eouadto 10.4. Correlacién clinica celularidad de la médula
sea | 208
ATLAS EN COLORES
sina 16, Eriuocttos 7 agramtoctos | 300
mira 17. Granuloctes | 302
i Tejido muscular | 30
I GENERALIDADES ¥ CLASIFICACION DEL TEJIDO
MUSCULAR | 308
BE Miscuto esaueténico | 306
I MUSCULO cARDIACO | 322
BE mbscuto uso | 327
Reeuadro II. Consideraciones funcionales: metabolismo mus-
‘cular isquemia | 310
Requadtro 11.2. Correlacién cliiea: distrofla muscular (distofina
y proteinas relacionadas) | 315
Fecuatira 11.9. Consderaciones funcionales: modelo det desl
tamiento de los flamentos | 315
ecuatr 11-4. Correacicn clinica; miastenia grave | 319
Feeuaeiro I1.5. Conseraciones funcionales: comparacion de
lec tes tipos musculares | 333
ATLAS EN COLORES
Limina 18, Mésculo esquelético | 336
Lamina 19, Union musculotendinosa y union,
‘eromuscular | 338
LUsmina 20. Méseulo cardiaco | 340
Lina 21. Mésculo cardico, fibras de Purkinje | 342
smipa 22. Maseulo liso | 344
@ Tejido nervioso | 346
[Ml GENERALIDADES DEL SISTEMA NERVIOSO | 347
| COMPOSICIN DEL TENDO NERVIOSO | 347
‘ME LANEURONA | 348
Hl CALULAS DE SOSTEN DEL TED NERVIOSO | 359
IM ORIGEN DE LAS CELULAS DEI. TE}DO NERVIOSO | 371,
Hl ORGANIZACION DEL SISTEMA NERVIOSO
PERIFERICO | 371
I ORGANIZACION DEL. SISTEMA NERVIOSO CENTRAL | 380
|W RESPUESTA DE LAS NEURONAS A LA AGRESION | 383
‘scuadro 12.1. Correlacin clinica: enfermedad
Ge Parkinson | 353,
‘ecuadro 12.2. Correlacion clinica: enfermedades desmielii-
antes | 366
ATLAS EN COLORES:
Lsmina 23. Ganglios simpaticos y aquldeos | 386
Lsmina 24. Nervio perérieo | 388
LUsmina 25. Cerebro | 390
mina 26. Cerebelo | 392
Lamina 27. Médula espinal | 394
i Aparato cardiovascular | 3%
[Hl GENERALIDADES DEL APARATO CARDIOVASCULAR 396
Bl conan | 597
IMI CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS ARTERIAS Y LAS.
\VENAS | 403
Bl agrenias | 404
BE capiares | 414
I ANASTOMOSIS ARTERIOVENOSAS | 416
Wi venas | 417
I Vasos LINFATICOS | 419
Recusdro 13.1, Correlacin clinica: hipertensién | 405
ecuadio 13.2, Correlacion etna’ aerosclerosis | 412
Recuadko 13.5. Cortelacin elnica enfermedad cardiaca
fsquémica | 420
ATLAS EN COLORES
Lémnina 28. Coraa6n | 422
Lamina 29, Aorta | 424
Lamina 30, Arterias musculaes y venas | 426
laa 91, arterioles y vasu Unitary | 425
TB sistema tinfatico 1
[IU GENERALIDADES DEL SISTEMA LINFATICO | 430
i CELULAS DEL SISTEMA LINFATICO | 432
i renD0s v ORGANOS LINFATICOS | 447
Recuadho 14.1. Consideraciones funcionales:origen de las
designaciones life Ty inp B | 436
Recuadio 14.2. Cortelacon clinka: reacciones de hipersersibil-
hd | 437
Recuado 143. Cortelacin elinica’ virus de la inmuncdeficlen-
2 humana (HIV) y sindrome de inmuncdeft-
clencia adqutrida SIDA) | 443
ATLAS EN COLORES
Lamina 32. Amigdala | 468
Lamina 33. Ganglo infateo t| 470
Amina 34, Ganglo lintatien i | 472
Lamina 33, 62201 | 474
Lamina 36, Bazo Il | 476
mina 37. Timo | 478
EB ict y fanerasi wo
Ill GENERALIDADES DE LOS TEGUMENTOS | 480
Ml esreatos De LA Pret | 481
I CELULAS DELA EPIDERMIS | 485
Wl esTRUCTURAS DE LA PIEL | 491
Recuadio 15.1, Consideraciones fundonales: color
de Ss piel | 490 Rociadro 15.2, Consideracienes tuncionales crecimiento y
aracteratcas del pelo | 496
Recuadro 15.3. Consideraciones luncionales: la funcion del
‘uno sebiceo | 498
Recuadre 15.1. Correlacion eliniea: sudoract6n y
enfermedad | 501
Recuadro 15.5, Cortelaci6n clinica: reparacién cuténea | 503
ATLASTEN COLORES
Lamina 38. Piel | $06
nina 39, Pel | 508
Lamina 40, Glindulas ssdoriparas ecrinas y apecrinas | 510
Limina 41. Glindulas sudoriparas y sebaceas | 512
LLimina 42, Pel y receptores sensoriales | 514
‘Lamina 43. Faliculo piteso y una | 516
Ha] Aparato digestivo
cayidad oral y estructuras
asociadas | sis
| CENERALIDADES DEL APARATO DIGESTIVO | 518
IH cavipap onat. | 519
‘Bi tencua | 521
I DIENTES ¥ SUS TEIIDOS DE SOSTEN | 526
GLANDULAS SALIVALES | 539
Recuadre 16.1. Correlacién clinica: el funeamente genético del
W525
usto
Recuadro 16.2, Cortelacion clinica: clasificacion de las denticior
nes permanente (secundaria) y decidua (prima:
tia) 1526
Recuodro 16,3. Correlacén clinics: caties dentaies | 549
[ecuadro 16.4. Covtelaclon clinica: tumores de fas glanduias
sallvales | 549
ATLAS EN COLORES
Liming 44, Labo, ransicion cutaneamucesa | $50
Lina 45, Lengua || 352
Lamina 40. Lengua tt 354
Lamina 47, Glandula submandibular | 556
Lina 48, Glindula pardtida | 558
Lémnina 49, Glia subtingva | 360
Hi 7] Aparato digestivo I:
esofago, estomago
€ intestino | 562
1H GENERALIDADES DEL TUEO DIGESTIVO | 563
Bi es6raco | 565
i cerémaco | see
Bi intestwno DELGADO | 579
Wi ivtestino arueso | 394
Recuadro 17.1. Costeacién dines: anemia perniciosa y enfer-
Imedad ulcerosa péptica | 573)
Recuadio 17.2. Consideraciones funcionales: clas enteroen-
ocrinas, elulas APUD y hormonas gatroin:
testinales | 580
Reauado 173. Correlaciin clinica! sindrame de Zalinger-
Etison | 381
Recuadro 17.4. Consiceraciones funcionales:fundones digest
vas y absortivas de los enteracitor | 502
Recusdro 17-5, Consideracfones funeionales:Funciones inmuno-
ogias de! tubo digestivo | 600
ATLAS EN COLORES:
Lamina 50, Eséfago | 602
Lamina 51, Esofago y estémago. regién del cards 604
Lamina 52, Esxomago | | 600
sina 53. Estomago il | 608
Lamina 54 Transicién gastroduodenal | 610
Lamina 55. Duodeno | 612
Lamina 96. Yeyuno | 614
Lamina 57, Hleon | 616
Amina 58. Colon | 618
Lamina 39, apendice | 620
{Lamina 60, Conducto anal | 622
18] Aparato digestivo II,
higado, vesicula biliar y
pancreas | 624
Wittcapo | co
BE vesicuta Bisa | 641
I PANCREAS | 645
Recuar 16. Gorrlato cna: oulciencn carta cone
‘esta y necrosis hepa | 632
Recuadro 18.2. Corrlaion cin: iponrxeinas | 639
fecuadro (8.3: Condderciones fnconales:datel eal
na. un ejemplo de procesamiento postraducclo-
nal | 633,
ATLAS EN COLORES
Lamina 61. Hieado 1! 654
Lamia 62, Higad i! | 056
mina 63, Vesela bikar | 638
{Lamina 64, Pancreas | 660
19] Aparato respiratorio | 62
IW GENERALIDADES DEL APARATO RESPIRATORIO | 662
BE CAVIDADES NASALES | 663
I FARINCE | 667
BELARINGE | 667
HE TRAQUEA | 669,
IB sronauios | 674
1 BRONQUIOLOS | 675
Bawveouos | 76
I IRRIGACION SANGUINEA | 484
I vasos LINFATICOS | 683
TB IneRvaciOn | 685, Realadro |9.1. Correlaion cnica: metaplasia | 670
Reauado 19.2. Correlacion clinica: fibrosis quisica | 677
Recuadho 19.4 Corrslacién clinica: enfisema y nesmorta | 683
ATLAS EN COLORES
Lamira 65, Mucose olfaterta | 686
Lamina 66, Laringe | 688
Lamina 67. Taquea | 690
mira 68, Bronqutolos y vas aéreas terminales | 692
‘Lamina 69, Paredes del bronquiolo terminal. bronquiolo respr
ratorio yalvéoto | 694
& Aparato urinario | 66
‘ME CENERALIDADES DEL APARATO URINARIO | 697
BE ESTRUCTURA GENERAL DEL RISON | 698
INE FUNCION TUBULAR RENAL | 711
Wi CELULAS inTeRsTiciALes | 717
Wi nistonsioLocia DEL RINON | 718
Mi inzicacion sanautvea | 719
IE VASOS LINFATICOS | 721
IE INERVAGION | 721
Wi unéren, venica y uRETRA | 722
Recuadro 20.1. Consideraciones funcionales:vtamina D | 697
Recaro 20.2. Consideracién clinica: anaisle de rina | 710
Recuadro 20.3, Correlaién clinica: sistema renine-anglorer-
sina-aldesterona e hipertension | 710
Recuadro 20.4. Consideraciones funciorales: estructura
1 fureién de los canales acuoses de
facuaporina | 714
ecuadro 20.5. Consideracionesfunciorates:reguacién
‘hormonal de la funcidn de les conductos
ccloctores | 718
ATLAS EN COLORES
Lémina 70, rinon | 726
Lamina 71, non | 728
Lsmina 72, raion tt | 730
Linina 73, Rinin tv | 732
Lamina 74, Ureter | 734
Lamina 75, Veiga | 735
2) Sistema endocrino | 738
| GENERALIDADES DEL SISTEMA ENDOCRINO | 738
IB GLANDULA PITUTTARIA (HIPOFISIS) | 742
BrorAtano | 770
BB GLANDULA PINEAL | 751
IE GLANDULA TIROIDES | 753,
Bi GLANDULAS paRATROIDES | 758
I GLANDULAS SUPRARRENALES | 750
ecuadeo 24 |. Consideraciones functorales: reguacion de la
secrecion hipfisaria | 748,
ecuadio 21.2. Correlation elie dlabetes inspida y ADK | 750
Recuadio 2! 3. Consideraciones funcionales retroconiral de fa
Sintess de hoewonas teoldeac | 755
RRecuadio 21.4, Cortlocion clinica: fucidn trodes anormal | 757
Recuadio 21.5. Consideracores tuncionales: células
‘cromafines | 764
Recuadro 21.6. Consideraciones foncionales: biosinteds de ae
hhormonas suprarrenates | 767
ATLAS EN COLORES
Lamina 76. Hipotisis1| 770
Amina 77. Mipsis 1 | 772
mina 78. Gléndula pineal | 774
Lamina 79. Gléndulas paratiroides y tiroides | 776
Usmina 80. Gléndula suprarrenal 1! 773
Lamina 8}. Cléndula cuprarrenat W | 780,
122 Aparato genital
masculino | 782
[BE GENERALIDADES DEL APARATO GENITAL
MASCULINO | 782
Biresricuto | 783,
IHU ESPERMATOGENESIS | 789
Bi répu.os seminirenos | 796
IHU CONDUCTOS INTRATESTICULARES | 602
II VAAS espeRMAricAs | 802
I GLANDULAS SEXUALES ANEXAS | 208
Mi senen | 819
pene | 813
Recuadro 22.1 Corsideraciones funcionales: regulacion hermo-
nal dela espermatogéness | 791
Recuicea 22.2. Correlaciin clinica factores que alectan la
cespermatogénesis | 798
ecu 22.3, Corelacon clinica: antigenos especiicos
de ls espermatomides y la respuesta
lmuntaria | sot
Recuacho 22.4, Correlacon clinica: hipertrotia prosttica
benigna y cancer de prosiata | 810
Recuadeo 22.5. Correlacon eica: mecanismo de la ereccion y
sfuncién eréett | 815
ATLAS EN COLORES,
Lamina 82. Testiclo 1| 815
Lamina 89. Testculo 1) | 818
‘Lamina 84. Conductillos eferentes y epididimo | 820
{Amina 85. Cordén espermatico y conducto deferente | 822
Lamina 86, Prostata | 824
‘Lamina 87. Vesteula seminal | 826
ES Aparato genital
femenino | 28
I GENERALIDADES DEL APARATO GENITAL
FEMENINO | 829 ovaro| $30
Wi rrompas ureninas | 846
oreo | 817
Wi pLacenta | 855
IB VAGINA | 860
(Ml GENITALES EXTERNOS | 363,
I CLANDULAS MAMARIAS | 864
Recuadlo 29.1, Correlaeiin cnica: poliquistosis ovirca | 636
Recuadho 23.2. Cortelacion clinica: fecundaci6a in vitro | 842
Recuado 23.3. Consideraciones funcionales: resumen de a
regulacion hormonal det ciclo ovarco | 844
Recuad’o 23.4. Correlacion cinica: destino de la placenta
‘madura en ol parte | 860.
ecuadro 25.5. Correlacon cin’ chologia exfohauva
(ap) | 852
Recuado 23.6, Consideraciones funciona: lactacin
eintertidad | 368.
ILA EN COLORES
Amina RR Owain’ | 20
Lamina 89. Ovario w | 872
Lémina 90. Cuerpo titeo | 874
Lasnina 91, rompa uterna | 870
LUsmina 92. Utero 1 | $78
Lamina 93, Otero t| 880
Lamina 94, Cuello ueerino ledevie) | 882
Linina 95. Placenta | $84
mina 96, Placeata i | 886
Lsmine 97, Vagina | 888,
LUiina 98. Glindulas mamarias | 890
Lamina 99. Cléndula mamario, proiferativa avanzada y en la
Iactacion | 892
EEL ojo a
I GENERALIDADES DEL O10 | 894
BB ESTRUCTURA GENERAL DEL 0/0 | 694
Ml ESTRUCTURA MICROSCOPICA DEL 10 | 898
Recuadro 24.1, Correlaciin linia: glaucoma | 906
Recuadro 24.2. Correlacion dna: desprendimiento
de la retina | 908
Reciadro 24.3. Correladén dina: degenctacion macular relo-
‘ionada con i edad | 914
[ATLAS EN COLORES
Lamina 100. oj0 1 | 920
Lamina 101. ojo retina | 922
LLémina 102. Ojo I: segmento arcerios | 924
Lamina 103. Ojo IV: escierovca, cornea y cristalino | 926
& El oido | 928
Il CENERALIDADES DEL Cibo | 928
WH ofpo exreRNo | 978
i ofDo Mepio | 929
1 ofpo interno | 932
Recuscro 25.1, Correlacién clinica: vértigo | 940
Recuacro 25.2. Corfelacién clinica: hipoacusia-disfuncién vest
bur | 945
[ATLAS EN COLORES,
Lamina 108, odo | 948;
Lamina 105, Organo de Corti | 950
INDICE ANALITICO | 953 © GENERALIDADES DE LAS TECNICAS UTILIZADAS EN HISTOLOGIA |
SN DEL TEJIDO 2
Rec enn
Otros fjadores | 3
‘Otras técnicas de tincion 5
= Hisroauimica ¥ crroauimica 5
ina de muestrasfiadas en formalina 2
‘Composicién quimica de las muestras histoldgicas | 5
Fundamentos quimicos de la coloracion | 6
Colonantes dcidos u Btsicos 6
Metacromasia 7
Grupos aldchido y el reactive de Seif. 7
Digestion enzimstica 8
Histoquimica enzimatica | 9
Inmunocitoquimica 9
Técnicas de hibridacion | 12
Radioautogratia | 13
= MICROSCOPIA 13
Microscopia éptica 13
Examen de un preparado histol6gico con el microscopio Sptico 15
Otros sistemas opticos 19
Microscopia electronica | 21
Microscopia de fuerza atémica 24
Recuadro 1.1 Correlacion clinica: biopsias por congelacion 4
Recuadro 1.2 Consideraciones funcionales: microespectrofotometria de Feulgen 8
Recuadro 1.3 Correlaci6n clinica: anticuerpos monoclonales en medicina | 10
Recuadro 1.4 Uso correcto del microscopio 6ptico
16
Recuadro 1.5 Consideraciones funcionales: desarrollo de la microscopia electronica | 23
@ GENERALIDADES DE LAS
TECNICAS UTILIZADAS EN
HISTOLOGIA
H objetivo de un curso de histologia es conducir
al esiudiante a comprender la microanatomia de
las eélulas, los tejidos y los Srganos y a
‘comrelacionar la estructura con la funcion
Las. téenicas utilizadas por los histologos son diver-
sis en extremo, La mayor parte de los contentdos le un
curso de histologéa se puede formular en los términos
de la microscopia éptica, que los estudiantes manejan
en las pricticas de laboratorio, pero la interpretacion
‘mis detallada de la microanatomifa se fundamenta en la
microscopia electrénica (ME), tanto con el microscopio
electrdnico de transmision (MET) como con el micros-
copio electronic de barrido (MEB), La ME, dado su
aumento mas tril y su resolucién mayor, sucle ser el
lilimo paso en la adquisicion de datos al que se recu
tte entre las muchas tecnicas auxiliares de la biologia
celular y molecular. Estas técnicas auxiliares inclayen: ‘+ Histoquimica y citoguimica
‘ Inmunocitoquimica y tecnicas de hibridacton.
4 Recioautografia.
# Cultivo de teidos y drganos
# Separacion de células y orginulos por centrifugacion
difenen
‘+ Mictoscopios y réenicas microscopleas especializadas,
Es posible que los estudiantes se sientan distantes de
estas téemicas y procedimientos experimentales porque
Jos programas actuales de la asignatura no suelen con-
templar una experiencia directa con ellos. Sin embargo,
6s importante saber algo acerca de os procedimientos,
‘especializados y los datos que proporcionan. En est capl-
tulo se presenta un panorama general de esas tcnicas y una
explicacion de la forma en que les datos apertados por ellas
‘pueden ayudar al estudiante a comprender major a esiru:
tura y la funcin de las célula, ios tidos y tos organos
Uno de los problemas que enfrentan los estudiantes,
en histologia es comprender Iz naturaleza de le imagen
bidimensional de un preparado histolégico 0: una
ricrofotogmfia cleerrénica y la forma en que esta 2c
relaciona con la estructura tridimensional de la cual
proviene. Para salvar esta brecha conceptual primero
fenemos que presentar una breve descripeién de las
técnica utilizadas para preparar los cortes histologicos
tanto de la microscopia dptica coma de la microscopia
electronica,
| PREPARACION DEL TEJIDO
Tincién con hematoxilina y eosina
de muestras fijadas en formalina
HL corte de rutina tenido con hematoxilina y cosina
es la muestra que mis freeuentemente se estudia
La caja de preparados que s¢ entregn a cada est
diante para que examine bajo el microscopio optico
contiene principalmente especimenes fijados en forma
lina, incluides en parafina y coloreados con hematoxi-
lina y eosina (H-E), Casi todas las microfotogratias opti-
eas que se presentan en las secciones del atias de este
libro son de preparados de estas mismas cajas. Ademés,
| mayoria de las microfotografias utlzadas para ilus-
trar tejidos y Srganos en las clases teéricas de histolo-
sa y en conferencias se obtienen de estos preparados,
A veces se usan otras téenicas para demostrar compo-
nentes especificus de bs velalas y lem wejidos, waiay de
estas técnicas Se descriten més adelante,
EL primer paso en la preparacion de una muestra
de tejido u organo es la fijacion para conservar la
‘estructura
La fiiacion, en general obtenida mediante el empleo
de sustancias quimicas individuales 0 mezclas de estas
sustancias, consersa la estructura del tgjido en forma
permanente para permitir el tratamiento ulterior Las
muestras tenen que sumergirse en el fjador inmedia-
tamente después de extraerse del organism. La ijacion
‘utiliza para
© Abolir el metabolismo celular
© Impedir la degradacién enzimaitica de las células y
los tejidos por autdlisis (autodigesti6n),
© Destratr Jos mictoorginismos Patogenos como las
Incterias, los hongos o los virus
# Endureeer ef tejido como consecuencia de la forma-
cion de enlaces cruzades 0 la desnaturalizacién de
las moléeulss proteicas.
Fl fijador de uso ms comin es la formalina, una
selucién acuosa de formaldehido al 37%, en diluciones
variadas y en combinacion con ofras sustancias quimi-
cas y amortiguadores (bulfers) El formaldehido preser-
va la estructura general de la célula y de les componen:
tes extracelulares al reaccionar con los grupes amino de
las proteinas (eon mucha freeuencia forme enlaces er
zados entre tesidios de lisina). Dado que el lormaldett-
do no altera en forma significativa su estructura tridi-
mensional, las proteinas mantienen su capacidad de
reaccionar con anticuerpos especificos. Esta. propiedad
es importante en los métedos de tincién inmunocitoqui-
mica (véase pp 9) Lat solucicin comercial estindar de for-
maldehido amortigiado con fosfatos (pH 7) actiia con
bastante lentirud pero penetra bien en el teido, Sin
embargo, el formakdehido no reacciona con los lipidos
y. por lo tanto, es un mal fjador de las membrana.
En el segundo paso la muestra se dispone para su
inclusion en parafina con el fin de permitir su corte
Para poder examinar la muesira hay que infiltrarla
con un medio de inelusién que permita realizar cortes
muy delgados, tipicamente de 5 a 15 pm (1. micréme:
tro (Um] equivale @ la milesima parte de un milimetro:
véase cuadro 1.1) Lnego de la fijacion la muestra se lava
y se deshidrata en una serie de soluciones alcohlicas
de concentracion creciente hasta alcanzar alcohol al
100%, En el paso siguiente, el aclarado, se utilizan sol-
vertes orginicos como xileno 0 tolueno, que son mis-
cibles tanto en alcohol como en parafina, para extraer
‘ picometo = 10% angstroms (A)
1 angstiom (0,1 nanémetro toe)
Waroaroms = 1.0 nanémetro 5
1 narémeto | 1000 picometros
1000 nandmevos
1000 micrOmetres =
1,0 mieromevo um)
1,0 miimeto (mm) FIGURA 1.1. Coloracién con hematoxilina y eosi
(BL), Las tes imagenes que se presentan aqui correspon-
den a cortes de pancreas seriados (adyacentes) para demostrar el efecto de la hematoxlina y Ia eosina utilzadas solas ©
combinades. a. En esta microfotogralia se ve una coloracion con hematoxiina sola. Si bien hay una tincién general de lo
muestra, los componentes y estructuras con gran afinicad por el clorante se tinen con una intensidad mucho mayor, por
ejempio, DNA nuclear y RNA citoplasmatico. B. De manera simiar la eosina (colorante de contraste), cuando se usa sola,
‘cansigue una tincién general de los tejdos, como puede verse en esta microfotcgraia. Sin embargo, obsérvese que los
nucleos son menos conspicuos que en la muestra tenida s6lo con hemetoxilna, Despues de colorear la muestra con herna-
toxilina y de prepararla para su tinci6n con eosina en solucién alcohdlica, la hematoxilna que no estaba unida con firme-
22 se lava y entonces la eosina tie los componentes con los que tiene gran afinidad. ¢. En esta microfotografia pueden
verse os efectes tintoviales combinados de ambos colorantes (H-), 480 x.
el alcohol al 100% ant
tra con parafina fundida.
‘Cuando la parafina fundida se ha enfiiado y endu-
recido se empareja para formar un bloque de tamani
adecuado. Este bloque, lamado taco, se coloca enton
ces en una maquina cortadora especial, el microtome,
que lo corts en rebaradas finas con una cuchilla de
cero, Luego los cortes obtenides se rmonian sobre por-
taobjetos de vidrio a los que antes se les habra anadi-
do una pequeta cantidad de albumina para que sirva
de adhesivo,
de la infiltracién de le mves-
En el tercer paso, la muestra se tine para permitir
‘su examen
Dado que los cortes en parafina son incoloros, la
muestra todavia no esté lista para su examen bajo el
microscopio 6ptico, Para colorear o tenir los cortes hi
telégicos Ia parafina debe disolverse y extraerse, de
ruevo con xileno 0 tolueno, y los tejidos deben rehi-
dratarse mediante el uso de una serie de alcoholes de
concentracién decreciente, Luego el tejido colocado
sobre los portaobjetos se tine con hematoxilina en agua
Como el colorante de contract, cocina
en alcohol que en agua, se vuelve a deshidramar la
muestra en soluciones aleoholicas de concentracion
cteciente y después se tine con eosina en alcohol. Los
resultados de ba tineién con hematoxilina sola, con cost
‘na sola y con ambos colorantes se muestran en la figu-
ra LI Luego de la coloracién la muestra se hace pasar
por xileno 6 talueno y se le celoca un medio de mon-
ide caluble
taje no acuoso antes de cubrirla con un cubreobjetos
para lograr un preparado permanente
Otros fijadores
La formalina no preserva todos los componentes
de las células y los tejidos
Aunque los cortes de muestras fiyadas en formalina
tehidos con H-E son convenientes porque permiten ver
bien las caracteristicas estructurales generates, no son
especificos para difuicidar la composicién quimica de
los elementos constitutivos de las e¢hilas. Ademés,
muchos componentes se pierden durante la. prepara-
cidn de la muestra, Para conse os componentes
y-estructuras hay que utilizar ottos méiodos de fijacion,
Estos métodos se fundamentan en un conocimiento
sélido de la quimica, Por ejemplo, los aleoholes y los
solventes orginicos que se usin en les preparados de
rutina diluyen los lipides neutros,
Para conservar los lipidos neutros, como los de las
células adiposas, deben utilizarse cortes por congelacion
de tajido fijado en formalina y colorantes que ce disuel-
van en las grasas; para conservar estructuras de la mem
brana hay que usar fijadores especiales con. metales
pesados. como permanginato y osmio, que se unan a
los fostolipides. El empleo de rutina de tetroxide de
esiio como fijador en la microscopia elecronica es ta
razén principal del excelente estado de conservacion de
las membranas en las microlotograias el
carénieas.
.
i ‘TECNICA HISTOLOGICA ¥ MICROSCOPIA,
A veces el patdlogo necesita evaluar de inmediato el
te}do obtenido durante el acto quirirgico, en especial
cuando el diagnostco anatomopatologico instantaneo
puede determinar el paso siguiente en la ciuola. Hay
varias incicaciones para realizar este tipo de evaluacion,
que se conoce como Biopsia por congelacion. Es muy
frecuente que un cinijano solite ura biopsia por conge-
lacién en el quir6fano cuando no cuenta con un diagnds-
tico preoperatorio 0 debe identificarhallazgos intraopera~
torios inesperados, Ademds, es posible que el ciujano
guiera saber si se ha extirpado toda la masa patovogica
ddento del livte del teido sano y si el borde de la resece
ign quiruraica est libre de tejdo entero. Las biopsies
or congelacion tambien se realizan en combinacon con
‘otfos procedimientos, como la endoscopia ola biopsia con
‘aqua fina, para confrmar si el material bidasco cbtenido
set ti en estudios anatomopatoldaicas adicionates.
‘ore reakzer una biopsio per congelacén 3 ciguen tea
sos principales:
+ Congelacién de la muestra de tejido. Se congelan
muestras de teido de tamaho pequetio mediante el
uso de anhichido carbanico comprimido o la inmersion
un liquide frlo (Sopentano) a una temperstura de
16 por congelacién
~50 °C, El congelamiento, que puede lograrse en una
‘camara refigeradora muy eficiente, endurece el tejido
y permite el corte con un microtomo.
+ Corte del tejido congelado. £1 corte suele realizarse
dentro de un ciéstato, una cémara refrigerada que
Contiene un mkcrotomo, Dado que el teido esta con-
‘gelato y duro, puede cortarse en rebanadas muy finas.
(5. 10 um), Luego los cortes se montan sobre un por
taobjetos de virio
+ Tinci6n de los cortes. La tincion se wealiza para dif
rericar los nucleos celulares del resto de las structures,
del teido. Los ticiones de uso mas frecuente para las
biopsies por congelacién son HE, azul de metileno
(fig. 1.2) PAS,
Todo el proceso de preperacion y evalueciin de las
biopsias por congelacion puede tardar unos 10 minutos
en completarze. Ei tempo total que tronacurre hat fo
btencion de resuitados degende sobre todo del tiempo
de transporte del tajdo desde e quiciano hasta el labo-
Iatorio de anatomopatologis, de le técnica histopatolégi
‘@.utizada y de ia experiencia del pat6iogo. Los halazaos,
‘2 comunican directemente al crujano que esta esperan-
doen € quicfano,
FIGURA 1.2. Evaluacién de una muestra obtenida durante el acto quirdrgico y preparada median:
te la técnica de congelacion. a. En esta microfotogratia se ve una muestra obienida del intastino grueso que se
prepard mediante la técnica de congelacin y se tiNé con azul de metieno (biopsia por congelacién), 160°. b. Parte de
la muestra ce fjé en formalin y se proces6.con una técnica de utina que comprende la coloracién con H-€ (biopsia dife-
‘ide) El examen de la biopsia por congelacion peiitid comprobar que el tejdo era normal. diagndstico se confizmo
‘despues mediante el examen del preparado de rutina tenido con HE, 180 x. (Gentileza del Dr. Daniel WW. Visscher) Otras técnicas de tincién
La hematoxilina y la eosina se utilisan en
histologia principalmente para poner en evidencia
las caracteristicas estructurales
A pesar de los méritos de la tincién con H-E, este
procedimiento no permite ver en forma adecuada cier~
tos componentes estructuraies de los cortes histol6si-
cos, a saber, clastina, fibras reticulares, membranas
basales y lipidos. Cuando se desea estudiar estos com-
ponentes pueden utilzarse otros métodos de tincién,
en su mayorie selectivos, que incluyen la coloracién con
orceina y fuesina-resorcina para el material ekistico y la
impregnacién argéncica para las fibras reticulates y las
membranas basales. Pese a que el fundamento quimico
de muchos no siempre se comprende, estos procedi-
mientos sirven. En cualquier cazo, es més importante
saber lo que el método permite observar que conocer
su mecanismo intimo de accién.
| HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICA
Los procedimientos quimicos especificos pueden
proveer informacion detallada acerea de la funcién
de las células y los componentes extracelulares de
los tejidos
Los métodos hisoquimicos y citoguimicos pueden
tener st fundamento en la union especifica de un colo
rante, el uso de anticuerpos marcados con un coloran-
te fluorescente dirigidos contra un componente celular
en particular o la actividad encimatica inherente de un
elemento constitutivo de las células, Ademas, muchas
macromoléculas presentes en las células. pueden detec
tarse por medio de la radioautogralia,en la cual prec
sores moleculares marcados radiactivamente se incor
poran a las células y los tejidos antes de la fijacion.
Muchos de estos procedimientos pueden usarse en pre
patacos tanto para is microscopia dptica como para la
rmicroscopia electronica.
‘Antes de comeniar la quimica de las tinciones de
nating y de las técnicas histoquimicas y citoquimicas
conviene describir brevemente la indole de un core
histolégico comin.
comaceicion quimica de
muestras histologicas
La composicion quimica de un tejido listo para
‘una coloracién de rutina es muy diferente de la
del tejido vivo
Los componentes que perduran tego de la fijacion
son principalmente moléculas grandes que no se disuel-
ven con facilidad, en especial después de aplicar el fja-
dor. Estas. moléeulas grandes, en particular las que reac
ctonan con otras moléculas semejantes para formar
complejos macromolectlares, son las que suelen conser-
varse en un corte histolégico, Los siguientes son gjem-
pos dle estos complejos mactomolectares grandes:
‘+ Nucleoproteinas, formadas por acidos nucleicos uni
dos a proteinas.
+ Proteinas intracclulares del citoesqueleto en comple
jo con otras proteinas,
© Proteinas extracelulares en grandes aglomeraciones
Insolubles, en las que moléculas vecinas semejantes
se unen a través de enlaces cruzados, como ocurre
fen la formacién de las fbras cokigenas,
+ Complejos de fosfolipidos y proteinas (0 carbohidra-
tos) en las membranas.
En su mayor pane estas moleculas constituyen la
estructura de las celulas y tos tefidos, dado que son los
clementes morfogénicos histicos, Constituyen la base de
la orwanizacion de los telidos visible con el micrescopio.
En muchos: casos un elemento estructural es al
misino tiempo una unidad funcional. Por ejemplo, en el
caso de las proteinas que forman los filamentos con-
trdetiles de las edlulas musculares, estos filamentes son
los componentes estructurales visibles y ademas parti-
cipan en el proceso. de contraccién, El RNA del cito:
plasma aparece como parte de un componente estruc-
tural (ergastoplasma de las células glandulares,
sustancia de Nissl de las neuronas) y al mismo tiempo
5 un participante activo en la sintesis de proteinas,
Muchos componentes de los tejidos desaparecen
durante la preparacién de los cortes teitides con H-E
A pesar de que la mayor parte de los acidos nuclei-
05, las proteinas y los fosfolipides se conservan en. los
cortes histologicos, muchos tambien se pierden. Las pro-
teinas pequefas y los dcides nucleicos pequeios, come
los RNA de transferencia, en general se piercen durante
la preparacion del tejido, Como se menciond antes, los
solventes orginices uslizades durante la ténica histold
aka suelen disolver les lipidos neutros. También pueden
perderse otras moléculss grandes, por ejemplo al set
hidrolizadas como conseciencia del pH desfavorable de
las soluciones fijadoras. Los que siguen son ejemplos de
macromoléculas que se pierden durante lt fijacién de
rutina en Bijadores acuosos
+ Glucégero (carbohidrato de almacenamicnto intrace
lular comun en et higado y las células musculares.
+ Proteoglucanos y glucosaminoglucanos (caibohidra-
tos complejos extracelulares hallades en el tejido
conjuntive),
Sin embargo, estas moléculas pueden conservarse si
se uiilizan fijadores no acuiosos para el ghicdgeno 0 si
i
i 1B Mistoquimica y cltoquimica
‘TECNICA HISTOLOGICA Y MICROSCOPIA
4a soluciOn fijadora se le aftaden agentes ly
especiales que preserven las moleculas extracelulares
con carbohidratos abundantes. Ademds, como ya se
soment6, durante la preparacién de rutina también suc
Jen perderse los lipides neutros. porque los: solventes
orginicos los disvelven
Los componentes solubles, los iones y las molécu-
Jas pequefias tambien desaparecen durante la pre-
paracién de las maestras incluidas en parafina
Darame Ia preparacion de las muestras de rutina
4que se incluyen en parafina y Inego se tien con H-E
se pierden metabolitos:intermedis,-slucosa, socio,
coro y sustancias similares, Machas de estas sustancias
pucden estudiarse en preparados especiales, en ocasio~
nes con una pérdida considerable de la. integridad
structural, Estos iones y pequedias moléculas solubles
no constituyen elementos morfogenicos histicos sino
que participan en los procesos de sintesis o en las reac-
ciones celulares, Cuando se conservan y pueden detec-
tarse por métodos especifices aportan informacion
saliosiima cobre el metabolism, el transpore activo y
ottos procesos vitales de las células. El agua, una mole
cula muy versiil, participa en. estas reacciones ¥ pro-
cesos y contribuye a la estabilizacién de la estructura,
macromolecular a través de enlaces dle hidrogeno.
Fundamentos quimicos de
la coloracion
Colorantes dds y bisicos
La hematoxilina y la eosina son los colonantes de
uso mas frecuente en la histologia
Un colorante deido, como la cosina, tiene ua carga
acta negativa en su parte coloreada y se describe con la
formula general (Nat anilina”).
Un colorante basico tiene uns carga neta positiva en
su parte coloreada y se describe con la {6rmula general
(avilina* Cr).
Desde el punto de vista estructural Ia hemaroxilina
‘no es un colorante hasico, pero tiene propiedades tin-
toriales muy semejantes a lay de las anilinas basicas. El
color de una anilina no se telaciona con el hecho de
que sea dcida 0 basica, como lo demuestran los ejem-
plos que se presentan en el cuadro 1.2.
Los colorantes basicos reaccionan con los compo-
nentes aniénicos de las eélulas y los tejidos (com-
ponentes que tienen una carga neta negativa)
Entre los componentes anidnicos se encuentran los
grupos foslato de los acidos nucleicos, los grupos sul-
lato de los glucosaminoglucanos y los grapos carboxilo
de les proteinas. La capacidad de estos grupos anini-
03 de reaccionar con una anilina 0 colorante basico se
denomina basofilia (gr hasis + philein, amar, es decir
que tiene afinidad por lo bisice). Los componentes del
telido que se tien con la hematoxilina también exhi-
ben basofilia,
La reaccion de los grupos antonicos varia segun el
pH. Ast
© Con tin pH alto (de cerca de 10) los tres grupos se
ionizan y quedan disponibles para la reaccién con el
colorante basico por medio de uniones electrostaticas
© Con un pi ligeramente acido a neutro (de 3 a 7) se
ionizan los grapos fosiato y sulfato y quedan dispo-
nibles pata reaccionar con ta anilina basica a traves
de uniones eleerrostiticas
+ Con un pH bap (inferior @ 4) solo se manticnen
ionizados los grupos sullato para reaccionar con los
colorants basicos,
En consecuencia, la tincién con colorantes bésicos
en un pH determinade puede utiizarse para centrar el
estudio en grupos anionicos especificos y como estos
anionee expecifione predominan en cienas macromelé-
culas, la tinei6n sirve como indicador de estas macro-
moléculss.
Como ya se menciond, a hematoxilina no es un
colorante basico en sentido estricto, Se usa con un mor-
diemte (es decir un intermediatio entre el componente
del tejido y Ja anjlina) y cs por la accion det mordien:
te que la coloracion con hematoxilina se parece a la tin-
cién que produce un colorante basico. Ls union en el
complejo tejido-mordiente-hematoxilina no consiste en
un simple enlace electrostético y cuando la hematosili-
ra se coloca en agua no se disocia del tejido. Por eso la
hematoxilina se presta para aquellos procedimientos
tintoriales en los que es seguida por soluciones acuosas
de colorants fcidos. Los colorantes bisices verdade:
tos, a diferencia de la hemaroxilina, no suelen usarse en
secuencias en las que la anilina basica es seguida por
una anilina aida. Entonces la anihina basica dende a
disociarse del teido durante los lavados en soluciones
acuosas que se realizan entre la aplicacién de ambas
soluciones colorantes
Colorante
Color
wade
aut
Rojo © Histoquimica y citoquimica
Los colorantes tcidos reaccionan con los grupos
cationicos de las edlulas y los tejidos, en particular
con los grupos amino ionizados de las proteinas
La reaccion de los grupos cationicos con un coloran-
te dcido recibe el nombre de acidofilia (lt. acidus + gr
philein, amas, seo que tiene afinidad por lo écido). La
reacciones de los componentes celulares ¢ histicos con
los colorantes fcidas no son tan especifeas ni tan pre
cisas como las reacciones con los color
‘Aunque el enlace eleccrostitico es el factor principal
en la union primaria de un colorante acido con el teji-
do, no €s el Gnico, debido a ello, los coloranies cides
a veces se utilizan combinados para tefir en forma
seleciva distintos componentes de los tejdos. Por ejem-
lo, en la técnica tricromica de Mallory se usan tres
eolorantes Aeidos; azul de anilira,fuesina acids y raran-
ja. Esos colorances tifien con selectividad el colageno,
el ctoplasma en general y ls eritrocitos, respectivamen-
te. La fucsina acids también dhe los nticleos.
En otras técnicas con anilinas acids. multiples se
ples la hemannvlina pars war primern los niiclos y
luego se aplican los colorantes écides con el fin de tenir
selectivamente el citoplasma y las fibras extraceulares, La
tincién selectiva de los componentes de ls teidos por los
coloramtes didos se debe a factores relativos, como
tamafo y el grado de acumulacién de las moléculas del
colorants y la permeabidad y densidad del tejdo,
Los colorantes basicos tambien. pueden utilzarse
combinadas o secuencialmente (p. ej, verde de metilo
Y pironina para estudiar la sintesis y la secrecién de
proteins), pero estas combinaciones no son de uso tan
difundido como las de los colorantes dcidos
Una cantidad limitada de sustancias dentro de las
célutas y en la matriz extracelular presenta basofiia
Enire estas sustancias figuran:
+ Heterocromatina y nucléolos del nvicleo (principal~
mente por los grupos fosfato tonizados en ios acids
nucleicos de ambos).
++ Componentes citoplasmaticos como el ergastoplasma
(también por los grupos foslato ionizados en el RNA
ribosémico),
‘© Material extracelular como los carbohidratos com-
plejos de la marriz eartilaginosa (por los grapos stl-
favo ionizados),
La tinciém con colorantes dcidos ex menos eepect-
fica pero mas sustanciay dentro de las eelulas y
cen [a matric extracelular presentan acidofilia
Estas sustancias inluyen:
La mayoria de los filaments citoplasmétices. en
los de las eélulas musculares.
# La mayorta de los camponentes membranosos intra-
edlulares y gran parte del ctoplasina no especialica-
dio de otro modo.
‘© La mayoria de las fibras extracelulares (principal-
mente por los grupos amino tontzades).
Metacromasia
Giertos colorantes basicos reaccionan con compo-
nentes histicos que hacen cambiar su color nor-
mal del azul al rojo 0 al purpura; esta modifica-
ion de la absorbancia se denomina metacromasia
El mecanismo bisico de la metacramasia es la pre-
sencia de polianiones en ¢! tcjide, Cuando estos tej
dos se tinen con uns solucton colorante bastca con-
centrada, como la de azul de toluidina, las moléculas
de la anilina estan lo suficientemente cerca como para
formar aglomeraciones diméricas y poliméricas. Las
propiedades de absorcion de estas aglomeraciones son
diferentes de las de las moleculas de colorant indivi-
diales na aglamoradas
Las estructuras de las cdlulas y los tejides con una
alta concentracion de grupos sullato y losfato ioniza-
dos, como la sustancia fundamental del cartilago, los
granules de heparina de los mastocios y et reticulo
endoplasmitico rugoso de los plasmocitos, muestran
metacromasia, En consecuencia, el azul de toluidina
se vera purpura 0 rojo cuando tina estos componen-
tes
Grupos aldetido y el reacive de Schif
La capacidad de la fuesina basica decolorada
(reactivo de Schiff) de reaccionar con les grupos
aldehido da como resultado ta aparicion de un
color rojo distintivo y es la base de las reacciones
del PAS (acido peryédico-reactivo de Schiff) y de
Feulgen
La reaccién del PAS (dcido peryédico-reactive de
Schiff) tine carbobidratos ymacromoléculas. con
abundancia de carbohidratos. Se usa para detectar
slucogeno en las células, moco en varios tipos de
celulas y tejidos, ta membrana basal que se encuentra
debajo de los epitelios y las fibras reticulares del teji-
do conjuntivo, La reaccién de Feulgen, que incluye
tuna hidrolisis acida débil con HCI, se utiliza para
tefir DNA,
Los fundamentos de la reaceion del PAS son los
sigaietes;
* Los anillos de las hexosas (carbohidrates) poseen
carbonos adyacentes, cada uno de ellos con un
grupo hidroxilo (OH).
«Las hexosaminas de los glicosaminoghiea
eajmynbon & e2puaynborseit m bidn peseen carbonas adyacentes, pero con akeman-
cia de grupos hidoxilo (OH) y_grupes amino
(NH)
+ Hl Acido peryédico rompe la unin entre estos dto-
mos de carbono adyacences y forma grupos alde-
hide
‘Estos grupes aldehido reaccionan con el reactivo de
Schill para dar un color purpura intenso disuntivo.
La tincion con PAS de la membrana basal (jig. 1.3)
yy las fibras reticulares tiene su fundamento en el con-
tenido 0 la asociacién de proteoglucanos (carbohidra-
tos complejos asociades con un centro de proteina),
Esta tincion es una-altemativa de las tenicas de
impregnacién argéntica, que también tienen como base
la reaccion con las moléculas de sacéridas de los pro-
teoglucanes.
La reaccion de Feulgen separa las purinas de las
desoxirribosas del DNA por medio de una hidrélisis
cida débil; entonces se abren les anillos de monosa-
carido y se forman grupos aldehido. De nuevo, son
loc gripar aldehido de formacidn reciente los que
reaccionan con el reactivo de Schiff para dar el color
rojo purpura caracteristico. La reaccion del reactivo
de Schill con el DNA es estequiométrica y por lo
tanto, puede usarse en metodos especiroforometricos
para cuantificar el DNA en ef micleo de una célula. EL
RNA no se tite con el reactivo de Schill porque no
tiene descxirnibosa,
FIGURA 1.3. Microfotografia de tejido renal
tefildo con Ia técnica del PAS. Esta técnica histogu
mica sine para demostrar y localizar carbohidratos y
sracromoléculas con carbohidratos abundantes. Las mem-
bbranas basales son PAS positivas, como es cbvio por su
coloracién rojo purpura intensa. Los tabuios renales (7) se
encuentran bien delineados por la membrana basa! tefida
‘que los rodea, Los capilares glomerulares (C) el eprtelio de
la capsula de Bowman (BC) también poseen membranas
basales PAS positivas. 360 x.
Digestion enzimatica
La digestion enzimatica de un corte adyacente a
‘otro teiido para identificar un componente especi-
fico, como glucogeno, DNA 0 RNA, puede ser util
para confirmar la identidad del material que se tifte
El matenal intracelular que se tie con a reaccién
del PAS puede identificarse como glucégeno mediante
de Feulgen
La microespectrofotometria de Feulgen es una téc-
nica que fue ideada pera el estudio de los aumentos
del DNA en las células en desarrolio y para analizar |a
ploidia, es decir a cantidad de veces que est8 muli-
Plicado ef contenido normal de DNA en une célula (se
dice que una célula somética normal que no se estd
dvidiendo es dipleide: on cambio, los espermatczoi-
des y fos ovulos son haploides). Para cuantificer el
DDAIA.nuclaar
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