O que Engenharia gentica A engenharia gentica o nome que se d a um conjunto de tcnicas que permite identificar, isolar, multiplicar e modificar

ar os genes; a tecnologia do DNA recombinante. O isolamento do DNA consiste em retirar o DNA de dentro das clulas. uma metodologia relativamente simples e, por incrvel que parea, os cientistas hoje so capazes de retirar at mesmo o DNA de fsseis. Aps isolado o DNA normalmente "reproduzido" no laboratrio. Os pesquisadores esto em geral interessados em estudar um pedao pequeno da molcula. Para isso, inventaram maneiras de fazer milhares de cpias (clones) deste pedacinho a fim de que possam manipul-lo e visualizar seus resultados.
PCR: a reproduo do DNA

A reproduo do DNA em laboratrio foi primeiramente realizada com o auxlio de bactrias, mas h uma maneira ainda mais rpida e efetiva de reproduzir um fragmento de DNA. Voc j estudou como se d a replicao da molcula de DNA dentro da clula? uma reao relativamente simples, que exige uma molcula "molde", um conjunto de enzimas e os quatro nucleotdeos soltos no meio, de forma que possam ser utilizados para compor a nova fita a ser formada. Tomando como base a replicao normal do DNA, um cientista desenvolveu uma tcnica em que esta reao podia ser realizada in vitro, ou seja, fora do ambiente celular. A figura acima mostra como feita a duplicao in vitro do DNA, numa reao chamada PCR (de Polimerase Chain Reaction, ou reao de polimerizao em cadeia). O PCR s se tornou uma tcnica de uso comum quando foram descobertas polimerases de DNA que resistiram s altas temperaturas da reao sem se desnaturarem. Estas polimerases so extradas da bactria Termophilus aquaticus que habita fontes de gua quente (por isso suas enzimas tm que funcionar em altas temperaturas). Antes desta descoberta, era preciso acrescentar mais enzima a cada ciclo de reao, o que tornava o processo muito trabalhoso. Atualmente os sistemas so automatizados, e o PCR se tornou uma das ferramentas mais valiosas para a engenharia gentica. Enzimas de restrio Para que um pesquisador possa "manipular" o DNA, ele precisa de ferramentas que o auxiliem neste processo, de forma a poder separar somente o gene, ou genes, que lhe interessem. Imagine uma ferramenta que funcione literalmente como uma tesoura, que corta o DNA em lugares especficos. Esta ferramenta existe na natureza, foi descoberta e foi chamada de enzima de restrio. A descoberta destas enzimas deu o primeiro impulso engenharia gentica. As enzimas de restrio foram encontradas na natureza em algumas bactrias. Nestas bactrias, as enzimas servem para picotar fragmentos de DNA estranhos, o que ajuda a prevenir ataques de vrus bacterifagos. Existem vrios tipos de enzimas de restrio, e cada uma delas capaz de reconhecer uma determinada seqncia de nucleotdeos, por exemplo: ATTCG. Cada vez que esta seqncia aparece no DNA estranho, a enzima corta este DNA nessa posio. Voc deve estar se perguntando como as bactrias fazem para evitar que seu prprio DNA seja cortado neste processo. Para evitar este problema, o DNA das bactrias marcado com radicais metil (CH4), que se ligam ao longo da cadeia de DNA e no permitem a ao das enzimas.

Com a descoberta das enzimas de restrio, os pesquisadores comearam a extrair o DNA de diversos organismos e constataram que as enzimas cortam de forma distinta o DNA de organismos diferentes, o que era esperado, j que os organismos possuem diferenas em seu genoma. Se o DNA de duas pessoas for extrado e submetido ao de uma enzima de restrio, possvel mostrar que estas duas pessoas apresentam padres diferentes de corte, pois o DNA delas apresentam diferenas nas seqncias. Os padres de corte das enzimas de restrio so visualizados atravs de uma tcnica chamada de eletroforese. Sabendo disso, possvel esclarecer casos de paternidade, identificar criminosos e resolver casos de desaparecimentos. O exemplo abaixo mostra como as enzimas de restrio podem ajudar a condenar ou inocentar o suspeito de um crime com um simples fio de cabelo deixado pelo criminoso no local do crime. Clonagem -Clonagem de Genes A clonagem de um gene um procedimento simples. Os pesquisadores simplesmente se utilizam de bactrias como fbricas para a reproduo de fragmentos de DNA. Com o auxlio de enzimas de restrio que cortam o DNA, o fragmento de interesse inserido num plasmdio (pedao circular de DNA que independente dos cromossomos) ou num vrus, que infecta uma bactria. Quando a bactria se duplica, ela duplica tambm o DNA de interesse que foi inserido pelos pesquisadores. Um gene clonado, obtido assim em vrias cpias, serve para que se possa estudar a seqncia de bases (seqenciamento). Isto interessante para comparar o mesmo fragmento gnico retirado de diferentes espcies (estudos evolutivos) ou comparar fragmentos retirados de indivduos diferentes da mesma espcie (estudos populacionais). Alm disso, isso permite estudar diretamente a estrutura dos genes. Outra aplicao possvel fazer com que as bactrias expressem o gene nelas introduzido a fim de produzir determinadas substncias. Exemplos disso so a produo em laboratrio de insulina e hormnio de crescimento, que so de genes humanos, em bactrias. -Clonagem de animais Ao contrrio do que se possa pensar a clonagem no uma tcnica inventada pela engenharia gentica.Ela um mecanismo natural, comum por exemplo na reproduo de plantas, que se reproduzem assexuadamente. Basta plantar um pedao de galho de uma planta para que nasa outra idntica anterior. As bactrias tambm se reproduzem por clonagem, pois, a cada ciclo so produzidas duas bactrias idnticas original. Alm disso, dois gmeos idnticos so clones um do outro, frutos da diviso de um nico vulo fecundado por um nico espermatozide. Poucos animais so capazes de se reproduzir por clonagem, especialmente em se tratando de vertebrados. Por isso, a clonagem de um animal inteiro bastante complexa e s foi conseguida pela engenharia gentica recentemente. Para isso preciso transferir todo o DNA do organismo a ser clonado para uma clula embrionria de outro indivduo da mesma espcie. Ainda no existe uma metodologia padronizada para realizar este processo. Pesquisadores de diferentes laboratrios tm usado vrias tcnicas, geralmente com um rendimento muito baixo. Isso significa que so necessrias dezenas, ou at mesmo centenas de tentativas para que um indivduo seja clonado (no

caso da Dolly foram feitas mais de 270 tentativas antes dela). O clone mais famoso da atualidade a ovelha Dolly, o primeiro mamfero a ser clonado. Outros animais, como anfbios j tinham sido clonados anteriormente, mas a complexidade de um mamfero e a proximidade evolutiva com a espcie humana fez da Dolly um experimento nico e muito polmico. Biotecnologia A biotecnologia est em alta. Quase todos os avanos na rea da agricultura, sade e alimentos tm a biotecnologia envolvida. Mas, afinal, o que Biotecnologia? Nada mais do que tecnolgico que permite a utilizao de um processo material biolgico para fins industriais. A biotecnologia o conjunto de tcnicas que permite implantar processos na indstria farmacutica, no cultivo de mudas, no tratamento de despejos sanitrios pela ao de microorganismos em fossas spticas, entre outros usos. Desde o incio do sculo XX, existem tcnicas de cultura de tecidos e de melhoramento de plantas, mas, apenas em meados do sculo XXI surgiram novos rumos com a Biologia Molecular em conjunto com os avanos na computao. Transgnicos Um organismo transgnico produzido quando um gene clonado de uma espcie introduzido nos embries de outra espcie. O DNA retirado das bactrias utilizadas para a clonagem, purificado e introduzido, geralmente com uma microagulha, no ncleo de clulas embrionrias da espcie que se deseja transformar. O primeiro organismo transgnico foi um camundongo, que recebeu genes de hemoglobina de coelho em 1981. Atualmente existem no mercado muitas plantas e animais transgnicos. Eles so criados a fim de aumentar a produtividade, diminuir a incidncia de pragas e doenas e at mesmo melhorar o seu teor nutricional. No entanto, existem srias controvrsias sobre a segurana do uso destes organismos, tanto no que diz respeito ao seu valor como alimento quanto nos riscos que eles podem representar para o meio ambiente. Genoma O estudo do genoma dos organismos est em moda ultimamente. Seu objetivo seqenciar todo DNA de um organismo para posteriormente manipul-lo de diversas maneiras com o intuito de auxiliar a agricultura, a pecuria e a medicina. O primeiro genoma a ser seqenciado no Brasil foi o da Xylella fastidiosa, uma bactria que provoca o amarelinho, um grande problema dos laranjais brasileiros. Este genoma j se encontra disponvel, o prximo passo reconhecer seus genes e tentar inferir que protenas eles codificam para entender melhor como esta bactria infecta as plantas, como se reproduz, de que forma causa a doena etc. Com este conhecimento, os cientistas sero capazes de produzir protenas que impeam, por exemplo, a infeco ou a reproduo destes microorganismos. A obteno da seqncia do DNA seria apenas o primeiro passo para a eliminao deste grave problema da agricultura nacional. Outro genoma que tem sido bastante comentado o genoma humano: o genoma de um indivduo foi completamente seqenciado e a quantidade de genes nele presentes j foi estimada em cerca de apenas trinta mil genes. Curiosamente, descobrimos que no

temos tantos genes quanto os cem mil que imaginavam os cientistas anteriormente. Nosso desafio agora descobrir como se d a interao destes genes entre si e com o ambiente para a formao de um ser humano. Um dos grandes objetivos do projeto , atravs do conhecimento da seqncia de genes "normais", tentar detectar os genes que provocam doenas e substitu-los. Existem hoje as vacinas gnicas feitas de genes que curariam o indivduo.