‘Account wie TREFIREFI RN rasp cn» entangle ead Poke bg espe bsicos de a PCR on tempo real » PCR en tempo real vs cig ve tadcional PCR en tiempo real frente a PCR digital frente a PCR tradicional + Applied Biorytams ane una gum completa de productos de PCR en ampe real par aplicaciones trai ydesnfanten Introduceién PCR en tiempo real frente a PCR tradicional frente a PCR digital de un vistazo Descargar infografia Visin general bie stave micromeaeloes {Cuantitative? Sin acosn de mooresecones reorbiae se aia ao abate expen sn cura ate oo evometo epenendel ay + Convo eaten y aici 3a rors oa bare mptincasa enn getcon ‘Ampliicacién de ADN para éListo para volver al laboratorio? Haga que su investigacién avance mas rapidoXVentajas dela PCR digital: teal ge epetcanes de POR ‘tannin Ventajas dela POR eg tempo. Desentaas de la PCR tradicional Para comprender por qué la PCR tradicional es limitante, es importante comprender qué sucede durante una reaccién de PCR, Una ejecucién basic de POR se puede dviir an tre fases: Exponencial La dupicacisn exacta del producto se acumula en cada ciclo (suponiendo una eficiencia de reaccién del 100 %) La reaccién es muy especifica y precisa La amplifcacion exponencial ocure porque todos los reactivos estan frescos y disponibles, la cinética de la reaccién empuja la reaccién para favorecer la duplicacién del amplicén. Lineal (alta variabilidad) ‘A medida que avanza la reaccién, algunos de los reactivos se consumen como resultado de la ampliicacin. Las reacciones comienzan a ralentizarse y el producto de PCR ya no se duplica en cada ciclo. Meseta (Punto final: deteccién de gel para métodos tradicionales) La reaccién se detuvo, no se fabrican mas productos , si se deja el tiempo suficiente, ls productos de la PCR comenzarén a degradarse. Cada tubo © reacelén so estancard on un punto dforento, dabid a ls aforentes cnéticas de reaccién do cada muestra, Estas diferoncias so pueden ver en la fase do mesela, La fase de mesela es donde la PCR tradicional realiza su medieién, también conacida coma deteccién de punto final Figura 1: Fases de PCR. Plateaw Mediday astoiqneasdtver Bl daboratcrio? Haga kisieu teaetigacisiebleance mas rapidoXEna Figura 2, res muestras replicadas, que tenian la misma cantdad de ADN al comienzo de lareaccién tienen diferentes cantidades de producto de PCR en la fase de meseta de la reacci6n (debido a variaciones en la cinétid&e@te ra46C%n), Por lo tanto, seré mas preciso tomar medidas durante la fase ‘exponencial, donde las muestas replicadas se amplifican exponencialmente, Area of Detection For Real-Time PCR og DNA over Figura 2: muestras idénticas producen diferentes cantidades de producto de reaccin en la fase de meseta de la PCR, Medidas de PCR en tiempo real en la fase exponencial para una cuantificacién mas precisa LaPCR en tiempo real se contra en a fase exponencial porque proporciona los datos mas precios y precisos para la cuantifcacién. Dentro dela fase ‘exponencial, el instumento de PCR en tiempo real calcula dos valores. Lainea Umbral es el nivel de deleccién an el quo una reaccién alcanza una Intensidad fiorescente por encima del fondo El ciclo de PCR en el que la muestra alcanza este nivel se denomina Cycle Threshold, Ct. El valor Ct se liza en fa cuantificacién aguas abajo 0 en la deteccién de presencialausencia, Al comparar lo valores de Ct de muestra de concentracién desoonocida ‘con una serie de estindares, se puede determinar con procisién la cantidad de ADN molde en una reaccién desconociéa PARTE SUPERIOR La PCR digital cuenta moléculas individuales para una cuantificacién absoluta La PCR digital funciona dgitaizando una muestra en muchas reacciones individuales de PCR en tiempo real; alguna parte de estas microreacciones Contione fa motécula diana (positva) mientras que otras no (negatva). Tras el ands de PCR, la raccién de respuestas negatvas se ulliza para generar luna respuesta absaluta para el nimero exacta de moléculas diana en la muestra, sn relerencia a estandares o contoles endégencs. éListo para volver al laboratorio? Haga que su investigacién avance mds rapidoX,Figura 4: la PCR dill uiliza la proporcién de microreacciones posilvas (negras) y negatvas (blancas) para contar el nimero de moléculas objevo, Applied Biosystems TaqMan sonda y deteccién basada en SYBR Green Cada reaceién de PCR en tiempo real contene una malécula indcadora Mluorescente, por ejemplo, una sonda Applied Biosystoms™ TagMan® o un colorante SYBR™ Green, para controlar la acumulacién del producte de PCR. A medida que aumenta la cantdad de amplicén diana, también aumenta la ‘cantdad de fluorescencla emiida por el fiorétoro. ——~ x Xx Figura 5: Ventajas de a PCR en tiempo real frente ala PCR tradicional Applied Biosystems tiene una gama completa de productos de PCR en tiempo real para aplicaciones rutinarias y desafiantes ‘Applied Biosystems ofrece un conjunto integral de productos para la expresion génica basada en PCR on tempo real, mIARN, variacién del nimero de ‘copias y andlisis de genotinade de SNP, desde juegos de sondas y cobadores especificas de genes lstos para usar, hasta reactivos y plsticascatiianos, instrumentos sistemas, software y todo lo demas. ‘Solo para uso de investigacién, No debe ulilizarse en os procedimientos de dlagndstco, Recursos educativos de PCR en tiempo real ‘Pouniod states tag icon United Si férminos y condiciones Politica de privacidad Politica de precios y fietes éListo para volver al laboratorio? Haga que su investigacién avance mas rapidoX