SEGUNDA CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA HUMANA

SEGUNDO CUATRIMESTRE 2020:

TP 1- Determinación de la glucemia:
- Método de la glucosa oxidasa/peroxidasa
Fundamento:
- El examen habitual de la glucemia utiliza una mezcla de glucosa oxidasa peroxidasa.
Se requiere un ayuno de 8 horas como mínimo y se estudia la concentración de glucosa
en sangre venosa. La enzima glucosa oxidasa es altamente específica para la beta-D-
glucopiranosa, que representa aproximadamente el 64% de la glucosa en solución. Se
emplea una mutarrotasa que cataliza una rápida interconversión de los alfa anómeros para
mejorar la sensibilidad del análisis. La reacción puede esquematizarse:

Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 + H2O Ácido glucónico + H2O2

Peroxidasa

2 H2O2 + 4-Aminofenazona + Fenol → Sustancia coloreada (Quinoimina) + 4 H2O

- El color obtenido guarda una relación directamente proporcional

a la concentración de glucosa en la muestra.
- Valores de referencia:
- Suero o plasma: 0,70 a 1,10 g/l (70 – 110 mg/dl).
- En la literatura (Tietz, N.W.) se menciona el siguiente rango de referencia:
- Suero o plasma: 0,74 - 1,06 g/l.

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- Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia,
teniendo en cuenta sexo, edad hábitos alimenticios y otros factores.
- Conversión de unidades:
Glucosa (g/l) = Glucosa (mg/dl) x 0,01
Glucosa (mg/dl) x 0,0555 = Glucosa (mmol/l)
. Importancia del automonitoreo de la glucemia en pacientes con diabetes mellitus:
- Los pacientes con diabetes mellitus (DM) monitorizan en forma diaria sus niveles de
glucemia capilar mediante aparatos medidores (glucómetros) que utilizan tiras reactivas.
Estas tiras reactivas están impregnadas con un reactivo de glucosa-oxidasa peroxidasa,
las cuales cambian la intensidad de color en forma proporcional a la concentración de
glucosa. Los glucómetros modernos emplean una pequeña gota de sangre y medidores
amperimétricos para medir la corriente generada por la glucosa deshidrogenasa (GDH)
que oxida la glucosa a ácido glucónico, reduciendo NAD en lugar del oxígeno.

- Un nuevo sistema flash para monitorizar la glucosa intersticial ha sido implementado.

Este sistema se basa en una nueva tecnología de sensores, que a través de un escaneo
rápido con un lector, permite medir la glucosa que está presente en el fluido intersticial
en forma contínua durante las 24 horas. Con cada escaneo se obtiene el valor actual de
glucosa, los valores de las últimas 8 horas y una flecha que indica la tendencia hacia el
aumento o la disminución. El sensor se aplica en la parte superior del antebrazo, de
manera de adherirse por un periodo de hasta 14 días. Si bien realiza el monitoreo contínuo
de la glucosa intersticial, se almacena una lectura de glucosa cada 15 minutos durante un
periodo de 8 horas. Por otra parte, a modo de bitácora, viene con un software que le
permite elaborar gráficos fáciles de interpretar, con un resumen histórico de glucosas de
hasta 90 días de manera que el paciente puede conocer sus patrones de glucosa intersticial
y su variabilidad. Se debe recordar que la difusión entre el capilar y el fluido intersticial
es de 5 a 10 minutos.

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• Hemoglobina glicosilada (glicada)/Fructosamina:

Existen 2 parámetros de laboratorio que indican el grado de compensación metabólica de

un individuo. Ellos son: la hemoglobina glicosilada (HbA1c) y la fructosamina. En los
adultos, la hemoglobina presenta diferentes denominaciones de acuerdo al tipo de dímero
que componen la molécula. Aproximadamente, el 97% corresponde a HbA (α2, β2), el
1.5-3.5% corresponde a A2 (α2, δ2) y <2% a HbF (α2, γ2); de HbA fueron identificados
por separación de cargas y se denominaron de acuerdo al orden de elución: A0, A1a, A1b
y A1c (la más estable).
- La glicación se refiere a la unión no enzimática de un monosacárido (generalmente
glucosa) a un grupo amino de una proteína. A pesar de que la hemoglobina ha sido la
proteína glicada más estudiada y utilizada, otras han sido evaluadas, tales como la
albúmina glicada, (fructosamina) y los productos de glicación avanzada. El paso inicial
de la reacción entre la glucosa y la hemoglobina es la condensación entre el carbonilo de
la primera y la amina primaria libre de la segunda, generando la formación de una base
de Schiff (reacción temprana de Maillard). Esta base no es estable y puede disociarse o
presentar un reordenamiento de Amadori, para formar una cetoamina estable. (Figura 1)
- La formación de proteínas glicadas se produce en forma covalente con el residuo valina
NH2- terminal de la cadena β de la HbA, constituyendo aproximadamente un 5-7 % del
total de hemoglobina. La glicación puede ocurrir en sitios distintos, como el residuo
valina de la cadena α, en la lisina de la cadena α o β, así como con otros tipos de hexosas,
tal como fructosa 1-6 difosfato o glucosa 6-fosfato.

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 Figura 1: Cómo se realiza la glicación proteica.

GLICACIÓN PROTEICA

- La HbA1c o hemoglobina glicosilada informa de la media de los valores de glucemia

durante las últimas 12 semanas (3 meses) anteriores a la extracción de sangre.
- Sus valores normales se encuentran entre 4.5 a 6%, aunque se considera que una
persona con diabetes está bien controlada cuando este valor está por debajo del 7%.
• La determinación de HbA1c se debe realizar de forma rutinaria en todos los pacientes
con DM, en la evaluación inicial y luego, como parte de la atención continuada. Debido
a que la HbA1c refleja la glucemia media en los últimos 3 meses, tiene un fuerte valor
predictivo de las complicaciones de la DM. Así, su determinación aproximadamente cada
3 meses determina si se han alcanzado y mantenido los objetivos glucémicos del paciente.
Se aconseja realizar la prueba de HbA1c por lo menos 2 veces al año en los pacientes que
están cumpliendo con el objetivo terapéutico (o quienes tienen control glucémico estable).
• La prueba de HbA1c se puede solicitar cada 3 meses en los pacientes cuya terapia ha
cambiado o que no están cumpliendo los objetivos glucémicos.
• El uso de pruebas de HbA1c rápidas o en el sitio de atención del paciente, permite la
modificación de los tratamientos de manera oportuna y rápida.
-Valores mayores a 6.5% han sido aceptados como diagnósticos de la diabetes
mellitus (DM), siempre y cuando la determinación haya sido efectuada por un método
certificado, con la técnica estandarizada aceptada (cromatografía líquida de alta
performance o HPLC). Se considera que la determinación debe ser repetida si el individuo
no tiene síntomas cardinales o la glucemia es menor de 200 mg/dl. Sus desventajas

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radican en las variaciones que puede sufrir en casos de anemia, hemoglobinopatias,
insuficiencia renal, embarazo, edad y origen étnico.
- En el caso de la fructosamina, el complejo glucosa-proteína se realiza entre proteínas
como la albúmina, que tiene una vida media de aproximadamente 20 a 25 días. Sus
valores normales son de 1.8 a 2.8 mmol/l. La fructosamina también informa de la media
de los valores de glucemia, pero de las 2-3 últimas semanas. Sus principales indicaciones
radican en: a) embarazo (necesidad de un control más estricto); b) pacientes con
hemoglobinas anormales; c) inicio o cambio de tratamiento. Sus desventajas radican en
que hay que corregir los valores de fructosamina en función de la concentración
plasmática proteica y en la rápida modificación que sufren los mismos ante los cambios
de glucemia.
Prueba oral de tolerancia a la glucosa (POTG):
Se indica para el diagnóstico de las fases precoces de la DM. Es de utilidad en pacientes
con valores de glucemia en ayunas reiteradamente entre 100 y 125 mg/dl; adultos con
sobrepeso y pacientes con factores de riesgo para DM. En estos casos, si el resultado es
normal, la prueba se debe repetir a los 3 años.
Técnica:
En adultos, se les dará a tomar 75 gramos de glucosa (Glucolin NR) después de la
primera extracción en ayunas disueltos en 375 ml de agua más unas gotas de limón. Se
repiten las determinaciones de glucemia a los 30, 60 y 120 minutos. Valores a los 120
minutos inferiores a 139 mg/dl se consideran normales; entre 140 y 199 mg/dl se
considera Tolerancia a la Glucosa Alterada (TGA) y si el valor es igual o superior a los
200 mg/dl, es diagnóstico de DM.
Índice glucémico:
El índice glucémico (IG) es una clasificación de los alimentos, basada en la respuesta
postprandial de la glucosa sanguínea, comparados con un alimento de referencia (glucosa
o pan blanco). Mide el incremento de glucosa en la sangre, luego de ingerir un alimento
o comida. David Jenkins, creó esta clasificación en 1981, con el objetivo de ayudar a
identificar los alimentos más adecuados para pacientes con DM. De esta manera, el IG es
definido como el aumento del área de la glucosa sanguínea después de la ingestión de un
producto testeado, expresado como porcentaje del área correspondiente después de una
carga de glúcidos de un producto de referencia. Si se comparan los IG, se le asigna a la
glucosa un valor se referencia de 100, a la sacarosa 65, a la lactosa 46 y a la fructosa 30.
Es menester considerar los siguientes factores que modifican la respuesta glucémica: a)
la naturaleza de los glúcidos; b) la presencia de otros nutrientes; c) la textura de los
alimentos y d) el procedimiento de elaboración del alimento. Así, la fructosa es menos
hiperglucemiante por tener un predominantemente metabolismo hepático; la
concentración de fibras, especialmente solubles, disminuyen la respuesta glucémica al
aumentar la viscosidad del bolo alimenticio, limitando el acceso enzimático; la
concentración de grasas lentifica el ritmo que los nutrientes llegan al intestino, a mayor
tenor lipídico de un alimento, menor IG; la concentración de proteínas o de ácidos
también disminuye la respuesta; la presencia de granos de cereales intactos o de texturas
que requieren una importante masticación favorecen la disminución del IG; la cocción

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favorece el proceso de gelatinización, lo que lleva a un mayor índice glucémico; la
amilosa tiene un proceso de digestibilidad más lento que la amilopectina; el almidón
encapsulado dentro de la pared vegetal determina índices glucémicos más bajos.
CASO CLÍNICO APLICADO: EL PACIENTE CON DIABETES MELLITUS:
. Roberto es un paciente de 53 años, obeso, de vida sedentaria, que decidió hacerse
un examen médico de salud y si bien en el examen físico, sólo se objetivó la
hiperpigmentación de los pliegues cutáneos (acantosis nigricans), en los exámenes de
laboratorio, se encontró una glucemia de 152 mg/dl. El médico que lo atendió, por
las dudas, volvió a repetir el análisis de glucemia (con ocho horas de ayuno) y obtuvo
un nuevo valor de 140 mg/dl. Se diagnosticó Diabetes mellitus tipo 2.
1. ¿Qué es la diabetes mellitus? (DM). ¿Cuál es su prevalencia en la República
Argentina?;
2. ¿Por qué se produce?. ¿Cuáles son sus criterios diagnósticos?;
-Síntomas clásicos (poliuria, polidipsia; pérdida inexplicable de peso) más
glucemia al azar igual o superior a 200 mg/dl o…
-Dos o más glucemias (con 8 horas de ayuno, como mínimo) de 126 mg/dl o
más o…
-Prueba oral de tolerancia a la glucosa (con 75 g de glucosa) con valor de glucemia
de 200 mg/dl o más a los 120 minutos,
3. ¿Qué tipos de DM existen?; Mencione 5 diferencias entre ellos;
Diabetes tipo 1: Diabetes tipo 2
Aparece antes de los 20 años; Aparece después de los 40 años;
Sujetos delgados; Sujetos obesos;
Susceptibilidad genética; Transmisión hereditaria;
Ausencia absoluta de insulina; Deficiencia relativa de insulina
(insulinorresistencia);
Insulinodependencia de por vida; Dieta/Ejercicio/Hipoglucemiantes
orales; en algún momento, pueden
requerir insulina;
Pueden hacer cetoacidosis. Pueden hacer coma hiperosmolar.

4. ¿De qué manera la deficiencia absoluta de insulina puede provocar un cuadro de

cetoacidosis metabólica en los DM 1?. Justifique.

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 5. ¿Qué tejidos se afectan en la DM?. ¿Qué complicaciones trae en el corto y largo
plazo?;
6. Describa el fundamento del método de determinación de la glucemia (glucosa-
oxidasa-peroxidasa). Valores de referencia;
7. ¿Cómo realiza el monitoreo de las glucemias en el largo plazo?. Describa el
fundamento de la determinación en sangre de la hemoglobina glicosilada y de la
fructosamina. Utilidad clínica. Ventajas y desventajas de cada una de ellas.
8. ¿Qué es el índice glucémico de los alimentos?. ¿Para qué se lo utiliza?. Plantee un
tratamiento nutricional racional con respecto a los glúcidos relacionando su
estructura química con el índice glucémico del alimento.
9. ¿Por qué es importante sugerirle a Roberto que realice algún tipo de actividad
física en forma regular?.

.Recuerde que la indicación de glúcidos complejos tiene por finalidad brindar glúcidos
con bajo índice glucémico sin generar picos de hiperglucemia. Ello ocurre
fundamentalmente con los llamados glúcidos simples o refinados, que son rápidamente
absorbidos y por ello, generar rápidos y precoces picos de hiperglucemia. La actividad
física, además de ser útil para bajar de peso, sirve para aumentar la actividad de los
GLUT-4, sobre todo, musculares y vencer la insulinorresistencia.