See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/322071469

Gas chromatography (Arabic language) ‫اﻟﻜﺮوﻣﺎﺗﻮﻏﺮاﻓﻴﺎ وﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺗﻬﺎ‬

Book · June 2014

CITATIONS READS
0 728

1 author:

Ahmed Said Mahmoud

Housing and Building National Research Center
18 PUBLICATIONS   6 CITATIONS   

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

enviromential View project

Development of Different Nanotechnologies Techniques for the Removal of Inorganic and Organic Contaminants from Aqueous Solutions at Low Cost with Artificial
Intelligence approach View project

All content following this page was uploaded by Ahmed Said Mahmoud on 31 December 2017.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

‫الكروماتوجرافيا وتطبيق اتها‬
‫(الكروماتوجرافياالغازيه )‬

‫‪1‬‬
 ‫المقدمة‬
‫كلمه كروما كلمه التينيه تعني لون أما الكروماتوجرافي فالغرض منها هي فصل المخاليط‬
‫المجهوله والتعرف عليها وتحديد نسبها في هذه المخاليط ‪.......‬‬

‫سيتم استعراض بعض طرق الفصل الكروماتوجرافي وسيتم الحديث عن نسب الفصل في بعض‬
‫منها‪.‬‬

‫كما سيتم استعراض جهاز الكروماتوغرافيا الغازيه تفصيال من حيث التركيب الدقيق لمكوناته‬
‫والصيانه االزمه وبرنامج التشغيل وغيرها‬

‫كما يتم تناول بعض اساليب الفصل والتنقيه لمكونات المواد العضويه الذائبه في الماء أو التربه‬
‫كما سنتعرف عليها ونحدد كمياتها وحساباتها‪.‬‬

‫كما تمت إضافه معظم المواصفات ( القابله للنشر) الخاصه بالفصل والتنقيه والتنظيف والتحليل‬

‫وأخيرا تم الحديث عن الجوده في إستخالص المخاليط المجهوله وضبط كفاءه المعمل عن طريق‬
‫محاليل معينه يتم من خاللها تقنين نسبه الخطأ ومعالجتها في حاله وجودها‬

‫المؤلف‬
‫كيميائي‪ /‬أحمد سعيد محمود‬
‫ضابط سابق بالقوات المسلحه – سالح الحرب الكيميائيه‬
‫‪ -‬الكشف الكيميائي و األشعاعي‬
‫و بالمركز القومي لبحوث األسكان والبناء‬

‫‪2‬‬
 ‫كلمه المؤلف‬

‫هذا الكتاب يمثل العديد من االفكار في إستخدام الكروماتوجرافي في مجال الطب و مجال الهندسه و‬
‫البحث العلمي أو حتي المجال العسكري وليس فكر المؤلف فقط فهذا الكتاب تجميع لعدد من األفكار‬
‫وليس كل األفكار فمن الصعب تجميع كل األفكار في كتاب واحد لتنوع هذه التخصصات ولكن تمت‬
‫للمهتمين بمبادئ‬ ‫إعاده صياغه هذه األفكار لتكون سهله الفهم باللغه العربيه واألنجليزيه‬
‫الكروماتوجرافيا بصفه عامه والكروماتوجراف الغازي بصفه خاصه في العالم العربي كما تمت إضافه بعض‬
‫المواصف ات المتاحه للتوضيح وإلمكانيه نشرها ولكن التحديثات في هذه المواصف ات غير جذري ليكون‬
‫الكتاب غني بالمعلومات وخاصه للمبتدئين وليكون مرجع لهم في المواضيع المذكوره فيه وأيضا تعمدنا‬
‫كتابه بعض المصطلحات باللغه االنجليزيه حتي النحرم الق ارئ من المشاركه الفكريه مع األوساط المحيطه في‬
‫نفس المجال وبذالك يكون الكتاب حجر أساس أولي للماده العلميه باللغه العربيه ونرحب بكل من يساهم‬
‫بأي فكر جديد في هذا المجال وبكل من حدث أو طور أو أضاف أو أبدي رأي في هذا الكتاب‬

‫ولذالك لزم كل الشكر والتقدير والتنويه بألشخاص الذين لوالهم ما ظهر هذا الكتاب سواء بالدعم الفني أو الدعم‬
‫المعنوي‬

‫أ‪.‬د‪.‬م‪ /‬مها الشافعي ( مدير معهد البحوث الصحيه والبيئيه بالمركز القومي لبحوث اإلسكان والبناء سابق ا )‬

‫د‪ /‬محمد سعيد محمود (مدير معمل الكيمياء بمعهد الهندسه الصحيه والبيئيه)‬

‫د‪ /‬طارق عبد الشافي (باحث بالمركز القومي للبحوث)‬

‫م‪ /‬سامح السعيد ( مهندس الكترونيات )‬

‫ك‪ /‬أحمد حمدي ( كيميائي بالمركز القومي لبحوث األسكان والبناء )‬

‫‪3‬‬
 ‫المحتويات‬
‫الفصل األول ‪ :‬نبذه عن الكروماتوجرافي‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫تاريخ الكروماتوجرافي‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫ما معني الكروماتوجرافي‬

‫‪..................................‬‬ ‫نظره عامه علي نظريات الفصل الــرومـاتـوجــرافـي‬

‫نظره تفصيليه علي نظريات الفصل الـكـرومـاتـوجــرافـي ‪...................................‬‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫تطبيقات الكروماتوجرافي‬

‫تفعيل التطبيقات عمليا بواسطه جهاز الكروماتوجراف الغازي ‪................................‬‬

‫‪......‬‬ ‫الملوثات والمخاليط المراد فصلها وتحليلها باستخدام جهاز الكروماتوجراف الغازي‬

‫تحضير العينات للفصل‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫العينات السائله‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫العينات الصلبه‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫العينات الغازيه‬

‫نبذه عن أنواع الفصل الكروماتوجرافي‬

‫‪.................................................................‬‬ ‫نظريه الفصل‬

‫ورقه الفصل الكروماتوجرافي ‪................................................................‬‬

‫مقدمه عن الفصل باستخدام األجهزه‪.......................................................................‬‬

‫الكروماتوجرافي الغازيه‬

‫‪.........................................................................‬‬ ‫نبذه عن الجهاز‬

‫‪..........................................................................‬‬ ‫نظريه الفصل‬

‫‪.........................................................................‬‬ ‫مكونات الجهاز‬

‫‪4‬‬
 ‫الفصل األول‬

‫نبذه عن الكروماتوجرافي‬

‫‪5‬‬
 ‫نبذه مختصره عن الكروماتوجرافي‬

‫منذ عام ‪ 1855‬تم اكتشاف الكروماتوجراف اللوني ( الفصل بااللوان ) عن طريق العالم فريك دريك ‪Fricdrich‬‬
‫وذالك بثبيت االمالح الغير عضويه علي ورقه الترشيح العاديه مثل كبريتات الحديديك والصبغه ونقط من محلول‬
‫حديدوسيانات البوتاسيوم‬

‫وبعدها بسنوات قليله عام ‪ 1865‬قام العالم سكوينبين ‪ Schoenbein‬بدراسه خواص االمالح الغير عضويه‬
‫علي ورقه الترشيح المستقيمه ووضح انه في المحلول المائي لالمالح الغير عضويه ان الماء يحمل الملح ويرتفع‬
‫في األوراق وبعدها اثبتت الدراسات التي اجريت بعد ذالك ان هذه النظريه يمكن تطبيقها ايضا علي االمالح‬
‫العضويه مع تغيير المذيب‬

‫وفي عام ‪ 1903‬وطرق الفصل موجوده ومستخدمه من قبل العلماء الروس أيضا حيث قام العالم البيولوجي‬
‫الروسي ميخائيل سمينوفتش بفصل الصبغه الموجوده داخل النبات باستخدام اعمده الفصل وتعتبر هذه هي‬
‫المره االولي التي تم فصل المركبات باستخدام نظريه االمتصاص‬

‫وفي عام ‪ 1906‬تم نشر ثالثه ابحاث بخصوص طرق الفصل للمركبات الملونه مثل الكلوروفيل وذالك باستخدام‬
‫محلول النبات االخضر المحتوي علي الصبغه في عمود يحتوي علي بدره ناعمه من كربونات الكالسيوم فلوحظ‬
‫ظهور عده اللوان قام بتسميتها كروماتوجرام وأطلق علي الطريقه كروماتوجرافي‬

‫ثم قام العلماء ليدرير و كوهن في عام ‪ 1931‬باستخدام الكروماتوجرفيا السائله في فصل انواع الكاروتين‬

‫وفي عام ‪ 1938‬تم تطوير ورقه الفصل الي ورقه مدعومه بسطح مثل األلمونيوم كروماتوجرافيا الطبقه‬
‫الرقيقه‪ TLC‬و كروماتوجرافيا تبادل الآليونات ( ‪) Ion exchange‬‬

‫وفي عام ‪ 1941,1944‬قام العالم جون بورتر بتطوير ورقه الفصل و كروماتوجرافيا السائل سائل )‪)PC,LLC‬‬
‫وحصل علي جائزه نوبل‬

‫وفي عام ‪ 1947‬قام الخريج األلماني فريتز بتطوير الكروماتوجرافي الغازي ذو الوسط الصلب‬

‫وفي عام ‪1950‬قام العالم جون بورتر مارتين بتقديم الكروماتوجرافي الغازي ذو الوسط السائل)‪)LGC‬‬

‫وفي عام ‪ 1959‬تم اكتشاف الجيل النفاذ (‪()1959 Gel permeation‬‬

‫‪6‬‬
 ‫‪PC‬‬ ‫‪TLC‬‬

‫‪HPLC‬‬
‫‪column‬‬ ‫‪GC‬‬

‫ما معني الكروماتوجرافي‬

‫الكلمه تعني فصل المركبات من داخل المخاليط وتحديد نوعها ونسبتها وتنقيتها إلستخدامها في األعمال البحثيه‬
‫‪.‬اوتحديد نسبتها داخل اي منتج من المنتجات لتحديد اضرارها (في المجاالت الصناعيه )اومعرفه نسبتها في‬
‫المياه ومدي صالحيه المياه للشرب اوفي المصارف ومعرفه مدي التلوث داخل المصارف (في المجاآلت البيئيه‬
‫)اوفصل األمينو اسيد لدراستها او فصل الهرمونات من الدم وايضا فصل الكحول من الدم( في المجاالت‬
‫الطبي)كما تتضمن ايضا فصل الصبغات وغيرها وقد تتم عمليه الفصل علي اساس فصل كيميائي او فيزيائي عن‬
‫طريقه دراسه خواص المواد الموجوده في الخليط لفصل كل مكون علي حده فكان قديما في االختبارات‬
‫الكيميائيه المعمليه تشمل فصل األلبومين من البيض والكازين من اللبن لكن ليس من السهل استخدام عمليات‬
‫فصل مشابهه لالمينو اسيد والهرمونات والمركبات المتعدده الحلقات بدقه وسرعه وهنا يكمن دور االجهزه‬
‫المخصصه لذالك‬

‫‪7‬‬
 ‫تطبيقات الكروماتوجرافي‬
‫أوال‪ :‬في الشركات الدوائيه‪:‬‬
‫يعتبر مجال األدويه من المجاالت الصناعيه الحساسه جدا النها تؤثر تأثير مباشر علي جسم األنسان فلذالك‬
‫لزم من الشركات الدوائيه إستخدام اجهزه التحليل عاليه الدقه للتأكد من سالمه الدواء حيث أنه ‪:‬‬
‫‪ – 1‬ي تم تحديد كل مكون من مكونات االدويه المنتجه حديثا لمعرفه مدي صالحياتها عن طريق تحديد نسبه‬
‫الشوائب فيها‬
‫‪ – 2‬ك ما يمكن الكشف علي المواد الخام المستورده لمعرفه كفائتها ونسبه الشوائب بها لضبط التركيزات‬
‫المستخدمه في صناعه األقراص الدوائيه‬
‫‪ – 3‬تنقيه المواد الخام‬
‫‪ – 4‬ك ما يتم تحديد مدي تأثير الظروف المختلفه من الضغط والحرارة علي مكونات الدواء لمعرفه تاريخ األنتهاء‬
‫للدواء وبعد إجراء هذه األختبارات يتم حقن الماده مره أخري بجهاز ‪ GC‬أو ‪ HPLC‬بعد اإلستخالص للتأكد‬
‫من مدي التغير في التركيز نتيجه تأثير الضغط ودرجه الحراره ومن هنا يتم تحديد تاريخ إنتهاء الدواءغير ذالك‬
‫الكثير‪.‬‬

‫ثانيا‪ :‬في المستشفيات ( في مجال التحاليل الطبيه ) ‪:‬‬

‫الكثير من الناس يظن أن مجال التحاليل الطبيه بعيد عن مجال الكروماتوجرافيا فلذالك يلزم التنويه ان‬
‫أساس المجال مبني علي الفصل ‪:‬‬
‫‪ – 1‬عند أخذ عينه من الدم فقبل البدء في أي أختبار لكيمياء الدم أو الهرمونات يلزم الفصل المبدئي للعينه عن‬
‫طريق ال ‪ Centrifuge‬وهذا يعد فصل فيزيائي‬
‫‪ – 2‬عند البدء في األختبارات نفسها البد من فصل كل مكون من مكونات الدم بواسطه كواشف معينه علي‬
‫حسب األختبار المطلوب فمثال ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬تحديد ومعرفه نسبه الكحول في الدم يمكن ان يتم االختبار بواسطه جهاز الكروماتوجراف الغازي السريع‬

‫‪8‬‬
 ‫والذي يتميز بقصر عمود الفصل وقصر مده اإلختبار‬
‫ب ‪ /‬معرفه نسبه الهرمونات مثل هرمون النمو ‪ GH‬وغيره عن طريق اسناد ماده او كاشف الي البالزما‬
‫(المفصوله من الدم بعد إضافه ماده مانعه للتجلط سترات صوديوم ) والذي بدوره يقوم باالتصال المباشر بالهرمون‬
‫دون غيره‬
‫ويتم تثبيت الهرمون في قاعده زجاجه التحضير وبعد الغسيل الزجاجه عده مرات يتم تحرير الهرمون من‬
‫قاعده الزجاجه ليتثني لنا إجراء عمليه القياس باستخدام جهاز ‪Eliza‬‬
‫ج ‪ /‬بعد إضافه الكواشف لفصل المركبات الكيميائيه يتم قياس نسب تركيزها عن طريق جهاز الفوتوميتر‬
‫‪Spectro photometr‬‬
‫د ‪ /‬عند البحث عن نسب الصوديوم والبوتاسيوم في الدم تتم إستخالصهم بجهاز ‪Flame photometer‬‬
‫ه ‪ /‬يتم فصل األمالح والذالل من عينات البول لتتم أختبارها وقياسها‬
‫و ‪ /‬يتم فصل أفضل حيوان منوي فصل فيزيائي من ماليين الحيوانات للوصول الي أفضل جنين‬
‫ر ‪ /‬فصل نسبه السكريات الموجوده في السائل األمينوسي الموجود حول األجنه لمعرفه مدي فاعليته‬
‫وبذالك يتضح ان هذا المجال له عالقه مباشره بعمليات الفصل‬
‫ثالثا‪ :‬في مجاالت البترول‪:‬‬
‫تحديد ومعرفه نسبه المركبات العضويه في النواتج الجانبيه لمشتقات البترول‬
‫تحديد نوعيه التربه واالرض الموجود بها المشتقات البتروليه بنسبه كبيره واحتماليه تواجد ابار البترول في تلك االرض‬

‫رابعا‪ :‬في المجاالت الصناعيه‪:‬‬

‫صناعه الكحول لمعرفه مدي جوده الكحول وكونه خالي من اي مواد عضويه ذائبه به‬
‫كما ان مجال صناعه االغذيه كان لها نصيب كبير في مجال الكروماتوجرافي‬
‫صناعات المواد المتطايره كالزيوت العطريه وغيرها لتحديد تركيزاتها ونسبه الشوائب بها‬
‫الصالعات البتروليه والبتروكيماويه لتحديد كفاءه المنتج‬
‫صناعه الكيماويات والكواشف‬

‫خامسا‪:‬في مجاالت البيئه‪:‬‬

‫تحديد ومعرفه الملوثات العضويه والمبيدات الحشريه في الماء خاصه مياه الشرب ومدي مطابقه ذالك بالحد‬
‫المسموح به عالميا بإلضافه الي معرفه الملوثات الموجوده داخل التربه وبمعرفه ذالك يتم تحديد مدي قابليه‬
‫التربه للزراعه‪.‬‬

‫‪9‬‬
 ‫سادسا‪ :‬في مجاالت الطب الشرعي‪:‬‬
‫لمعرفه ومقارنه العينات الموجوده في مسرح الجريمه والمشتبه بهم والضحايا‬

‫سابعا‪ :‬في مجاالت الحرب الكيميائيه‪:‬‬

‫عن طريق الكشف عن الغازات الحربيه المختلفه في التربه والجو بالطرق المختلفه للفصل والتحليل لتحديد نوعها‬
‫التخاذ االجراءات االزمه للوقايه منها ‪.‬‬
‫ثامنا ‪ :‬في مجال االبحاث‪:‬‬
‫حيث يقوم الباحث بدراسه وفصل عنصر معين من خليط حيث ان معظم العناصر المراد فصلها تكون غير متوفره‬
‫وغاليه الثمن فلذالك يفضل الباحث عدم استهالك هذا العنصر‬

‫‪10‬‬
 ‫تفعيل التطبيقات عمليا بواسطه جهاز الكروماتوجراف الغازي‬

‫في هذه التطبيقات يتم النظر الي درجات حراره الفرن ومعدالت ارتفاع درجه الحراره والطور المتحرك والضغط‬
‫المطلوب ونوع الكاشف ودرجه حراره الكاشف الي ان تتم دراستها فيما بعد مع العلم بان كل هذه البيانات‬
‫صحيحه عند تطبيق البيانات الموجوده داخل كل رسمه‬

‫‪Hydrocarbons in Natural Gas‬‬

‫‪Phthalates - EPA Method 606‬‬

‫‪11‬‬
 Pesticides

Butter Triglycerides C24-C56

12
 Ketones

Cyclic Hydrocarbons

13
Drugs 1,2

14
 ‫‪Phenols‬‬

‫الملوثات والمخاليط المراد فصلها وتحليلها‬

‫باستخدام جهاز الكروماتوجراف الغازي‬
‫وفيما يلي بيان بالمركبات التي يمكن قياسها عن طريق الكروماتوجرافيا الغازيه ومتطلبات الطريقه ورقم‬
‫الطريقه في المواصفه القياسيه ( ‪ ) EPA‬حيث تعتمد هذه المواصفات علي تحديد طريقه االختبار و الظروف‬
‫المناسبه الجراء االختبار واالحتياطات و المعايرات الخاصه التمام العمليه بنجاح‬

‫‪NU‬‬ ‫‪Method‬‬ ‫‪Analytes‬‬ ‫‪Chromatographic‬‬ ‫‪Detector‬‬ ‫‪Cleaning‬‬

‫‪number‬‬ ‫‪Technique‬‬ ‫‪methods‬‬

‫‪1‬‬ ‫‪7580‬‬ ‫) ‪White phosphorus (P‬‬ ‫‪GC, capillary‬‬ ‫‪NPD‬‬

‫‪column‬‬

‫‪2‬‬ ‫‪8011‬‬ ‫‪EDB, DBCP‬‬ ‫‪GC, capillary‬‬ ‫‪ECD‬‬

‫‪column‬‬

‫‪3‬‬ ‫‪8015‬‬ ‫‪Nonhalogenated‬‬ ‫& ‪GC, packed‬‬ ‫‪FID‬‬

‫‪volatiles‬‬ ‫‪capillary column‬‬

‫‪15‬‬
4 8021 Volatiles GC, capillary PID, ELCD
column

5 8031 Acrylonitrile GC, packed NPD

column

6 8032 Acrylamide GC, packed ECD

column

7 8033 Acetonitrile GC, capillary NPD

column

8 8041 Phenols Underivatized or FID, ECD ,3640,3650,

derivatized, GC, 8041c,
capillary column 3630b

9 8061 Phthalates GC, capillary ECD 3610, 3620,

column 3640

10 8070 Nitrosamines GC, packed NPD, ELCD, 3610, 3620,

column TED 3640

11 8081 Organochlorine GC, capillary ECD, ELCD 3620, 3640,

pesticides column 3660

12 8082 Polychlorinated GC, capillary ECD, ELCD 3620, 3630,

biphenyls column 3665

13 8091 Nitroaromatics and GC, capillary ECD 3620, 3640

cyclic column

14 8100 PAHs GC, packed & FID 3611, 3630,

Example

capillary 3640

15 8111 Haloethers GC, capillary ECD 3620, 3640

column

16 8121 Chlorinated GC, capillary ECD 3620, 3640

hydrocarbons column

17 8131 Aniline and selected GC, capillary NPD 3620, 3640

derivatives column

16
18 8141 Organophosphorus GC, capillary FPD, NPD, 3620
pesticides column ELCD

19 8151 Acid herbicides Derivatize; GC, ECD 8151d

capillary
3620

20 8260 Volatiles GC, capillary MS

column

21 8270 Semivolatiles GC, capillary MS 3640, 3650,

column 3660

Petroleum waste 3611, 3650

22 8275 Semivolatiles Thermal MS

extraction/GC

23 8280 Dioxins and GC, capillary Low 8280

Dibenzofurans column resolution MS

24 8290 Dioxins and GC, capillary High 8290

Dibenzofurans column resolution MS

25 8310 PAHs HPLC, reverse UV, 3611, 3630,

phase Fluorescence 3640

26 8315 Carbonyl compounds Derivatize; HPLC Fluorescence

27 8316 Acrylamide, HPLC, reverse UV

acrylonitrile, phase

28 8318 N-Methyl carbamates Derivatize; HPLC Fluorescence 8318

29 8321 Extractable HPLC, reverse TS/MS, UV

nonvolatiles phase

30 8325 Extractable HPLC, reverse PB/MS, UV

nonvolatiles phase

31 8330 Nitroaromatics and HPLC, reverse UV

nitramines phase

32 8331 Tetrazene HPLC, ion pair, UV

reverse

17
 ‫‪33‬‬ ‫‪8332‬‬ ‫‪Nitroglycerine‬‬ ‫‪HPLC, reverse‬‬ ‫‪UV‬‬
‫‪phase‬‬

‫‪34‬‬ ‫‪8410‬‬ ‫‪Semivolatiles‬‬ ‫‪GC, capillary‬‬ ‫‪FT-IR‬‬

‫‪column‬‬

‫‪35‬‬ ‫‪8430‬‬ ‫‪Hydrolysis products‬‬ ‫‪GC, capillary‬‬ ‫‪FT-IR‬‬

‫‪column‬‬

‫‪36‬‬ ‫‪8090‬‬ ‫‪Nitroaromatics and Cyclic Ketones by gas chromatography‬‬

‫يوجد العديد من الملوثات العضويه الموجوده في البيئه من هذه الملوثات‬

‫‪ -1‬الزيوت الهيدروكربونيه ‪:‬‬

‫ومنها ماهو اليفاتي ومنها ماهو اروماتي ومتعدد الحلقات‬

‫‪ -2‬المركبات الفينوليه ‪:‬‬

‫ومصادرها متنوعه وال يمكن ازالتها بالطرق التقليديه لل ‪DWTP‬‬

‫‪ -3‬المبيدات الحشريه العضويه ‪:‬‬

‫يوجد ‪ 5‬مليون نوع من مملكه الحشرات تم التعرف علي ‪ %20‬فقط منها وبناءا‬
‫علي تقرير هيئه الصحه العالميه ان ما يقرب من ثلث االنتاج الزراعي في العالم تتلفه الحشرات بجانب تسببها في‬
‫امراض خطيره مثل المالريا والحمي الصفراء ولذالك قام العلماء بمحاربتها عن طريق تعقيم الذكور وايضا ايقاف‬
‫عمليه ال تنفس ولكن مع كثره استخدام المبيدات ادي الي التلوث البيئي سواء في مياه الشرب النيليه او المياه‬
‫الجوفيه او حتي التربه نفسها‪.‬‬
‫ومن المبيدات الحشريه المستخدمه هي‬
‫الترايازين ‪ -‬المبيدات الكلوريه ‪ -‬المبيدات الفسفورسه ‪ -‬الكربامات والفينيل يريا ‪ -‬مجموعه األنيليد ‪ -‬مجموعه احماض الفينوكس‬

‫وسيتم استعراض بعض من هذه المركبات تفصيليا كاالتي ‪:‬‬

‫‪18‬‬
 ‫اوال الزيوت الهيدروكربونيه وهي تشمل المركبات االتيه‬

Acenaphthene Acenaphthylene Anthracene Benzo(a)anthracene

Benzo(a)pyrene Fluoranthene Chrysene Benzo(b)fluoranthene
Dibenzo(a,h)anthracene Naphthalene Pyrene Benzo(ghi)perylene
Indeno(1,2,3-cd)pyrene Phenanthrene Fluorene Benzo(k)fluoranthene
‫ثانيا المبيدات الكلوريه وهي تشمل المركبات االتيه‬

trans-Chlordane Aldrin Chlorobenzilate Heptachlor

1,2-Dibromo-3- Δ –BHC Cis-Chlordane Endosulfan II
chloropropane (DBCP)
Heptachlor epoxide Peta-BHC 4,4'-DDD Diallate

Hexachlorobenzene Gama-BHC 4,4'-DDE Dieldrin

(Lindane)
Endosulfan sulfate Endrin aldehyde 4,4'-DDT Endrin
Chlordane not otherwise Toxaphene Isodrin Endrin ketone
specified (n.o.s.)
Hexachlorocyclopentadiene Endosulfan Methoxychlor α-BHC

:‫ثالثا المبيدات الفوسفوريه وهي تشمل المركبات االتيه‬

Azinphos-methyl Aspon Carbophenothion Chlorfenvinphos

Azinphos-ethylChlorpyrifos Ethion Dimethoate Demeton-O Demeton-S

Dichlorvos (DDVP) Diazinon Dichlorofenthion Dicrotophos

Coumaphos Crotoxyphos Dioxathion Disulfoton EPN
Bolstar (Sulprofos) Ethoprop Famphur Fenitrothion
Chlorpyrifos methyl
Fensulfothion Fenthion Fonophos Leptophos

Malathion Merphos Mevinphos Monocrotophos

Parathion, methyl Parathion, Naled Phorate
ethyl

19
 Stirophos Phosphami Ronnel Phosmet
(Tetrachlorvinphos,Gardona) don
Thionazin (Zinophos) Terbufos Sulfotepp Trichloronate
Tetraethyl pyrophosphate (TEPP) Trichlorfon
Tokuthion (Prothiofos)
: ‫أما المركبات الفوسفوريه الناتجه من الصناعه فهي كاالتي‬

Hexamethyl phosphoramide Tri-o-cresyl phosphate (TOCP) Simazine

(HMPA)
Triazine Herbicides (NPD only) Atrazine
‫أما النوع االخر من المركبات الفوسفوريه‬

Bendiocarb Butylate EPTC Methiocarb Molinate

Pebulate o-Phenylenediamine Propham Prosulfocarb Triallate

: ‫رابعا المركبات الفينوليه وهي تشمل المركبات االتيه‬

Phenol 2-chlorophenol 2-methyl-4,6-dinitrophenol

2-nitrophenol 2-methylphenol (o-cresol) 4-chloro-3-methylphenol

2,4-dinitrophenol 2,4-dimethylphenol 2,4,6-trichlorophenol

4-nitrophenol 2,4-dichlorophenol Pentachlorophenol

: ‫خامسا المركبات العضويه المتطايره وهي تشمل المركبات االتيه‬

Benzene Bromomethane Bromochloromethane

Bromoform Chlorobenzene Bromodichloromethane

Chloroethane Chloromethane Carbon tetrachloride

Chloroform 1,2-Dibromoethane Dibromochloromethane

Styrene Dibromomethane 1,2-Dibromo-3-chloropropane

20
‫‪1,2-Dichloroethane‬‬ ‫‪1,2-Dichlorobenzene‬‬ ‫‪Dichlorodifluoromethane‬‬

‫‪1,1-Dichloroethene‬‬ ‫‪1,3-Dichlorobenzene‬‬ ‫‪Trans-1,2-Dichloroethene‬‬

‫‪1,2-Dichloropropane‬‬ ‫‪1,4-Dichlorobenzene‬‬ ‫‪Hexachlorobutadiene‬‬

‫‪Ethylbenzene‬‬ ‫‪1,1-Dichloroethane‬‬ ‫‪Methylene chloride‬‬

‫‪Naphthalene‬‬ ‫‪Tetrachloroethene‬‬ ‫‪1,1,1,2-Tetrachloroethane‬‬

‫‪Toluene‬‬ ‫‪1,2,4-Trichlorobenzene‬‬ ‫‪1,1,2,2-Tetrachloroethane‬‬

‫‪m-Xylene‬‬ ‫‪Trichloroethene‬‬ ‫‪1,1,1-Trichloroethane‬‬

‫‪o-Xylene‬‬ ‫‪1,2,3-Trichloropropane‬‬ ‫‪1,1,2-Trichloroethane‬‬

‫‪p-Xylene‬‬ ‫‪Vinyl chloride‬‬ ‫‪Trichlorofluoromethane‬‬

‫أما بالنسبه لمصادر‬

‫المواد العضويه في الماء فهي متنوعه‪:‬‬
‫البكتريا – الطحالب – النفايات العضويه – الكائنات والنباتات البحريه‬

‫وتؤدي تواجد هذه المكونات في الماء الي تنوع المركبات العضويه كما تم ذكره فمثال‬
‫المخلفات العضويه لبعض الصناعات باالضافه الي إخراج الحيوانات االليفه واخيرا‬ ‫المركبات الفينوليه المذكوره تتكون من ‪:‬‬
‫االكسده الكيميائيه والبيولوجيه لبعض المبيدات العضويه واكسده بعض العناصر‬
‫الطبيعيه كما تعتد المركبات الفينوليه انها من المواد المسببه للسرطان ويمكن الكشف‬
‫عنها بالطرق اللونيه والطرق الكروماتوجرافيه‪.‬‬
‫أما إستخدامات بعض المركبات تكون في ‪:‬‬

‫‪ Aldrin‬يستخدم كمبيد حشري لمحاصيل القطن والدره‬

‫‪ DDT‬يستخدم كمبيد حشري للقضاء علي دوده القطن‬

‫‪ Clordan‬يستخدم كمبيد حشري للقضاء علي افات القطن والخضروات والبطاطس‬

‫‪ Dialdrin‬و ‪ Endrin‬و ‪ Mirex‬يستخدموا كمبيد حشري لمحاصيل القطن والذره‬

‫‪ Heptachlor‬يستخدم كمبيد الفات التربه‬

‫‪ Hexachlorobenzene‬يستخدم للقضاء علي الفطريات‬

‫‪ Toxaphene‬يستخدم كمبيد حشري‬

‫‪21‬‬
 ‫نظره عامه علي نظريات الفصل الــرومـاتـوجــرافـي‬
‫‪chromatography‬‬

‫‪Partition‬‬ ‫‪Adsorption‬‬

‫يـوجـد نـوعـان مـن الـقـوي الـمـؤثـره عـلـي عــمـلـيـه الـفـصـل مـنـهـا أوال ‪ :‬قـــوي االعـاقـه الـتـي تـمـثـل الـطـور‬
‫الـسـاكـن ثـانـيـا ‪ :‬الـطـور الـمـتـحـرك الـذي يـقـوم بـحمـل الـمـاده الـمـراد فـصـلـهـا ويـقـوم بـتـجـزئـتـهــا عـلـي‬
‫الـسـطـح مـن خـالل مـروره عـلـي الـطـور الـسـاكـن فـيـتـم فـصـل كـل مـركـب عـلـي حـده ويـتـم تـقـسـيـم هـذا‬
‫الـنـوع مـن الـفـصـل عـلـي حـسـب الـطـور الـمـتـحرك فـمـنـه الـسائـل ومـنـه الـغاـزي هذا بالنسبه للفصل باستخدام‬
‫التجزئه‪.‬‬

‫أما النوع الثاني للفصل فهو يعتمد علي خاصيه االمتصاص للماده بين المذيب المتحرك سائل كان أو غاز والطور‬
‫الساكن وبهذا يتحقق الفصل بخاصيه االمتصاص فعندما يكون الطور المتحرك سائل يسمي كروماتوجراف السائل‬
‫صلب ( ‪ ) LSC‬وعندما يكون الطور المتحرك غاز يكون اسمه كروماتوجراف الغاز صلب ( ‪) GSC‬‬

‫‪Part 1‬‬ ‫‪Part 2‬‬

‫‪Partition‬‬ ‫‪Adsorption‬‬
‫‪chromatography‬‬ ‫‪chromatography‬‬

‫‪Gas Partition‬‬
‫‪chromatograph‬‬ ‫‪Gas Solid‬‬
‫‪y‬‬ ‫‪chromatography‬‬

‫‪Liq Partition‬‬ ‫‪Liq-Solid‬‬

‫‪chromatograph‬‬ ‫‪chromatography‬‬
‫‪y‬‬

‫‪PC‬‬
‫‪TLC‬‬ ‫‪GSC‬‬ ‫‪Column‬‬
‫‪Column‬‬

‫‪22‬‬
‫نظره تفصيليه علي نظريات الفصل الـكـرومـاتـوجــرافـي‬
‫أوال ‪ /‬تقسيم علي حسب الحاله ( ‪: ) Phases involved‬‬
‫يتم تقسيم الكروماتوجراف طبقا للطور المتحرك كاالتي‪:‬‬
‫‪ -1‬اذا كان الطور المتحرك غاز يكون الكروماتوجراف الغازي ( ‪) GC‬‬
‫‪ - 2‬اذا كان الطور المتحرك سائل يكون الكروماتوجراف السائل ( ‪) LC‬‬

‫ويتم تقسيم الكروماتوجراف السائل ( ‪ ) LC‬الي ثالث أقسام‪:‬‬

‫أ – عمود الفصل ( ‪ ) Column‬ويتم الفصل باستخدام الجاذبيه االرضيه‬
‫ب – ( ‪ ) HPLC‬وتتم الفصل باستخدام معدل سريان الضغط‬

‫ج – ( ‪ ) TLC‬وتتم عمليه الفصل باستخدام خاصيه األمتصاص‬

‫‪23‬‬
 ‫ثانيا ‪ /‬التقسيم طبقا لألحداثيات ( ‪: ) Geometry of the system‬‬
‫‪ – 1‬في حاله الفصل باستخدام عمود الفصل ( ‪ ) Column‬يتم وضع الماده الصلبه داخل انبوبه تسمي‬
‫( ‪ ) Column‬ويتم ازاحه‬
‫‪ – 2‬النوع المستوي (محور سيني وصادي فقط ) ويتم تقسيمه الي نوعان ‪:‬‬
‫أ – ورقه الفصل ‪ :‬ويكون الطور الساكن هو جسم الورقه نفسها‪.‬‬
‫♠ تعتبر طريقه الفصل الكروما توجرافي باستخدام ورقه الفصل من اهم الطرق المستخدمه قديما والتي استمر‬
‫عملها حديثا بالرغم من التطور الهائل في مجال الفصل الكروماتوجرافي‪.‬‬

‫♠♠ تستخدم هذه الطريقه ليس فقط للفصل بل ايضا للحفاظ علي كمييه الماده الماده المفصوله حيث يمكن تجميعها‬
‫مره اخري وخصوصا للمركبات النادره‪.‬‬

‫ب – ذات الطبقه الرقيقه ( ‪ : ) TLC‬ويكون الطور الساكن ماده صلبه متصله ببعضها مثل ( كبريتات‬

‫الكالسيوم ) موضوعه علي سطح زجاجي او بالستيك او محمل علي معدن ‪metal‬‬

‫ثالثا ‪ /‬التقسيم طبقا لعمليه الفصل نفسها ( ‪: ) Mode of operation‬‬

‫‪ ) Development chromatography ( -1‬في هذه الطريقه يتم ايقاف الطور المتحرك قبل خروج‬

‫الماده من الطور الساكن وفي هذه الحاله يسمي الطور المتحرك (‪ – ) developer‬المطور –‬

‫وتسمي حركه السائل علي طول الطور الساكن ( ‪ – ) development‬التطوير –‬

‫‪ ) Elution chromatography ( - 2‬في هذه الطريقه تتم هجره السائل المحتوي علي الماده المراد‬

‫فصلها خالل عمود الفصل ويتم بالتتابع الكشف عن الماده الخارجه عن طريق الكاشف ( المقدر ) لفصل‬

‫كل مكون عن االخر‬

‫‪24‬‬
 ‫رابعا ‪ /‬التقسيم تبعا لل ‪: Retention mechanism‬‬
‫ظ تقريبيةُ‪ ،‬ألن اإلحتفا َ‬
‫ظ في الحقيقة عباره عن خليط من ال ‪ RT‬و ال ‪RF‬‬ ‫التصنيف من ناحية آلي ِة اإلحتفا َ‬

‫خامسا ‪ /‬التقسيم تبعا للطور الساكن ‪:‬‬

‫قد يكون الطور الساكن سائل او صلب كاالتي ‪:‬‬

‫‪25‬‬
 ‫سادسا ‪ /‬التقسيم تبعا لمبادئ الفصل ( ‪: ) Principle of sepration‬‬
‫‪ -1‬كروماتوجرافيا االمتصاص ( ‪:) Adsorption chromatography‬‬
‫تعتمد علي اختالف درجه امتصاص لكل مركب عن االخر الموجوده داخل العينه علي سطح صلب‬

‫نشط ومناسب‪.‬‬

‫‪26‬‬
 ‫‪ -2‬كروماتوجرافيا حجب الجزيئات (‪: Molecular exclusion chromatography‬‬

‫تتم استخدام نظريه الفصل باستخدام حجب الجزيئات ‪:‬‬

‫تعتمد نظريا علي حجم الجزء ومدي قابليه الجزئ للخروج من ثقوب ماده معينه‬

‫كروماتوجرافيا الجيل ( ‪: ) Gel permeation chromatography‬‬

‫تتم عمليه الفصل باستخدام الجيل كاالتي ‪:‬‬

‫تعتمد ايضا علي حجم الجزيئات فالجزء صغير الحجم يستطيع المرور من الجيل اما االكبر بكون في نهايه‬
‫الجل المثبت داخل عمود الفصل واالكبر يكون اعلي وهكذا وبذالك يتم استخالص كل علي حده‬

‫‪27‬‬
DIAGRAM OF SIMPLE LIQUID COLUMN CHROMATOGRAPHY

Solvent(mobile or
moving phase)
OOOOOOOOOOO
A +B +C Sample OOOOOOOOOOO
(A+B+C) OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOA OOOO
OOOOOOOOOO Column OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO Solid Particles OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO (packing material- OOOOOB OOOO
OOOOOOOOOO stationary phase) OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOC OOOO
OOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOO
OOOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO
OOOOOOOOOO OOOOOOOOOOO

Eluant (eluate)

: ) Partition chromatography ( ‫ كروماتوجرافيا التقسيم‬-3

: ‫تتم عمليه الفصل تبعا للتقسيم كاالتي‬
‫ يتم تقسيم الكروماتوجرافي تبعا لإلختالف في ذوبانيه كل مكون من مكونات الخليط المراد فصله تبعا‬-1

) ‫للطور الساكن ( الكروماتوجراف الغازي‬

‫ يتم تقسيم الكروماتوجرافي تبعا لإلختالف في ذوبانيه كل مكون من مكونات الخليط المراد فصله‬- - 2

) ‫تبعا للطور الساكن والطور المتحرك سويا ( الكروماتوجراف السائل‬

28
 ‫‪ -4‬كروماتوجرافيا تبادل االيونات ( ‪: ) Ion-exchange chromatography‬‬
‫تعتمد هذه الطريقه علي االختالف بين االنيون والكاتيون وعلي درجه االختالف في تبادل االيونات حيث‬

‫تقوم االنيونات السالبه أو الكاتيونات الموجبه باإلرتباط بالطور الساكن ومن ثم يقوم الطور المتحرك‬

‫باتمام عمليه الفصل حيث يقوم االنيون المتصله بالطور المتحرك باالتصال بالكاتيون المفصول علي‬

‫الطور الساكن وتتم عمليه الفصل‬

‫‪29‬‬
 ‫‪ -5‬الفصل تبعا للصله ( ‪: ) The affinity chromatography‬‬
‫عن طريق الخواص البيولوجيه الفريده بين ارتباط ال ( ‪ ) ligand‬مع ( ‪) analyte‬‬

‫‪30‬‬
 ‫تحت ظروف مناسبه الرتباط اليجاند مع المكون المناسب له والموجود في الخليط وبعد امرار الخليط في‬
‫وسط غير ماص للخليط يتم االرتباط المذكور وبعد اتمام عمليه الفصل تتم مراحل الغسيل التمام التنقيه‬
‫النهائيه للماده المفصوله‬

‫وبعد الحديث عن التقسيم ينبغي علينا ذكر طرق الفصل كاالتي ‪:‬‬
‫‪ / 1‬الفصل باستخدام ورقه الفصل‬
‫تعد من ابسط طرق الفصل الكروماتوجرافي بسبب سهوله تطبيقها والتعرف علي المركبات العضويه ذات الوزن‬
‫الجزيئي الصغير عن طريقها والتعرف ايضا علي بعض المركبات الغير عضويه ‪.‬‬

‫ونعتمد في استخدام ورقه الفصل علي االختالف في االنتشار للمركبات علي ورقه الفصل المصممه خصيصا‬
‫لذالك الغرض مما يؤدي الي األختالف في معامل التجزئه (‪. )Partition coefficient‬‬

‫وتكمن نظريه الفصل في ان الطور المتحرك في هذه الطريقه يكون المذيب العضوي ويكون الطور الساكن‬
‫المسبب لإلعاقه هو الماء الممتص علي الجزء ال ‪ Hydrophilic‬الموجود علي سطح ورقه الفصل وبدال من هذه‬
‫الطريقه يوجد انواع من الورق الملقح بالسليكا الغير متميئه او االلومينا وبذالك تكون التجزئه معتمده علي فصل‬
‫السائل – صلب ( ‪. ) Liquid solid extraction‬‬

‫عندما تتم إضافه نقطه من المحلول علي ورقه الفصل تتأثر هذه النقطه بقوتين االولي تكون قوه الدفع (‬
‫‪ ) propelling force‬والقوه االخري هي قوه االإعاقه ( ‪.) retarding force‬‬

‫أوال قوه الدفع ‪ :‬هذه القوه تحاول اعاقه الماده في اتجاه سير المذيب وتعتمد علي اختالف زوبانيه المواد بالنسبه‬
‫للمذيبات المختلفه كما ان الذوبانيه تختلف باختالف درجات الحراره ‪.‬‬

‫‪31‬‬
 ‫فمثال عند وجود خليط من عده مواد مراد فصلها باستخدام ورقه فصل يكون االسرع في الحركه هي الماده التي‬
‫لها اعلي ذوبانيه مع ذالك المذيب واالقل في الحركه هو االقل في الذوبانيه بالنسبه للمذيب‪ .‬ولذالك لزم عند أختيار‬
‫مذيب معين لمادتين ان يكون هناك اختالف كبير في درجه الذوبانيه وفي بعض االوقات اليتحقق الفصل باستخدام‬
‫مذيب واحد ويلزم استخدام أكثر من مذيب عضوي واحد ولذاك أطلق علي هذا النوع من الفصل ( ‪Tow‬‬
‫‪. )dimensial chromatography‬‬

‫ثانيا قوه اإلعاقه ‪ :‬تقوم بشد الماده للخلف نحو نقطتها وتعتمد هذه القوه علي نسبه االمتصاص ونسبه التجزئه ولكن‬
‫في ورقه الفصل يكون االعتماد الكلي علي التجزئه أما االمتصاص فله دور صغير في الفصل وذالك بسبب وجود‬
‫خاصيه امتصاص للورقه نتيجه احتوائها علي مجموعه كربوكسيل‪.‬‬

‫وتكون فكره االمتصاص في ان بعض المركبات الموجوده في الخليط تمتص بقوه عن غيرها مما يؤدي الي‬
‫إختالف في كميه الماده المتحركه مع المذيب وبذالك يكون المركب الذي له قوه امتصاص عاليه في الورقه يبقي‬
‫في مكانه والذي له قوه أمتصاص في الورقه أقل يتحرك مع المذيب‪.‬‬

‫كما تتم عمليه الفصل بالتجزئه علي ورقه الفصل أيضا وذالك الن ورقه الفصل تحتوي علي السليلوز والذي‬
‫يحتوي علي كميات ضئيله من الماء وبذالك تتحرك الماده الموضوعه علي ورقه الفصل مع مذيبان غير متحدين‬
‫وهو المذيب العضوي والماء وبذالك تتم عمليه التجزئه بين هاذين المذيبين تنبعا لإلختالف في الذوبانيه بالنسبه‬
‫لكل مذيب علي حده ‪.‬‬

‫وتكون العالقه بين المذيب والمذاب ب ‪ Rf‬والتي تعرف بحاصل قسمه المسافه المقطوعه للماده علي المسافه‬
‫المقطوعه للمذيب وتقاس المسافتين من نقطه البدء مع العلم بان كل مركب له ‪ Rf‬مختلف عن غيرها وتكون دائما‬
‫هذه العالقه أقل من الواحد الصحيح وبذالك نستطيع تحديد المركب عن طريق جداول موضوعه‪.‬‬

‫ويمكن إستخدام عالقه اخري اكثر سهوله وهي ‪ Rx‬وتكون هذه العالقه حاصل قسمه المسافه المقطوعه للماده الي‬
‫المسافه المقطوعه لمحلول قياسي له نفس المركبات ‪.‬‬

‫ويعتمد ال ‪ Rf‬علي عده عوامل هامه وهي ‪:‬‬

‫‪ – 1‬درجه الحراره‬

‫‪ – 2‬جوده ورقه الفصل‬

‫‪32‬‬
 ‫‪ – 3‬المذيب المستخدم‬

‫‪ – 4‬طريقه العمل‬

‫‪ – 5‬التفاعالت التي قد تحدث بين المركبات داخل الخليط‬

‫‪ – 6‬المسافه المقطوعه بين المذيب والمذاب‬

‫خطوات العمل ‪:‬‬

‫‪ – 1‬أختيار ورقه الفصل المناسبه‬

‫‪ – 2‬تحضير المحاليل‬

‫‪ – 3‬طريقه وضع الماده علي الورقه‬

‫‪ – 4‬اختيار المذيب‬

‫‪ – 5‬تطوير الفصل‬

‫‪ – 6‬تجفيف الورقه‬

‫‪ – 7‬تحديد موقع الماده علي الورقه‬

‫‪ – 8‬التحليل الكمي‬

‫فصل وتنقيه المخاليط‬

‫أوال ‪ :‬سحب العينات‬

‫‪ -1‬يجب ان تتم عمليه سحب العينات في زجاجيات نظيفه بنيه اللون لها غطاء تفلون للحفاظ بقدر المستطاع علي‬
‫المركبات العضويه الموجوده داخل العينه والتي قد تتأثر بالضوء‬
‫‪ -2‬في حاله ‪ chlorine residue‬تتم اضافه ‪ 80‬مل من صوديوم ثيو سلفات الي العينه‬
‫‪ -3‬يتم حفظ العينه في الثالجه عند درجه حراره اكبر من ‪ 4‬درجه لمده ‪ 7‬ايام علي االكثر‬
‫‪ -4‬عينات التربه والمراد عمل اختبارات عضويه لها يشترط ان تكون العينه غير سطحيه علي االقل نصف‬
‫متر عن سطح االرض مع وضع العينه في زجاجيات مغلقه وتحفظ في الثالجه‬
‫ثانيا ‪ :‬الغسيل المبدئي والتحضير للزجاجيات ‪:‬‬
‫‪ -1‬عند البدء في غسل الزجاجيات يراعي استبدال غطاء التفلون باخر عادي مع وضع المونيوم فويل للحفاظ‬

‫‪33‬‬
 ‫علي الغطاء من الكيماويات واالحماض المستخدمه في عمليه الغسيل‬
‫‪ -2‬يتم تحضير حمض الكروميك بإضافه ‪ 5‬جم من البوتاسيوم داي كرومات في ‪ 1‬لتر حمض كبريتيك مركز‬
‫‪ -3‬ان يتم غسل زجاجيات بمنظفات عاديه ماء وصابون‬
‫‪ -4‬يتم اضافه حمض الكروميك داخل الزجاجيات علي االقل ‪ 4‬ساعات يقوم حمض الكروميك بتكسير المركبات‬
‫العضويه الموجوده داخل الزجاجه ويعطي لون اخضر اذا كانت الزجاجه تحتوي علي مركبات عضويه‬
‫‪ -5‬يتم غسل الكروميك بالماء جيدا‬
‫‪ -6‬يتم تقطير الزجاجه بماء مقطر جيدا‬
‫‪ -7‬يتم التجفيف بواسطه ‪ Dryer‬عند ‪ 103‬درجه للتأكد من جفاف الزجاجيات‬
‫‪ -8‬يتم امرار اسيتون ‪ %99‬علي الزجاجيات لسحب الرطوبه والماء الزائد من الزجاجيات‬
‫‪ -9‬تسري هذه العمليه علي جميع الزجاجيات‬
‫‪ -10‬تم اتباع الطرق المعتمده للتنظيف والتنقيه علي حسب كل اختبار‬

‫‪34‬‬
 :‫مراحل التنقيه والتحضير‬
: ‫يتم استخدام الطرق المعتمده للتنقيه والتحضير كاالتي‬
Method 3600C: Cleanup

Method 3610B: Alumina Cleanup

Method 3611B: Alumina Column Cleanup and Separation of Petroleum Wastes

Method 3620B: Florisil Cleanup

Method 3630C: Silica Gel Cleanup

Method 3640A: Gel-Permeation Cleanup

Method 3650B: Acid-Base Partition Cleanup

Method 3660B: Sulfur Cleanup

Method 3665A: Sulfuric Acid/Permanganate Cleanup

: ‫ عمليه االستخالص طبقا للقواعد المعتمده‬: ‫ثالثا‬

Method 3500B: Organic Extraction and Sample Preparation

Method 3510C: Separatory Funnel Liquid-Liquid Extraction

Method 3520C: Continuous Liquid-Liquid Extraction

Method 3535: Solid-phase extraction

Method 3540C: Soxhlet Extraction

Method 3541: Automated Soxhlet Extraction

Method 3542: Extraction of semivolatile analytes using Method 0010

Method 3545: Pressurized Fluid Extraction (PFE)

Method 3550B: Ultrasonic Extraction

35
Method 3560: Supercritical Fluid Extraction of TRPHs

Method 3561: Supercritical Fluid Extraction of PAHs

Method 3580A: Waste Dilution

Method 3585: Waste Dilution for Volatile Organics

Method 5000: Sample preparation for volatile organics

Method 5021: VOCs in soils and other solid matrices using equilibrium

headspace analysis

Method 5030B: Purge-and-Trap for Aqueous Samples

Method 5031: Volatile, nonpurgeable, water-soluble compounds by

azeotropic distillation

Method 5032: Volatile organic compounds vacuum distillation

Method 5035: Closed-system purge and trap and extraction for VOC in

Soil and waste samples

Method 5041A: Analysis for Desorption of Sorbent Cartridges

36
 ‫مثال لعمليه استخالص مركبات ‪ PAHs‬من عينه مياه شرب ‪:‬‬
‫ملخص عمليه االستخالص‬
‫تتم عمليه االستخالص علي نوعان من العينات‬

‫‪ - 1‬العينات السائله‬
‫‪ - 2‬العينات الصلبه‬
‫‪ - 1‬العينات السائله‬
‫‪SPE‬‬ ‫أ ‪ /‬استخالص الحاله الصلبه‬
‫ب ‪ /‬استخالص السائل – سائل‬

‫تحويل المواد العضويه الي‬
‫صوره سائله ذائبه في‬
‫مذيب معين‬
‫استخالص السائل – سائل‬ ‫استخالص الحاله الصلبه‬
‫‪Liquid Liquid‬‬
‫‪Extraction‬‬

‫المركبات الكلوريه‬ ‫المركبات‬

‫والفوسفوريه‬ ‫الهيدروكربونيه‬

‫المركبات ذات‬ ‫المركبات‬

‫الحلقه الواحده‬ ‫االليفاتيه‬
‫المركبات متعدده‬
‫الحلقات‬

‫‪37‬‬
 ‫األدوات المطلوبه ‪:‬‬ ‫الكيماويات المطلوبه ‪:‬‬

‫‪ -13‬قمع فصل ‪ 2‬لتر للتركيزات الخفيفه مثل عينات‬ ‫‪ -1‬ايثانول ‪HPLC grade‬‬
‫مياه الشرب‬
‫‪ -2‬ميثانول ‪HPLC grade‬‬
‫‪ -14‬قمع فصل ‪ 1‬لتر للعينات عاليه التركيز‬
‫‪ -3‬اسيتون ‪HPLC grade‬‬
‫‪ -15‬فرن تجفيف ‪ 150‬درجه مأويه‬
‫‪ -4‬كلوريد الميثلين ( داي كلورو ميثان)‬
‫‪ -16‬فرن ‪ 400‬درجه مأويه‬
‫‪ -5‬سايكلو هكسان ‪HPLC grade‬‬
‫‪Rotary evaporator -17‬‬
‫‪ -6‬نورمال هكسان ‪HPLC grade‬‬
‫‪ -18‬كولوم لفصل العينات‬
‫‪ -7‬سلكا بودر حبيبات ناعمه‬
‫‪ -19‬حامل دائري لقمع الفصل‬
‫‪ -8‬الومينا ( المونيوم أكسيد) حبيبات ناعمه‬
‫‪ -20‬حامل سحاحه للكولوم‬
‫‪ -9‬ورقه ترشيح غير منفذه للماء‬
‫‪ -21‬جهاز ‪ soxhlet‬الستخالص المركبات‬
‫‪ -10‬هكسان ‪ % 20‬داي كلورو ميثان‬
‫العضويه من التربه‬
‫‪ -11‬هكسان ‪ % 40‬داي كلورو ميثان‬
‫‪ -22‬سلندر ‪ 100‬مل‬
‫‪ -12‬كبريتات صوديوم ال مائيه‬
‫‪ -23‬ثالجه‬

‫‪ -24‬كودرنا دانش لتركيز العينات المتطايره‬

‫‪ -25‬دسكاتور لتبريد العينات بعد خروجها من الفرن‬

‫‪Glass rod -26‬‬

‫خــطــوات الــعمــلي ‪:‬‬

‫‪ – 1‬سحب العينه‬
‫‪ -2‬وضع ‪ 1‬لتر أو ‪ 2‬لتر من الماء في قمع فصل حسب وجود المواد العضويه كلما زادت المواد العضويه‬
‫كلما قلت كميه العينه المفصوله لضمان دقه الفصل‬

‫‪38‬‬
 ‫‪ -3‬وضع ‪ 25‬مل من كلوريد الميثلين داخل قمع الفصل‬

‫‪ -4‬رج العينه جيدا لمده ‪ 5‬دقائق مع فتح محبس القمع بعد الفصل لخروج الهواء الزائد‬

‫‪ -5‬يتم اخراج الطبقه السفليه من قمع الفصل‬

‫‪39‬‬
 ‫‪ -6‬تكرار الخطوه ‪ 5 , 4 , 3‬مرتان اخران‬
‫‪ -7‬بذالك تكون تم استخالصالماده العضويه‬
‫‪ -8‬بوضع ناتج الفصل داخل المبخر ‪Rotary Evaporator‬‬
‫‪ -9‬يتم ضبط درجه الحراره عند درجه ‪ 45‬درجه مأويه مع امرار الماء في مكثف المبخر والسماح‬
‫بدوران القاروه المحتويه علي الماده العضويه بحيث تكون توزيع الحراره بدرجه مناسبه علي‬
‫المحلول ككل مع غلق القاروره جيدا حتي ال تتم عمليه فقدان المذيب وتلويث البيئه‬

‫ملحوظه ‪ :‬الخطوه ‪ 9‬ال تسري علي العينات المتطايره ولكن يوجد طرق اخري لتركيز العينات‬

‫يتم تركيز العينات في المبخر الي ان تصل الي حجم ‪ 1‬مل ويضاف عليها الهكسان الحلقي بعد‬ ‫‪-10‬‬
‫التخلص من كلوريد الميثيلين تماما عن طريق المبخر‬
‫بعد إتمام ال‪ 10‬خطوات السابقه تكون العينه الناتجه جاهزه للدخول في عمود الفصل للوصول للصوره‬
‫النهائيه التي علي اثرها يتم إدخال العينه في جهاز الكروماتنوجراف الغازي وذالك بفصل كل مكون عن‬
‫االخر ( االليفاتي عن ذو الحلقه الواحده عن متعدد الحلقات ) وذالك في حاله قياس المركبات‬
‫الهيدروكربونيه‬

‫عمود الفصل الكروماتوجرافي‬

‫تجهيز العمود‪:‬‬
‫‪ -1‬يتم وضع ‪ 10‬جم من السلكا و ‪ 10‬جم من االلومينا بودر و ‪ 2‬جم من كبريتات الصوديوم‬
‫االمائيه في الفرن عند ‪ 400‬درجه لمده اربع ساعات وذالك لعمل‬
‫‪Deactivation‬‬

‫‪ -2‬يتم وضع السلكا وااللوينا وكبريتات الصوديوم داخل دسكاتور للتبريد‬

‫‪ -3‬يتم اضافه ‪ % 5‬من الوزن ماء مقطر علي السليكا وااللومينا لعمل ‪Activation‬‬

‫‪40‬‬
 ‫‪ -4‬يتم تحضير المحاليل المستخدمه في استخراج المركبات العضويه‬
‫‪ -5‬يتم وضع قطعه من القطن عند طرف العمود‬
‫‪ -6‬تتم اضافه ‪ 12‬مل من السلكا جل و ‪ 6‬مل من اللومينا بودر و‪ 2‬مل من كبريتات الصوديوم اال‬
‫مائيه‬

‫‪ -7‬يتم اضافه الهكسان الحلقي علي اليودر حتي تمام تحول البودر الي جيل‬
‫‪ -8‬بعد تمام التحول الي جيل يتم وضع العينه داخل عمود الفصل ثم يضاف بعدها ‪ 10‬مل من الهكسان‬
‫النورمال لتحرير المركبات االليفاتيه ثم ‪ 10‬مل من هكسان ‪ %20‬كلوريد الميثلين لتحرير‬
‫المركبات احاديه الحلقه ثم ‪ 20‬مل من كلوريد الميثلين لتحرير المركبات العضويه متعدده الحلقات‬
‫‪ -9‬يتم تركيز العينات كل علي حده ثم تتم قياس نسبهم بجهاز الكروماتوجراف الغاز‬

‫‪41‬‬
 ‫الفصل الثاني‬
‫جهاز الكروماتوجراف الغازي‬

‫‪42‬‬
 ‫الـفـصـل الـكـرومـاتـوجـرافــي‬
‫الـفـصـل بـاسـتـخـدام الكـرومـاتـوجـراف الغازي ‪:‬‬

‫يعتمد الحديث عن جهاز الكروماتوجراف الغازي علي عنصران اساسيان وهما ‪:‬‬
‫‪1-Hardware & firmware‬‬
‫وفي ذالك السياق يتم الحديث عن مكونات الجهاز تفصيليا ووظيفه كل مكون من مكونات الجهاز‬

‫‪2 – Software‬‬
‫وفي ذالك يتم الحديث عن استخدام برمجه الجهاز للحصول علي نتائج صحيحه‬

‫كروكي الجهاز ‪:‬‬

‫‪43‬‬
 ‫مكونات الجهاز ‪:‬‬
‫‪ – 8‬عمود الفصل‬ ‫‪ -1‬مصدر للطور المتحرك ( الغاز الخامل )‬
‫‪ - 9‬الفرن‬ ‫‪ -2‬منظم للغاز الخامل‬
‫‪ - 10‬الكاشف‬ ‫‪ -3‬انبوبه هيدروجين ‪% 99.99‬‬
‫‪ – 11‬حساسات الحراره والضغوط‬ ‫‪ -4‬مضخه للهواء‬
‫‪ – 12‬برنامج التحكم وتحليل النتائج‬ ‫‪ -5‬فالتر للهواء‬
‫‪ – 13‬الساحب االلي ‪Auto sampler‬‬ ‫‪ – 7‬الحاقن ( مصدر دخول العينه )‬

‫‪ -1‬مصدر للطور المتحرك ( الغاز الخامل )‬

‫‪ - 1‬البد وأن يكون مصدر الطور المتحرك خامل ( خالي من االكسجين والرطوبه)‬
‫‪ – 2‬يتم تركيب للغاز الخامل ثالث فالتر للتأكد من خلو الغاز من المواد الغير نقيه وهم ( فلتر الرطوبه – فلتر‬
‫هيدروكربوني وفلتر لألكسجين وبذالك تكون النقاوه علي االقل ‪% 99.99‬‬
‫‪ – 3‬يقوم الطور المتحرك بعمل حمل للماده العضويه من الحاقن ثم الي عمود الفصل والذي يقوم بامتصاص الماده‬
‫العضويه ومن ثم فصلها ثم يقوم الغاز الخامل بحملها بعد الفصل الي الكاشف المناسب لها‬
‫‪ – 4‬انواع الغازات الخامله المستخدمه في جهاز الكروماتوجراف الغازي هم الهيليوم والنيتروجين والهيدروجين‬
‫واالرجون ‪ % 5‬ميثان‬
‫‪ – 5‬في بعض طرق الفصل باستخدام اعمده الفصل الشاعريه يفضل استخدام غاز الهيروجين كغاز خامل‬
‫‪ – 6‬الملوثات التي قد تكون في الغاز الخامل تؤدي الي‪:‬‬
‫أ ‪ /‬التفاعل مع الماده العضويه‬
‫ب ‪ /‬تحميل زائد علي الكاشف‬
‫ج ‪ /‬أرتفاع في ال ‪Base line‬‬

‫‪ -2‬مصدر دخول العينات ( الحاقن ) ‪Inlet‬‬

‫‪ – 1‬هي المنطقه االكثر حراره ( من درجه حراره تبخير اعلي مركب في الخليط المراد فصله ) حتي تتم عمليه تبخير‬
‫العينه كامله ليتم حملها بواسطه الطور المتحرك لدخولها في عمود الفصل لفصلها ثم تقدير كمياتها‬
‫‪ – 2‬يتم تقسيم مصدر دخول العينات الي نوعين اساسيان ‪:‬‬

‫أ – مداخل حقن العينه ‪Injection Ports‬‬

‫‪44‬‬
 ‫ب –صمامات السحب ‪Sampling valves‬‬
‫‪ – 3‬تقوم نظريه العمل علي ان العينه تدخل في صورتها السائله بالمايكرو ليتر بواسطه سرنجه معينه الي منطقه ذات‬
‫درجه حراره عاليه ‪ Linear‬عن طريق جزء مطاطي ويسمي السبتم والذي يسمح بدخول العينه وال يسمح بخروجها‬
‫وبعد مرور السرنجه من السبتم تتم عمليه خروج العينه لداخل الجهاز‬
‫‪ – 4‬بالنسبه للعينات الغازيه يتم تحليلها تحليل كيفي وليس تحليل كمي وباستخام سرنجه مخصصه للغاز اما اذا ‪Gas‬‬
‫‪sample valve‬كانت العينه مطلوب تحليلها تحليال حجميا فالبد من وجود صمام العينات الغازيه‬

‫أ – مداخل (موانئ ) حقن العينه ‪Injection Ports‬‬

‫‪ – 1‬يقوم بحقن العينات السائله والعينات الغازيه‬
‫‪ -2‬يقوم بتبخير العينه‬
‫‪ – 3‬يتم اختيار نوع الحاقن البد من االعتماد علي قطر ونوع عمود الفصل‬
‫أنواع الحاقن‬
‫‪A- Split/Splitless Injector‬‬ ‫‪EPC and Non-EPC‬‬
‫‪B- Purged Packed Injector‬‬ ‫‪EPC and Non-EPC‬‬
‫‪c- Cool On-Column injector‬‬ ‫‪EPC only‬‬
‫)‪d- Programmed Temperature Vaporization (PTV‬‬ ‫‪EPC only‬‬
‫)‪e- Volatiles Interface Injector (VI‬‬ ‫‪EPC only‬‬
‫‪A- Split/Splitless Injector‬‬
‫‪ - 1‬يسمي بالحاقن الشاعري‬
‫‪ – 2‬يستخدم فقط في اعمده الفصل الشاعريه‬
‫‪ – 3‬له اربع طرق لإلستخدام‬
‫للعينات ذات التركيز العالي بنسبه معينه ‪ 1:1‬أو‪1:2‬‬ ‫أ ‪ /‬فصل العينه ‪Split‬‬
‫الخ كل عينه حسب تركيزها وتخفيفها‬
‫للعينات ذات التركيز القليل حتي يتثني للعينه‬ ‫ب ‪ /‬دخول العينه كما هي ‪Splitless mode‬‬
‫الدخول الكامل داخل الجهاز وإتمام عمليه القياس‬
‫تسمح بدخول األحجام الكبيره‬ ‫ج ‪ /‬الفصل المتذبذب ‪Pulsed-Split Mode‬‬
‫تسمح بدخول االحجام الكبيره‬ ‫د ‪ /‬الدخول الكامل المتذبذب ‪Pulsed-Splitless Mode‬‬

‫‪45‬‬
 ‫كامله بسرعه وتقليل عمليه االمتصاص‬

‫‪B- Purged Packed Injector‬‬

‫‪ – 1‬يسمي حاقن العمود المعبأ فقط‬

‫‪ – 2‬يستخدم كحاقن للعمود المعبأ فقط‬
‫‪ – 3‬اثناء دخول العينه يتم تبخير العينه داخل العمود الزجاجي ‪ Liner‬وحقنها كامله داخل العمود المعبا في اقل من ثانيه‬
‫علي شكل فالش لذالك يطلق عليه ”‪“Flash Injector‬‬

‫‪c- Cool On-Column injector‬‬

‫‪ – 1‬يسمي الحاقن في العمود‬

‫‪46‬‬
 ‫‪ – 2‬يتم حقن العينه في صورتها السائله داخل العمود مباشره‬
‫‪ – 3‬تستخدم هذه الطريقه في العينات الغير ثابته حراريا والعينات ذات الحساسيه العاليه‬
‫‪ – 4‬غالبا ما يستخدم في اإلستخدامات البيئيه‬

‫)‪d- Programmed Temperature Vaporization (PTV‬‬

‫‪ – 1‬هذا الحاقن يتم من خالله دخول العينه بفصل او بدون فصل الي العمود باستخدام برنامج حراري حتي تتم سهوله‬
‫عمليه الفصل‬
‫‪ – 2‬يحتاج الي وحده تحكم ‪Epc‬‬

‫‪ – 3‬فعال في العينات الغير ثابته حراريا بحيث يتم تبريد العينه داخل الحاقن‬

‫‪47‬‬
 ‫)‪e- Volatiles Interface Injector (VI‬‬

‫‪ – 1‬للعينات الغازيه‬
‫‪ – 2‬خامل جدا‬
‫‪ – 3‬الكميه المحقونه محدوده‬
‫‪ – 4‬معدل فصل العينه صغير‬

‫)‪Electronic Pneumatic Control (EPC‬‬

‫وحده تحكم كهربي للتحكم في بعض انواع الحاقن كما تم ذكره سابقا‬

‫‪48‬‬
49
‫ب –صمامات السحب ‪Sampling valves‬‬
‫‪ - 1‬يستخدم لمخاليط الغازات‬
‫‪ – 2‬يستخدم في مدي من ‪ 250‬مايكرون الي ‪ 50‬مل‬
‫‪ - 3‬يوجد اكثر من نوع من الصمامات علي حسب انواع الغازات‬
‫أ ‪ /‬صمام ذات اربع مخارج‬
‫ب ‪ /‬صمام ذات سته مخارج‬

‫‪50‬‬
 ‫ج ‪ /‬صمام ذات ثمانيه مخارج‬
‫د ‪ /‬صمام ذات عشره مخارج‬

‫‪ –3‬الساحب االلي ‪Auto sampler‬‬

‫يقوم بالسحب االلي للعينه بعد إعداد وضبط السرنجه داخل الساحب وبعد التأكد من ثبات الكميات المسحوبه وبعد فحص‬
‫عمليه التنظيف االلي للسرنجه‬

‫‪51‬‬
‫‪ - 4‬عمود الفصل‬

‫يوجد نوعان من أعمده الفصل ‪:‬‬

‫أ ‪ /‬العمود الشاعري‬

‫ب ‪ /‬العمود المعبأ‬

‫‪52‬‬
 ‫أوال ‪ :‬العمود الشاعري‬
‫‪ – 1‬هو عباره عن انبوبه مفتوحه الطرفين مصنعه من النحاس أو ال ستانلس ستيل ومحمل بداخلها الطور الساكن‬
‫وهذا الطور قد يكون سائل أو صلب‬
‫‪ – 2‬عمود الفصل الشاعري له قطر داخلي عدد قليل من المليمترات‬
‫‪ – 3‬العمود الشاعري يحتاج كميه عينه صغيره عن العينه علي عكس العمود المعبأ‬
‫‪ – 4‬يتم تقسيم عمود الفصل الشاعري ال قسمين ‪:‬‬
‫)‪Wall-Coated Open Tubular (WCOT‬‬ ‫أ ‪ /‬عمود مفتوح مطلي من الجدار الداخلي‬
‫)‪Support-Coated Open Tubular (SCOT‬‬ ‫ب ‪ /‬عمود مفتوح مدعم من الداخل‬

‫‪WCOT‬‬
‫هو عباره عن انبوبه شاعريه مطليه من الداخل بطور ساكن سائل‬

‫‪SCOT‬‬
‫الماده الموجوده داخل عمود الفصل عباره عن طبقه رقيقه من ماده داعمه مثل ( ‪ )diatomaceous earth‬المناسبه‬
‫لتمام االمتصاص علي الطور الساكن‬
‫‪ – 5‬تتكون الماده الداعمه للعمود من ماده خامله كيميائيا ويحمل عليها الطور الساكن ولهذا السبب يجب ان تكون‬
‫فتحاتها المساميه كبيره ولذالك تستخدم مركبات السليكا لتفي بالغرض وغالبا ما تكون هذه المواد الكيميائيه تحتاج الي‬
‫المعالجه من الشوائب ولذالك تتم عمليه اضافه االحماض والقواعد للغسيل‬
‫‪ – 6‬في حاله أستخدام الطور الساكن السائل البد من توفر بعض الشروط ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬ان يكون غير قابل للتبخر وثابت عند درجات الحراره المستخدمه في التجربه‬
‫ب ‪ /‬ان ال يتم خروج السائل من الماده الداعمه اثناء مرور الغاز‬
‫ج ‪ /‬يتم استخدام الطور الساكن طبقا لنوع االختبار كما هو موضح في االمثله التاليه‬
‫‪ – 7‬بالنسبه للعمود المفتوح المدعم من الداخل ( ‪ ) Scot‬أقل كفاءه من العمود المطلي من الداخل ( ‪ ) Wcot‬وكالهما‬
‫اكثر كفاءه من العمود المعبأ‬
‫‪ – 8‬في عام ‪ 1979‬ظهر نوع جديد من العمود المطلي ( ‪ ) WCOT‬وهو العمود المفتوح المحتوي علي السلكا (‬
‫‪) Fused Silica open tubular FSOT‬‬

‫‪53‬‬
 ‫) ‪Fused Silica open tubular ( FSOT‬‬
‫‪ – 1‬هذا العمود ارفع من االعمده الزجاجيه كما انه يمتاز بالمرونه‬
‫‪ – 2‬له قوه تحمل عاليه‬
‫‪ – 3‬خامل الي حد كبير‬

‫ثانيا ‪ :‬العمود المعبأ‬

‫‪ – 1‬العمود المعبأ يحتوي من الداخل علي ماده داعمه رقيقه خامله مطليه بطور ساكن سائل مناسب‬
‫‪ – 2‬طور العمود من ‪ 10 : 1.5‬متر‬
‫‪ – 3‬يحتوي علي قطر داخلي من ‪ 4 : 2‬ملمتر‬
‫‪ – 4‬له سعه تحميل كبيره للعينات‬
‫‪ – 5‬فعال ايضا في العينات الغازيه‬
‫‪ – 6‬أقل كفاءه في العينات السائله من العمود‬
‫‪ – 7‬يوجد نوعان من العمود المعبأ عمود معبأ زجاجي – عمود ستانلس ستيل‬

‫وعموما ‪:‬‬
‫‪ – 1‬فأن عمود الفصل الكروماتوجرافي يقوم بتجزئه وفصل المركبات الموجوده داخل مخاليط معينه‬
‫‪ – 2‬تتم تحديد كفاءه عمود الفصل عن طريق‬
‫أ ‪ /‬المسافه بين ال ‪ Beaks‬والتي تحدد كفاءه الفصل فكلما زاد التداخل قلت الكفاءه‬
‫ب ‪ /‬معدل سريان الطور المتحرك يوضح كفاءه العمود‬
‫ج ‪ /‬تركيب العمود نفسه فكلما قل قطر العمود ورقه الطور الساكن كلما زادت كفائته‬
‫‪ – 3‬يتم اختيار عمود الفصل الكروماتوجرافي طبقا ل ‪:‬‬

‫‪54‬‬
 ‫أ ‪ /‬خصائص الطور الساكن يحدد انواع العينات الذي يقوم الجهاز بفصلها‬
‫ب ‪ /‬كيف تكون افضل طريقه للفصل بين مركبين باقل تداخل في النتيجه‬
‫‪ – 4‬الطور الساكن داخل العمود يساعده التغير في درجات الحراره إلتمام عمليه الفصل‬
‫أ ‪ /‬في درجات الحراره الصغري ( درجه االنصهار ) ‪:‬‬
‫‪ – 1‬أقل من هذه الدرجه يكون ‪GSC‬‬

‫‪ – 2‬أعلي من هذه الدرجه يكون ‪GLC‬‬

‫ب ‪ /‬في أعلي درجه حراره غالبا ما يتم استخدام درجه الغليان لكل مكون من الخليط‬
‫‪ – 5‬التحكم في الغازات ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬في العمود المعبأ يتم استخدام معدل سريان الكتله‬
‫ب ‪ /‬في العمود الشاعري يتم استخدام معدل سريان الضغط‬

‫‪55‬‬
‫أنواع الطور الساكن في العمود المعبأ‬

‫‪56‬‬
57
58
 ‫‪ – 5‬الفرن‬
‫‪ – 1‬يحاط عمود الفصل الكروماتوجرافي بمصدر حراري مبرمج أو ثابت لسهوله عمليه الفصل وإلن عمليه الفصل‬
‫تحتاج لدرجات حراره عاليه‬
‫‪ – 2‬يوجد نوعان من االفران ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬فرن ذات درجه حراره واحده وثابته ‪ISO THERMAL‬‬
‫ب ‪ /‬فرن ذات درجات حراره يتم ضبطها طبقا لبرنامج معين‬

‫‪59‬‬
 ‫سيتم خصائص الفرن طبقا لماركه الجهاز المشروح ولكن االختالف بين انواع االجهزه طفيف جدا‬
‫‪ – 3‬خصائص الفرن ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬أقل درجه حراره ‪ 60-‬درجه إذا تم التبريد بغاز ‪co2‬‬
‫ب ‪ /‬أقل درجه حراره ‪ 80-‬درجه مأويه إذا تم التبريد بغاز النيتروجين السائل‬
‫ج ‪ /‬اليتم استخدام درجات الحراره العاليه أو التبريد العالي اال إذا كان عمود الفصل يسمح بذالك‬
‫د ‪ /‬أعلي درجه حراره ‪ 450‬درجه مأويه‬
‫ه ‪ /‬معدل التغير في درجات الحراره من ‪ 0‬ال ‪ 120‬درجه في الدقيقه‬
‫و ‪ /‬يتم ضبط درجات الحراره طبقا لنوع العينه المفصوله ونوع وطول عمود الفصل‬

‫فرن ذات درجه حراره واحده وثابته ‪ISOTHERMAL‬‬

‫مميزاته ‪:‬‬
‫‪ – 1‬يعتبر ابسط طريقه لعمل اي اختبار حيث انه الياخذ الكثير من الوقت في تعديل درجه حراره الفرن فدرجه الفرن‬
‫ثابته والجهاز دائما جاهز للعينات‬
‫‪ – 2‬يحافظ علي درجه الحراره خالل التجربه‬
‫عيوبه ‪:‬‬
‫‪ – 1‬العينات التي بها العديد من المركبات تأخذ الكثير من الوقت إلتمام عمليه الفصل‬
‫‪ – 2‬في كثير من االحيان تؤثر ثبات الحراره بالسلب علي دقه وصحه الفصل‬

‫ب ‪ /‬فرن ذات درجات حراره يتم ضبطها طبقا لبرنامج معين‬

‫تتغير درجه حراره التجربه طبقا للبرنامج الموضوع للحصول لعمليه فصل مثاليه ولكن درجات الحراره ومعدل زيادتها‬
‫او نقصانها بالنسبه للزمن يتم ضبطها طبقا لقواعد معتمده ومحدده‬
‫مميزاته ‪:‬‬
‫ا – إختزال وقت التفاعل‬
‫‪ – 2‬ثبات شكل ال ‪ Peak‬في كل مراحل التجربه‬
‫‪ – 3‬سهوله الكشف والقياس للعينه‬
‫عيوبه ‪:‬‬
‫‪ – 1‬العينات ذات درجات الحراره العاليه تتأثر عند تغيير درجه الحراره من االقل الي االعلي علي عكس الفرن الثابت‬
‫حراريا‬

‫‪60‬‬
 ‫‪ – 2‬البد من تبريد الفرن بعد كل حقنه للوصول لدرجه الحراره البادئه مما يؤدي الي التأخير في وقت إتمام عدد من‬
‫العينات‬
‫‪ –6‬المقدر‬
‫يجب أن يتوفر في المقدر الخواص اآلتيه‪:‬‬
‫‪ – 1‬سرعة االستجابة لكل تغير في تركيزات المذابات المختلفة‪.‬‬
‫‪ – 2‬ارتفاع حساسيته و ثباتها أثناء عملية الفصل‪.‬‬

‫‪ – 3‬أن تكون استجابته للتغير في التركيز عبارة عن عالقة خطية‪.‬‬

‫يوجد العديد من ال ‪ Detectors‬المستخدمه في جهاز الكروماتوجراف الغازي علي حسب الماده المراد الكشف عنها‬
‫بواسطه الجهاز ويوجد عده أنواع من المقدر وهم‬
‫)‪1. Flame Ionization Detector (FID‬‬

‫)‪2. Thermal Conductivity Detector (TCD‬‬

‫)‪3. Nitrogen-Phosphorous Detector (NPD‬‬

‫)‪4. Flame Photometric Detector (FPD‬‬

‫‪5. Electron Capture Detector (ECD)/ Micro-Cell Electron Capture Detector‬‬

‫)‪(uECD‬‬

‫)‪6. Mass Spectrometer Detector (MSD‬‬

‫)‪7- Atomic-Emission Detector (AED‬‬

‫‪8- Chemiluminescence Spectroscopy‬‬

‫‪61‬‬
Comparison of GC
Detectors

ELCD (SorN
ELCD )
( X)
AED
TC
FID D
EC
D NPD
(N) (P)
NPD
FPD (S)
PID

(SIM IR
MS ) D (SCAN
D )
10-15 10-12 10-9 10-6 10-3
Sensitivity fg pg ng ug mg grams
1 ppt 1 ppb 1 ppm 0.1 % 100 %

62
 ‫)‪Thermal Conductivity Detector (TCD‬‬
‫‪ – 1‬مكون من سلك كهربي حراري (ملف تسخين )‬
‫‪ – 2‬يقوم الكاشف بحس فرق درجات الحراره بين الماده العضويه والوسط المحيط بها‬
‫‪ – 3‬االختالف في درجات الحراره تمثل القيمه فلو كان هناك مركب عضوي وسط طور متحرك نجد انه عند مرور‬
‫الماده العضويه ترتفع درجه الحراره وبذالكيقوم المقدر بالكشف‬

‫(‪Electron Capture Detector (ECD‬‬

‫‪ – 1‬يتكون من نظير إشعاعي يكون مصدر لإللكترونات والذي يقوم بإستقطاب جزء من الطور المتحرك ليتكون تيار‬
‫مبدئي يمكن ان يحس به المقدر‬
‫‪ – 2‬عندما تمر مركبات عضويه تحتوي علي مركبات لها سالبيه كهربيه مثل الهالوجينات والفوسفور والنيترو تقوم‬
‫هذه المركبات بأخذ جزء من االلكترونات وينتج تيار يمكن قياسه‬

‫)‪Flame Ionization Detector (FID‬‬

‫‪ – 1‬يتكون علي يتكون من الهيدروجين والهواء الذي يقوم الجهاز بسحبه بواسطه مضخه هواء‬
‫‪ – 2‬عندما تدخل الماده العضويه من مخرج عمود الفصل عن طريق الطور المتحرك يتم إمراره علي اللهب والذي‬
‫بدوره يقوم بتأين المواد العضويه‬

‫‪63‬‬
 ‫‪ – 3‬هذه االيونات يتم تجميعها علي الكترود ليقوم بتحويلها الي إشاره يستطيع الجهاز الحس بها‬
‫‪– 4‬حساسية هذا المقدر ممتازة للغاية ( في مجال النانوجرام)‪.‬‬
‫‪ – 5‬العالقة بين استجابته و التركيز خطية في مدى واسع من التركيز‪.‬‬
‫‪ – 6‬اختيار نوع الغاز الحامل غير مهم حيث يمكن استخدام غز الهليوم أو النيتروجين أو األرجون‪.‬‬

‫)‪Atomic-Emission Detector (AED‬‬

‫‪64‬‬
 Chemiluminescence Spectroscopy

Mass Spectrometer Detector (MSD)

65
 ‫‪ –7‬اللينر‪Liner‬‬
‫يعتبر أول إتصال فعلي بين العينه وعمود الفصل الكروماتوجرافي حيث انه المستقبل الثاني للعينه بعد الحاقن‬
‫ويحتوي علي عده مقاسات وانواع منه ما هو ‪ 2‬مم ومنه ماهو ‪ 4‬مم وغير ذالك كما انه مدعم في بعض االنواع‬
‫بقطع من الصوف الحراري كونوع من انواع فلتره العينه من الشوائب ومنه ماهو غير مدعم‬

‫‪Septa–8‬‬
‫هو قطعه من المطاط الحراري يسمح بدخول العينه بعد اختراق االبره له وال يسمح بخروجها ويكون علي حسب‬
‫مقاس الحاقن ‪ 10‬مم او ‪ 11‬مم او ‪ 12‬مم او غير ذالك وهذه القطعه من القطع المتغيره في الجهاز ويفضل‬
‫تغيرها بعد كل ‪ 50‬حقنه‬

‫‪Reducer – 9‬‬

‫‪66‬‬
 ‫‪washer – 10‬‬

‫‪ – 11‬الصاموله ‪Nut‬‬
‫عند تركيب عمود فصل معبأ نحاسي او تفلون ذات قطر خارجي ‪ 6-4‬مم يتم استخدام صاموله ‪ ¼ G‬مع الشد علي‬
‫الصاموله النحاسيه النحاسيه بواسطه مفك ‪ 17‬مم وكل نوع عمود فصل له الصاموله الخاصه به والتركيب المثالي له‬
‫ويتم ذكر ذالك في ملفات تعليمات االجهزه‬

‫‪ – 12‬الحلقات ‪Ferrule‬‬

‫‪67‬‬
‫يوجد نوعان من الحلقات المتاحه عند تعيف عمود الفصل الشاعري االول وهو ال ‪ graphite‬والثاني هو ال‬
‫‪vesple – graphite‬‬

‫النوع الجرافيتي ‪:‬‬

‫‪ – 1‬ذات قوه عاليه‬

‫‪ – 2‬يدوم لمده طويله في درجات الحراره العاليه تصل الي ‪ 450‬درجه مأويه‬
‫‪ – 3‬مفضل في حاالت العمود الشاعري الزجاجي‬
‫‪ – 4‬في حاله تغيير عمود الفصل باخر الجراء اختبار معين يكون امن عند الفك والتركيب بدون اي تأثير او‬
‫ضرر علي عمود الفصل‬
‫‪ -5‬البد ان يتم تركيبها مع ال ‪ washer‬لضمان التركيب ومنع التسريب‬
‫‪ – 6‬متاح بحجم واحد ويتم تكيفه علي حسب قطر عمود الفصل‬

‫أما النوع الثاني هو ال ‪vesple – graphite‬‬

‫‪ – 1‬مخصص العمده الفصل الشاعريه‬
‫‪ - 2‬تستخدم لدرجه حراره ‪ 350‬درجه مأويه‬
‫‪ – 3‬اذا عوملت ببروده او حراره عاليه تتعرض للتشقق والتسريب‬
‫‪ - 4‬البد ان يتم تركيبها مع ال ‪ washer‬لضمان التركيب ومنع التسريب‬
‫‪ - 5‬موجوده بعده اقطار علي حسب االعمده ويتم تكيفها من الخارج‬

‫كل نوع عمود فصل يتناسب معه باقي الكسسوارات حسب نوعه وقطره‬

‫‪68‬‬
 ‫‪O-Ring seal – 13‬‬
‫عباره عن قطعه من المطاط الحراري والموجود علي شكل حرف ( ‪ ) o‬ويستعمل عند تركيبه للحفاظ علي الغاز‬
‫ومنع تسريبه‬

‫‪Union – 14‬‬

‫‪69‬‬
Nipple – 15

Tees – 16

Crosse - 17

plugs – 18

70
 Microfilter – 19

Air pump trap -20

Sampling valve – 21

71
 Sampling lope – 21

vial liquid sample – 22

Syringes - 23

72
‫‪Needle for Hss– 24‬‬

‫‪ – 25‬الفالتر‬

‫األجهزه المساعده لجهاز الكروماتوجراف الغازي ‪:‬‬

‫‪73‬‬
 ‫أوال جهاز التبخير (‪: )Rotary evaporator‬‬
‫يقوم المستخدم بوضع القاروره المحتويه علي المذيب العضوي والماده‬
‫العضويه والمغسوله جيدا داخل الجهاز ثم يقوم ملء وعاء الجهاز بماء مقطر (لمنع تكون امالح داخل الوعاء والتي قد‬
‫تؤثر بالسلب علي ضبط درجه الحراره ) ثم نقوم بضبط درجه حراره الوعاء بحيث تكون مناسبه لتبخير المذيب دون‬
‫غيره من الماده العضويه وبذالك نستطيع استخدام هذا المذيب مره اخري بعد الكشف عليه والتأكد من خلوه من الملوثات‬
‫العضويه (كما في فصل التحقق من صحه النتائج ) وايضا تقليل األثر الضار للمركبات العضويه علي البيئه واخيرا‬
‫الوصول بالعينه الي واحد مل ليكون هذا هو الحجم النهائي الممثل للتر والمعبر عن التركيز النهائي للمركبات العضويه‬

‫ثانيا زجاجيات التركيز ( ‪: )Kuderna-Danish‬‬

‫يقوم المحلل للمركبات العضويه المتطايره استخدام هذه الزجاجيات‬

‫لتركيز العينات المطلوب قياسها‬

‫‪74‬‬
75
 ‫ثالثا الميزان ( ‪: ) Lab balance‬‬
‫حيث يقوم المستخدم إستخدام الميزان في تحديد أوزان السلكا جيل وااللومينا حتي‬
‫يتثني للمشغل تحديد كميه الماء االزم لعمليه ال ‪ Deactivation‬وايضا في التحضيرات وغيرها وللدقه البد من معايره‬
‫الميزان دوريا والتأكد من ثبات ميزان الماء في المنتصف تماما‬

‫رابعا الفرن ‪:‬‬

‫أ‪ /‬فرن ذات درجات حراره عاليه تصل الي ‪ 400‬درجه مأويه‬

‫ب‪ /‬فرن تجفيف ذات درجات حراره منخفضه لتجفيف الزجاجيات‬

‫‪76‬‬
 ‫خامسا ‪: Micro pipite‬‬
‫لعمل المحاليل القياسيه والتخفيفات البد من الدقه في عمليه السحب حيث يقوم المشغل بوضع‬
‫ال ‪ micropipte‬داخل المحلول المراد تخفيفه والضغط عليها داخل المحلول وبعد خروجها يراعي مسحها من الخارج‬
‫بقطعه من القطن النظيف مع اإلحتفاظ ببعد مناسب للقطنه من طرف المحلول‬

‫سادسا جهاز ال ‪: Soxhlet‬‬

‫وذالك الجهاز من االجهزه المميزه في عمليات االستخالص من المركبات الصلبه مثل‬
‫التربه وغيرها حيث تم إستخدامه قديما ولكنه مازال محتفظ بفاعليته في عمليات اإلستخالص علي الرغم من طول زمن‬
‫اإلستخالص‬

‫‪77‬‬
‫سابعا الماصه والزجاجيات ‪:‬‬

‫‪78‬‬
 ‫الفصل الثالث‬
‫إستخدام برنامج التشغيل‬

‫‪79‬‬
 ‫إحتياطات خاصه‬

‫♠ يتم فصل المواد العضويه عن طريق فصل كل مكون علي حده عن طريق خاصيه التجزئه بين الطور الساكن‪-‬‬

‫والموجود داخل عمود الفصل‪ -‬والطور المتحرك‪ -‬يقوم بحمل الماده العضويه داخل عمود الفصل‬

‫♠♠ يتم تحديد اسم المركب عن طريق زمن الفصل ( مثال عند استخدام محلول قياسي يحتوي علي عدد من‬

‫المركبات العضويه وليكن ‪ 4‬مركبات وهم البنزين – والتولوين – وااليثيل بنزين – والزايلين مركبات يتم‬

‫حقنهم وفصلهم داخل الجهاز الكروماتوجراف الغازي فيكون خروج البنزين من ال ‪ Detector‬عند حوالي‬

‫عشره دقائق يليه التولوين ‪ 15‬دقيقه يليه االيثيل بنزين ‪ 20‬دقيقه يليه الزايلين عند ‪ 22‬دقيقه مع العلم بان‬

‫هذه االزمنه تقديريه اما االزمنه الحقبقيه فهي تعتمد علي عده عوامل اخري كما سيتم استعراضه الحقا )‬

‫♠♠♠ وبهذا يكون زمن الفصل ‪ Retention Time‬هو الزمن االزم لفصل المركب العضوي‬

‫♠♠♠♠ أما بالنسبه للتحليل الكمي فيتم قياس التركيز عن طريق طول ال ‪ Peak‬او ال ‪Aria‬‬

‫♠♠♠♠♠ لكي تتم عمليه الفصل بنجاح البد من التأكد من االتي ‪:‬‬

‫‪ -1‬أن تكون الماده نقيه وخاليه من الشوائب التي قد تؤثر بالسلب علي خروج الماده ( سواء بالتقديم اوالتأخير)‬

‫من عمود الفصل ودخولها في المقدر مما يؤدي الي عدم تعرف الجهاز علي المركب خاصه إذا كان الجهاز ال‬

‫يحتوي علي وحده (مطياف الكتله) ألن الجهاز يقوم بالتعرف علي المركب عن طريق زمن الفصل ‪.‬‬

‫‪ - 2‬الفصل الصحيح للماده و التأكد من خلو العينه من الشوائب التي قد تؤدي الي انسداد عمود الفصل مما يؤدي الي‬

‫تلفه خصوصا في حاله عمود الفصل الشاعري‪.‬‬

‫‪ - 3‬عمل ‪ Calibration curve‬صحيح‪.‬‬

‫‪ - 4‬استخدام ال‪ Micropipette‬في تحضير المحاليل الخاصه بالمعايره لضمان صحه التحضير‪.‬‬

‫‪ - 5‬وزن محاليل المعايره قبل وبعد االستخدام مع تزويدها بالمذيب في حاله نقص الوزن ( لو كان تركيز‬

‫النفثالين مثال ‪ 2.116‬جم بعد اخر استخدام وعند اعاده استخدامه مره اخري بعد فتره كان الوزن ‪2.009‬‬

‫‪80‬‬
 ‫جم ففي هذه الحاله يجب ان يتم اضافه مذيب لحين بلوغ الوزن ‪ 2.116‬جم الن النقص في وزن المذيب يؤدي‬

‫الي زياده في التركيز مما يؤدي الي خطأ كبير في المعايره‪.‬‬

‫‪ - 6‬التأكد من ثبات قراءه الجهاز وذالك عند حقن اي عينه اكثر من مره تعطي ثبات في النتيجه‬

‫‪ - 7‬التأكد من خلو الغاز الداخل في الجهاز من الرطوبه او المركبات الهيدروكربونيه ويتم ذالك باضافه فالتر للغاز‬

‫والتاكد ايضا من ان الغازات الداخله للجهاز ‪% 99.9‬‬

‫‪ – 8‬التأكد من خلو الجهاز من اي تسريب في الغاز او العينه وذالك بفحص الجهاز بسفنجه مبلله بصابون ومراقبه‬

‫وجود حركه في رغوه الصابون‪.‬‬

‫‪ – 9‬التأكد من ان الكيماويات المستخدمه مكتوب عليها ‪HPLC GRADE‬‬

‫‪ – 10‬مراقبه عدادات الحراره والضغط اثناء التشغيل لضمان سالمه التجربه ‪.‬‬

‫‪ – 11‬عدم االعتماد علي حسابات الجهاز والتأكد من الحسابات خارجيا لضمان دقه النتيجه‬

‫‪ – 12‬التأكد من خلو العينات من الماء والرطوبه وذالك بامرار العينه علي كبريتات الصوديوم االمائيه الموضوعه‬

‫في الفرن عند ‪ 400‬درجه لمده ساعتين‬

‫‪ – 13‬اتباع الطريقه المستخدمه والمعتمده تفصيليا سواء درجه الحراره او الضغوط‪.‬‬

‫‪ – 14‬استخدام برنامج حساب الضغط في حاله ان الغاز (الطور المتحرك) المستخدم في طريقه التشغيل للتجربه‬

‫مختلف مع الغاز المتصل بالجهاز ( لو الغاز الموجود بالطريقه هيليوم مثال والجهاز بالمعمل متصل بغاز‬

‫النيتروجين يتم ضبط معدل ضخ الغاز علي حسب غاز النيتروجين وذالك باستخدام برامج الضغط المعروفه )‬

‫‪ – 15‬االلتزام بلبس مهمات الوقايه الفرديه والجماعيه داخل المعمل الن معظم المركبات العضويه مسببه للسرطان‪.‬‬

‫‪ – 16‬عدم وضع الجهاز تحت مكيف او مصدر للهواء وخصوصا عند استخدام كاشف التاين باللهب ‪FID‬‬

‫‪ -17‬ترك مسافه خلف الجهاز ال تقل عن نصف متر‪.‬‬

‫‪ – 18‬التأكد من نظافه الزجاجيات وغسلها جيدا كما تم ذكره‬

‫‪81‬‬
 ‫‪ – 19‬عمل حقنات تنظيف للجهاز قبا البدء في القياس‬

‫‪ – 20‬قياس العينات ذات التركيز االقل اوال ثم األعلي وهكذا‬

‫‪ – 21‬قياس نفس النوع من العينات ثم تنظيف الجهاز ثم البدء في عينات من نوع اخر‬

‫‪ - 22‬اختيار طول وسمك الكولوم المستخدم تبعا للطريقه المستخدمه الجراء اإلختبار‬

‫‪ – 23‬عمل تنظيف للمقدر ( الكاشف ) والتاكد من ثبات االشاره الخاصه به‪.‬‬

‫‪SOFTWARE‬‬

‫يوجد حوالي سته شركات المنوطه ‪ – 1 Clarity software‬يتم البدء أوال بفتح البرنامج الخاص بالتشغيل وليكن‬
‫المسئول عن ربط الهاردوير ‪Firmware‬بالبرامج الخاصه باالجهزه ويكون البرنامج لعدد من الشركات علي حسب‬
‫بالسوفت وير‬

‫‪82‬‬
 ‫‪ – 2‬البرنامج عند تشغيله يوضح االتي ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬أسم البرنامج‬
‫ب ‪ /‬اسم الطريقه التي سيتم ضبطها الحقا‬
‫ج ‪ /‬الكروماتوجرام ( رسمه ال ‪ ) Curve‬السابقه‬
‫د ‪ curve /‬المعايره الجديد او القيم‬
‫ه ‪ /‬ادوات الطباعه والمواصفات المطلوب كتابتها في التقرير‬
‫و ‪ /‬شكل التقرير‬
‫ز ‪ /‬خيارات البرنامج من حيث تعدير الطريقه والحسابات‬
‫‪ – 3‬يتم خيار الطريقه االزمه للعمل كاالتي ‪:‬‬
‫من ‪ File‬ثم الضغط علي ‪ Open method‬ثم اختيار الطريقه‬

‫‪83‬‬
84
 ‫‪ – 4‬نجد ظهور محتويات الطريقه‬

‫أ ‪ /‬الفرن‬

‫نجد ان محتويات خانه الفرن تحتوي علي شقين طوليين ‪:‬‬

‫أ ‪ /‬الجزء الموجود علي اليسار ويشمل ‪:‬‬
‫‪ – 1‬جدول إدخال البيانات ومنقسم الي ثالث خانات‬
‫العمود االولي ‪ :‬ادخال درجه الحراره‬
‫العمود الثاني ‪ :‬الوقت وهذا يعني ثبات الجهاز عند هذه الدرجه لمده من الزمن‬
‫العمود الثالث ‪ :‬معدل تغير درجه الحراره بالنسبه للزمن‬
‫الصوره الموضوعه توضح في الصف االول ان درجه الحراره البادئه تكون ‪ 41‬درجه مأويه ويقوم الجهاز بتثبيتها صفر‬
‫دقيقه ثم يقوم الجهاز بزيادتها بمعدل ‪ 12‬درجه مأويه لكل دقيقه حتي الوصول للدرجه ‪ 60‬درجه الموجوده في بادئه‬
‫الصف الثاني وهكذا تتم عمليه االدخال طبقا للطريقه المعتمده او طبقا لبحث موضوع او طبقا لدراسه وتجربه من‬
‫الشركات المصنعه لالجهزه للكشف عن كفائتها أو من المستخدم نفسه علي سبيل الدراسه‬
‫ملحوظه ‪ :‬الفرن الموجود في الصوره يمثل فرن مبرمج تتم التحكم في درجات الحراه كما تم ذكره سابقا‬

‫‪85‬‬
 ‫تتم ادخال البيانات الموجوده في الصوره السابقه حيث تتم ادخال الفرن وقراءته كاالتي‪:‬‬
‫يتم البدء بدرجه حراره ‪ 40‬درجه مأويه ويتم ثباتها لمده صفر دقيقه ثم يتم ارتفاعها بمعدل ‪ 5‬درجه لكل دقيقه لحين‬
‫وصولها الي ‪ 100‬درجه مأويه ثم ثباتها بمعدل صفر دقيقه وارتفاعها بمعدل صفر درجه في الدقيقه وبذالك يكون اخر‬
‫سطر يحتوي علي ‪ 100‬درجه وصفر دقيقه وصفر درجه لكل دقيقه‬
‫‪ – 2‬أسفل الجدول يقوم البرنامج بحساب الوقت االزم التمام التجربه‬
‫أ ‪ /‬الجزء الموجود علي اليمين ويشمل ‪:‬‬
‫‪ – 1‬أقصي قيمه للفرن أثناء التجربه وهذه الخانه مهمه جدا حيث انها المسؤله عن ايقاف الفرن عند هذه الدرجه فقد‬
‫يكون اعلي درجه للفرن ‪ 450‬درجه مأويه ولكن عمود الفصل اقصي درجه حراريه له هي ‪ 350‬درجه مأويه فعند حدوث‬
‫اي خطأ في التجربه أوخطأ في حساس الحراره أو انسداد في عمود الفصل نتيجه للشوائب أو أي عوائق وعوالق في‬
‫العينه أو الطور الساكن قد يؤدي ذالك الي ارتفاع في درجه الحراره عن الدرجه الموضوعه في الجدول وليكن ‪360‬‬
‫درجه مأويه قد يؤدي ذالك الي الي تلف عمود الفصل مما يؤدي الي خساره كبيره من حيث ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬الخساره الماديه‬
‫ب ‪ /‬خساره التجربه نفسها وربما العينه نفسها فقد تكون العينه عباره عن غاز او عينه نادره أو عينه‬
‫عاليه السعر‬
‫ج ‪ /‬دخول الجهاز تحت الصيانه واالصالح‬
‫د ‪ /‬إذا كان عمود الفصل الجديد مختلف في الطول أو القطر أو الماده الملئه وسمكها فسيتم تغيير الطريقه‬
‫نهائيا ويتم البحث عن طريقه جديده بمواصفات العمود الجديد‬

‫‪86‬‬
 ‫ه ‪ /‬عمل معايره للجهاز لالسباب االتيه ‪:‬‬
‫‪ – 1‬التغير في كفاءه العمود‬
‫‪ – 2‬التغير في نسبه ضغط الغاز أذا كان تسريب في الوصالت ولو التسريب طفيف‬
‫‪ – 2‬الجزء الثاني الموجود في اليمين هو المروحه وهي هامه جدا حيث تقوم بتبريد الفرن في حاله ارتفاع درجه‬
‫الحراره أو في حاله حدوث اي خطأ في التجربه‬
‫‪ – 3‬الجزء الثالث وهو ‪ Conditioning time‬وهو الزمن االزم للتأكد من ثبات درجه حراره الفرن قبل اجراء االختبار‬
‫وقبل الحقن‬

‫ب ‪ /‬الحاقن‬

‫تتم تقسيم شاشه الحاقن الي ثالث خانات رئيسيه طوليه ‪:‬‬
‫أ ‪ /‬الشق الموجود منطقه اليسار ‪:‬‬
‫‪ – 1‬التحكم بدرجه الحراره‬

‫‪87‬‬
 ‫‪ – 2‬تحديد درجه الحراره المناسبه لتحويل العينه كامله الي غاز وغالبا ماتكون هي اعلي نقطه‬
‫تبخيرإلعلي مركب موجود في الخليط‬
‫‪ – 3‬البيانات المتعلقه باتصال الحاقن مع عمود الفصل من نوع الغاز الداخل ( الطور المتحرك )‬
‫ومقاسات عمود الفصل‬
‫ب ‪ /‬الشق الموجود منطقه الوسط ‪:‬‬
‫‪ – 1‬نوع التحكم في الضغط ‪ Pressure‬أو ‪Flow‬‬

‫‪ – 2‬نوع الحاقن الموجود في الصوره مبرمج اي يمكن التحكم في درجات ومعدالت الضغط فيه‬
‫فنجد جدول به الضغط البادئ وثباته وارتفاعه بمعدل لكل دقيقه ويمكن استخدامه عند ضغط‬
‫ثابت كما هو موجود في الصوره ويتم تحديد الضغط المستخدم طبقا للطريقه المعتمده المحتويه‬
‫علي اطوال العمود الفصل وسمكه والمركبات المفصوله‬

‫ففي هذا المثال أيضا نجد أنه تم استخدام غاز الهيليوم بمعدل ‪ 5‬مل ‪ /‬دقيقه فعند استخدام غاز النيتروجين بدال من‬
‫الهيليوم فيلزم تغيير معدل الضغط بواسطه ‪Flow calculator‬‬

‫‪ – 3‬اسفل الجدول يوجد إنقسام العينه‬

‫ج ‪ /‬الشق الموجود منطقه اليمين تكمن اهميتها في ‪:‬‬
‫حفظ الغازات وإذا وجد تسريب في اي منطقه من الغاز يقوم الجهاز بإعطاء االنذارات االزمه لتجنب حدوث مشاكل فلو‬
‫اتأثر السبتا بعدد الحقنات مما الي ادي الي تلفه فنجد ان الجهاز غير قادر علي الحقن‬

‫‪88‬‬
 ‫ج ‪ /‬كاشف التأين بواسطه اللهب‬

‫أ ‪ /‬الشق الموجود منطقه اليسار تكمن اهميتها في‪:‬‬

‫‪ – 1‬درجه حراره الكاشف‬
‫‪ – 2‬التحكم في دمج الغازات‬
‫‪ – 3‬نوع الغاز المستخدم‬
‫ب ‪ /‬الشق الموجود منطقه اليمين تكمن اهميتها في‪:‬‬
‫‪ – 1‬تحديد اقل عرض لل ‪ peaks‬والذي من خالله يتم تعيين مدي دقه الرسمه والنقط المتوقعه‬
‫‪ – 2‬تشغيل اللهب (اإلشعال الذاتي)‬

‫‪89‬‬
 ‫د‪ /‬الساحب االلي‬

‫أ ‪ /‬الشق الموجود منطقه اليسار تكمن اهميتها في‪:‬‬

‫‪ – 1‬يتم ضبط كميه العينه المسحوبه‬
‫‪ – 2‬يتم ضبط كميه العينه االزمه للغسيل‬
‫‪ – 3‬يتم ضبط تجهيز السحب قبل عمليه السحب‬
‫‪ – 4‬ا رتفاع السرنجه وقت السحب مع مراعاه ان بعض السوفت وير تحسب من اعلي زجاجه السحب‬
‫والبعض يقوم بالسحب من اسفل‬
‫‪ – 5‬معدل خروج العينه في الثانيه‬
‫ب ‪ /‬الشق الموجود منطقه الوسط تكمن اهميتها في‪:‬‬
‫‪ - 1‬يتم ضبط كميه المذيب االزم للغسيل‬
‫‪ – 2‬كميه وعدد مرات الغسل‬
‫‪ – 3‬مكان سحب المذيب‬

‫‪90‬‬
 ‫ج ‪ /‬الشق الموجود منطقه اليمين تكمن اهميتها في ‪:‬‬
‫‪ – 1‬مكان الحاقن‬
‫‪ – 2‬معدل الحقن‬
‫‪ – 3‬عمق الحقنه‬

‫ه ‪ /‬الكروماتوجرام‬

‫‪91‬‬
 ‫يتم تقسيم الكروماتوجرام الي ثالث مناطق اساسيه افقيه‪:‬‬
‫المنطقه االولي‬
‫تكون عباره عن الرسمه الكامله للكروماتوجرام ويتم التركيز منها علي منطقه منطقه للعمل بهاوفصل كل ‪ peak‬عن‬
‫االخري وتعديل واضافه وتعديل ومسح لل ‪peaks‬‬
‫المنطقه الثانيه‬
‫عباره عن ال ‪ curve‬الواضح والذي من خالله تتم عمليات التعديل والضبط حتي تتم اضافه جميع ال ‪ peaks‬حتي‬
‫يتمكن الجهاز بتطبيق ملف المعايره والحسابات‬
‫المنطقه الثالثه‬
‫هي الناتج النهائي للكروماتوجرام وهو عباره عن المركبات الموجوده ونسبتها باإلضافه الي التخفيف المستخدم في‬
‫الحقنه علي حسب ملف المعايره‬
‫ثم يتم استخدام االدوات الموجوده علي الجانب االيسر ‪:‬‬
‫‪ – 1‬اوال يكون الشكل الكامل لل ‪ curve‬هو المتاح كاالتي‪:‬‬

‫‪92‬‬
‫‪ – 2‬يتم التركيز علي الجزء المراد العمل به في الرسمه بواسطه الجزء العلوي الموجود اعلي ال ‪Curve‬‬

‫‪93‬‬
‫‪ – 2‬يتم إختيار االداه االولي ‪ start‬واالداه الثانيه ‪ end‬لتحديد بدايه ونهايه ال ‪peak‬‬

‫‪94‬‬
95
‫نالحظ حدوث تعديل في بدايه ال ‪ peak‬لتصبح المساحه الموجوده اسفل ال ‪ peak‬اقل من االول مما يؤدي الي تغير في‬
‫التركيز اذا كانتال ‪ peak‬معرفه لذالك يراعي ضبط بدايات ونهايات ال‪ peaks‬قبل البدء في العمل او حتي البدء في عمل‬
‫ال ‪calibration‬‬

‫‪96‬‬
‫‪ – 3‬يتم إستخدام االداه الثالثه ‪ add positive‬واالداه الرابعه ‪ add negative‬الضافه ‪ peak‬مرئيه ولكن الجهاز (‬
‫السوفت وير ) عجز عن إضافتها‬

‫‪97‬‬
98
‫وبذالك يكون قد تم إضافه ال ‪ peak‬الجديده ليقوم الجهاز بتعريفها اوتوماتيكيا اذا كانت موجوده من االصل في ال‬
‫‪calibration file‬‬

‫وبالفعل كانت هذه ال ‪ peak‬موجوده فب ملف المعايره لذالك قام الجهاز بتعريفها وحسلب تركيزها‬

‫‪99‬‬
 ‫الفصل الرابع‬
‫التحقق من صحه النتائج‬

‫‪100‬‬
 ‫قبل البدء في دراسه النتائج النهائيه ومدي صحتها البد من القيام باعمال الضبط لإلستخالص‬
‫وللجهاز لذالك يجب معرفه المفاهيم االتيه اوال ‪:‬‬
‫‪: Extraction Batch‬‬

‫هي مجموعه من العينات المجمعه والمستخلصه تحت نفس الظروف وبنفس الشخص خالل‬

‫يوم عمل واحد وتحتاج الي عينات ضابطه ‪.‬‬

‫‪: Analysis Batch‬‬

‫هي مجموعه من العينات التي يتم تحليلها ( بواسطه الجهاز ) تحت نفس الظروف خالل ‪24‬‬

‫ساعه متضمنا عمليه المعايره ‪.‬‬

‫)‪: Internal Stander (IS‬‬

‫هو عباره عن محلول عياري قياسي معلوم التركيز وتتم إضافته الي الخليط المراد‬

‫استخالصه ويشترط ان تكون خواصه مشابهه للخليط وليس مع محتوياته ‪.‬‬

‫)‪: Surrogate Standard (SUR‬‬

‫عباره عن ماده كيميائيه نقيه تضاف الي الخليط ليتم استخالصها بعد ذالك‬

‫وبذالك تتم معرفه كفاءه الطريقه المستخدمه في االستخالص عن طريق قياس‬

‫الماده المضافه بواسطه الجهاز ‪.‬‬

‫)‪: Stock Standard Solution (SSS‬‬

‫هو محلول قياسي مركز يحتوي علي خليط من المركبات المراد قياسها‬

‫معمليا وتركيزه اليقل عن ‪ % 96‬ويكون غالبا تركيزه ‪ 100‬ملي جرام‬

‫لكل لتر ويتم تخفيفه علي حسب الحاجه ‪.‬‬

‫‪: Primary Dilution Standard (PDS) Solution‬‬

‫تتم عمليه تحضيره بتخفيف المحلول القياسي المركز‬

‫)‪ Stock StandardSolution (SSS‬بحيث ان يكون‬

‫التخفيف واقع بين المحلول المركز والمحلول القياسي‬

‫العياري )‪Calibration Standard (CAL‬‬

‫‪101‬‬
 ‫)‪: Calibration Standard (CAL‬‬

‫يحضر من محلول قياسي أولي )‪ (PDS‬والعياري البديل )‪(SUR‬‬

‫والقياسي الداخلي )‪ )IS‬وذالك لمعايره الجهاز وتحديد كفاءته وتحديد‬

‫كفاءه القياس‬

‫‪Blanks‬‬
‫(‪: Laboratory Fortified Sample Matrix (LFSM‬‬

‫عينه معمليه ولكن مضاف اليها نفس المركبات المراد‬

‫قياسها وتكون معلومه التركيز تتم معاملتها كعينه عاديه‬

‫من حيث االستخالص والقياس للوقوف علي دقه المعمل‬

‫)‪: Laboratory Fortified Blank (LFB‬‬

‫عينه بالنك مضاف اليها نفس المركبات المراد قياسها ( في واحد‬

‫لتر من الماء الخالي من الملوثات العضويه ) وتكون معلومه‬

‫التركيز تتم معاملتها كعينه عاديه من حيث االستخالص والقياس‬

‫للوقوف علي دقه المعمل‬

‫)‪: Laboratory Reagent Blank (LRB‬‬

‫تحضر للتعرف علي الشوائب الموجوده بالكواشف والكيماويات وذالك‬

‫بعمل إختبار لعينه مياه خاليه من المواد العضويه بنفس خطوات‬

‫اإلستخالص للعينه المطلوبه وبذالك تتم إستخالص المذيب فقط وبذالك‬

‫تتم معرفه ما إذاكانت الكواشف تحتوي علي نسبه شوائب أم ال‬

‫فالشوائب تسبب ‪ interferance‬عند القياس بالجهاز مما يؤثر علي‬

‫دقه القياس‬

‫‪102‬‬
 ‫)‪: Quality Control Sample (QCS‬‬

‫تحضر من المحاليل القياسيه األوليه وتتم حقنها في ألجهاز للوقوف علي‬

‫دقه عمليه القياس‪.‬‬

‫)‪: Laboratory Fortified Sample Matrix Duplicate (LFSMD‬‬

‫عينه معمليه ولكن مضاف اليها نفس المركبات المراد‬

‫قياسها وتكون معلومه التركيز تتم معاملتها كعينه عاديه من‬

‫حيث االستخالص والقياس بعد تقسيمها الي نصفين‬

‫متساويين تماما للوقوف علي دقه المعمل بعد عمل تحيل لكل‬

‫جزء علي حده ومقارنه النتائج‬

‫‪: (DL)Detection Limit‬‬

‫أقل قيمه لتركيز المواد المراد قياسها بهذه الطريقه مع التأكد أن أقل تركيز يتم إستخالصه‬

‫لحقنه بالجهاز اليساوي الصفر‬

‫)‪: Minimum Reporting Level (MRL‬‬

‫أقل تركيز يمكن قياسه للعينه بشرط أن يكون أكبر من من أقل قيمه‬

‫مقاسه للمحلول العياري‬

‫خطوات ضبط الجوده‬

‫‪Quality Control Procedure‬‬
‫‪ – 1‬معرفه نسبه الشوائب في الكواشف وذالك بحقن عينه من )‪ (LRB‬لمعرفه هل يوجد شوائب في الكواشف‬

‫ام ال وإذا وجدت الشوائب في الكواشف فتتم تعيين تركيزها لمراعاتها في ضبط العينات‬

‫‪ – 2‬يتم تحليل عينه مرجعيه معلومه التركيز ( ‪ )QCS‬ويجب ان تكون النتيجه مابين ‪ %80‬الي ‪ %120‬من‬

‫التركيز المعلوم‬

‫‪103‬‬
‫‪ – 3‬يتم تحيل عينه من )‪ (LFSMD‬ويكون تركيزها ‪ 10‬مايكرو جرام من أحد المكونات للماده المراد قياسها‬

‫أو اختيار بدال من ال‪ 10‬مايكروجرام تركيز متوسط من أعلي تركيز واقل تركيز ثم توضع في عينه وتقسم‬

‫الي قسمين متساويين ويتم اخذ متوسط نتائج القياس ويجب ان يكون متوسط النتائج ‪ %20 ±‬من التركيز‬

‫األصلي‬

‫‪ – 4‬يتم حساب معدل األنحراف )‪ Standard Deviation (SD‬لكل نتيجه علي حده عن طريق إيجاد الفرق‬

‫بين معدل االنحراف بين التركيزات المحقونه‬

‫‪ – 5‬يتم عمل عينتان معمليتان والقيام بنفس الحسابات ليعطي قيمتين لمعدل األنحراف‬

‫‪ – 6‬يتم حساب معدل االنحراف النسبي (‪ ) RSD‬عن طريق المعادله االتيه ‪:‬‬

‫‪ – 7‬لضمان الجوده يشترط االيزيد معدل االنحراف النسبي عن ‪%25‬‬

‫‪ – 8‬بعدها تتم تعيين ال ( ‪ ) DL‬عن طريق تحليل ‪ 7‬عينات من )‪ (LRB‬بشرط ان يكون التركيز مقارب لتركيز‬

‫العينات المراد قياسها وبذالك يتم حسابه من المعادله االتيه ‪:‬‬

‫حيث ان قيمه ال ( ‪ ) t‬عباره عن القيمه الناتجه والموثوق فيها بنسبه ‪%100‬‬

‫وأن ال ( ‪ ) n‬عباره عن عدد مرات التكرار‬

‫وأن ال ( ‪ ) n-1‬هي عباره عن درجات الحريه وتكون ‪ 3.143‬عند عمل ‪7‬حقنات‬

‫‪104‬‬
 ‫وتكون ( ‪ ) S‬هي معدل االنحراف‬

‫‪ – 9‬يتم حقن )‪ (LRB‬مع كل ‪ Analysis Batch‬كل مره مع العمل اليومي‬

‫‪ – 10‬يتم عمل إختبار )‪ Continuing Calibration Check (CCC‬عن طريق حقن محلول )‪ (CAL‬مع‬

‫كل ‪ 20‬عينه ‪ Analysis Batch‬بشرط ان يكون تركيزها بين أقل وأعلي تركيز ( في المتوسط )‬

‫‪ – 11‬يتم إختبار الجوده عن طريق محلول )‪ (SUR‬عن طريق إضافته للعينه وتحقيق المعادله االتيه ‪:‬‬

‫حيث أن ( ‪ ) A‬تكون قيمه ال ( ‪ ) SUR‬في العينه المطلوبه أو في عينات ضبط الجوده‬

‫وأن ( ‪ ) B‬تكون قيمه تركيز ال ( ‪ ) SUR‬الموضوع والمعلوم‬

‫‪105‬‬
 ‫الفصل الخامس‬
‫بعض المواصفات‬

‫‪106‬‬
 GC Methods

Experments
Cleanup
Extraction

1 – Cleanup methods

‫الطرق التفصيليه للتنقيه والتحضير‬

METHOD 3600C CLEANUP

1.0 SCOPE AND APPLICATION

1.1 Method 3600 provides general guidance on selection of cleanup methods that are appropriate for
the target analytes of interest. Cleanup methods are applied to the extracts prepared by one of the
extraction methods, to eliminate sample interferences
1.3 The purpose of applying a cleanup method to an extract is to remove interferences and high
boiling material that may result in:
A – errors in quantitation (data may be biased low because of analyte adsorption in the
injection port or front of the GC column or biased high because of overlap with an interference peak
B – false positives because of interference peaks falling within the analyte retention time
window
C - false negatives caused by shifting the analyte outside the retention time window
D - rapid deterioration of expensive capillary columns; and,instrument downtime caused by
cleaning and rebuilding of detectors and ion sources
1.4 The following techniques have been applied to extract purification: adsorption chromatography;
partitioning between immiscible solvents; gel permeation chromatography; oxidation of interfering
substances with acid, alkali, or oxidizing agents. These techniques may beused individually or in
various combinations, depending on the extent and nature of theco-extractives.
1.5 Most extracts of soil and waste require some degree of cleanup, whereas, cleanup for water
extracts may be unnecessary. Highly contaminated extracts (e.g. sample extracts of oily waste or soil
containing oily residue) often require a combination of cleanup methods. For example, when
analyzing for organochlorine pesticides and PCBs, it may be necessary to use gel permeation

107
chromatography (GPC), to eliminate the high boiling material and a micro alumina or Florisil column
to eliminate interferences with the analyte peaks on the GC/ECD
1.6 Prior to employing this method, analysts are advised to consult the disclaimer statement at the
front of the manual and the information in Chapter Two for guidance on the allowed flexibility in the
choice of apparatus, reagents, and supplies. In addition, unless specified in a regulation, the use of
SW-846 methods is not mandatory in response to Federal testing requirements. The information
contained in this procedure is provided by EPA as guidance to be used by the analyst and the
regulated community in making judgments necessary to meet the data quality objectives or needs for
the intended use of the data.

2.0 SUMMARY OF METHOD

Refer to the specific cleanup method for a summary of the procedure.

3.0 INTERFERENCES

3.1 Analytical interferences may be caused by contaminants in solvents, reagent, glassware, and other
sample processing hardware. All of these materials must be routinely demonstrated to be free of
interferences, under the conditions of the analysis, by running laboratory reagent blanks.
3.2 More extensive procedures than those outlined in the methods may be necessary for reagent
purification.

4.0 APPARATUS AND MATERIALS

Refer to the specific cleanup method for apparatus and materials needed

5.0 REAGENTS

Refer to the specific cleanup method for the reagents needed

6.0 SAMPLE COLLECTION, PRESERVATION, AND HANDLING

See the introductory material to this chapter, Organic Analytes, Sec. 4.1.
7.0 PROCEDURE

7.1 Prior to using the cleanup procedures, samples normally undergo solvent extraction Chapter Two,
Sec. 2.0, may be used as a guide for choosing the appropriate extraction procedure based on the
physical composition of the waste and on the analytes of interest in the matrix (seealso Method 3500
for a general description of the extraction technique). For some organic liquids, extraction prior to
cleanup may not be necessary.
7.2 Most soil/sediment and waste sample extracts will require some degree of cleanup. The extract
is then analyzed by one of the determinative methods. If interferences still preclude analysis for the
analytes of interest, additional cleanup may be required
7.3 Many of the determinative methods identify cleanup methods that should be used when
determining particular analytes (e.g., Method 8061, gas chromatography of phthalate esters,
recommends using either Method 3610 (alumina column cleanup) or Method 3620 (Florisil column
cleanup) if interferences prevent analysis. However, the experience of the analyst may prove

108
invaluable in determining which cleanup methods are needed. Many matrices may require a
combination of cleanup procedures in order to ensure proper analytical determinations, however, each
cleanup step has the potential to decrease the analytical sensitivity through small losses of analytes
during the cleanup. As a result, when multiple cleanup procedures are necessary additional care is
recommended to minimize analyte loss during each individual cleanup procedure.
7.4 Specific guidance on each cleanup technique is listed in the individual cleanup methods that
follow. The amount of extract cleanup required prior to the final determination depends on the
concentration of interferences in the sample, the selectivity of both the extraction procedure and the
determinative method and the required detection limit. The following Sections give a description of
The different cleanup approaches:
7.4.1 Adsorption chromatography - Alumina (Methods 3610 and 3611), Florisil (Method3620), and
silica gel (Method 3630) are useful for separating analytes of a relatively narrow polarity range away
from extraneous, interfering peaks of a different polarity. These are primarily used for cleanup of a
specific chemical group of relatively non-polar analytes, i.e., organochlorine pesticides, polynuclear
aromatic hydrocarbons (PAHs), nitrosamines, etc.. Solid phase extraction cartridges have been added
as an option.
7.4.2 Acid – base partitioning (Method 3650) - Useful for separating acidic or basic
Organics from neutral organics. It has been applied to analytes such as the chlorophenoxyherbicides
and phenols. It is very useful for separating the neutral PAHs from the acidic phenols when analyzing
a site contaminated with creosote and pentachlorophenol.
7.4.3 Gel permeation chromatography (GPC) (Method 3640) - The most universal
cleanup technique for a broad range of semivolatile organics and pesticides. It is capable of
separating high molecular-weight, high boiling material from the sample analytes. It has been used
successfully for all the semivolatile base, neutral, and acid compounds associated with the EPA
Priority Pollutant and the Superfund Target Compound list prior to GC/MS analysis for semi volatiles
and pesticides. GPC may not be applicable to elimination of extraneous peaks on a chromatogram
which interfere with the analytes of interest. It is, however, useful for the removal of high boiling
materials which would contaminate injection ports and column heads, prolonging column life,
stabilizing the instrument, and reducing column reactivity.
7.4.4 Sulfur cleanup (Method 3660) - Useful in eliminating sulfur from sample extracts, which may
cause chromatographic interference with analytes of interest.
7.4.5 Sulfuric acid/permanganate cleanup (Method 3665) - Useful for the rigorous cleanup of
sample extracts prior to analysis for polychlorinated biphenyls (PCBs). This method should be used
whenever elevated baselines or overly complex chromatograms prevent accurate quantitation of
PCBs. This method cannot be used to cleanup extracts for other target analytes, as it will destroy
most organic chemicals including the pesticides Aldrin, Dieldrin, Endrin, Endosulfan (I and II), and
Endosulfan sulfate.
7.5 Fractionation is a useful technique that can aid in the separation of complex mixtures of analytes.
For instance, an analyst may use Method 3630 (Silica Gel) for separating the PCBs away from most
organochlorine pesticides. Method 3611 (Alumina) may be used for fractionation of aliphatic,
aromatic, and polar analytes. Method 3620 (Florisil) provides for fractionation of the organochlorine
pesticides.
7.6 Cleanup capacity is another factor that must be considered in choosing a cleanup technique. The
adsorption methods (3610, 3620, and 3630) provide the option of using standard column
chromatography techniques or solid phase extraction cartridges. The decision process in selecting
between the different options available generally depends on the amount of interferences/high boiling

109
material in the sample extract and the degree of cleanup required by the determinative method.The
solid phase extraction cartridges require less elution solvent and less time, however, their cleanup
capacity is drastically reduced when comparing a 0.5 g or 1.0 g Florisil cartridge to a 20 g s tandard
Florisil column. The same factor enters into the choice of the 70 g gel permeation column specified in
Method 3640 versus a high efficiency column. As with any other method choice issue, the
responsibility for ensuring that the use of a cartridge cleanup is appropriate lies with the laboratory. If
the results from a sample analysis suggest that the cleanup was not effective because the capacity of
the cartridge was exceeded, then it may be necessary to repeat the procedures with either a larger
cartridge or the standard column chromatographic procedure.
7.7 Table1 indicates the recommended cleanup techniques for the indicated groups of compounds.
This information can also be used as guidance for compounds that are not listed, Compounds that are
chemically similar to these groups of compounds should behave similarly when taken through the
cleanup procedure. However, this must be demonstrated by determining recovery of standards taken
through the method.
7.8 Following cleanup, the sample is concentrated to whatever volume is listed in the determinative
method using the procedures described in the appropriate 3500 series method. Analysis follows as per
the appropriate determinative procedure.

8.0 QUALITY CONTROL

8.1 Refer to Chapter One and Method 8000 for specific quality control procedures.
8.2 The analyst must demonstrate that the compounds of interest are being quantitatively recovered
by the cleanup technique before the cleanup is applied
to actual samples. For sample extracts that are cleaned up, the associated quality control samples
(e.g. spikes, blanks, replicates, and duplicates) must also be processed through the same
cleanup procedure.
8.3 The analysis using each determinative method (GC, GC/MS, HPLC) lists instrument
calibration procedures using stock standards. It is recommended that cleanup also be
performed on a series of the same type of standards to validate chromatographic elution
patterns for the compounds of interest and to verify the absence of interferences from
reagents.
9.0 METHOD PERFORMANCE

Refer to the specific cleanup method for performance data.

10.0 REFERENCES

Refer to the specific cleanup method.

METHOD 3610B ALUMINA CLEANUP

1.0 SCOPE AND APPLICATION

1.1 Alumina is a highly porous and granular form of aluminum oxide. It is available in three
pH ranges (basic, neutral, and acidic) for use in chromatographic cleanup procedures. It is
used to separate analytes from interfering compounds of a different chemical polarity.
1.2 Each of the three pH ranges of alumina has different uses and disadvantages as a
cleanup procedure.

110
 1.2.1 Basic alumina has a pH of 9-10. It is used to separate basic and neutral
compounds that are stable to alkali, alcohols, hydrocarbons, steroids, alkaloids, natural
pigments. Its disadvantages are that it can cause polymerization, condensation, and
dehydration reactions, and one cannot use acetone or ethyl acetate as eluants.
1.2.2 Neutral alumina has a pH of 6-8. It is used to separate aldehydes, ketones,
quinones, esters, lactones, glycoside. Its disadvantage is that is it considerably less
activethan the basic form.
1.2.3 Acidic alumina has a pH of 4-5. It is used to separate acidic pigments (natural
and synthetic), and strong acids (that otherwise chemisorb to neutral and basic alumina).
This method does not address the use of acid alumina.
1.3 Basic, neutral, and acidic alumina can be prepared in various activity grades (I to V),
based on the Brockmann scale reproduced below. Grade I is prepared by heating alumina
until nomore water is lost (typically overnight at 400-450EC, but other time-temperature
relationships may be employed). The other grades (II-V) are prepared by adding water to
Grade I to deactivate it.

where RF is the retention factor for p-aminoazobenzene.

1.4 Alumina cleanup may be accomplished using a glass chromatographic column packed
with alumina or using solid-phase extraction cartridges containing alumina.
1.5 This method includes procedures for cleanup of sample extracts containing phthalate
esters and nitrosamines. See Method 3611, Alumina Column Cleanup of Petroleum Wastes,
for alumina cleanup of petroleum wastes.
1.6 This method is restricted to use by or under the supervision of trained analysts. Each
analyst must demonstrate the ability to generate acceptable results with this method.
2.0 SUMMARY OF METHOD

2.1 This method describes procedures for alumina cleanup of solvent extracts of
environmental samples. It provides the option of using either traditional column
chromatography techniques or solid-phase extraction cartridges. Generally, the traditional
column chromatography technique uses larger amounts of adsorbent and, therefore, has a
greater cleanup capacity.
2.2 In the column cleanup protocol, the column is packed with the appropriate amount of
adsorbent, topped with a water adsorbent, and then loaded with the sample extract. Elution
of the analytes is effected with a suitable solvent(s), leaving the interfering compounds on
the column. The eluate may be further concentrated prior to gas chromatographic analysis.
2.3 The cartridge cleanup procedure uses solid-phase extraction cartridges containing 40
μm particles of alumina (60 Dpores). Each cartridge is washed with solvent immediately
prior to use. The sample extract is loaded onto the cartridge which is then eluted with
suitable solvent(s). A vacuum manifold is needed to obtain reproducible results. The eluate
may be further concentrated prior to gas chromatographic analysis.
2.4 The phthalate esters may be considered either the analytes of interest or the
interferants, depending on which eluant fraction is analyzed.

111
3.0 INTERFERENCES

3.1 A reagent blank should be prepared and analyzed for the compounds of interest prior to
the use of this method. The level of interferences must be below the method detection limit
before this method is performed on actual samples.
3.2 The procedures for reagent purification outlined here should be considered to be the
minimum requirements for use of this method. More extensive procedures may be
necessary to achieve acceptable levels of interferences for some analytes.

4.0 APPARATUS AND MATERIALS

4.1 Chromatography column - 300 mm x 10 mm ID, with a polytetrafluoroethylene (PTFE)

stopcock.
NOTE:
Columns with fritted glass discs are difficult to clean once the column has been used to
process highly contaminated extracts. Columns without frits may be purchased, and a small
pad of Pyrex glass wool may be used to retain the adsorbent. Prewash the glass wool pad
with 50 mL of acetone followed by 50 mL of elution solvent prior to packing the column with
adsorbent.
4.2 Beakers - Appropriates sizes
4.3 Reagent bottle - Appropriate sizes
4.4 Muffle furnace - capable of maintaining 400 C.
4.5 Vials - Glass, 2-mL capacity, with PTFE-lined screw caps or crimp tops.
4.6 Vacuum manifold - VacElute Manifold SPS-24 (Analytichem International), Visiprep
(Supelco, Inc.) or equivalent, consisting of glass vacuum basin, collection rack and funnel,
collection vials, replaceable stainless steel delivery tips, built-in vacuum bleed valve and
gauge. The system is connected to a vacuum pump or water aspirator through a vacuum
trap made from a 500-mL sidearm flask fitted with a one-hole stopper and glass tubing. The
manifold is needed for use of the
cartridge cleanup protocol.
4.7 Top-loading balance - capable of weighing 0.01 g.

5.0 REAGENTS

5.1 Organic-free reagent water - All references to water in this method refer to organic-free
reagent water, as defined in Chapter One.
5.2 Sodium sulfate - Sodium sulfate (granular, anhydrous), Na2SO4. Purify by heating at
400 C for 4 hours in a shallow tray, or by precleaning the sodium sulfate with
methylenechloride. A method blank must be analyzed in order to demonstrate thatthere is
no interference from the sodium sulfate.
5.3 Eluting solvents - all solvents must be pesticide quality or equivalent.
5.3.1 Diethyl Ether, C2H5OC2H5. Must be free of peroxides as indicated by test strips (EM
Quant, or equivalent). Procedures for removal of peroxides are provided with the test strips.
After cleanup, 20 mL of ethyl alcohol preservative must be added to each liter of ether.
5.3.2 Methanol, CH3OH
5.3.3 Pentane, CH3 (CH2) 3CH3
5.3.4 Hexane, C6 H14

112
5.3.5 Methylene chloride, CH2 Cl2
5.3.6 Acetone, CH3COCH3
5.4 Granular alumina, for column cleanup procedure
5.4.1 Neutral alumina, for cleanup of phthalates, activity Super I, W200 series (ICN Life
Sciences Group, No. 404583 or equivalent). To activate, place 100 g of alumina into a 500-
mL beaker and heat for approximately 16 hr at 400 C. After heating, transfer to a 500-mL
reagent bottle. Tightly seal the bottle and cool to room temperature. When cool, add 3 mL of
organic-free reagent water. Mix thoroughly by shaking or rolling for 10 min and let it stand
for at least 2 hr. The preparation should be homogeneous before use. Keep the bottle
sealed tightly to ensure proper activity. Super I alumina cited above is a Grade I reagent
with a very high
binding capacity. The neutral alumina employed in this method may be prepared from
reagents other than Super I, provided that adequate performance can be demonstrated.
5.4.2 Basic alumina, for cleanup of nitrosamines, activity Super I, W200 series (ICN Life
Sciences Group, No. 404571, or equivalent). To activate, place 100 g of alumina into a 500-
mL reagent bottle and add 2 mL of organic-free reagent water. Mix thoroughly by shaking or
rolling for 10 min and let it stand for at least 2 hr. The preparation should be homogeneous
before use. Keep the bottle sealed tightly to ensure proper activity. Super I alumina cited
above is a Grade I reagent with a very high binding capacity. The basic alumina employed
in this method may be prepared from reagents other than Super I, provided that adequate
performance can be demonstrated.
5.5 Alumina cartridges - 40 μm particles, 60 D pores, for cleanup of phthalates. The
cartridges from which this method were developed consist of 6-mL serological-grade
polypropylene tubes, with the 1 g of alumina held between two polyethylene or stainless
steel frits with 20 μm pores. Cartridges containing 0.5 g and 2.0 g of alumina are available,
however, the compound elution patterns need to be verified when cartridges containing
other than 1 g of alumina are used.

6.0 SAMPLE COLLECTION, PRESERVATION, AND HANDLING

See the introductory material to this chapter, Organic Analytes, Sec. 4.1.

7.0 PROCEDURE

The chromatographic separation procedures for the phthalate esters may be accomplished
by either the column cleanup approach (Sec. 7.3) or the cartridge cleanup approach (Sec.
7.4). The procedure for the nitrosamines includes only the column cleanup approach (Sec.
7.5). Sec. 7.1 describes the procedures for assembling and conditioning the alumina
cartridges. Sec. 7.2 describes general procedures for handling sample extracts prior to
cleanup. The column chromatography procedures employ a larger amount of alumina than
the cartridge procedures and, therefore, have a greater cleanup capacity. Samples that
exhibit greater degrees of interferences should be cleaned up using the column procedures.
However, both techniques have limitations on the amount of interferences that they can
remove.
7.1 Cartridge set-up and conditioning
7.1.1 Arrange the cartridges on the manifold in the closed-valve position.

113
7.1.2 Turn on the vacuum pump and set the vacuum to 10 in (254 mm) of Hg. Do not
exceed the manufacturer's recommendation for manifold vacuum. Flow rates may be
controlled by opening and closing cartridge valves.
7.1.3 Condition the cartridges by adding 4 mL of hexane to each cartridge. Slowly open the
cartridge valves to allow hexane to pass through the sorbent beds to the lower frits. Allow a
few drops per cartridge to pass through the manifold to remove all air bubbles. Close the
valves and allow the solvent to soak the entire sorbent bed for 5 minutes. Do not turn off the
vacuum.
7.1.4 Slowly open cartridge valves to allow the hexane to pass through the cartridges.
Close the cartridge e valves when there is still at least 1 mm of solvent above the sorbent
bed. Do not allow cartridges to become dry. If cartridges go dry, repeat the conditioning
step.
7.2 Handling sample extracts
7.2.1 Reduce the sample extract volume to 2 mL (per 3500 series methods) prior to
cleanup. The extract solvent should be hexane for the phthalate esters and methylene
chloride for the nitrosamines.
7.2.2 Allow extract to reach room temperature if it was in cold storage. Inspect the extract
visually to ensure that there are no particulates or phase separations and that no
evaporative loss has taken place. If crystals of sulfur are visible or if the presence of sulfur is
suspected, proceed with Method 3660.
7.3 Column procedure for phthalate esters
7.3.1 Place approximately 10 g of neutral alumina (Sec. 5.4.1) into a 10-mm ID
chromatographic column. Tap the column to settle the alumina, and add 1-2 cm of
anhydrous sodium sulfate to the top.
7.3.2 Pre-elute the column with 40 mL of hexane. The rate for all elutions should be about
2 mL/min. Discard the eluate and, just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the
air, quantitatively transfer the 2-mL sample extract (Sec. 7.2) onto the column using an
additional 2 mL of hexane to complete the transfer.
7.3.3 Just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, add 35 mL of hexane to
the column and continue the elution of the column. Discard this hexane eluate.
7.3.4 Elute the column with 140 mL of ethyl ether/hexane (20/80, v/v) and collect this
fraction in a flask for concentration.
7.3.5 Concentrate the collected fraction to the volume required by the determinative
method (e.g., 2 mL for Method 8061), using the techniques described in the appropriate
3500 series method. No solvent exchange is necessary. Compounds that elute in this
fraction are: Bis(2-ethylhexyl) phthalate Diethyl phthalate Butyl benzyl phthalate Dimethyl
phthalate Di-n-butyl phthalate Di-n-octyl phthalate
7.4 Cartridge procedure for phthalate esters
NOTE :
If organochlorine pesticides are known to be present in the extract, Florisil cartridges
(Method 3620) are recommended instead of Alumina cartridges.
7.4.1 Using 1-g alumina cartridges, condition the cartridges with hexane as described in
Sec. 7.1.
7.4.2 Transfer the extract (Sec. 7.2) to the cartridge. Open the cartridge valve to allow the
extract to pass through the cartridge bed at approximately 2 mL/minute.

114
7.4.3 When the entire extract has passed through the cartridge, but before the cartridge
becomes dry, rinse the sample vial with an additional 0.5 mL of solvent, and add the rinse to
the cartridge to complete the quantitative transfer.
7.4.4 Close the cartridge valve and turn off the vacuum after the solvent has passed
through, ensuring that the cartridge never gets dry.
7.4.5 Place a 5-mL vial or volumetric flask into the sample rack corresponding to the
cartridge position. Attach a solvent-rinsed stainless steel solvent guide to the manifold cover
and align it with the collection vial.
7.4.6 Add 10 mL of acetone/hexane (20/80, v/v) to the cartridge. Turn on the vacuum pump
and adjust the pump pressure to 10 in (254 mm) of Hg. Allow the solvent to soak the
sorbent bed for 1 minute or less. Slowly open the cartridge valve and collect the eluate into
the collection vial.
7.4.7 Adjust the final volume of the eluant to the volume listed in the determinative method,
using the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.5 Column procedure for nitrosamines
7.5.1 Diphenylamine, if present in the original sample extract, must be separated from the
nitrosamines if N-nitrosodiphenylamine is to be determined by this method.
7.5.2 Place approximately 12 g of basic alumina (Sec. 5.4.2) into a 10-mm ID
chromatographic column. Tap the column to settle the alumina and add 1-2 cm of
anhydrous sodium sulfate to the top.
7.5.3 Pre-elute the column with 10 mL of ethyl ether/pentane (30/70, v/v). Discard the eluate
(about 2 mL) and, just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, quantitatively
transfer the 2-mL sample extract (Sec. 7.2, in methylene chloride) onto the column using an
additional 2 mL of pentane to complete the transfer.
7.5.4 Just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, add 70 mL of ethyl
ether/pentane (30/70, v/v). Discard the first 10 mL of eluate. Collect the remainder of the
eluate in a flask for concentration. This fraction contains some N-nitroso-di-n-propylamine, if
any is present in the sample extract.
7.5.5 Elute the column with 60 mL of ethyl ether/pentane (50/50, v/v), collecting the
eluate in a second flask for concentration. Add 15 mL of methanol to the flask.This fraction
will contain N-nitrosodimethylamine, most of the N-nitroso-di-n-propylamine,
and any diphenylamine that is present.
7.5.6 Concentrate both fractions to the final volumes listed in the appropriate
determinative method, using the techniques described in the appropriate 3500 series
method.

8.0 QUALITY CONTROL

8.1 Refer to Chapter One for specific quality control procedures and Method 3600 for
cleanup procedures.
8.2 The analyst must demonstrate that the compounds of interest are quantitatively (70-
130%) recovered before applying this method to actual samples. This test applies to both
the column cleanup and cartridge cleanup procedures. A recovery check needs to be
performed using standards of the target analytes at a known concentration near the
regulatory limit or action level for the target analyte.

115
8.2.1 This test should be conducted on each batch of alumina following its activation (Sec.
5.4).
8.2.2 The efficiency of each lot of the solid-phase extraction cartridges needs to be verified.
Only lots of cartridges from which the spiked analytes are quantitatively recovered may be
used to process the samples. A check should also be performed at least once on each
individual lot of cartridges and at least once for every 300 cartridges of a particular lot,
whichever frequency is greater.
8.3 The quality control samples associated with sample extracts that are cleaned up using
this method, should also be processed through this cleanup method.

9.0 METHOD PERFORMANCE

Table 1 provides data for the recoveries of phthalate esters obtained from 1-g alumina
cartridges.

10.0 REFERENCES

1. U.S. EPA, "Evaluation of Sample Extract Cleanup Using Solid-Phase Extraction

Cartridges", Project Report, December 1989.

METHOD 3611B
ALUMINA COLUMN CLEANUP AND SEPARATION OF PETROLEUM WASTES
1.0 SCOPE AND APPLICATION
1.1 Alumina is a highly porous and granular form of aluminum oxide. It is available in three
pH ranges (basic, neutral, and acidic) for use in chromatographic cleanup procedures.
Method 3611 utilizes neutral pH alumina to separate petroleum wastes into aliphatic,
aromatic, and polar fractions.
1.2 Method 3611 was formerly Method 3570 in the Second Edition of this manual.

116
1.3 This method is restricted to use by or under the supervision of trained analysts. Each
analyst must demonstrate the ability to generate acceptable results with this method.
2.0 SUMMARY OF METHOD
2.1 The column is packed with the required amount of adsorbent, topped with a water
adsorbent, and then loaded with the sample to be analyzed. Elution of the analytes is
effected with a suitable solvent(s), leaving the interfering compounds on the column. The
eluate is then concentrated (if necessary).
3.0 INTERFERENCES
3.1 A reagent blank should be performed for the compounds of interest prior to the use of
this method. The level of interferences must be below the method detection limit before this
method is performed on actual samples.
3.2 More extensive procedures than those outlined in this method may be necessary for
reagent purification.
3.3 Caution must be taken to prevent overloading of the chromatographic column. As the
column loading for any of these types of wastes approaches 0.300 g of extractable organics,
separation recoveries will suffer. If overloading is suspected, an aliquot of the base-neutral
extract prior to cleanup may be weighed and then evaporated to dryness. A gravimetric
determination on the aliquot will indicate the weight of extractable organics in the sample.
3.4 Mixtures of petroleum wastes containing predominantly polar solvents, i.e., chlorinated
solvents or oxygenated solvents, are not appropriate for this method.
4.0 APPARATUS AND MATERIALS
4.1 Chromatography column: 300 mm x 10 mm ID, with Pyrex® glass wool at bottom and a
polytetrafluoroethylene (PTFE) stopcock.
NOTE: Fritted glass discs are difficult to decontaminate after highly contaminated
extracts have been passed through. Columns without frits may be purchased.
Use a small pad of Pyrex® glass wool to retain the adsorbent. Prewash the glass wool pad
with 50 mL of acetone followed by 50 mL of elution solvent prior to packing the column with
adsorbent.
4.2 Beakers: Appropriate sizes.
4.3 Reagent bottle: Appropriate sizes.
4.4 Muffle furnace.
4.5 Water bath: Heated with concentric ring cover, capable of temperature control
(±5EC).The bath should be used in a hood.
4.6 Erlenmeyer flasks: 50 and 250 mL.
5.0 REAGENTS
5.1 Sodium sulfate: (granular, anhydrous), Na2 SO4 . Purify by heating at 400C for 4 hours
in a shallow tray, or by pre cleaning the sodium sulfate with methylene chloride. If the
sodium sulfate is pre cleaned with methylene chloride, a method blank must be analyzed,
demonstrating that there is no interference from the sodium sulfate.
5.2 Eluting solvents:
5.2.1 Methanol, CH3 OH - Pesticide quality or equivalent.
5.2.2 Hexane, C6 H14 - Pesticide quality or equivalent.
5.2.3 Methylene chloride, CH2 Cl2 - Pesticide quality or equivalent.
5.3 Alumina: Neutral 80-325 MCB chromatographic grade or equivalent. Dry alumina
overnight at 130EC prior to use.

117
6.0 SAMPLE COLLECTION, PRESERVATION, AND HANDLING
See the introductory material to this chapter, Organic Analytes, Sec. 4.1.
7.0 PROCEDURE
7.1 It is suggested that Method 3650, Acid-Base Partition Cleanup, be performed on the
sample extract prior to alumina cleanup.
7.2 Place approximately 10 g of alumina into a chromatographic column, tap to settle the
alumina, and add 1 cm of anhydrous sodium sulfate to the top.
7.3 Pre-elute the column with 50 mL of hexane. Discard the eluate and, just prior to
exposure of the sodium sulfate layer to the air, quantitatively transfer the 1 mL sample
extract onto the column using an additional 1 mL of hexane to complete the transfer. To
avoid overloading the column, it is suggested that no more than 0.300 g of extractable
organics be placed on the column (see Sec. 3.3).
7.4 Just prior to exposure of the sodium sulfate to the air, elute the column with a total of 15
mL of hexane. If the extract is in 1 mL of hexane, and if 1 mL of hexane was used as a
rinse, then 13 mL of additional hexane should be used. Collect the effluent in a 50 mL flask
and label this fraction "base/neutral aliphatics." Adjust the flow rate to 2 mL/min.
7.5 Elute the column with 100 mL of methylene chloride and collect the effluent in a 250 mL
flask. Label this fraction "base/neutral aromatics."
7.6 Elute the column with 100 mL of methanol and collect the effluent in a 250 mL flask.
Label this fraction "base/neutral polars."
7.7 Following cleanup, concentrate the fractions to the final volumes listed in the appropriate
determinative method, using the techniques described in an appropriate 3500 series
method. Analysis follows as specified in the determinative procedure.
8.0 QUALITY CONTROL
8.1 Refer to Chapter One for specific quality control procedures and Method 3600 for
cleanup procedures.
8.2 The analyst should demonstrate that the compounds of interest are being quantitatively
recovered before applying this method to actual samples.
8.3 For sample extracts that are cleaned up using this method, the associated quality
control samples must also be processed through this cleanup method.
9.0 METHOD PERFORMANCE
9.1 The precision and accuracy of the method will depend upon the overall performance of
the sample preparation and analysis.
9.2 Rag oil is an emulsion consisting of crude oil, water, and soil particles. It has a density
greater than crude oil and less than water. This material forms a layer between the crude oil
and water when the crude oil is allowed to gravity separate at the refinery. A rag oil sample
was analyzed by a number of laboratories according to the procedure outlined in this
method. The results of these analyses by GC/MS for selected components in the rag oil are
presented in Table 1. Reconstructed ion chromatograms from the GC/MS analyses are
included as Figures 1 and 2.
10.0 REFERENCES
1. U.S. EPA 40 CFR Part 136, "Guidelines Establishing Test Procedures for the Analysis of
Pollutants Under the Clean Water Act; Final Rule and Interim Final Rule and Proposed
Rule,"October 26, 1984.

118
 FIGURE 1
RECONSTRUCTED ION CHROMATOGRAM FROM GC/MS ANALYSIS OF THE
AROMATIC FRACTION FROM RAG OIL

FIGURE 2

119
RECONSTRUCTED ION CHROMATOGRAM FROM GC/MS ANALYSIS OF THE
ALIPHATIC FRACTION FROM RAG OIL

METHOD 3620B

120
 FLORISIL CLEANUP
1.0 SCOPE AND APPLICATION
1.1 Florisil, a registered trade name of U. S. Silica Co., is a magnesium silicate with
basic properties. It is used to separate analytes from interfering compounds prior to
sample analysis by a chromatographic method.
1.2 Florisil has been used for the cleanup of pesticide residues and other chlorinated
hydrocarbons; the separation of nitrogen compounds from hydrocarbons; the
separation of aromatic compounds from aliphatic-aromatic mixtures; and similar
applications for use with fats, oils, and waxes. Additionally, Florisil is considered
good for separations with steroids, esters, ketones, glycerides, alkaloids, and some
carbohydrates.
1.3 Florisil cleanup may be accomplished using a glass chromatographic column
packed with Florisil or using solid-phase extraction cartridges containing Florisil.
1.4 This method includes procedures for cleanup of sample extracts containing the
following analyte groups:

1.5 This method is restricted to use by or under the supervision of trained analysts.
Each analyst must demonstrate the ability to generate acceptable results with this
method.
2.0 SUMMARY OF METHOD
2.1 This method describes procedures for Florisil cleanup of solvent extracts of
environmental samples. It provides the option of using either traditional column
chromatography techniques to solid-phase extraction cartridges. Generally, the
traditional column chromatography technique uses larger amounts of adsorbent and,
therefore, has a greater cleanup capacity.

121
2.2 In the column cleanup protocol, the column is packed with the required amount of
adsorbent, topped with a water adsorbent, and then loaded with the sample extract.
Elution of the analytes is effected with a suitable solvent(s), leaving the interfering
compounds on the column. The eluate may be further concentrated prior to gas
chromatographic analysis.
2.3 The cartridge cleanup protocol uses solid-phase extraction cartridges containing
40 μm particles of Florisil (60 D pores). Each cartridge is washed with solvent
immediately prior to use. The sample extract is loaded onto the cartridge which is
then eluted with suitable solvent(s). A vacuum manifold is required to obtain
reproducible results. The eluate may be further concentrated prior to gas
chromatographic analysis.
3.0 INTERFERENCES
3.1 A reagent blank should be prepared and analyzed for the compounds of interest
prior to the use of this method. The level of interferences must be below the method
detection limit before this method is performed on actual samples.
3.2 The procedures for reagent purification outlined here should be considered to be
the minimum requirements for use of this method. More extensive procedures may
be necessary to achieve acceptable levels of interferences for some analytes.
However, during the evaluation of the cartridge cleanup procedure, phthalate esters
were detected in the Florisil cartridge method blanks at concentrations up to 400 ng
per cartridge. Therefore, complete removal of the phthalate esters from Florisil
cartridges may not be possible.
4.0 APPARATUS AND MATERIALS
4.1 Chromatography column - 300 mm x 10 mm ID, with a polytetrafluoroethylene
(PTFE) stopcock.
NOTE:
Columns with fritted glass discs are difficult to clean once the column has been used
To process highly contaminated extracts. Columns without frits may be purchased,

122
and a small pad of glass wool may be used to retain the adsorbent. Pre wash the
glass wool pad with 50 mL of acetone followed by 50 mL of elution
solvent prior to packing the column with adsorbent.
4.2 Beakers - Appropriate sizes.
4.3 Reagent bottle - Appropriate sizes.
4.4 Muffle furnace - capable of maintaining 400C.
4.5 Vials - Glass, 10-mL and 25-mL capacity, with PTFE-lined screw caps or crimp
tops.
4.6 Vacuum manifold - VacElute Manifold SPS-24 (Analytichem International),
Visiprep (Supelco, Inc.) or equivalent, consisting of glass vacuum basin, collection
rack and funnel, collection vials, replaceable stainless steel delivery tips, built-in
vacuum bleed valve and gauge. The system is connected to a vacuum pump or
water aspirator through a vacuum trap made from a 500-mL sidearm flask fitted with
a one-hole stopper and glass tubing. The manifold is required for use of the cartridge
cleanup protocol.
4.7 Top-loading balance - capable of weighing to 0.01 g.
5.0 REAGENTS
5.1 Organic-free reagent water - All references to water in this method refer to
organic-free reagent water, as defined in Chapter One.
5.2 Granular Florisil - for column clean up procedure. Florisil is produced in four
grades, two of which are appropriate for this procedure. The differences between
grades are primarily a function of the activation temperature, resulting in somewhat
different chemical characteristics among the grades. Florisil PR is activated at 675C
and is most useful for pesticide residue analyses. Florisil A is activated at 650C and
is generally used for other analytes. Whichever grade is used, store Florisil in glass
containers with ground-glass stoppers or foil-liner screw caps.
5.3 Lauric acid - reagent grade. Used for the standardization of the Florisil activity.
Weigh 10.00 g of lauric acid in a 500-mL volumetric flask. Add 50 mL of hexane to

123
the flask to dissolve the lauric acid. Swirl the flask gently until the lauric acid is
dissolved, then dilute the solution in the flask to 500 mL with additional hexane.
5.4 Phenolphthalein Indicator - Dissolve 1 g of phenolphthalein in ethanol and dilute
to 100 mL in a 100-mL volumetric flask.
5.5 Sodium hydroxide - Weigh out 20 g of NaOH (pellets, reagent grade) in a 500-mL
volumetric flask. Dissolve in organic-free reagent water and dilute to 500 mL to make
a 1 N solution. Dilute 25 mL of the 1 N NaOH to 500 mL with water in a second 500
mL volumetric flask, yielding a 0.05N solution. The NaOH solution must be
standardized against lauric acid, as follows.
5.5.1 Weigh 100 - 200 mg of lauric acid to the nearest 1 mg in a 125-mL Erlenmeyer
Flask. Add 50 mL of ethanol to the flask and swirl to dissolve the lauric acid.
5.5.2 Add 3 drops of phenolphthalein indicator to the flask, and titrate with the 0.05 N
NaOH solution to a permanent endpoint (i.e., the indicator color does not disappear
when the solution is allowed to stand for 1 min).
5.5.3 Calculate the "strength" of the NaOH solution as the mg of lauric acid
neutralized per mL of NaOH solution.
5.6 Deactivation/Activation of Florisil
5.6.1 Deactivation of Florisil - for cleanup of phthalate esters. to prepare for use,
place100± 10 g of Florisil into a 500-mL beaker and heat to 140 C for approximately
16 h. After heating, transfer to a 500-mL reagent bottle. Tightly seal and cool to room
temperature. When cool, add 3 ± 0.1 mL of organic-free reagent water. Mix
thoroughly by shaking or rolling for 10 min and let stand for at least 2 h. Keep the
bottle sealed tightly.
5.6.2 Activation of Florisil - for all cleanups other than phthalate esters. It is advisable
to treat both Florisil A and Florisil PR prior to use to drive off any moisture adsorbed
during storage and handling. Heat the Florisil in a glass container loosely covered
with aluminum foil in an oven at 130C overnight. Cool the Florisil in a dessicator
before use.

124
5.6.3 Florisil from different batches or sources may vary in adsorptive capacity. To
standardize the amount of Florisil which is used, use the lauric acid value, described
below. The procedure determines the adsorption from a hexane solution of lauric
acid (mg) per g of Florisil.
5.6.3.1 Weigh 2.000 g of Florisil in a 25-mL glass-stoppered Erlenmeyer flask. Cover
loosely with aluminum foil and heat overnight at 130C. Stopper the flask and cool to
room temperature.
5.6.3.2 Add 20.0 mL of the lauric acid solution to the flask, stopper, and shake
occasionally for 15 min. Lauric acid value' 200 &(titration volume in mL of NaOH)
(strength of NaOH) where the strength of the NaOH is measured in Sec. 7.5.3 as the
mg of lauric acid neutralized per mL of NaOH solution.
5.6.3.7 Use the following equation to obtain an equivalent quantity of any batch of
Florisil.

5.7 Sodium sulfate (granular, anhydrous), Na2 SO4 - Purify by heating at 400EC for
4 hours in a shallow tray, or by precleaning the sodium sulfate with methylene
chloride. A method blank must be analyzed in order to demonstrate that there is no
interference from the sodium sulfate.
5.8 Florisil cartridges - 40 μm particles, 60 D pores. The cartridges from which this
method were developed consist of 6-mL serological- grade polypropylene tubes, with
the 1 g of Florisil held between two polyethylene or stainless steel frits with 20 μm
pores. Cartridges containing 0.5 g and
2.0 g of Florisil are available, however, the compound elution patterns must be
verified when cartridges containing other than 1 g of Florisil are used.
5.9 Eluting solvents - all solvents must be pesticide quality or equivalent.
5.9.1 Diethyl Ether, C2 H5 OC2H5 .must be free of peroxides as indicated by test
strips (EM Quant, or equivalent). Procedures for removal of peroxides are provided

125
with the test strips. After cleanup, 20 mL of ethyl alcohol preservative must be added
to each liter of ether.

5.10 Florisil cartridge phenol check solution (for the organochlorine pesticide
technique) - Prepare a solution of 2,4,5-Trichlorophenol in acetone at a concentration
of 0.1 mg/L.
5.11 Florisil cartridge pesticide check solution - Prepare a solution containing the
following analytes in hexane :

126
5.12 Chlorophenoxy acid herbicide check solution - Prepare a solution containing
2,4,5-Tmethyl ester at 100 mg/L, pentachlorophenyl methyl ester at 50 mg/L, and
Picloram methyl ester at 200 mg/L.
6.0 SAMPLE COLLECTION, PRESERVATION, AND HANDLING
See the introductory material to this chapter, Organic Analytes, Sec. 4.1.
7.0 PROCEDURE
Sec. 7.1 describes the procedures for assembling and conditioning the Florisil
cartridges.

Sec.7.2 describes general procedures for handling sample extracts prior to cleanup.
Secs. 7.3 - 7.13 describe the column and cartridge procedures for phthalate esters;
nitrosamines; organochlorine pesticides, haloethers, and organophosphorus
pesticides; nitroaromatics and isophorone; chlorinated hydrocarbons; aniline and
aniline derivatives; organophosphates; and derivatized chlorophenoxy acid
herbicides.
The column chromatography procedures employ a larger amount of Florisil than the
cartridge procedures and, therefore, have a greater cleanup capacity. Samples that
exhibit greater degrees of interferences should be cleaned up using the column
procedures. However, both techniques have limitations on the amount of
interferences that they can remove.
If the interference is caused by high boiling materials, then Method 3640 should be
employed prior to Florisil cleanup. If the interference is caused by relatively polar
compounds in the same boiling range as the analytes of interest, then multiple
column or cartridge cleanups may be required. For additional cleanup of
organochlorine pesticides and PCBs, see Method 3665. If crystals of sulfur are
present in the extract, then Method 3660 should be employed prior to Florisil
cleanup.
Whenever Florisil is used to fractionate groups of target compounds (rather than to
simply remove potential interferents) it is critical that the specific fractionation

127
scheme be validated using spiked solutions or spiked sample extracts that contain
most or all of the analytes of interest. This may be particularly important when the
Florisil cartridge techniques are employed, as the differences between the various
cartridge formats and manufacturers may affect the fractionation patterns. In
addition, it may be useful to archive any fractions not originally intended for analysis,
in the event that the fractionation scheme chosen does not yield the intended results.
Once the determinative analysis has been performed and demonstrates that the
fractionation has been successful, such archived fractions may be disposed of in an
appropriate manner. However, if the fractionation did not perform as intended, the
analytes of interest may be contained in the archived fractions which may be able to
be analyzed or combined with the other fraction(s) for reanalysis.
Following Florisil cleanup, extracts may require further concentration and/or solvent
exchange.Consult the appropriate determinative method and 3500 Series extraction
method for details.
7.1 Cartridge set-up and conditioning
7.1.1 Arrange the cartridges on the manifold in the closed-valve position.
7.1.2 Turn on the vacuum pump and set the vacuum to 10 in (254 mm) of Hg. Do not
exceed the manufacturer's recommendation for manifold vacuum. Flow rates may be
controlled by opening and closing cartridge valves.
7.1.3 Condition the cartridges by adding 4 mL of hexane to each cartridge. Slowly
open the cartridge valves to allow hexane to pass through the sorbent beds to the
lower frits. Allow a few drops per cartridge to pass through the manifold to remove all
air bubbles. Close the valves and allow the solvent to soak the entire sorbent bed for
5 minutes. Do not turn off the vacuum.
7.1.4 Slowly open cartridge valves to allow the hexane to pass through the
cartridges. Close the cartridge valves when there is still at least 1 mm of solvent
above the sorbent bed. Do not allow cartridges to become dry. If cartridges go dry,
repeat the conditioning step. 7.2 Handling sample extracts Most sample extracts will
have to be concentrated to a smaller volume prior to the use of Florisil cleanup. The

128
extract volume is a function of the analytical sensitivity necessary to meet the project
objectives. The extract volume will also affect the ability of the Florisil to separate
target analytes from potential interferences, particularly for the cartridge procedures,
where applying large extract volumes to the cartridges may cause poor results. As
noted in Sec. 7.0, consult the appropriate extraction and determinative methods for
the details on final extract volumes, extract concentration techniques, and solvent
exchange procedures.
7.2.1 Reduce the sample extract volume to 2 mL prior to cleanup for:
Phthalate esters Chlorinated hydrocarbons
Nitrosamines Chlorophenoxy acid herbicides
Nitroaromatics and isophorone Aniline and aniline derivatives
The extract solvent should be hexane for the phthalate esters, nitroaromatics,
chlorinated hydrocarbons, and chlorophenoxy acid herbicides, and methylene
chloride for the nitrosamines and aniline and aniline derivatives.
7.2.2 Reduce the sample extract volume to 10 mL prior to cleanup for:
Organochlorine pesticides
Haloethers
Organophosphorus pesticides
Organophosphates
PCBs
The extract solvent should be hexane for these analytes. In most cases, given the
sensitivity of the determinative methods, only 1 mL of the 10 mL extract needs to be
subjected to the Florisil cleanup procedure. The remaining 9 mL should be archived
for later use, if needed.
7.2.3 Allow the extract to reach room temperature if it was in cold storage. Inspect
the extract visually to ensure that there are no particulates or phase separations and
that no evaporative loss has taken place. If crystals of sulfur are visible or if the
presence of sulfur is suspected, proceed with Method 3660.
7.3 Column procedure for phthalate esters

129
7.3.1 Place approximately 10 g of deactivated Florisil (Sec. 5.2.1) into a 10 mm ID
chromatographic column. Tap the column to settle the Florisil and add approximately
1 cm of anhydrous sodium sulfate to the top.
7.3.2 Pre-elute the column with 40 mL of hexane. The rate for all elutions should be
about 2 mL/min. Discard the eluate and, just prior to exposure of the sodium sulfate
layer to the air, quantitatively transfer the 2-mL sample extract onto the column using
an additional 2 mL of hexane to complete the transfer.
7.3.3 Just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, add 40 mL of
hexane and continue the elution of the column. Discard this hexane eluate.
7.3.4 Elute the column with 100 mL of ethyl ether/hexane (20/80, v/v) and collect this
fraction in a flask (e.g., a 500 mL K-D flask equipped with a clean 10 mL
concentrator tube). Concentrate the eluate to the volume listed in the determinative
method, using the techniques described in the appropriate 3500 series method. No
solvent exchange is necessary. Compounds that elute in this fraction are:
Bis(2-ethylhexyl) phthalate Diethyl phthalate
Butyl benzyl phthalate Dimethyl phthalate
Di-n-butyl phthalate Di-n-octyl phthalate
7.4 Cartridge procedure for phthalate esters
7.4.1 Using 1-g Florisil cartridges, condition the cartridges with hexane as described
in Sec. 7.1.
7.4.2 Transfer the extract (Sec. 7.2) to the cartridge. Open the cartridge valve to
allow the extract to pass through the cartridge bed at approximately 2 mL/minute.
7.4.3 When the entire extract has passed through the cartridges, but before the
cartridge becomes dry, rinse the sample vials with an additional 0.5 mL of solvent,
and add the rinse to the cartridges to complete the quantitative transfer.
7.4.4 Close the cartridge valve and turn off the vacuum after the solvent has passed
through, ensuring that the cartridge never gets dry.
7.4.5 Place a 5-mL vial or volumetric flask into the sample rack corresponding to the

130
cartridge position. Attach a solvent-rinsed stainless steel solvent guide to the
manifold cover and align it with the collection vial.
7.4.6 If the sample is suspected to contain organochlorine pesticides, elute the
cartridge with methylene chloride/hexane (20/80, v/v). Turn on the vacuum pump and
adjust the pump pressure to 10 inches (254 mm) of Hg. Allow the solvent to soak the
sorbent bed for 1 minute or less. Slowly open the cartridge valve, and collect the
eluate (this fraction contains the organochlorine pesticides, and should be
discarded).
7.4.7 Close the cartridge valve, replace collection vials, and add 10 mL of
acetone/hexane (10/90, v/v) to the cartridge. Slowly open the cartridge valve and
collect the eluate into the collection vial. This fraction contains the phthalate esters,
and should be retained for analysis.
7.4.8 Concentrate the eluate to the volume listed in the determinative method, using
the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.5 Column procedure for nitrosamines
7.5.1 Add a weight of activated Florisil (nominally 22 g) predetermined by calibration
(Sec. 5.6.3.7) into a 20 mm ID chromatographic column. Tap the column to settle the
Florisil and add about 5 mm of anhydrous sodium sulfate to the top.
7.5.2 Pre-elute the column with 40 mL of ethyl ether/pentane (15/85, v/v). Discard
the eluate and, just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air,
quantitatively transfer the 2-mL sample extract (Sec. 7.2) onto the column using an
additional 2 mL of pentane to complete the transfer.
7.5.3 Just prior to the exposure of the sodium sulfate layer to the air, elute the
column with 90 mL of ethyl ether/pentane (15/85, v/v). Discard the eluate. This
fraction will contain and diphenylamine present in the extract.
7.5.4 Elute the column with 100 mL of acetone/ethyl ether (5/95, v/v), collecting the
eluate in a flask (e.g., a 500 mL K-D flask equipped with a clean 10 mL concentrator
tube). This fraction will contain all of the nitrosamines listed in the scope of the
method.

131
7.5.5 Add 15 mL of methanol to the collected fraction, and concentrate this fraction to
the volume listed in the determinative method, using the techniques described in the
appropriate 3500 series method.
7.6 Column procedure for organochlorine pesticides, haloethers, and
organophosphorus pesticides (see Table 2 for fractionation patterns of
organophosphorus pesticides)
7.6.1 Add a weight of activated Florisil (nominally 20 g), predetermined by calibration
(Sec. 5.6.3.7), to a 20 mm ID chromatographic column. Settle the Florisil by tapping
the column. Add anhydrous sodium sulfate to the top of the Florisil to form a layer 1
to 2 cm deep.
7.6.2 Pre-elute the column with 60 mL of hexane and discard the eluate. Just prior to
exposure of the sodium sulfate to air, quantitatively transfer the 10-mL sample
extract (Sec.7.2) onto the column, completing the transfer with two 1-2 mL rinses
with hexane.
7.6.3 Place a flask (e.g., a 500 mL K-D flask equipped with a clean concentrator
tube) under the chromatographic column. Drain the column into the flask until the
sodium sulfate layer is nearly exposed. Elute the column with 200 mL of ethyl
ether/hexane (6/94, v/v) using a drip rate of about 5 mL/min. This is Fraction 1, and
all of the haloethers are in this fraction. Remove the flask and set aside for later
concentration.
7.6.4 Elute the column again, using 200 mL of ethyl ether/hexane (15/85, v/v), into a
second flask. This is Fraction 2.
7.6.5 Perform a third elution using 200 mL of diethyl ether/hexane (50/50, v/v),
collecting the eluate in a third flask. This is Fraction 3.
7.6.6 Perform a final elution with 200 mL of 100% ethyl ether, collecting the eluate in
a fourth flask. This is Fraction 4.
7.6.7 Concentrate the four eluates to the volume listed in the determinative method,
using the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.7 Cartridge procedure for organochlorine pesticides and PCBs

132
7.7.1 Using 1-g Florisil cartridges, condition the cartridges with hexane, as described
in Sec. 7.1.
7.7.2 Transfer the 1 mL (or other appropriate volume) of the extract (Sec. 7.2) to the
cartridge. Open the cartridge valve to allow the extract to pass through the cartridge
bed at approximately 2 mL/minute.
7.7.3 When the entire extract has passed through the cartridge, but before the
cartridge becomes dry, rinse the sample vial with an additional 0.5 mL of hexane,
and add the rinse to the cartridge to complete the quantitative transfer.
7.7.4 Close the cartridge valve and turn off the vacuum after the solvent has passed
through, ensuring that the cartridge never goes dry.
7.7.5 Place a 10-mL vial or volumetric flask into the sample rack corresponding to
the cartridge position. Attach a solvent-rinsed stainless steel solvent guide to the
manifold cover and align with the collection vial.
7.7.6 If there is no need to separate the organochlorine pesticides from the PCBs,
then add 9 mL of acetone/hexane (10/90, v/v) to the cartridge. Turn on the vacuum
pump and adjust the pump pressure to 10 inches (254 mm) of Hg. Allow the solvent
to soak the sorbent bed for 1 minute or less. Slowly open the cartridge valve and
collect the eluate into the collection vial. Go directly to Sec. 7.7.8.
7.7.7 The following procedures are used to separate the organochlorine pesticides
from the PCBs.
7.7.7.1 Add 3 mL of hexane to the cartridge. Turn on the vacuum pump and
adjust the pump pressure to 10 inches (254 mm) of Hg. Allow the solvent to soak the
sorbent bed for 1 minute or less. Slowly open the cartridge valve and collect the
eluate into the collection vial. This is Fraction 1 and it will contain the PCBs and a
few of the organochlorine pesticides (see Table 5).
7.7.7.2 Close the cartridge valve, replace the collection vial, and add 5 mL of
methylene chloride/hexane (26/74, v/v) to the cartridge. Slowly open the cartridge
valve and collect the eluate into the collection vial. This is Fraction 2 and it will
contain most of the pesticides.

133
7.7.7.3 Close the cartridge valve, replace collection vials, and add 5 mL of
acetone/hexane (10/90, v/v) to the cartridge. Slowly open the cartridge valve and
collect the eluate into the collection vial. This is Fraction 3 and it will contain the
remaining pesticides.
7.7.8 As needed, perform a solvent exchange and adjust the final volume of the
eluant to the volume listed in the determinative method, using the techniques
described in the appropriate 3500 series method.
7.8 Column procedure for nitroaromatics and isophorone
7.8.1 Add a weight of activated Florisil (nominally 10 g) predetermined by calibration
(Sec. 5.6.3.7) into a 10 mm ID chromatographic column. Tap the column to settle the
Florisil and add about 1 cm of anhydrous sodium sulfate to the top.
7.8.2 Pre-elute the column with methylene chloride/hexane (10/90, v/v) at about 2
mL/min. Discard the eluate and, just prior to exposure of the sodium sulfate layer to
the air, quantitatively transfer the 2-mL sample extract (Sec. 7.2) onto the column
using an additional 2 mL of hexane to complete the transfer.
7.8.3 Just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, add 30 mL of
methylene chloride/hexane (10/90, v/v) and continue the elution of the column.
Discard the eluate.
7.8.4 Elute the column with 90 mL of ethyl ether/pentane (15/85, v/v) and discard the
eluate. This fraction will contain any diphenylamine present in the extract.
7.8.5 Elute the column with 100 mL of acetone/ethyl ether (5/95, v/v), and collect the
eluate in a flask (e.g., a 500 mL K-D flask equipped with a 10-mL concentrator tube).
This fraction will contain all of the nitrosamines listed in the scope of the method.
7.8.6 Add 15 mL of methanol to the collected fraction, and concentrate to the volume
listed in the determinative method, using the techniques described in the appropriate
3500 series method.
7.8.7 Elute the column with 30 mL of acetone/methylene chloride (10/90, v/v), and
collect the eluate in a flask (e.g., a 500-mL K-D flask equipped with a 10-mL
concentrator tube). Concentrate the collected fraction to the volume listed in the

134
determinative method, using the techniques described in the appropriate 3500 series
method, and exchanging the solvent to hexane. Compounds that elute in this fraction
are:
2,4-Dinitrotoluene
2,6-Dinitrotoluene
Isophorone
Nitrobenzene
7.9 Column procedure for chlorinated hydrocarbons
7.9.1 Add a weight of activated Florisil (nominally 12 g) predetermined by calibration
(Sec. 5.6.3.7) into a 10 mm ID chromatographic column. Tap the column to settle the
Florisil and add about 1 to 2 cm of anhydrous sodium sulfate to the top.
7.9.2 Pre-elute the column with 100 mL of petroleum ether. Discard the eluate and,
just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, quantitatively transfer the
sample extract (Sec. 7.2) to the column by decantation and subsequent petroleum
ether washings. Discard the eluate.
7.9.3 Just prior to exposure of the sodium sulfate layer to the air, begin eluting the
column with 200 mL of petroleum ether and collect the eluate in flask (e.g., a 500-mL
K-D flask equipped with a 10-mL concentrator tube). This fraction should contain the
following chlorinated hydrocarbons:
2-Chloronaphthalene Hexachlorobenzene
1,2-Dichlorobenzene Hexachlorobutadiene
1,3-Dichlorobenzene Hexachlorocyclopentadiene
1,4-Dichlorobenzene Hexachloroethane
1,2,4-Trichlorobenzene
7.9.4 Concentrate the collected fraction to the volume listed in the determinative
method, using the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.10 Cartridge procedure for chlorinated hydrocarbons
7.10.1 Using 1-g Florisil cartridges, condition the cartridges with 5 mL of
acetone/hexane (10/90, v/v) as described in Sec. 7.1.

135
7.10.2 Transfer the extract (Sec. 7.2) to the cartridge. Open the cartridge valve to
allow the extract to pass through the cartridge bed at approximately 2 mL/minute.
7.10.3 When the entire extract has passed through the cartridges, but before the
cartridge becomes dry, rinse the sample vial with an additional 0.5 mL of
acetone/hexane (10/90), and add the rinse to the cartridges to complete the
quantitative transfer.
7.10.4 Close the cartridge valve and turn off the vacuum after the solvent has passed
through, ensuring that the cartridge never gets dry.
7.10.5 Place a 5-mL vial or volumetric flask into the sample rack corresponding to
the cartridge position. Attach a solvent-rinsed stainless steel solvent guide to the
manifold cover and align it with the collection vial.
7.10.6 Add 10 mL of acetone/hexane (10/90, v/v) to the cartridge. Turn on the
vacuum pump and adjust the pump pressure to 10 inches (254 mm) of Hg. Allow the
solvent to soak the sorbent bed for 1 minute or less. Slowly open the cartridge valve
and collect the eluate into the collection vial.
7.10.7 Adjust the final volume of the eluant to the volume listed in the determinative
method, using the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.11 Column procedure for Aniline and Aniline derivatives (see Table 4 for elution
patterns)
7.11.1 Add a weight of activated Florisil predetermined by calibration (Sec. 5.6.3.7)
into a 20 mm ID chromatographic column. Tap the column to settle the Florisil.
7.11.2 Pre-elute the column with 100 mL of 2-propanol/methylene chloride (5/95,
v/v), followed by 100 mL of hexane/methylene chloride (50/50, v/v), followed by 100
mL of hexane. Discard the eluate and leave a column of about 5 cm of hexane above
the Florisil.
7.11.3 Quantitatively transfer the 2-mL sample extract (Sec. 7.2) onto 2.0 g of
activated Florisil in a 50-mL beaker, using a small volume of methylene chloride, and
dry under a gentle stream of nitrogen.

136
7.11.4 Place the dried Florisil containing the sample extract onto the
chromatographic column, and wash the beaker which contained the Florisil with 75
mL of hexane, adding this wash to the reservoir.
7.11.5 Elute the hexane from the column and discard. Stop the column flow just prior
to the exposure of the Florisil to air.
7.11.6 Elute the column with 50 mL of methylene chloride/hexane (50/50, v/v), using
a drip rate of about 5 mL/minute, and collect the eluate in a flask (e.g., a 500-mL K-D
flask equipped with a 10-mL concentrator tube). This is Fraction 1.
7.11.7 Elute the column with 50 mL of 2-propanol/hexane (5/95, v/v), and collect the
eluate in a second flask. This is Fraction 2.
7.11.8 Elute the column a third time using 50 mL of methanol/hexane (5/95, v/v).
Collect the eluate in a third flask. This is Fraction 3. Frequently, it will prove useful to
combine the three fractions prior to analysis. However, in some situations, analysis
of each separate fraction may be required. Refer to Method 8131.
7.11.9 Concentrate the collected fractions to the volume listed in the determinative
method, using the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.12 Column procedure for organophosphates
7.12.1 Add a weight of activated Florisil, predetermined by calibration (Sec. 5.6.3.7),
to a 20 mm ID chromatographic column. Settle the Florisil by tapping the column.
Add anhydrous sodium sulfate to the top of the Florisil to form a layer 1 to 2 cm
deep.
7.12.2 Pre-elute the column with 50-60 mL of hexane. Discard the eluate and just
prior to exposure of the sulfate layer to air, quantitatively transfer the 10-mL sample
extract (Sec. 7.2) onto the column using a hexane wash to complete the transfer.
7.12.3 Just as the sample reaches the sodium sulfate, elute the column with 100 mL
of diethyl ether/hexane (10/90, v/v). Discard the eluate.
7.12.4 Just prior to exposure of the sodium sulfate to air, elute the column with 200
mL of diethyl ether/hexane (30/70, v/v). This fraction contains all of the target
analytes except for tris(2,3-dibromopropyl) phosphate.

137
7.12.5 Elute the column with 200 mL of diethyl ether/hexane (40/60, v/v). This
fraction contains tris(2,3-dibromopropyl) phosphate.
7.12.6 Concentrate the collected fraction to the volume listed in the determinative
method, using the techniques described in the appropriate 3500 series method.
7.13 Column procedure for derivatized chlorophenoxy acid herbicides
7.13.1 Add a weight of activated Florisil (nominally 4 g) predetermined by calibration
(Sec. 5.6.3.7) into a 20 mm ID chromatographic column. Tap the column to settle the
Florisil and add approximately 5 mm of anhydrous sodium sulfate to the top.
7.13.2 Pre-elute the column with 15 mL of hexane. The rate for all elutions should be
about 2 mL/min. Discard the eluate, and just prior to exposure of the sodium sulfate
to air, quantitatively transfer the 2-mL sample extract (Sec. 7.2) onto the column,
using an additional 2 mL of hexane to complete the transfer.
7.13.3 Just prior to the exposure of the sodium sulfate layer to the air, elute the
column with 35 mL of methylene chloride/hexane (20/80, v/v), collecting the eluate in
a clean flask (e.g., a 500 mL K-D flask equipped with a concentrator tube). This is
Fraction 1, and will contain any pentachlorophenyl methyl ester that is present.
7.13.4 Elute the column with 60 mL of methylene chloride/acetonitrile/hexane
(50/0.035/49.65, v/v/v), collecting the eluate in a second flask. This is Fraction 2.
7.13.5 If Picloram is to be determined, perform a third elution with the volume of
diethyl ether determined from the Florisil check in Sec. 8.2.4, collecting this eluate in
a third flask. This is Fraction 3, and will contain the Picloram.
7.13.6 The three fractions may be combined for analysis. Concentrate the combined
fractions to the volume listed in the determinative method, using the techniques
described in the appropriate 3500 series method.
8.0 QUALITY CONTROL
8.1 Refer to Chapter One for specific quality control procedures and Method 3600 for
cleanup procedures.
8.2 The analyst must demonstrate that the compounds of interest are being
quantitatively recovered before applying this method to actual samples. This test

138
applies to both the column cleanup and cartridge cleanup procedures. A recovery
check must be performed using standards
of the target analytes at known concentration.
8.2.1 This test must be conducted on each batch of Florisil following its activation
(Sec. 5.4).
8.2.2 The efficiency of each lot of the solid-phase extraction cartridges must be
verified. Only lots of cartridges from which the spiked analytes are quantitatively
recovered may be used to process the samples. A check should also be performed
at least once on each individual lot of cartridges and at least once for every 300
cartridges of a particular lot, whichever frequency is greater.
8.2.3 Organochlorine pesticides - To check each new lot of Florisil cartridges before
use, perform the following in duplicate:
8.2.3.1 Combine 0.5 mL of the 2,4,5-trichlorophenol solution in Sec. 5.10, 1.0 mL of
the pesticide solution in Sec. 5.11, and 0.5 mL of hexane in a vial.
8.2.3.2 Condition the cartridge as described in Sec. 7.1 and then perform the
cartridge cleanup starting with Sec. 7.7.
8.2.3.3 Elute the cartridge with 9 mL of acetone/hexane (10/90, v/v) only.
Reduce the volume to 1.0 mL and analyze by Method 8081.
8.2.3.4 The lot of Florisil cartridges is acceptable if all pesticides are recovered at 80
to 110 %, if the recovery of trichlorophenol is less than 5 %, and if no peaks
interfering with the target analytes are detected.
8.2.4 Chlorophenoxy acid herbicides - To check each new lot of granular Florisil
perform the following:
8.2.4.1 Add 5 mL of the chlorophenoxy acid herbicide check solution (Sec. 5.12)
to a Florisil column packed and washed as in Sec. 7.13.2.
8.2.4.2 Elute Fractions 1 and 2 as described in Secs. 7.13.3 and 7.13.4, collecting
each in a separate flask.
8.2.4.3 Elute the column with approximately 100 mL diethyl ether and collect
ten separate 10-mL fractions.

139
8.2.4.4 Concentrate Fraction 1 and Fraction separately and concentration each
of the ten 10-mL diethyl ether fractions to 5 mL. 8.2.4.5 Analyze each of the 12
eluates by GC/ECD and calculate the recovery of each analyte. Pentachlorophenyl
methyl ether should be found in Fraction 1. 2,4,5-T methyl ester (and the methyl
esters of the other chlorophenoxy acids) should be found in Fraction 2. Determine
the volume of diethyl ether that is required to elute Picloram methyl ester.
8.2.4.6 The lot of Florisil is acceptable if the target analytes are quantitatively
recovered and if the recovery of trichlorophenol is less than 5%. No interferences
should be detected in any of these eluates.
8.3 The quality control samples associated with sample extracts that are cleaned up
using this method must also be processed through this cleanup method.
9.0 METHOD PERFORMANCE
9.1 Table 1 provides recoveries of phthalate esters obtained from the Florisil column
procedure.
9.2 Table 2 provides recoveries of phthalate esters obtained from the Florisil
cartridge procedure.
9.3 Table 3 provides the distribution of organochlorine pesticides and PCBs from the
Florisil column procedure.
9.4 Table 4 provides recoveries of Aroclors from the Florisil cartridge procedure.
9.5 Table 5 provides the distribution of organochlorine pesticides from the Florisil
cartridge procedure, using 1-g cartridges.
9.6 Table 6 provides the distribution of organophosphorus pesticides from the Florisil
column procedure.
9.7 Table 7 provides recoveries of chlorinated hydrocarbons obtained from the
Florisil cartridge procedure.
9.8 Table 8 provides the elution patterns for aniline compounds from the Florisil
column procedure.
10.0 REFERENCES

140
1. Gordon, A.J. and R.A. Ford, The Chemist's Companion: A Handbook of Practical
Data, Techniques, and References (New York: John Wiley & Sons, Inc.), pp. 372,
374, and 375, 1972.
2. Floridin of ITT System, Florisil: Properties, Application, Bibliography, Pittsburgh,
Pennsylvania, 5M381DW.
3. Mills, P.A., "Variation of Florisil Activity; Simple Method for Measuring Absorbent
Capacity and its use in Standardizing Florisil Columns," Journal of the Association of
Official Analytical Chemists, 51, 29, 1968.
4. U.S. Food and Drug Association, Pesticides Analytical Manual (Volume 1), July
1985.
5. Lopez-Avila, V., Milanes, J., Dodhiwala, N.S., and Beckert, W.F., "Cleanup of
Environmental Sample Extracts Using Florisil Solid-Phase Extraction Cartridges," J.
Chrom. Sci. 27, 209-215,1989.
6. US EPA "Evaluation of Sample Extract Cleanup Using Solid-Phase Extraction
Cartridges," Project Report, December 1989.
7. US EPA Method 650, Aniline and Selected Substituted Derivatives.
8. Beckert, W.F., and Lopez-Avila, V., "Evaluation of SW-46 Method 8060 for
Phthalate Esters," Proceedings of the Fifth Annual Waste Testing and Quality
Assurance Symposium, 1989, pp. 144-156.
9. US EPA Method 608, Organochlorine Pesticides and PCBs.

141
142
143
144
145
146
147
 148

View publication stats