\ ew OENOLOGIE (I) 3oo APLICATI ALE SPECTROFOTO! RSs IN OENOLOGIE | Detorminarea antocianilor rin dfn de pH (Riboreau-Gayon & Stonestreet) nS sevice A. COJOCARU mal ‘APLICATII ALE SPECTROFOTOMETRIE! UV-VIS IN OENOLOGIE Nojiuni generale Metodele spectrootometice se bazeazé pe procesul de absorbtie Juminoase ultraviolete (UV) sau din spectrul vizibil (VIS) de cat neentratia-atestbia~ Masurarea absorbanjei cu detérminare a concentrate! substanfe! ‘concenrai est iniard,fapt care face ca pas sorta a drs ois OO), 1 -cosfcen nod ttn (stall expat mle (ome sau aban hc (goes cv pectic, 02,051 em “conan, melAPLICATI ALE SPECTROFOTOMETRIEI UV.VIS IN OENOLOGIE Spectrofotometrul este un echipament care se folseste la masurareaintensit lumind cu ajutoral unui detector, dupa ce un fasccul de lumina trece aura (6 road ante. Un fascist dt Ri alunc'cénd un fotonintlneste © molecu dn proba de ate sansa ca sezasi absorb ft! Aas abr eure nnd od osc ucdnd asf infensiatea fascculiul . Campane meta de absorb Zs bl (IS) sn ulvavoet (UY) Monocromat Curd ——_—atactr vec or sma) YalMsouD ar NSCl cua eal foto oe VS lament: seli/evr) stelseua fotomulpstor A Se observ din tabel e& detector sunt identi sii \ dlomeniu spectral U 3 in VS, ar ewa de cuart permite a lucrul in ambele omenit ale lungiilor de und. figna 1 Diagrama de sate ana _Diferenfa consti in sursa de lumii, lar pin inglobarea ‘asdculde mind in ave aaacts toce ambelorsurse(lampa eu deutery gi cea cu wala) tn riko cw etme ‘2oelagi instrument, ou 0 funcfonare consecutiv, -2 reusit reaizarea spectrofotometreor UVM. APLICATI ALE SPECTROFOTOMETRIEI UVMIS IN OENOLOGIE Lumina este radiatie electromagneticd alcatut& din particulele_element ‘purtatoare de energie, denumite fotoni. Astel, putem considera lumina “pachete” de energie constitute din fotont ‘Spectrul electromagnetic UV-VIS , ao Radom ungine do unas —_Soweamishde. —\. “aoa obras dome cto 2 fomeniel is rm (ela (cuoare complement’) Westen 10-00 ‘ , ova 100.200 ; : we 400.290 a : we oad : : wa ooo A : Saas vicat gabon erase aba pontocala x soa saben violet ph 590-620 portocaliu albastru 20750 rope verde 506m 7048 195450APLICATI ALE SPECTROFOTOMETRIEI UVVIS IN OENOLOGIE Spectrul electromagnetic (10-780 nm) iene Casae From Ewe Fotoni sunt caracter se toons ce ures waa camer (4TH et ‘sau de eneraia(E) Pe care yy extrem 10-100 - 3000-30000 12,4124 ‘poseda, UV Vid: 100-200 . 1500-2000 62424 he we — 100-20 == | 4034-3000 443-124 Ba M/ = hw we aoa \C) > sare S94 unde WA 326400 7e0ss7 —3105,94 oe nstanta Plan Violet 9 (\980-480 galben 668-789 2.75.26 : anew ‘Allastru'’ 450-495 portocaliu 606-668 2,50-2,75 : Neale? 495570 "row 525-606 217275 Galben 570890 volt 508-828. «2100,17 Potocalu $2020 abastwy 484-508 200.10 Rosy 620-750 verde = 400-484 1,65-2,00 |. Determinarea antocianilor prin diferent de pH (metoda RIBEREAU-GAYON $1 STONESTREET) Importanta: ~ evaluarea antocianilor in perioada de macerare-fermentare; ¥ evaluarea antocianilor in perioada de maturare a vinurilor; ¥ evaluarea proceselor de oxidare si degradare din perioada de‘ivechite. Baza teoreticd a metodel consté in varatia r pH=06 intensitticulori intre dou valori ale pH EN \ tui (06 $i 39, care este ‘proportional cu concentratia Be | antociani. sul | a s200 cen pH 3 ae Font clarsts Fons incl Lange enh om (cation evi) (peeudobakcartino) _Absorbantarelatv8 a antocianilor la pH 0,6 $1 3,5|, Determinarea antocianilor prin diferent& de pH (metoda RIBEREAU-GAYON $I STONESTREET) Baza teoreticd \)\ Metoda presupune trasarea unei curbe etalon (abso i @ cconcentratie) @ unor solufii de ni Astfel, din diferenta densitailor optice masurate (ADO,») se obtine 0 ‘dreapta (“curba etalon”), care are panté ce depinde oe coeficientului mo tru antociani. i . pentru ant COP r Pri absorbfie! (DOs:e) @ we de vin pentru analizs regatité n acelasi fel ca gi probele etalon la pH=0,6 sipH=355)siprin “Gy a intermediul curbel etalon, se poate curbé etalon obs pe baca determina concentrata de antoclnt solu de antocten determina din vin. “ "— cuva de 10 mm |. Determinarea antocianilor prin diferenta de pH (met. RIBEREAU-GAYON $1 STONESTREET) Reactivi: > scot etie de 96° eu 0.1% HC concentra: es > acid clorhidric 2% (pH = 0,6); > solute tampon cu pl = 35 preparaté din fostatcisodic gl acid. se > proba etalon, de antocianicristalizafi de Vitis vinifera os °% 0 solute 375, ‘malin etanol cu 0,1% HCI concentrate. nee festa Aparaturi: spectrofotometry care s& permit sae SO nares abel. ss & > 1000 ‘Spectrofotometru VIS + Cuve desticta, diverse sonar CCuve de sticlé de 1,2, 5 gi 10mm|, Determinarea antocianilor prin diferent& de pH (met, RIBEREAU-GAYON $I STONESTREET) Modul de cru: Eprubeta vt mi vin ¥ {mil aleoo etic cu 0.1% Hl (compensare solvent solui etalon); ¥ 1OmIHCI2% (oH= 0.8). Eprubeta2 4m vin; ¥ mil alco otic eu 0.1% HI (compere YOM solu talon); ¥ 401i solute tampon cu pH = 35. ‘Se mascaré densitatsa gated a brobelor din cele doud eprubete (00, pH06 gi DO H=3.5) in cuve de_4> ciy_grosime la 520 nm, utlizdnd apd stata pentru calbrarea spectrofoiometi (pasate. Dac’ absorbjactits dopagoste valoaea 0.9 po scara extineilor, In locul cuvelor le 1 cm se vor folosi cuve cu grosimi mal mic! si se va tine cont de aceasta la exprimarea rezuitatuli |. Determinarea antocianilor prin diferent de pH (met. RIBEREAU-GAYON $I STONESTREET) Curba etalon pentru antociani (determinata in cuva de 10 mm) Concentratia Extinetia Extinctia__Diferenfa extinetilor we ‘nantocian, mg lapH=06 — lap=35, ve 750 4,200 0230 7s ato atta as soe 0060 az oer ante 0028 Calcule si exprimarea regujtetetor, BDO s2q = (DO s2y pH70,6\- O02» PH=3,5) x f, unde: f — factor de multiplicare pentru cuve < 10 mm (cad To mpznf> ThcNRS mm => = 2 cub 2mm =>4= 5;e0N8 1 mmm=> f= 10) -Exgmplu'catou! {cuva de 10 mm): 375.0 mal antociani 187.5 mp anton 57504875 =1875 mgl antocian gross ‘emg ane 0 530-492=00067 UA x= (187,5 x0,047)/0,478= 18,44 ml antocian Antocianl, mgl= 187.5 + 1844 = 205,94Il. Analiza caracteristicilor cromatice ale vinurilor rogii Important ¥ evaluarea caracteristiclor cromatice in perioada de macerare-fermentares, ¥ evaluarea caracteristcilorcromatice In perioada de maturare a vinulor: evaluarea proceselor de oxidare si degradare din perioada de itwechite; Baza teoreticd. Consta in determinarea absorbliet probed vin la 420, 520 gi 620 iim gi calcularea intensitati culoi sia nyant2{ebloi. + Lalungimea de und de 420 nm absuibiia se datoreaza pigmentilorgalbeni sau bruni favonoizi,taninurigi antociani oxidai) + La lungimea de und) 42-520 nim absorbtia se datoreaza pigmentifr rosi (in principal antactani)) + La lungifjea Yolundé de 620 nm absorbtia se datoreaza tentelor violacee din vinyl fre, find date de regula de antocianilco-pigmentaf. "otersitatea culo se exprima prin suma densitailor optice masurate in cuve de 10 mm grosime la lungimile de unda de 420 nm, 520 nm si respectiv 620 nm. Tenta (ovanfa) culo reprezintraportl dntre absorbta la 420 nm $i cea la 520 nm. Il. Analiza caracteristicilor cromatice ale vinurilor rosii Modul de iueru: Se masoara densitatea optic& (absorbanta) a probei de vin, la colorimetru, la lungimile de unda de 420 nm, 520 nm gi 620 nm in cuve de grosime de 4th, pentru vinurile intens colorate gi de 5 sau 10 mm pentru vinurile puti colorate. ¥ Citirea se face dupa calibrarea spectrofotometrului cu apa distilats, n acelasi tip de cuva. ¥ Valorle cite in cuve de sub 10 mm grosime se Ye inmhulti cu un coeficient care sa le aduca la nivelul valorilor care s--f ttn cuve de 10 mm (10 pentru ccuvele de 1 mm si2 pentru cele de § hm), Calcul yy 1, UA= Day + Day Ba \ PR 9 Exprimarea ghintefpretarea rezultatelor: Intonsitatea culo, UA Tonta culori pina ditt (4.08 pentru avanfa view inee (1 sn) 01 pent vin roze {480 perry quanta vnuormaioidte Sau mai vehi 220, pon vine ogi (-Zanisau mai mul) 4,0-15 pentru nana vinuloroxidate gl foarte vechi “valor ridicare ale tentei culor > 08+ in cazul vinurlrtnere, indicdo oxidare prematuré;MODEL PROBLEMA TEST DE LABORATOR ‘84 se caleuleze concentratia de antocanidint-un vin sind c& pentru determinare sa utiizat Sainte mn aN AD0 20 (D0. roe BOS at ctor de mulipcare pent cuve ch Cutba etalon pentru antociani (determin 10mm) Concentatia —_Extneia Diferentaextncilor (ADO) {nantocian, mal > lap=35 UA 3750 44200 0230 agro 1818 0610 one ee 35 0,304 0.060 oes 750 0234 0947 oner m8 oe 0.026 0092