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Quimiosfera 286 (2022) 131782

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Efecto interactivo de biocarbón y compost con plantas Poaceae y Fabaceae en la

remediación de hidrocarburos totales de petróleo en suelos contaminados con petróleo
crudo

Uzma Yosafa,1, Aqib Hassan Ali Kanb,1, Asifa Farooqia, Yousaf Shad MuhammadC, Rocío
Barrosd, Juan Antonio Tamayo Ramosd, Mazhar Iqbala, Sohail Yousafa,*
aDepartamento de Ciencias Ambientales, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Quaid-i-Azam, Islamabad, 45320, Pakistán
bDepartamento de Ciencias Ambientales y de la Tierra, Universidad de Bahria (campus de Karachi), Karachi, 75260, Pakistán
CDepartamento de Estadística, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad Quaid-i-Azam, Islamabad, 45320, Pakistán
dCentro Internacional de Investigación en Materias Primas Críticas y Tecnologías Industriales Avanzadas, Universidad de Burgos, Burgos, 09001, España

DESTACAR GRÁFICAMENTE ABSTRACTO

• Respuesta de plantas Poaceae y Fabaceae en

suelos envejecidos contaminados con TPHs.
• El efecto del biocarbón y el compost con plantas
fue adecuado para la eliminación de TPH.
• El potencial de cada tipo de pasto con la
enmienda del suelo fue diferente.
• Con compost de trigo, maíz y ryegrass se
realizaron fitorremediaciones con
mayores TPHs.
• Para la eliminación de TPH con trébol blanco y
alfalfa, se encontró que el biocarbón era más
adecuado.

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Editor de manejo: T Cutright El estudio actual se dedicó a encontrar el efecto de las enmiendas del suelo (biocarbón y compost) en plantas pertenecientes a
las familias Poaceae y Fabaceae. Las plantas seleccionadas para el experimento de fitorremediación incluyeron trigo (Triticum
Palabras clave: aestivum), maíz (zea mays), trébol blanco (Trifolium repens), alfalfa (Medicago sativa), y raigrás (Lolium multiflorum). Los
fitorremediación parámetros fisiológicos y microbianos de las plantas y del suelo se vieron afectados negativamente por la contaminación del
TPH
suelo con 4 % de TPH. Los parámetros fisiológicos estudiados fueron biomasa fresca y seca, longitud de raíces y brotes y
plantas poaceas
contenido de clorofila. Los parámetros microbianos incluyeron el recuento endófito de raíces y brotes. Los parámetros del
plantas fabáceas
Biocarbón
suelo incluyeron UFC rizosféricas y TPH residuales. El biocarbón con trigo, maíz y raigrás (familia Fabaceae) y el compost con
Compost trébol blanco y alfalfa (familia Poaceae) mejoraron los parámetros de crecimiento de las plantas y mostraron una mejor
fitorremediación de los TPH. Entre las diferentes plantas, la mayor remoción de TPH (68,5 %) la demostró el raigrás con
compost, seguido del trébol blanco con biocarbón (68 %). Sin ninguna enmienda del suelo, el ryegrass y la alfalfa mostraron
59.55 y 35.21 % de degradación de TPH, respectivamente. El biocarbón y el compost solo eliminaron 27. 24 % y 6,01 % TPH,
respectivamente. También se observó el efecto interactivo de la enmienda del suelo y el tipo de planta para los parámetros
estudiados y la degradación de los TPH.

* Autor correspondiente. Departamento de Ciencias Ambientales, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Quaid-i-Azam, 45320, Islamabad, Pakistán.
Correos electrónicos:rasy_1023@yahoo.com,syousaf@qau.edu.pk (S. Yousaf).
1Ambos autores contribuyeron por igual.

https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2021.131782
Recibido el 23 de junio de 2021; Recibido en forma revisada el 27 de julio de 2021; Aceptado el 1 de agosto de 2021
Disponible en línea el 4 de agosto de 2021
0045-6535/© 2021 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
U. Yousaf et al.
1. Introducción
Entre los contaminantes orgánicos, la clase más extendida son los hidrocarburos de
petróleo (Khan et al., 2016a,2016b). Varios procesos, incluidas las fugas accidentales
durante la extracción, los derrames durante el transporte, la liberación, el procesamiento
y la generación de desechos con actividades industriales, contribuyen a la contaminación
del suelo con productos petroquímicos, más específicamente hidrocarburos (Yu et al.,
2019). Durante los últimos años, la exposición de estos contaminantes cosquillosos, que
se produjo debido a la contaminación del suelo, ha aumentado los riesgos nocivos para
la salud y los impactos ambientales. Las amenazas asociadas con los productos
petroquímicos incluyen toxicidad, mutagenicidad, carcinogenicidad y bioacumulación en
la cadena alimentaria. Estos impactos amenazan siniestramente a los seres humanos y al
medio ambiente (Hussain et al., 2018;Khan et al., 2019c). Además de social y sanitario, el
aspecto económico es otra preocupación para los sitios contaminados, ya que el suelo
impactado muestra la reducción de la productividad y la depreciación financiera (Khan et
al., 2020a,2020b). Se requiere un tratamiento adecuado para evitar la migración de
contaminantes a las matrices ambientales y una amenaza poderosa. Si no se trata, se
produce el envejecimiento del suelo, lo que reduce la biodisponibilidad de los
hidrocarburos de petróleo.
Está bien establecido que los hidrocarburos de petróleo se degradan en el
suelo. Hay una volatilización casi insignificante de la planta. Por lo tanto, no debe
referirse a la instalación de fitorremediación, específicamente rizodegradación de
suelos frescos o envejecidos (Ingrid et al., 2016;Wu et al., 2019). Por lo tanto, será
beneficioso mejorar la degradación de los contaminantes petroquímicos dentro
de la rizósfera. Las plantas producen exudados de raíces que contienen enzimas
catabólicas. Estos exudados son necesarios para la remediación de compuestos
nocivos. Estos exudados proporcionan condiciones favorables para las
poblaciones microbianas rizosféricas involucradas en el proceso de tratamiento (
Alagić et al., 2015). Por lo tanto, la selección de especies de plantas es crucial y un
factor limitante en fitotecnología, ya que la aplicación, el avance y la aceptación
generalizada dependen de ello (Abdalá et al., 2020). Se ha informado que las
especies de gramíneas pertenecientes a la familia Fabaceae y Poaceae realizan
una mejor fitorremediación de TPH en suelos impactados por hidrocarburos (
Hussain et al., 2018). Múltiples adaptaciones predicen la eficiencia de la
fitorremediación. La asociación simbiótica de las plantas con bacterias fijadoras de
nitrógeno y hongos micorrícicos arbusculares influye en las actividades de
fitorremediación (Arshad et al., 2017). La utilización de fósforo de fuentes no
disponibles para otras especies de plantas también puede ayudar a la planta a
prevenir el estrés de la privación de nutrientes (Hussain et al., 2018). Además, la
liberación de exudación derivada de la raíz, como flavonoides y fenoles, y enzimas
que promueven las comunidades microbianas asociadas, mejoran las capacidades
de remediación de las plantas (Mushtaq et al., 2020).
Otro enfoque adoptado para mejorar el proceso de degradación de los
hidrocarburos de petróleo en el suelo son las enmiendas del suelo (Chen et al.,
2016). Entre las muchas enmiendas del suelo utilizadas, las enmiendas orgánicas
como el compost y el biocarbón han ganado un interés considerable en los
últimos años. Han demostrado múltiples beneficios. También se sabe que influyen
en la abundancia microbiana, las propiedades acondicionadoras del suelo y
ayudan a mejorar las características fisicoquímicas (Mushtaq et al., 2020). El
biocarbón elimina los contaminantes a través de múltiples métodos, incluidos el
intercambio catiónico, la formación de complejos, la interacción electrostática y la
precipitación (Arshad et al., 2017). Se sabe que el compost tiene un alto contenido
orgánico que mejora las actividades microbianas y enzimáticas del suelo. En
condiciones aeróbicas, la materia orgánica (de plantas y animales) se descompone
en compost. (Iqbal et al., 2019).
Aunque varias especies de plantas y varias enmiendas del suelo se han
aplicado con éxito para la fitorremediación de suelos contaminados con
hidrocarburos de petróleo, mejorar la eficiencia y optimizar las condiciones
de la fitorremediación es una de las principales preocupaciones. La eficiencia
de la fitorremediación de hidrocarburos depende significativamente de las
propiedades fisicoquímicas del suelo y la población microbiana (Hoang et al.,
2021;Khan et al., 2018). Los pastos proporcionan condiciones ideales para la
fitorremediación debido al sistema de raíces fibrosas (Hussain et al., 2018).
Su elevada superficie radicular, que participa en la mineralización de la
2
Quimiosfera 286 (2022) 131782
orgánicos como los TPH. A pesar de que se hicieron esfuerzos para identificar la
mejor planta capaz de fitorremediar TPH, hubo una falta de trabajo de
investigación que compare diferentes plantas de pasto y enmiendas orgánicas
para la eliminación de TPH. Además, el dominio del efecto de interacción de las
plantas y la enmienda orgánica no se informa en su profundidad estadísticamente
significativa. Con base en la literatura discutida anteriormente, el objetivo
principal de este estudio fue evaluar el efecto del biocarbón y el compost como
enmiendas orgánicas con diferentes plantas de pasto (de la familia Poaceae y
Fabaceae) sobre la eliminación de hidrocarburos y la comunidad bacteriana en
suelos contaminados envejecidos.
2. Materiales y métodos
2.1. Recolección, preparación y caracterización de suelos
El suelo contaminado con TPH se recolectó del sitio de remediación de una
refinería de petróleo ubicada en Rawalpindi, Pakistán. Por el contrario, se
recolectó suelo limpio del sitio agrícola ubicado en la Universidad Quaid-i-Azam,
Islamabad. Tanto los suelos limpios como los contaminados se tamizaron con
mallas de 2 mm para obtener una textura uniforme. El suelo tamizado se utilizó
para cuantificar el pH del suelo, la conductividad eléctrica (EC), el contenido de
humedad, la textura, los nitratos, el fosfato, el potasio, el carbono orgánico total y
los hidrocarburos totales de petróleo (TPH) iniciales de acuerdo con el método
descrito por Hussain et al. (2018).
2.2. Selección de especies de plantas y enmiendas del suelo.
Se seleccionaron plantas pertenecientes a las familias Poaceae y Fabaceae
para el experimento de fitorremediación (los detalles de las plantas se presentan
en tabla 1). Estos incluían trigo (Triticum aestivum), maíz (zea mays), trébol blanco
(Trifolium repens), alfalfa (Medicago sativa), y raigrás (Lolium multiflorum). Se
recolectaron semillas de diferentes especies de plantas del Laboratorio de
Preservación de Semillas y del departamento del Banco Nacional de Genes del
Centro Nacional de Investigación Agrícola (NARC), Islamabad.
Las enmiendas orgánicas (biocarbón y compost) se recolectaron del Instituto
Austriaco de Tecnología (AIT) y el Departamento de Horticultura de NARC, Islamabad. El
biocarbón utilizado se preparó a partir de materia prima de astillas de madera y tiene las
siguientes características; pH (en CaCl2) 8,9, contenido de cenizas 15,2 %, EC 1,6 mS·cm−1,
SSA 26,4 m2gramo−1, CIC 93,0 cmolCkg−1, 1,23 % N, 0,63 %
P, 2.08 % K y 46.24 % carbono orgánico (Kloss et al., 2012). El compost
utilizado en este estudio se preparó a partir de material de desecho verde y
tenía las siguientes características; pH 7,8, NPK 1,19, 0,309 y 3,3 %,
respectivamente, Zn, Cu, Fe y Mn totales 158, 37, 290 y 229 mg kg−1,
respectivamente y un carbono orgánico total del 18 % (Mushtaq et al., 2020).
2.3. Experimento de maceta de biorremediación de TPH
2.3.1. Esterilización de semillas
Para el experimento en maceta, la esterilización de la superficie de la semilla de cada
planta seleccionada se realizó antes de sembrar en la maceta.L. multiflorumLas semillas
se esterilizaron superficialmente sumergiéndolas en una solución de hipoclorito de sodio
al 5 % (2 min), seguido de inmersión en etanol al 70 % (2 min), como se hizo por Yousaf et
al. (2010). Semillas dem sativayT.repensfueron esterilizados sumergiéndolos en una
solución de peróxido de hidrógeno al 10 % (10 min) (Muratova et al., 2012). las semillas
deL. multiflorum,m. sativa,yT.repens, luego de estos pasos, se enjuagaron tres veces con
agua destilada autoclavada (ADW). ParaT. aestivum, las semillas se sumergieron en
hipoclorito de sodio al 1 %
+ 0,05 % Tween 20 (15 min), seguido de enjuague completo con ADW (Perata et al.,
1992), mientras que las semillas deZ. Maysse esterilizaron sumergiendo las
semillas en HgCl al 0,1 %2(Li et al., 1997). Después de la esterilización respectiva,
T. aestivumyz mayslas semillas se lavaron tres veces con ADW y, después del
lavado final, se sumergieron durante 2 h en ADW.
2.3.2. Experimento de olla
Para el experimento en maceta, el peso total de suelo y suelo + enmienda orgánica
del suelo se mantuvo en 4 kg por maceta. Las enmiendas orgánicas fueron
U. Yousaf et al.
agregado en cada maceta en base a una relación porcentual de peso a volumen
(W: V), donde W es el peso del suelo y V es el volumen de una enmienda
agregada). Como la densidad (kg L−1) de biochar y compost fueron 0.37 y 0.75,
receptividad, el volumen utilizado para biochar se agregó 5 %, mientras que
compost se agregó 10 % (W:V), en cada maceta. El porcentaje de enmienda
seleccionado se basó en la lógica del experimento realizado previamente por
Hussain et al. (2018)yBenhabylès et al. (2020). Se adoptó el siguiente plan de
tratamiento para la experimentación con cada planta; suelo limpio, suelo
contaminado (CS), CS + biocarbón (BC), CS + compost (CM). También se
mantuvieron controles (sin plantas) de cada uno de los tratamientos para
comparar los tratamientos vegetativos de cada planta. El experimento se realizó
por triplicado. Semillas esterilizadas superficialmente dem sativa,L. multiflorum,T.
aestivum,yT.repensse sembraron a razón de 50 semillas por maceta, mientras que
paraZ. Mays,Se sembraron 15 semillas por maceta dentro de cada uno de los
tratamientos respectivos. Para cada uno de los tratamientos individuales, las
plántulas más débiles se eliminaron después de la germinación, dejando 35
plántulas sanas por maceta para cada especie de planta, excepto para
Z. Mays, para lo cual quedaron diez plántulas sanas por maceta. Se realizó un
experimento con macetas en el invernadero de la Universidad Quaid-i-Azam,
Islamabad, Pakistán. Se mantuvo la duración día a noche de 16:8 h, con
temperatura 25-30◦C. Las macetas se regaron periódicamente con agua destilada.
Además, para reducir/eliminar el efecto de crecimiento de los bordes, las macetas
se reposicionaron a lo largo del experimento y las plantas se cosecharon después
de 62 días para su posterior análisis.
2.3.3. Análisis de suelos y plantas.
2.3.3.1. Parámetros de la planta.El porcentaje de germinación, la raíz y la longitud
de los brotes de la planta se anotaron como hechos porArshad et al. (2017). La
germinación de las semillas de las plantas candidatas se controló cada 24 h hasta
las tres semanas. Después de eso, la germinación de las semillas se informó en
forma porcentual. La biomasa vegetal se estimó de acuerdo con el protocolo
adoptado por Raza et al. (2019). La clorofila total se calculó sumando la clorofilaay
b, calculado por extracción de clorofila con acetona, seguido de la absorbancia con
un espectrofotómetro a 645 y 663 nm, respectivamente (Raza et al., 2019). Las
siguientes ecuaciones se utilizaron para la estimación de los pigmentos
fotosintéticos,
clorofila a= (12.25×A663) - (2.79×A645)
clorofila b= (21.50×A645) - (5.1×A663)
carotinoides= (1000×A470) − (1.82×Chla) − (85.02×Chlb198
Se estimó el conteo total de bacterias endófitas (para el interior de raíces y
brotes), capaces de tolerar el petróleo crudo. Brevemente, el material vegetal se
lavó y se esterilizó la superficie con etanol al 70 % (raíz: 5 min, brote: 3 min), luego
se trató con cloruro mercúrico al 0,02 % (raíz: 5 min, brote: 2 min) seguido de
lavados tres veces con ADW. Se aseguró la eficacia de la esterilización, como lo
hizoCoombs y Franco (2003). El material homogeneizado en solución salina al 0,9
% (producido con 5 g de parte de la planta esterilizada en la superficie) se agitó
durante 1 hora a 30ºC.◦C. Después de estabilizar el material sólido, el
sobrenadante se esparció sobre agar nutritivo que contenía cicloheximida (100 mg
l−1), modificado con 2 % de aceite crudo, incubado a 30◦C durante 48 horas. Se
observó abundancia endofítica en UFC g-1de suelo secado al aire.
2.3.3.2. Parámetros del suelo.Después de la cosecha de las plantas, se determinaron los TPH
tabla 1
Detalles de las características de las raíces de las plantas.
nombre botánico Nombre común Familia
Triticum aestivum Trigo poáceas
zea mays Maíz poáceas
Trifolium repens trébol blanco fabáceas
Medicago sativa Alfalfa fabáceas
Lolium multiflorum ballico poáceas
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utilizando el método definido porHussain et al. (2018). La cuantificación de TPH
(C10-C40) se realizó mediante el Cromatógrafo de Gases modelo Hewlett Packard
5890 (serie II) acoplado a un detector de ionización de llama (FID). Toda la unidad
de GC-FID también estaba equipada con un inyector de líquido automático HP
7673. El instrumento operaba en modo SIM, particularmente como modo de
monitoreo de iones. Una columna ya horneada (30 m× 0,25 mm) vidriada con 0,25
μm de fenilo al 5 % y polisiloxano de metilo al 95 % como fase estacionaria para el
análisis de hidrocarburos. La temperatura tanto para el detector como para el
inyector se fijó en 300◦C y 280◦C, respectivamente. Se utilizó helio como gas
portador durante todo este procedimiento y se realizó la cuantificación de TPH a
través de MS ChemStation. El horno GC se programó de acuerdo con el siguiente
programa, 60◦C durante 60 s, 20◦C min-1 hasta el nivel de 340◦C, y finalmente se
mantuvo en 340◦C durante 10 min. Los resultados de las concentraciones de TPHs
(75 días) se presentaron en porcentajes (%). Todas las concentraciones de
hidrocarburos calculadas se expresaron en base a materia seca. Se estimó la
abundancia microbiana de bacterias rizosféricas tolerantes al petróleo crudo
(2016a). Brevemente, diluciones seriadas (100 μl de 10−1a 10−5diluciones) de
muestras de suelo separadas y posteriormente se extendieron en medios de agar
nutritivo con 2 % de aceite crudo. Luego, las placas se incubaron a 30◦C durante 24
h y se contaron las colonias.
2.4. Análisis estadístico y modelo de un experimento factorial
El análisis estadístico se realizó en el entorno de software R para computación
estadística. En la investigación actual, las combinaciones de tratamiento fueron los
niveles variables de los factores de investigación. Estamos usando dos factores;
(i) El factor uno es el tipo de enmienda del suelo.
(ii) El factor dos es un tipo de planta.
El conjunto completo de tratamientos se aplica al azar a la unidad
experimental en 'r' repeticiones. La colección de remedios a investigar se
utilizan en unidades experimentales. Consideremos el modelo;
F(X1,X2) =α+β1X1+β2X2+β12X1X2
Donde los factores de tratamiento presentan una estructura factorial. Para una
estructura factorial simple, consideramos dos factores, x1(tipo de enmienda del
suelo) y x2(tipo de planta), digamos, con niveles 'a' y 'b' cada uno, respectivamente.
/ Hay un×b” tratamientos. Como se discutió anteriormente, los dos factores fueron
el tipo de enmienda del suelo y el tipo de planta en repeticiones "r". Consideramos
esta estructura si 'Yjk'es la observación enith nivel de factor tipo de enmienda del
suelo ajº nivel de factor tipo de planta en elkreplicar. El modelo de datos se puede
expresar como;
Yjk=m+ηi+γj+ (ηγ)yo+εjk
Dondemrepresenta el efecto medio general,ηies el efecto deith nivel de enmienda
del suelo tipo 'i' yγjefecto dejhnivel de planta tipo 'j'.(ηγ)yoson efectos de
interacción entre el tipo de planta 'i' y el tipo de enmienda del suelo 'j'. El error
aleatorio esεjkrepresenta el error experimental. Al usar este modelo, estamos
probando la hipótesis;
i) ¿Si los factores, el tipo de enmienda del suelo y el tipo de planta afectan
significativamente sus niveles variables?
raíces de semillas raíces postembrionarias echa raíces
raíces seminales Raíces nodales (de corona o adventicias) No presente
Raíces embrionarias primarias y seminales Raíces de corona Raíces ortopédicas
Raíces seminales Raíces nodales (de corona o adventicias) No presente
raíces seminales Raíces nodales (de corona o adventicias) No presente
raíces seminales Raíces nodales (de corona o adventicias) No presente
3
U. Yousaf et al. Quimiosfera 286 (2022) 131782

ii) ¿Cuáles son las interacciones significativas de los factores aplicados contra los Tabla 2
parámetros estudiados? Parámetros fisiológicos de plantas cultivadas en diferentes condiciones de suelo.
iii) Comparaciones entre familias de plantas. Parámetro Tierra Alfalfa ballico Maíz Blanco Trigo
escribe trébol
Para la tercera hipótesis, es decir, comparaciones entre familias de plantas, plantas frescas Limpio 2.03± 7.23± 36.17 6.71± 7.27±
probamos el siguiente contraste en los parámetros de plantas ANOVA (hipótesis en Peso (gramos tierra 0,46a 0.38a ±1.04a 0.17a 0.21a
α =Se rechaza un nivel de significación del 1 %. En los dos experimentos restantes, esta planta−1) CS 1.14± 1.61± 13.48 2.52± 1.53±
prueba no tiene sentido ya que los factores no son independientes. Este contraste puede 0.16C 0.27C ± 0.14C 0.09b
1.21b
ser probado. Del mismo modo, si los factores hubieran sido independientes. Para la
CS + 2.02± 2.63± 14.24 6.62± 1.74±
prueba, nuestra hipótesis nula es; antes de Cristo 0.25a 0.32b ± 0.28a 0.05b
1.01b
a) H0: Poaceae y Fabaceae son similares. O CS + 1.70± 7.21± 34.07 4.34± 1.91±
CM 0.20b 0.59a ±0.54a 0.19b 0.40b
b) H0: 2μtrigo+ 2μmaíz+ 2μhierba de centeno- 3μtrébol blanco- 3μAlfalfa= 0 plantas secas Limpio 0.91± 4.73± 15.50 4.40± 5.70±
Peso (gramos tierra 0.13b 0.49a ±2.00a 0.36a 0.10a
Es posible probar la hipótesis anterior a partir de la tabla de análisis de planta−1) CS 0.74± 0.90± 5.53± 1.85± 1.06±
varianza (ANOVA). Del conjunto de diferentes contrastes independientes, 0.05b 0.04C 0.13b 0.05C 0.03b
cada uno de los cuales, las sumas de cuadrados de contrastes lineales pueden ser fácilmente CS + 1.70± 1.65± 6.41± 4.24± 1.26±
∑ ∑ 0.20a 0.31b 0.13b 0.15a 0.04b
Cj2), con un
antes de Cristo
calculado como la suma de los cuadradoscontraste= (nortejXj)2)/(
CS + 0.90± 5.30± 14.52 3.53± 1.25±
un solo grado de libertad, dondenortees el mismo número de observaciones para CM 0.20b 0.41a ±0.98a 0.15b 0.58b
todas las muestras. En general, necesitamos calcular la relación F, F(contraste)= Longitud de la raíz Limpio 15.86 26.15± 35.33 13.57 42.67
(Suma de cuadradoscontraste)/MSE, y comprobar su significado comparando con F (cm) tierra ± 0.35a ±1.53a ± ±
2.24a 1.93a 3.06a
α(1, error). Además, la correlación entre la degradación de TPH y las UFC bacterianas
CS 6.94± 12.95± 20.55 3.66± 14.27
rizosféricas se cuantificó mediante la correlación de Pearson. 2.55C 1.15C ±0.15C 0.09C ±
Con la ayuda de análisis de componentes principales (PCA), se realizó el 4.87b
impacto de la aplicación de BC y CM en las plantas. Usando PCA, las CS + 15.83 22.20± 23.36 8.30± 18.34
implicaciones de la aplicación de acondicionadores (BC y CM) se notaron con antes de Cristo ± 1.47b ±4.09C 0.50b ±
3.33a 2.03b
la ayuda de un gráfico disperso. El gráfico de dispersión PCA visualiza los
CS + 10.29 25.70± 30.47 5.46± 20.00
datos en dos dimensiones, componentes principales (PC) 1 y 2. Los CM ± 2.49b ± 1.04C ±
parámetros g con color verde en el gráfico disperso representan los 0.54b 2.63b 2.00b
parámetros que contribuyen a valores de carga más altos en PC1. En Duración del disparo Limpio 3.97± 12.30± 34.33 6.00± 32.33
(cm) 0.25a 0.30a ±2.52a 1.02a ±
comparación, los parámetros con color amarillo tienen valores de carga más
tierra

2.52a
altos en el PC2. La extracción y representación de las dimensiones se hizo en CS 2.00± 8.47± 16.73 2.82± 13.07
base al valor propio mayor o igual a 1. 0.20C 0,45b ± 0,68C ±
1.25d 1.07C
3. Resultados CS + 2.85± 7.30± 19.85 4.13± 16.30
antes de Cristo 0,63b 1.10b ±3.45C 0.70b ±
2.50b
3.1. Caracterización de suelos contaminados y limpios CS + 2.47± 11.80± 24.09 3.29± 13.67
CM 0.15C 1.70a ± 0.11C ±
Los detalles de los parámetros fisicoquímicos se presentan enTabla 2. El suelo 1.19ab 2.52C
Clorofila Limpio 7.66± 3.68± 4.71± 4.84± 5.62±
recolectado de la refinería de petróleo mostró una contaminación del 4 % de TPH, y el
contenido (mg tierra 0.20a 0.12a 0.19a 0.14a 0,61a
suelo del sitio de agricultura estaba libre de contaminación de TPH. Ambos suelos se gramo−1)
CS 4.58± 2.28± 1.36± 0.92± 1.53±
utilizaron para experimentación adicional. 0.03d 0.03C 0.02C 0.13d 0.25C
CS + 6.81± 3.33± 1.88± 3.33± 2.02±
0.22b 0.03b 0.02b 0.16b 0.02b
3.2. Rendimiento de las plantas en diferentes condiciones de suelo
antes de Cristo

CS + 5.29± 3.47± 2.06± 1.77± 2.77±

CM 0.27C 0.25abdominales 0.02b 0.15C 0.23b
3.2.1. Parámetros fisiológicos de la planta
1Suelo contaminado.
Las tasas de germinación (%) de las plantas estudiadas con diferentes condiciones de
2Suelo contaminado + Biochar, y.
suelo se muestran enFigura 1. Se observó una reducción estadísticamente significativa en
3Suelo contaminado + Compost.
las tasas porcentuales de germinación para las semillas de alfalfa y trébol blanco
Letras pequeñas similares en la misma columna (para cada planta) dentro del mismo parámetro
cultivadas en suelo contaminado con HTP, 15.1 y 24.5 %, respectivamente, en
estudiado del experimento son estadísticamente insignificantes.
comparación con la calidad del suelo limpio. Las semillas de ballica, maíz y trigo no se La media significativamente más alta se representa como una columna "a" seguida de alfabetos
vieron afectadas. Aunque hubo una reducción mínima en el porcentaje de germinación, posteriores para las medias más bajas.
estadísticamente no fue significativa. La adición de biocarbón y compost mejoró las tasas Los datos presentados para cada caso en todos los parámetros están en medias, con n = 3±SD,
de germinación. En general, todas las plantas mostraron una germinación prueba post hoc aplicada prueba Duncan MR, p = 0,05.
estadísticamente mejorada cuando el suelo contaminado se modificó con compost. Las * un control no vegetativo con suelo contaminado solamente.

tasas de germinación de 98.5, 99.6, 96.6, 88.96 y 100 % se restauraron con compost en
suelo contaminado para alfalfa, raigrás, maíz, trébol blanco y trigo. El trébol blanco y la
alfalfa (familia Fabaceae) mostraron alguna variación en la germinación, mientras que el
raigrás (familia Poaceae) siguió una trayectoria diferente. Se confirma que las plantas de
la familia Poaceae, el trigo y el maíz ofrecen el mismo patrón de germinación en otras
condiciones de enmiendas del suelo.
La biomasa fresca y seca de trigo y ryegrass se vio más afectada cuando se
cultivó en suelo contaminado. La reducción en biomasa fresca fue de 78.9 y 77.7
%, mientras que en biomasa seca fue de 81.4 y 80.9 % para trigo y raigrás. Se notó
una reducción significativamente menor para el trébol blanco en
tanto biomasa fresca como seca, 62.4 y 57.9 %, respectivamente. La
enmienda biochar en alfalfa y trébol blanco, mientras que el compost en
raigrás y maíz, mejoró la biomasa fresca y seca de las plantas (Tabla 2). No
se observó ninguna diferencia en el trigo con las adiciones de cualquiera de
estas enmiendas. Además, no hubo una mejora significativa en el fresco
(1,74±0,05 g en biocarbón modificado y 1,91±0,40 g en compost modificado)
y biomasa seca (1,26±0,04 con biocarbón y 1,25±0.58 con compost) para
trigo, cultivado en suelo contaminado (Tabla 2).
El impacto negativo de la contaminación de TPHs en las raíces de las

4
U. Yousaf et al. Quimiosfera 286 (2022) 131782

3.2.2. UFC endófitas y rizosféricas y TPH residuales en el suelo UFC

Figura 1.Tasas de germinación de plantas cultivadas utilizadas para la fitorremediación de TPHs
con diferentes tratamientos. CS; Suelo contaminado, CS + BC; Suelo contaminado
+ Biochar, y CS + CM Suelo contaminado + Compost. Los datos presentados para cada caso en
todos los parámetros están en medias, con n = 3±DAKOTA DEL SUR.
se observó la planta seleccionada. La máxima disminución porcentual entre las
plantas cultivadas en suelo contaminado (3,66 cm) versus las cultivadas en suelo
no contaminado (13,57 cm) (73,0 %) se observó en el trébol blanco. Las raíces de
trigo, raigrás y alfalfa se acortaron en un 66,5, 56,2 y 50,4 %, respectivamente, en
comparación con la longitud de las raíces de las plantas cultivadas en suelo limpio
(Tabla 2). Se notó una disminución menor para el maíz, 35,33 cm en suelo limpio y
20,55 cm en suelo contaminado. La adición de biochar con alfalfa y trébol blanco
mientras que el compost con raigrás, maíz y trigo, en suelo contaminado, mejoró
significativamente la longitud de las raíces. Las recuperaciones de longitud de raíz
(%) para compost fueron 98,2 en raigrás, 86,2 en maíz y 46,8 en trigo, y para
biocarbón fue 99,8 para alfalfa y 61,1 para trébol blanco (Tabla 2). El mayor efecto
negativo de la contaminación de TPHs sobre la longitud de los brotes de la planta
(59.57 %) se encontró para el trigo (Tabla 2). Longitud de los brotes de trigo
reducida a 13,07±1,07 cm cuando se cultiva en suelo contaminado con TPH, de
32,33±2,52 cm cuando está en suelo limpio. La adición de biocarbón facilitó
significativamente que la alfalfa, el trébol blanco y el trigo recuperaran el tamaño
de los brotes hasta en un 71,7, 68,8 y 50,41 %, respectivamente. Por otro lado, el
compost mejoró significativamente la recuperación de la longitud de los brotes
para el raigrás y el maíz, 95.9 y 70.1 %, respectivamente (Tabla 2).
Reducción del contenido de clorofila (mg g−1) se observó en todas las plantas
cuando se cultivaron en suelo contaminado (Tabla 2). Estadísticamente, se observó
una reducción significativa en el trébol blanco, 80,9 %, mientras que la reducción
más baja se observó en el ryegrass (38,0 %). La adición de biocarbón y compost
mejoró el contenido de clorofila. No se observaron diferencias significativas entre
las enmiendas del suelo para maíz y trigo. En todas las plantas, se encontró que la
adición de biocarbón mostró un mayor contenido de clorofila, en comparación con
la adición de compost, excepto en el ryegrass (3,47 ±0.25), en el que la composta
mejoró el contenido de clorofila hasta en 94.3 %. La recuperación mediada por
biocarbón osciló entre 90,4 y 35,9 %, con el mayor raigrás (3,33±0.03) y el más bajo
1.88±0.02, para maíz (Tabla 2).
endófitas de plantas cultivadas en suelo contaminado (CS), CS
+ Se observaron biochar (B) y CS + Compost (C). No se presentaron las UFC endófitas
(ECFU) de plantas cultivadas en suelos limpios, ya que las ECFU colonizadoras no eran
tolerantes a los TPH. La contaminación de TPH redujo significativamente las CFU
endófitas y rizosféricas en todas las plantas (Tabla 3). Las UFC de raíces endófitas de
todas las plantas, excepto la alfalfa, fueron más altas en el tratamiento con compost.
Para el trébol blanco, el impacto del biocarbón y el compost no mostró una variación
significativa. El suelo contaminado enmendado con biocarbón mostró mejores UFC de
raíces para la alfalfa (1.8 E7±3.6 mi5), Mientras que, en el trébol blanco, la aplicación de
biocarbón y compost al suelo contaminado resultó en CFU endófitas de raíz
significativamente más altas (2.0 E7±3.2 mi5y 2.1 E7±3.7 mi5, en el tratamiento respectivo).
Se observó una tendencia similar en las UFC endófitas de brotes. Todas las plantas
mostraron UFC endófitas de brotes significativamente más altas en el compost, excepto
la alfalfa y el trébol blanco. No se observó ninguna variación estadísticamente
significativa en el trébol blanco entre biocarbón y compost. Sin embargo, ambos
tratamientos mejoraron los recuentos endófitos. La planta de alfalfa produjo UFC
endófitas de brotes estadísticamente más altas cuando se modificó con biocarbón (Tabla
3). Para las UFC rizosféricas, se observaron UFC estadísticamente más altas para el suelo
contaminado enmendado con compost en todas las plantas excepto la alfalfa y el trébol
blanco. La alfalfa mostró un recuento rizosférico estadísticamente más alto en el suelo
contaminado modificado con biocarbón, y el trébol blanco no tuvo una variación
significativa (Tabla 3).
Las degradaciones de los hidrocarburos totales de petróleo (TPH) se
mejoraron con la aplicación de enmiendas (Figura 2). La adición de biocarbón al
suelo contaminado sin vegetación dio como resultado una eliminación de TPH un
27 % mayor que el tratamiento con CS del control negativo (NC). La adición de
compost también redujo la carga de TPH en un 6 % en comparación con el
tratamiento con CS. La mayor degradación de TPH se observó entre diferentes
plantas de trébol blanco y alfalfa, 27,25±0,25 y 26,21±0,21 g TPH kg−1
de suelo enmendado con biocarbón. De manera similar, con el raigrás, el suelo
enmendado con compost dio como resultado una mayor degradación de TPH, 27,37±0,87
g TPH kg−1tierra. En comparación con CS, el estado de degradación de TPH en maíz y
trigo con la enmienda fue estadísticamente más alto, pero no se observó una variación
significativa entre los tratamientos modificados. Las plantas de raigrás y alfalfa se
desempeñaron bien en suelos contaminados en comparación con las otras plantas y NC (
Figura 2).
3.3. Análisis estadístico, el modelo de experimento factorial y PCA para datos
recopilados
En este análisis, el enfoque principal fue probar nuestras hipótesis de estado utilizando el
modelo establecido. El análisis de la salida del modelo indicó que las enmiendas del suelo
individualmente tienen efectos estadísticamente significativos en todos los parámetros
estudiados, con un valor de p de 0,00 en todos los casos. Del mismo modo, el

Tabla 3
Recuento de UFC bacterianas tolerantes a TPH de cada tratamiento tras la exposición a TPH cultivadas en diferentes condiciones.

Parámetro Tipo de suelo Alfalfa ballico Maíz trébol blanco Trigo CAROLINA DEL NORTEd

UFC endófitas de raíz+(UFC g−1) CSa 8.6 mi6±4.0 mi4c 8.9 mi6±2.6 mi4c 8.4 mi6±3.0 mi5c 8.1 mi6±3.5 E4c 7.5 E6±4.0 mi4c
CS + BCb 1.8 mi7±3.6 mi5 un 1.7 mi7±4.9 mi5b 1.5 E7±3.5 E5b 2.0 mi7±3.2 mi5 un 9.1 mi6±5.0 mi4b
CS + CMC 1.7 mi7±4.7 mi5b 3.4 mi7±1.6 mi6 un 3.0 mi7±3.2 mi5 un 2.1 mi7±3.7 mi5 un 1.6 mi7±4.0 mi5 un
Disparar UFC endófitas+(UFC g−1) CS 6.3 mi4±2.1 mi3c 6.8 mi4±2.0 mi3c 5.9 E4±2.5 E3c 5.5 E4±5.0 mi3b 4.7 mi4±2.5 E3c
CS + BC 1.9 mi5±2.0 mi3 un 1.8E5±2.0 mi3b 1.6 mi5±4.5 E3b 2.1 mi5±9.6 mi3 un 7.2 mi4±2.5 E3b
CS + CM 1.8 mi5±4.0 mi3b 3.8 E5±1.0 mi4 un 3.1 mi5±1.0 mi4 un 2.1 mi5±7.6 mi3 un 1.7 mi5±3.5 E3 un
UFC rizosféricas+(UFC g−1) CS 9.3 mi7±1.5 E6c 9.5 E7±1.5 E6c 9.2 mi7±1.5 E6c 9.0 mi7±1.0 mi6b 8.1 mi7±6.3 mi6c 3.7 mi4±2.5 E3c
CS + BC 1.4 mi8±3.5 E6 un 1.3 mi8±2.5 E6b 1.1 mi8±3.5 E6b 1.6 mi8±5.7 mi6 un 9.6 mi7±4.0 mi6b 7.1E4±3.1 mi3b
CS + CM 1.3 mi8±1.5 E6b 2.7 E8±1.8 mi7 un 2.0 mi8±4.2 mi7 un 1.5 E8±2.1 mi7 un 1.2 mi8±2.5 E6 un 7.9 E5±5.5 E4 un
+
Las UFC endófitas de raíces y brotes están en g de material vegetal fresco, mientras que las UFC rizosféricas son g de suelo tamizado de 2,5 mm.
Letras pequeñas similares en la misma columna (para cada planta) dentro del mismo parámetro estudiado del experimento son estadísticamente insignificantes. La media
significativamente más alta se representa como una columna "a" seguida de alfabetos posteriores para las medias más bajas.
Los datos presentados para cada caso en todos los parámetros están en medias, con n = 3±SD, prueba post hoc aplicada prueba Duncan MR, p = 0,05.
aSuelo contaminado.
bSuelo contaminado + Biochar, y.
CSuelo contaminado + Compost.

dNC = Control negativo (un control no vegetativo con suelo contaminado solamente).

5
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hipótesis nula de que los factores aplicados no tienen un efecto interactivo en la

Figura 2.Fitorremediación de TPHs por diferentes plantas con referencia a diferentes
tratamientos. CS; Suelo contaminado, CS + BC; Suelo contaminado + Biochar, y CS + CM
Suelo contaminado + Compost. NC significaba control negativo. Los datos presentados
para cada caso en todos los parámetros están en medias, con n = 3±DAKOTA DEL SUR.
También se encontró que la selección de plantas era significativamente importante (con
un valor p muy bajo de 0.00) en todos los parámetros estudiados, excepto para las UFC
endófitas de raíces y brotes (Tabla 4). Por lo tanto, se rechaza nuestra hipótesis nula de
que los factores aplicados no tienen un efecto independiente e indican el impacto
significativo en el crecimiento de las plantas, individualmente. La interacción de las
enmiendas del suelo y los tipos de plantas también fue estadísticamente significativa
para los parámetros más estudiados al analizar la salida del modelo. Rechazó la
mayoría de los parámetros estudiados en este estudio, excepto en las UFC
endófitas de raíces y brotes (valor de p = 0,60 y 0,66), respectivamente (Tabla 4).
Además, en general, una correlación positiva (R = 0,62, p = 0,00, n =
54) entre las UFC rizosféricas y la eliminación de TPH en este estudio. Para la
tercera hipótesis, SScontrastees 1000, la relación F es 39,52 y el valor p es
inferior a 0,0001. Se rechaza la hipótesis de no diferencia entre la familia
Poaceae y la familia Fabaceae (Tabla 4). Concluimos que estas dos familias
tienen una diferencia significativa en la media de los datos en comparación
con el general. Por lo tanto, se puede inferir que el tipo de familia puede
jugar un papel importante en la degradación de los TPH.
La aplicación de biocarbón y compost en todas las plantas mostró
interacciones variables, que se pueden visualizar al ver la variabilidad de los datos
recopilados para cada planta usando PCA. La aplicación PCA arrojó dos
dimensiones para todas las plantas. Los detalles para la extracción de
componentes principales basados en los valores propios se proporcionan en
Tabla Suplementaria 1, los valores de carga de PC se proporcionaron enCuadro
complementario 2. En cambio, las parcelas dispersas se proporcionaron enhigos. 3
y 4. para la alfalfa (Fig. 3a y b, para biocarbón y compost, respectivamente), las
UFC de raíz, DW y GP mostraron la mayor variabilidad de datos (66,03 %) con
biocarbón. En contraste, con el compost, se encontró que las UFC SL, GP, FW, RL y
rizosférica tenían mayor variabilidad de datos (70.89 %). Las UFC rizosféricas, FW,
RL y RL en biocarbón, y las UFC rizosféricas, FW, RL, TChl, DW y RL con compost,
fueron los parámetros que resultaron en la mayor

Tabla 4
Comparación resumida de ANOVA de dos vías del modelo estadístico de las interacciones individuales y en el parámetro estudiado de las plantas.

Fuente Suma de cuadradosa d.f.b Cuadrado medio valor F Significado

Enmiendas del suelo (SA) Tasas de germinación 555.51 3 185.17 7.32 0.00
Duración del disparo 717.22 3 239.07 79.84 0.00
Longitud de la raíz 1682.29 3 560.77 106.95 0.00
peso fresco de la planta 308.29 3 102.95 399.314 0.00
peso seco de la planta 281.48 3 93.82 314.31 0.00
clorofila total 79.52 3 26.51 626.78 0.00
TPH residuales del suelo 1211.53 2 605.76 127.33 0.00
UFC rizosféricas 4.83 midieciséis 2 2.41 midieciséis 75.44 0.00
ECFU raízC 1.85 E15 2 9.27 mi14 35.11 0.00
Dispara ECFU 2.82 mi11 2 1.41 mi11 38.60 0.00
Planta Tasas de germinación 1610.88 4 402.72 15.92 0.00
Duración del disparo 4121.51 4 1030.37 344.09 0.00
Longitud de la raíz 3496.05 4 874.01 166.69 0.00
peso fresco de la planta 3201.93 4 800.48 3112.29 0.00
peso seco de la planta 938.31 4 234.57 785.825 0.00
clorofila total 103.76 4 25.94 613.35 0.00
TPH residuales del suelo 2211.11 4 552.78 116.19 0.00
UFC rizosféricas 1.54 mi17 4 3.84 midieciséis 119.95 0.00
ECFU raíz 5.71 mi13 4 1.43 mi13 0.54 0.71
Dispara ECFU 7.13 mi9 4 1,78 E9 0.48 0.74
SA * Planta Tasas de germinación 677.92 12 56.49 2.23 0.03
Duración del disparo 573.99 12 47.83 15.97 0.00
Longitud de la raíz 1045.63 12 87.14 16.62 0.00
peso fresco de la planta 681.43 12 51.53 200.37 0.00
peso seco de la planta 709.05 12 59.08 197.94 0.00
clorofila total 19.06 12 1.58 37.56 0.00
TPH residuales del suelo 547.28 8 68.41 14.38 0.00
UFC rizosféricas 3.23 midieciséis 8 4.04 mi15 12.63 0.00
ECFU raíz 1,69 mi14 8 2.11 mi13 0.80 0,60
Dispara ECFU 2.14 mi10 8 2.67 mi9 0.73 0,66
Derechos residuales de autor Tasas de germinación 1011.81 40 25.29
Duración del disparo 119.78 40 2.99
Longitud de la raíz 209.73 40 5.24
peso fresco de la planta 10.28 40 0.25
peso seco de la planta 11.94 40 0.29
clorofila total 1.69 40 0.04
TPH residuales del suelo 185.542 39 4.76
UFC rizosféricas 1,25 Edieciséis 39 3.20 mi14
ECFU raíz 7.92 mi14 30 2.64 mi13
Dispara ECFU 1.09 mi11 30 3,65 E9

Un valor de p inferior a 0,05 en sig. la columna se considera estadísticamente significativa.

aTipo I suma de cuadrados.
bdf= Grado de libertad.
CECFU = UFC endófitas.

6
U. Yousaf et al.
variación, 78.38 y 70.68 %, respectivamente, con maíz (Fig. 3c y d). Con
raigrás (Fig. 3e y f, para biocarbón y compost, respectivamente), las
UFC y RL rizosféricos, de raíces y brotes tienen mayor variación en los
datos (56.93 %) cuando se cultivan con biocarbón. En contraste,
compost TChl, DW y RL constituyeron mayor variación (71.53 %). La
aplicación de biocarbón con trébol blanco resultó en una variación
significativamente mayor (66,79 %) con las UFC de brotes y raíces, TChl,
DW, RL y SL. En cambio, cuando se cultivaron con compost, SL, RL, FW,
DW y las UFC de raíz mostraron variables más altas (64.20 %). Con el
trigo, al cultivar con biocarbón, se observó una mayor variabilidad
(64,20 %) para las UFC de SL, RL, FW, DW y raíz. La aplicación de
biocarbón con trigo resultó en una mayor variabilidad (55,39 %) con las
UFC rizosféricas, de brotes y raíces, SL y RL, mientras que la aplicación
de compost resultó en una mayor variabilidad con TChl, DW y RL.
4. Discusión
El estudio actual informa la eficacia de las enmiendas orgánicas y el uso de
fitorremediación para tratar los TPH. Los parámetros fisiológicos de las plantas, el
análisis microbiano y los TPH residuales se observaron como indicadores del beneficio de
una estrategia concluyente para la eliminación de los TPH. Está bien documentado que la
contaminación de TPH en el suelo afecta las propiedades fisicoquímicas del suelo (Han et
al., 2016). El suelo contaminado con hidrocarburos de petróleo se caracteriza por una alta
relación C/N y cantidades limitadas de nitratos y fosfatos en comparación con el suelo no
contaminado (Alavi et al., 2016). El crecimiento y la germinación de las plantas se ven
afectados por la disponibilidad limitada de N y P. La germinación de las semillas depende
de muchos factores, como el tipo de suelo, el tipo de planta y la contaminación por
hidrocarburos (Shahsavari et al., 2013). Este estudio reveló que el porcentaje de
germinación de raigrás, maíz y trigo no se vio afectado en suelos contaminados, pero se
observó una reducción estadísticamente significativa para la alfalfa y el trébol blanco (
Figura 1). Una posible explicación de esta tendencia es que en el período de germinación
temprana, la semilla en sí misma contiene suficientes nutrientes necesarios para romper
la latencia de la semilla y tener capacidad de tolerancia (Junior et al., 2016). Las semillas
de tamaño grande muestran más porcentaje de germinación que
Figura 3a.Gráficos de análisis de componentes principales (PC) para los parámetros estudiados de las plantas, incluidos Alfalfa (a y b), Maíz (c y d) y Ryegrass (e y f) para tratamientos con biocarbón y
compost, respectivamente. En gráficos de PC, el punto verde tiene un valor de carga más alto en el PC 1, mientras que el amarillo tiene un valor de carga más alto en el PC 2. (Para la interpretación de las
referencias al color en la leyenda de esta figura, se remite al lector a la versión web de este artículo.)
7
Quimiosfera 286 (2022) 131782
semillas pequeñas porque las semillas de gran tamaño pueden capturar más alimentos y
nutrientes (Lloret et al., 1999). Se informó que la germinación de semillas de ballico no se
vio afectada con una contaminación del suelo del 5 % de TPH (Issoufi et al., 2006). Las
enmiendas del suelo, el tipo de planta individualmente y su interacción son los
determinantes esenciales para la eliminación de TPH, el parámetro fisiológico de la
planta y las interacciones y el crecimiento microbiano de la planta (Tablas 2–4, yFigura 2).
Aunque las plantas pueden funcionar bien con la tasa de germinación, no
garantiza el destino de la fitorremediación holística. Si bien algunas plantas tienen
la capacidad intrínseca de tolerar cargas de contaminación orgánica e inorgánica
en las primeras etapas de germinación de las semillas, la contaminación puede
causar daños a las plántulas de las plantas en las primeras etapas de desarrollo (
Junior et al., 2016). Un hallazgo similar fue reportado porShahsavari et al. (2013)
que el 1 % de la contaminación por aceite crudo afectó significativamente el
crecimiento de la hierba de trigo, pero no afectó la germinación de las semillas. La
contaminación por hidrocarburos altera las propiedades fisicoquímicas del suelo (
Hussain et al., 2018;Khan et al., 2019a). Los TPH tienen la característica de
hidrofobicidad y alteran las interacciones suelo-agua; por lo tanto, afectando la
transferencia de gases, la absorción de agua y los nutrientes disponibles (Khan et
al., 2019b).
Los parámetros fisiológicos estudiados para todas las plantas se redujeron
considerablemente en comparación con el control de suelo limpio (Tabla 2). Las
respuestas fisiológicas de las plantas no están generalizadas, y cada tipo de planta se
comporta de manera diferente en respuesta al suelo contaminado con TPH y las
enmiendas proporcionadas (Hussain et al., 2018;Khan et al., 2019c). Se observaron
hallazgos similares en el presente experimento, estando todas las plantas afectadas con
una contaminación del 4 % de TPH. Se observó una tendencia en los parámetros
fisiológicos de las plantas. El biocarbón mejoró el crecimiento de plantas pertenecientes a
Fabaceae (trébol blanco y alfalfa), mientras que las plantas de Poaceae (trigo, maíz y
ballica) se desempeñaron mejor en enmiendas de compost (Tabla 2).Rondón et al. (2007)
propusieron que el biocarbón mejora el crecimiento de las leguminosas a través de la
fijación biológica de nitrógeno, mejorando las interacciones planta-microbio. Contribuyó
al mejor rendimiento de las plantas de Fabaceae cuando el suelo contaminado se
modificó con biocarbón.Chen et al. (1996) sugirieron que el compost mejora el
crecimiento del raigrás (perteneciente a la familia Poaceae), ya que contiene altos niveles
de N, P, K y otros importantes y
U. Yousaf et al.
Figura 3b.Gráficos de análisis de componentes principales (PC) para los parámetros estudiados de las plantas, incluido el trigo (f y g) y el trébol blanco (i y j) para tratamientos con biocarbón y compost,
respectivamente. En las gráficas de PC, el punto verde tiene un valor de carga más alto en el PC 1, mientras que el punto amarillo tiene un valor de carga más alto en el PC 2.
nutrientes menores. Se puede inferir que los parámetros fisiológicos de trigo,
maíz y ryegrass (familia Poaceae) se mejoran con la enmienda del compost (Tabla
2). Además, la modificación del suelo y la interacción del tipo de planta se
encontraron significativas (Tabla 4), lo que sugiere que las enmiendas específicas
del suelo son meritorias para determinados tipos de plantas. Se debe tener
cuidado al seleccionar enmiendas para facilitar la fitorremediación.
Las bacterias asociadas a plantas rizosféricas y endófitas son esenciales para
la remediación de suelos contaminados.Mushtaq et al., 2020). La mejora en el
crecimiento de las plantas también aumenta la abundancia microbiana (McLeod et
al., 2016). El compost y el biocarbón mejoran el recuento microbiano, ya que el
biocarbón reduce la lixiviación de nutrientes, aumenta la disponibilidad de agua,
mejora la aireación del suelo, cambia el pH del suelo y ofrece poros para la
absorción de contaminantes tóxicos y refugio de los herbívoros bacterianos (Iqbal
et al., 2019). El compost actúa como un nutriente y un mejorador del suelo al
cambiar el contenido de humedad, el pH y la estructura del suelo, por lo tanto,
mejora el ambiente del suelo para los microorganismos autóctonos que degradan
los hidrocarburos (Mushtaq et al., 2020;Khan et al., 2017). Los microbios no utilizan
biocarbón directamente, pero el aumento en número se debe a la mejora de las
características fisicoquímicas del suelo (Hussain et al., 2018). Sin embargo, el
compost es una fuente disponible de nutrientes para los microbios, además de
aumentar las características fisicoquímicas del suelo. En el presente estudio, la
condición en la que se mejoró el crecimiento de las plantas también logró
mayores recuentos endofíticos y rizosféricos (Tabla 3). El efecto individual de las
enmiendas del suelo fue estadísticamente significativo para el conteo endófito y
rizosférico. Al mismo tiempo, la interacción solo es sustancial para la abundancia
microbiana rizosférica (Tabla 4). Por lo tanto, se puede inferir que con enmiendas
específicas del suelo y plantas apropiadas, ocurrió una mejora en las UFC
rizosféricas.
En el presente estudio, el suelo contaminado sin sembrar, privado de enmiendas,
mostró 0.18 % de hidrocarburo de la concentración inicial.Barrutia et al. (2011)también
informaron que el estado de TPHs se mantiene constante en dichos tratamientos. El
biocarbón eliminó el 27,24 % de los TPH del suelo contaminado envejecido en
comparación con el suelo contaminado sin enmiendas (Figura 2). En este estudio, la
eliminación mejorada de TPH se vio significativamente afectada por la enmienda del
suelo individualmente. Se puede explicar porque en el suelo enmendado con biocarbón
se facilitó una fuerte sorción de TPH.
8
Quimiosfera 286 (2022) 131782
remediación En los tratamientos que contenían compost, el aumento de la degradación
se debió a que los microbios proporcionaron nutrientes, aumentaron el oxígeno y
mejoraron la textura del suelo. Los resultados también están bien respaldados por el
hallazgo deHussain et al. (2018). Otra explicación para la eliminación de TPH del suelo es
la contribución de la volatilización de n-alcanos ligeros debido a la rizodegradación, como
Gallego et al. (2007)propuesto.
De manera similar, los tratamientos plantados mejoraron significativamente la
degradación de los TPH en comparación con el control sin plantar. Se encontró
que el tipo de planta afecta el proceso de degradación individualmente (Tabla 4).
Observaciones deLolium multiflorum(raigrás) yMedicago sativa(alfalfa)
concertaron aún más los hallazgos, que redujeron considerablemente la
concentración de TPH del suelo contaminado, 59.55 35.21 %, respectivamente.
Además, el efecto interactivo de la enmienda del suelo y el tipo de planta también
resultó significativo (higos. 3 y 4,Tabla 4), lo que sugiere que el uso de plantas
apropiadas junto con una enmienda adecuada del suelo puede exacerbar la
eliminación de TPH en el suelo.
Las plantas y enmiendas apropiadas son fundamentales para la aplicación
definitiva de la fitorremediación para cualquier contaminante (Khan et al., 2020a,
2020b). El presente estudio exploró el uso de plantas gramíneas (pertenecientes a
la familia Fabaceae y Poaceae) y enmiendas del suelo (incluyendo biocarbón y
compost) en suelo contaminado con TPH. Se requiere una caracterización de tres
pasos para el tratamiento biológico definitivo de los sitios contaminados (Azubuike
et al., 2016). La primera y principal importancia es estudiar la tratabilidad de los
contaminantes a través de diferentes métodos biológicos. Posteriormente, si es
necesario, las condiciones ambientales como la modificación del suelo, las
enmiendas microbianas, la cubierta vegetal y la dilución de contaminantes deben
modificarse para optimizar la eliminación/degradación de los contaminantes.
Finalmente, el sitio también debe caracterizarse porque estos atributos influyen
en el control y la operación de los procesos de ingeniería que manipulan las
actividades microbianas en el subsuelo. Por lo tanto, es esencial estudiar la
exposición a largo plazo para confirmar la distribución/translocación/destino de
los contaminantes, la respuesta de las plantas al estrés contaminante y la
posibilidad de maniobrar las matrices ambientales a favor de los contaminantes,
en particular la fitorremediación de TPH.
U. Yousaf et al.
5. Conclusión
El potencial de cada tipo de pasto es diferente, y no todos los tipos
de pastos son aptos para obtener resultados prolíficos de
fitorremediación. Por lo tanto, es vital identificar los enfoques con los
que se pueden lograr beneficios óptimos. Concluimos que el trigo, el
maíz y el raigrás (perteneciente a la familia Poaceae) se comportan
mejor en la fitorremediación de HTP cuando el suelo contaminado se
modifica con compost. Al mismo tiempo, se encontró que el biocarbón
era más adecuado para el trébol blanco y la alfalfa. Además, el raigrás y
la alfalfa son mejores que otras plantas estudiadas para tratar los TPH,
ya que realizan una eliminación estadísticamente mayor. Como el
biocarbón y el compost pueden facilitar el proceso de biodegradación
de los TPH, de forma individual e interactiva, con la planta seleccionada
por aposición,
Aprobación ética, financiación, consentimiento para participar y consentimiento para
publicar
Esta investigación no recibió ninguna subvención específica de agencias de
financiación en los sectores público, comercial o sin fines de lucro. Además, esta
investigación no necesita aprobación ética, consentimiento para participar y
permiso para publicar.
Contribuciones de los autores
Conceptualización- Yousaf U, Khan AHA y Yousaf S. Metodología-
Yousaf U, Khan AHA y Farooqi A. Software y análisis- Yousaf U, Khan
AHA, Iqbal M, Muhammad YS y Yousaf S. Análisis experimental- Yousaf
U, Khan AHA, Farooqi A y Barros R. Redacción: preparación del
borrador original: Yousaf U, Khan AHA y Muhammad YS. Redacción,
revisión y edición: Khan AHA, Iqbal M, Yousaf S y Tamayo-Ramos JA.
Supervisión- Yousaf S. Administración del proyecto- Yousaf U, y Yousaf
S.
Declaración de competencia de intereses
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia ni
relaciones personales conocidas que pudieran haber influido en el trabajo
informado en este documento.
Expresiones de gratitud
Los autores también agradecen al Instituto Austriaco de Tecnología (AIT) y al
Departamento de Horticultura de NARC, Islamabad, por proporcionar biocarbón,
compost y las semillas necesarias para la experimentación.
Apéndice A. Datos complementarios
Los datos complementarios a este artículo se pueden encontrar en línea enhttps://
doi. org/10.1016/j.chemosphere.2021.131782.
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