Master 

: Génie des Matériaux et Procédés

Compte rendu du TP de la Chromatographie

Séparation des colorants d’un sirop

par chromatographie.

Réalisé par : AZZAARI Hamza

Encadré par : Pr.LAMCHARFI

Année universitaire : 2022/2023

I.Partie théorique :
1. Généralités :
 La chromatographie : est un mécanisme de séparation analytique et/ou préparatif des
substances chimiques d’un mélange. Cette technique repose sur la différence de répartition
des molécules des composés d’un mélange entre deux phases non-miscibles l’une mobile
et l’autre stationnaire.
o La phase mobile : c’est une phase qui se déplace sur une phase stationnaire
(chromatographie sur couche mince) ou à travers une phase stationnaire
(chromatographie sur colonne) provoquant la séparation des constituants d’un mélange
à des vitesses différentes en fonction de leurs affinités (polarité) pour les deux phases,
cette phase peut être soit un liquide appelé éluant (la CCM ou la CC) ou gaz (cas de la
chromatographie en phase gazeuse) appelé alors gaz vecteur ou porteur.
o La phase stationnaire : c’est une phase fixe à travers laquelle les constituants et la
phase mobile passent. Elle retient les composés en fonction de leurs affinités, elle peut
être soit solide ou liquide greffé sur un solide, emprisonnée dans une colonne ou fixée
sur un rapport plan.
 Il existe plusieurs types de chromatographie :
- Chromatographie sur couche mince (CCM)

Figure 1 : Montage d’une CCM.

- Chromatographie sur colonne (CC)

Figure 2 : Montage d’une CC.

 - Chromatographie en phase gazeuse (CPG)

Figure 3 : Montage d’une CPG.

2. Chromatographie sur couche mince :

C’est une méthode d’identification qualitative et micro-analytique qui ne nécessite pas des
grandes quantités des produits pour les analyser. Cette technique se fait sur une plaque de
CCM qui se présente sur un support plan régide et souple sur lequel la phase stationnaire est
étalée, et la phase mobile maintenue dans une cuve dont laquelle on pose la plaque.

 Différentes utilisation du CCM :

o D’analyser un mélange pour déterminer sa constitution avec très peu de produit
et très peu du solvant.
o De suivre l’évolution d’une réaction chimique : en effectuant la CCM à chaque
instant on peut déterminer le temps de disparition des réactifs et de l’apparition
des produits.
o De faire une étude préliminaire : étudier et déterminer la nature de la phase
mobile et stationnaire pour les utiliser dans la chromatographie sur colonne
autrement dit la CCM permet de trouver les conditions convenables avec
lesquelles on va travailler dans la chromatographie sur colonne.
o D’analyser et de déterminer la composition des différentes fractions issues de
la chromatographie sur colonne, donc elle joue le rôle d’un détecteur.

 Les révélateurs :
Ce sont des moyens utilisés pour visualiser les taches sur CCM :

 Révélateurs universels : ils permettent de révéler tous les composés de

même principe, parmi ces révélateurs on cite :

 la lumière UV-visible : lorsqu’on oriente une plaque CCM sur laquelle on a des
composés possédant des liaisons conjuguées on assiste à une excitation et on voit sur
la plaque des taches sombres.

 l’iode I2 : utilisé pour les composés qui ont une double liaison ou plus.
  Révélateurs spécifiques : sont des réactifs qu’on va les faire réagir avec les
composés qu’on a sur la plaque, parmi ces réactifs on trouve :

 la ninhydrine : détecteur des acides aminés.

La réaction entre la ninhydrine et un acide aminé qui donne une couleur violet :

 Nitrate d’argent : détecteur des halogénures d’alkyles.

La réaction permettant cette détection :
AgNO₃ + R—X RNO₃ + Ag—X

 2,4-DNPH : 2,4-Dinitrophénylhydrazine
détecteur des aldéhydes et des cétones selon la réaction suivante :
  Le réactif de Molish : détecteur des sucres par cette réaction :

3. Chromatographie sur colonne :

C’est une technique de séparation dont laquelle la phase stationnaire est placée dans une
colonne verticale à travers laquelle passe la phase mobile par effet de gravité entrainant la
séparation des constituants par le phénomène de l’élution-fixation qui se répète le long de la
colonne.
Le remplissage de la colonne s’effectue par deux méthodes :
 Remplissage à sec : on dépose la phase stationnaire (généralement la silice)
directement et à sec dans la colonne puis on ajoute la phase mobile.
 Remplissage humide : on mélange la phase stationnaire avec la phase mobile qu’on
va utiliser dans un bécher et on agite bien pour éviter le déphasage puis on dépose le
mélange dans la colonne.
Il faut s’assurer que la colonne est bien tassée, pour le faire on met un trait indiquant le niveau
du mélange et on tapote sur la colonne, et ainsi on remarque que le niveau du mélange a
diminué.

4. Les phases utilisées dans cette manipulation :

La phase stationnaire : la silice (SiO2) qui est polaire.
La phase mobile : on a testé dans la CCM six solvants ce qui nous a aidé à choisir trois
solvants qui semblent convenables pour effectuer la séparation.

5. Les composés à analyser :

On a travaillé dans cette manipulation avec deux sirops pour séparer les colorants qui les
contiennent :
Un sirop vert de menthe : contient trois colorants.
Un sirop rouge de grenadine : il contient un seul colorant.
 Figure 4 : Sirop vert à analyser. Figure 5 : Sirop rouge à analyser.

II. Partie pratique :

Dans le but de séparer les colorants contenus dans les deux sirops, on a réalisé deux
manipulations : la CCM suivis de la CC.
1. La CCM :
Pour réaliser la séparation sur colonne, il faut trouver la phase stationnaire et la phase mobile
convenable pour séparer les sels donc la phase mobile doit contenir des sels pour respecter la
loi «  tous ce qui se ressemblent s’assemblent », donc on effectue la CCM dont le but de
tester et de déterminer la phase mobile.

a. Préparation des solvants : dans notre manipulation on a travaillé avec des

solvants déjà préparés.
 On travaille soit par un solvant délicat, soit par un mélange de deux solvants.
 Les solvants ou la phase mobile ne doit jamais être plus forte ou plus polaire que la
phase stationnaire sinon on risque de monter tous les constituants dans la plaque de
CCM et donc on n’aura pas de séparation.
 Les solvants doit être de polarité différente que celle de la phase stationnaire.
 Généralement pour une chromatographie en phase normale, la phase stationnaire est
polaire et la phase mobile est apolaire.
 si on inverse la polarité des phases, on inverse l’ordre de sortie des composés dans la
chromatographie sur colonne, donc on opère une chromatographie en phase inverse
dans laquelle on trouve la phase stationnaire qui est apolaire et la phase mobile est
polaire.
 Les solvants qu’on a testé par la CCM sont six : Eau, NaCl 10 g/l, NaCl 20g/l, NaCl 40
g/l, NaCl 100g/l, NaCl 40 g/l (eau/éthanol).

b. Préparation de la plaque :
 on prend la plaque des deux côtés (il ne faut jamais toucher la plaque de la face dont
laquelle est étalé la phase stationnaire pour ne pas la contaminer).
 on trace la ligne de départ : il doit être supérieur au niveau du solvant dans la cuve.
 on écrit en haut de la plaque le nom du solvant utilisé.
 Figure 6 : Plaque CCM préparée.

c. Réalisation de la manipulation :
-À l’aide d’un capillaire on dépose deux taches séparées des deux échantillons (le capillaire
est utilisable pour une seule solution plusieurs fois, et il permet de contrôler la quantité et de
faciliter le dépôt du produit dans sa place exactement).
-Si on met une grande tâche du produit, on sature la phase stationnaire et donc les molécules
qui ne sont pas fixées ils vont se déplacer avec la phase mobile sans fixation-élution (très
facile de les déplacer) et les autres seront difficiles à l’éluer donc il nécessite plus de solvant
donc ils seront en retard par rapport aux premiers alors on aura une tache dispersée.
- La quantité du sirop à déposer doit être diluée de 1% pour ne pas saturer la phase
stationnaire.
-on met la plaque CCM dans le cuve contenant l’éluant (solvant) d’une manière très attentive,
il faut maintenir le cuve fixe pendant le dépôt de la plaque et lorsqu’on termine on le ferme
afin de ne pas s’éparpiller l’éluant sur les taches.
-Le couvercle assure la protection dans le cas d’un solvant volatil, et aussi il permet de saturer
l’atmosphère à l’intérieur du cuve, cette saturation prend d’avoir une migration en continue de
la phase mobile par capillarité.

Figure 7 : Montage dépôt de la plaque dans le cuve.

 On laisse la réaction de séparation s’effectuer pendant un temps précis en mesurant la
durée de cette période, et en contrôlant la montée de la phase mobile.
 Une fois la phase mobile monte, environ, jusqu’à 0,5 cm de haut du papier, on maintient
 le cuve et on le divise, on tient la plaque et on trace la ligne d’arrivée de la phase
mobile. Cette hauteur nous permet de calculer le rapport frontal :
la distance parcourue par≤composé séparé
Rf =
ladistance parcourue par la phase mobile
 Après l’enlèvement de la plaque, on la sèche si on a un éluant volatil et on entoure les
taches s’ils sont visibles sinon on utilise un révélateur.

d. Interprétation des résultats :

Figure 8 : Résultats obtenues de la CCM.

 Le produit rouge monte dans les solutions salines donc ce produit a une affinité pour
l’eau saline.
 Concernant le produit vert, on remarque qu’il est séparé en trois composés.
 Si nous adoptons l’eau comme solvant, on risque de faire sortir les produits jaune et
bleu en même temps.
 Donc pour une meilleure séparation on va utiliser en premier temps l’eau salée pour
séparer le produit jaune, puis on va ajouter de l’eau pour séparer le premier produit bleu
du deuxième et enfin pour sortir le dernier on va verser de l’éthanol.

2. La Chromatographie sur colonne :

Dans cette séparation sur colonne on va se consacrer juste du produit vert qui contient trois
colorants à séparer contrairement au produit rouge qui est composé juste d’un seul colorant.

a. La réalisation de la CC :
- Premièrement, on met du coton (empêche le passage de la phase stationnaire comme
le disque poreux), on verse de l’eau salée (20 /l) et on tape bien sur la paroi pour
éliminer les bulles d’air, on récupère l’eau salée.
- On remplit la colonne par le mélange de la phase stationnaire et la phase mobile
(remplissage humide).
- On laisse le mélange se stabilise et on récupère la phase mobile (fraction 1).
- On met une petite fraction de notre mélange.
- On met le coton pour protéger le produit puis on pose la phase mobile.
- On remarque que le produit jaune se sépare du mélange et commence à descendre
 dans la colonne.
- On récupère le produit jaune dans un bécher (fraction 2), et on ajoute le deuxième
solvant (l’eau).
- Le premier produit bleu a de l’affinité pour la phase mobile supérieur à celle du
deuxième produit donc ils commencent à se séparer.
- On récupère le bleu 1 (fraction 3) et on ajoute de l’éthanol.
- On récupère dans la quatrième fraction le dernier produit bleu.

b. Le déroulement de la CC :

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