= @ i La UTMACH UNIVERSIDAD TECNICA DE MACHALA Ae FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS Y DE LA Se LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y cael fe} ie INFORME DE PRACTICA DE Lasoraronio/ NUMERO DE PRACTICA: 10.05,02-03 ot NOMBRE DE LA PRACTICA: Preparacion de medios Ye cultivo, semisdlidos y liquidos para microorganismos. 1. DATOS INFORMATIVOS. INTEGRANTES: * Blacio Paladines Diego Andres * Diaz Barrezueta Jhonny Alexander * Pico Sisalima Anthony Alexander © Ordinola Agurto Kevin Mauricio = Ramirez Bravo Jonathan David DOCENTE: Ing. Juan Gabriel Sanchez Sanchez, Mgs. CARRERA: Ingenieria Quimica ASIGNATURA: Microbiologia general CICLOINIVEL: Quinto semestre “A” Diurna FECHA: 11 de enero del 2023 2. FUNDAMENTACION. Por medio de cultivo se entiende a todo substrato estéril que contiene elementos Inhibitorioso nutricionales que permiten o regulan el crecimiento y la multiplicacion bacteriana. Los medios de cultivo deben manipularse procurando darles esterilidad completa, pH, temperatura, etc., adecuados para la especie bacteriana que se requiera cultivar. Dispensar medio de cultivo implica colocar una cantidad apropiada en una Caja Petri en laque posteriormente se realizaré una técnica de inoculacién de muestra, Los medios de cultivo se clasifican:© UTMACH + Medios de cultivo basicos. + Medios de cultivo mejorados. + Medios de enriquecimiento. + Medios selectivos. + Medios de cultivo diferenciales. La introduccién y posterior perfeccionamiento de los medios de cultivo, ha signifcado un adelanto fundamental en bacteriologta, pues, permit el sislamiento, estudio y tipfieacién de las bacterias. Hoy en dia se emplea medios de cutivos Producides por diversas casas comerciales (Merck, Difco, Gibco, Sigma, etc.) Cominmente se pesa la cantidad de medio requerida y se hidrata con agua destilada estéril, para luego solubiizar con calor durante un tiempo establecido por fabricante. La puesta en practica de la bioseguridad personal antes, durante y despues de la Practica en el laboratorio de microbiologia y parasitologia dependen en gran medida de la aplicacién de los conocimientos adquiridos por los alumnos en clases teéricas, se ha considerado queestas se adapten a los recursos disponibles en el laboratorio, a los procedimientos de trabajo y que sean aplicables al nivel de conocimiento y formacién profesional. Manual de Bioseguridad en laboratorio (Fontalvo, 2012). 3. RESULTADOS DE APRENDIZAJE. Reconoce con objetividad los medios de cultivo utilizados, como medios de nutricion que necesitan los microorganismos para el crecimiento bacteriano mediante una caracterizacién estructural de los mismos. 4, OBJETIVOS ESPECIFICOS. > Elaborar medios de cultivo para microorganismos, a través de la aplicacién de las técnicas especificadas en la literatura cientifica para el crecimiento y desarrollo normal de microorganismos en el laboratorio. > Identificar las diferencias de los medios de cultivo, mediante su preparacion y aplicacién para cumplir con los propésitos de estudio planteadosACH 5, EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. ~ MATERIALES | ciU | EQUIPOS | CiU | SUSTANCIAS cju [MUESTRA Erlenmeyer 1 | Estufa | 1 ee 1 | sin sabor a Medio de nar i: Grandes | 3 | Autoclave | 1 i acer 1 corre Cajas Petri cultive | Nutritive disposicién Pequefias| 9 | Reftigerador| eek 1 conan Lactosado |disposicién Tubos ensayo con tapa 7 | Incubadora | 1 Agua destilada 1000mI Gradillas para Tubos ensayo| 1 | M.bunsen | 1 ‘agua potable Suficiente | | 10 mt 4 Desinfectante | Suficiente| Pipetas 7 Belanza | eee oe eee ie graduadas | 5m alll scaee Jabon Tiquido Sufciente Ami 1 Cintas de pH 1 Cr fT 7 Vasos de ie | Acida precipitacién | 50m! | 4 25ml_ | 1 | Cocinetas Varila 7 | eléctricas | ' | Soci aluste PH O.1N Pera de succi6n 1 Basica_ | | Papel de empaque | AT | 6. PROCEDIMIENTO. 1, Observar que todos los materiales y equipos de laboratorio se encuentren disponibles sobre las mesas de trabajo para su uso. 2, La preparacién del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada de sustrato o nutriente (agar). Con la ayuda de un Erlenmeyer o recipiente para preparacion de medios de cultivo disolverta en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante (agar). 4. Mezclar con la ayuda de una varillo o agitador el sustrato con el volumen de ‘agua previamente sugerido. 5. Poner a calentamiento o fundicién de acuerdo a la temperatura establecido por el fabricante (agar).ACH 6, Ajustar el medio de acuerdo al Ph requerido para el medio a preparar. 7. Llevar a esterilizacién y distribucién de ser posible. DISPENSACION. 8. Dispensar de 18 a 20 ml. de medio de cultivo en Caja Petri en presencia de mecheros de alcohol. ———— Sea fl Te nesuLTADOMESPERADOS. obknidas Dates ~ En este caso se escogieron los volimenes mayores para realizar los respectivos calculos. > 3cajas petri grandes = 20 ml > 3cajas petri pequefias = 10 ml > 7 tubos de ensayos = 7ml 13 g para una disolucién de 1000 mL « Dato proporcionado por el docente Condiciones para la preparacién de medios de cultivos: > Temperatura > pH > Oxigeno >» Tiempo > Cantidad de sustancia (gelatina sin sabor) > Agua (volumen)1. Volumen que se necesita. Al comienzo de la prictica el volumen obtenido fue el comecto, debido 2 que se reaizaron las debidas operaciones metemaicas expicadas anticipadamente por el docente, teniendo en cuenta los volimenes y los materiales a uilizar. 3 cajas petri pequefias = 10 ml 3 cajas petri grandes = 20 ml 7 tubos de ensayo = 7ml x 10m = ] 30m i i i 4s g a El volumen total obtenido fue de 159 ml 2 Frasco agar (medio liofilizado). Les 13 g fusron comparides por el dovente ye que nes explicé que en un medio de cutivo que habia en el laboratorio se disuelve en 1L 0 1000 mi 13g 1000 ml x-159mlPesar lo obtenido, Antes de pesar la cantidad de sustancia (gelatina sin sabor), la balanza analitica fue previamente tarada con el fin de evitar errores, 9 inconsistencias, Matraz Erlenmeyer (250 ml) (agua destilada). El agua destilada fue calentada con el fin de facilitar la disolucién ya que se utilize como cantidad de sustancia la gelatina. 5. Agregar en el matraz con el agua destilada la cantidad de sustancia. Se agregé agua destilada al matraz Erlenmeyer por medio de alicuotas obtenidas a partir de la pipeta graduada previamente lavada, con el fin de agregar el volumen exacto. 6. icokenearnicaty) SoC} a 70°C. La utilizaci6n del mechero de alcohol fue de gran relevandia ya que se calenté hasta que la solucién se volvi clara. 7. Ajusta ae . En esta practica se omitié este paso debido a que no se Feontebaeoutell pepe ltorseoll perofsteneratccendeleetafteite ipettate eseaceeaom ene lemedc a7) rhe > Siesta muy dcido agregar una base (NaOH 0.10 N) > Siesta muy basico agregar un dcido (HCI 0.10 N) 8. Autoclavado, Se debe realizar a una temperatura de 121°C y una presion 4 ‘atm con el propésito de esterlizar. 9. Enfriar hasta los 45°C. Para ello se realiza por medio del equipo del bafio maria, si se dejaba pasar esta temperatura se iba a gelificar (contiene gelatina), 10. Agregar a las cajas Petri y los tubos de incubacién. Se agregé con ayuda de la pipeta graduada y la pera, en cada caja Petri y tubos de 6ACH incubacién con la finalidad de agregar el volumen correspondiente y asi se evité errores, > Cada una de las cajas petris ya sea grandes o pequefias, asi como los tubos de ensayos fueron etiquetados, con el objetivo de identificar y evitar confusiones. 11, Llevar a una temperatura 4°C, Ya que asi se conserva el medio. 8, CONCLUSIONES En el Laboratorio de Microbiologia y Parasitologia de la Facultad de Ciencias Quimicas y de la Salud de la Universidad Técnica de Machala se realiz6 con éxito la correspondiente practica. Acotando que cada uno de los calculos realizados fueron determinantes, ya que se pudo célcular el volumen necesario, asi como se pesé la cantidad de sustancia obter\ida, y se pudo agregar en el matraz Erlenmeyer la gelatina junto con el agyé destilada. Asi como es importahte las condiciones de temperatura, oxigeno, tiempo, cantidad de sustancia, yglumen y pH, el mismo que debe encontrarse cercano a la neutralidad, dependiendo del caso se agrega una base como el NaOH 0.1N si esta muy Acido o si se encuentra en un medio muy basico se agrega el HCI 0.1N, de igual manera se pudo distribuir la cantidad de sustancia de forma adecuada en las cajas Petri y en los tubos de ensayos cada une eliquetadas correctamente, trabajando de la mejor manera con los materiales y equipos dentro del laboratorio.y MACH 9, RECOMENDACIONES > Es importante tener en cuenta cada uno de los pasos para la preparacién de medios de cultivos, asi como las condiciones de temperatura, pH, oxigeno, tiempo, cantidad de sustancia y volumen, previamente explicados por el docente ya que asi se evita cometer confusiones que pueden llegar a resultados erréneos. > Siempre se debe afiadir una caja Petri grande con la finalidad de reponer la solucién que quizés se vaya a derramar o perder por algun accidente. > Revisar que todos los materiales que se vayan a utilizar se encuentren en buen estado, 7 jamente esterilizados. > Los materiales ademas deben estar py > Realizar la préctica con las debjdés precauciones.. > Es conveniente usar ung/ata de laboratorio para proteger la ropa de manchas y salpicaddras. Los zapatos deben ser cerrados (no usar sandalias) y préferentemente con suela de goma para disminuir eventuales > Las personas que usan el cabello largo deberdn llevario recogido. No usar cadenitas, colgantes, collares, pulseras, pafiuelos o bufandas que puedan engancharse a los elementos de trabajo, produciendo vuelcos y aceidentes, > Queda terminantemente prohibido comer 0 beber en el laboratorio o durante la realizacién de los experimentos..—— | @ uTMACH 40. BIBLIOGRAFIA. * Garcia Manrique, Paloma (2016). Control microbiolégico y sensorial de losalimentos. Espatia: Editorial Sintesis. (BCOS02448) + Luna Fontalvo, J. A. (2020). Métodos analiticos de microbiologia general y aplicada. Editorial Unimagdalena htps:lielibro net.basesdedatos.utmachala edu .ec/es/ereaderutmachalal 125443 Silverio Calderén, C. (2015) Microbiologia general pare Investigaciones de laboratorio. Machala, Ecuador Universidad Téonica de Machala hilp-/repositorio vimachala edu eclhandle/48000/6542 Maria de los Angeles Aquiahuatl, Maria de Lourdes Pérez Chabela (2004) Manual de practices de microbiologia general © Universidad auténomametropolitana - Iztapalapa. ISBN. $70-31-0141-0. 2004. Disponible en L_RAMOS MARIA DE LOS IGELES Manual de practices de.pdtANEXOS ustracién 3. Materiales de laboretorio. Mustracién 2. Area de preparaciéin de muestras Mustracton 1, Area de lavade Mustracion 5. Mairaz con of aque destiads stracion 4. Pesar a muestra Peppeaalecn bad y la cantidad de sustancie (gelatina) ‘ena balenza anailics Mustracién 8 Agregar Ia solucisn _/ Mustracién 9. Lievar al agitader fen las cajas pets y tubos de los tubos de ensayo i ‘ensayo Mustraci6n 7. Cubic la enirad del ‘matraz Erlenmeyer