Prova Biologia 6 de dezembro de 2014

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TRABALHO PRÁTICO / ISOLAMENTO DE DNA DAS CÉLULAS DA BOCA

INTRODUÇÃO

O isolamento e purificação de DNA é o primeiro passo para se iniciar

qualquer analise genética. O DNA está presente em todos os
organismos vivos e, do ponto de vista químico, é idêntico desde as
plantas até ao homem, desde as bactérias até às leveduras. No
entanto a forma como o DNA se organiza é muito variável.

Fazer novelos de DNA (DNA Spooling) à volta de uma vareta de vidro

é um meio comum de isolar o DNA após precipitação por adição de
etanol. No entanto, o procedimento que vais realizar é muito diferente
de outros protocolos utilizados para o isolamento e purificação de
DNA. Os detergentes são utilizados para provocar a ruptura das
membranas celular e nuclear (no caso da célula ser eucariotica). Além
disso, quando o DNA está compactado no interior de um núcleo,
numa célula eucariotica, associado a histonas, tornam-se necessários
passos adicionais para remover as histonas. O procedimento que vais realizar é muito simples e
omite os passos de purificação que seriam normalmente realizados para isolar o DNA dessas
proteínas. No entanto, é um protocolo fácil, simples, pouco dispendioso e que tanto pode ser
utilizado para extrair DNA de bactérias e leveduras como de células humanas.

CONSIDERAÇÕES RELATIVAS À SEGURANÇA

Para evitar a possibilidade de transmissão de agentes infecciosos cada aluno deve manipular apenas
as suas células. É pouco provável que muitos agentes infecciosos permaneçam viáveis após os
passos que envolvem a adição de detergentes, no entanto, algumas bactérias resistem mesmo após
a adição de sabões.

MATERIAL

Reagentes

Solução de detergente 50%

Solução de Etanol 96%
Solução de NaCl 0,9%

Material de laboratório

Copo de plástico
Tubo de ensaio de 50 ml
Pipeta de 10 ml
Pipetador
Vareta de vidro
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Protocolo 1: RECOLHA DAS CÉLULAS DA BOCA

a solução de NaCl 0,9% é uma solução 1 – Coloca 10 ml de NaCl 0,9% num copo de plástico.
isotónica que tem como função evitar a
lise expontânea das células.

Se bochechares durante mais tempo 2 – Bochecha com a solução de sal durante 60 segundos.
recolhes maiores quantidades de células

Recolheste células das gengivas e da 3 – Expele a solução de sal, agora contendo as células,
parte interior das bochechas num tubo de ensaio.

Protocolo 2: ISOLAMENTO DO DNA

o detergente quebra a membrana 1 – Coloca, no mesmo tubo de ensaio, 10 ml de

celular, libertando o conteúdo da célula, uma solução de 50% detergente.
incluíndo o DNA, na solução.

o etanol desidrata o DNA provocando a 2 – Mistura bem, invertendo o tubo (NÃO AGITES O TUBO!)
sua precipitação

o DNA agarra-se ao vidro e apresenta o 3 – Adiciona, cuidadosamente, 5 ml de etanol 95% no topo do t

aspecto de fios esbranquiçados deve formar uma camada distinta no topo da camada de detergent

o DNA isolado através deste 4 – Move a vareta de vidro entre a camada de etanol e a
procedimento permanece associado a detergente que contém as células. Repete este processo e vai roda
algumas proteínas celulares. de vidro (NÃO MISTURES AS DUAS CAMADAS!).

5 – Observa a vareta de vidro.

QUESTÕES

1 – Em que local das tuas células se localiza o DNA?

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2 – Para que serve o detergente, durante o processo de isolamento do DNA?

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3 – O que é que afecta a quantidade de DNA que foi isolado?

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4 – Como é que o DNA está organizado para caber dentro da célula?

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