PERHITUNGAN BACTERI COLIFORM, COLIFORM TINJA, ESCHERICHIA COLI DENGAN IETHODE MOST PROBABLE NUMBER (M PN) SPECIMEN : Matanan, minuman, air pIFINISI = ‘Most probable number = perkiraan terdekat jumah, « Bactericoliform = bacter golongan coli, yang dtandai dengan kemampuan bacter ins menguraikan lactose menjadi asum dan gas di dalam media Brilliant green lacose bile broth pada inkubasi sub 37° C 48 jam. Contot : Genus Klebsiella, Genus Enterobacter, Genus Escheriia, + Coliform tinja = coliform yang mampu tunbuh pada 44,5° C 24 jam. + Escherichia coli = Gram () batang yang menguraikan lactose sampai dengan gas, memproduksiindol, Simon's clue negatif. CARA PEMERIKSAAN : ‘A Persiapan specimen : "+ Untuk specimen yang padat atau cair tapi pekat, dilarutkan dulu dengan aquadest atau air garam steril atau Quarter strength Ringer solotion. 10 gram atau 10 cc specimen ditambah aquadest steril atau lainnya sampai 100 cc. + Sedangkan specimen cai dapat langsing diperisa. |B. Ragamn LB yang digunakan : 1. Raga 1:5X 10 ml, 1X1 ml, 10,1 ml, ‘Untuk specimen yang sudah diotah atau yang angka kumannya dperkiralan rendah, Specimen cairauat yang dilarutkan ditanam didalam : 5 tabung Lactose bro Triple strength masing-masing 10 ml. = 1 tabung Lactose broth single strength, 1 ml. = 1 tabung Lactose broth single strength, 0,1 ml. Masuk inkutator 37° C 48 jam. bs Tiap-tiap tabung Lactose broth (LB) yang menunjukkan posit gas, dtamam kedalam Brilliant green Inctose bile broth (BGLB). ‘Masuk inkubator 37° C 48 jam. «.Dibaca dan dicatat BGLB yang menunjukkan positif gas, masing-masing ditanam Mac Conkey agar/Endo agar! Eosin Methyleen Blue agar/Tergitol 7 agar plate, Masuk inkubator 37° C 24 jam. ‘Untuk mendapatkan index MPN coliform, digunakan abel MPN berdasarkan iabung-tabung BGLB positif gs. 4.Koloni yang tersangka E. coli ditanam pada SIM/MIO/MIU (untuk mengetahui produksiindol) dan Simmon's citrate (unfuk mengetahui kemampuan bacteri dengan citrete sebagai sumber carbon) serta TSI aga. Masuk inkutator 37° C 24 jam, -Dibaca dan dicatat pertumbuban pada media TSI, SIM dan SC untuk memastian apaiah B. ‘Kemudian dicari pada tabel MPN untuk menetukan index MPN E, 2, Ragam I :5X 10 ml, 5X1 ml, 5 X0,1 ml. ‘Untuk specimen yang belum diolah atu yang angka kumannyadiperkratan tings Kalau periu penen:man dapat ilanjutkan dengan 5 X 0,01 ml dst. ‘Yang biasadiperiksa dengan cara ia ialah sum, gali, air mata ar, ar hujan, air sunga, air kolam renang dsb «Specimen air tanpa diencerkan ditanam didatam media : 5 tabung LB triple strength masing-masing 10 ml. 5 tabung LB single strength masing-masing 1 ml. +5 tabung LB single streagth masing-masing 0,1 ml. Masuk inkubator 37° C 48 jam. LLB yang positif gas ditanam didalam BGLB masing-masing 2 tabung, ‘Sana seri BGLB diinkubasikan 37° C 48 jam dan sau seri BGLB yang lin dinkubasitan 44 -44,5° © 24 jam. 105 Dipindai dengan CamScanner«. Pada waktunya dibaca dan dicatat berapa bung BGLB yang (+) ga dari masing-masing kelompok penanaman, ‘Angka-angka yang diprolehdicocokdan dengan tabel MPN untuk memperoleh index MPN coliform (nkubast 37° C 48 jam) dan index MPN coliform tina Gakubasi 44~44,5° C 24 jam). 3. Ragam Il: 3X 10 ml, 3X 1 ml, 3X 0,1 ml. ‘Adalah ragam alteratif untuk ragam Tl, apabilajummlah tbung terbatas,begity pula persedian media juga terbaus. (Cara pelaksanaannya seperti gam I. . CONTOH PEMBACAAN HASIL : Ragam 1: ‘Tabung 5 X 10 ml, BGLB (+) gas : 3) ‘Tabung 1 X 1 ml, BGLB (+) gus: 1) Index MPN : 12. ‘Tabung 1 X 0,1 ml, BGLB (+) g88 : 0) Ragam It: ‘Tabung 5 X 10 ml, BGLB (+) gas :2) ‘Tabung 5 X 1 ml, BGLB (+) gas: 1) Index MPN : 9, ‘Tabung 5 X 0,1 ml, BGLB (+) eas: 1) Raga Il: “Tabung 3 X 10 ml, BGLB (+) gas ‘Tabung 3 X 1 ml, BGLB (+) gas: ‘Tabung 3 X 0,1 ml, BGLB (+) gas : 1) CATATAN : + Apabila dalam pembacaan BGLB, semua tabung menunjukkan hasl (+) gs, penanaman dapat diteruskan dengan rmengencerkan specimen 10X atau 100X lebih rendah dari pada ragam LB yang sudah dikerjakan, asil MPN yang diperolch ditalikan dengan 10 X atau 100 X. + Penghitungan index MPN dapat pul dilakukan dengan formula Thomas : (A+B+0)X(VEXN)"*X 100 ‘A-= jummlah tbung (+) gas penanaman kelompok pertam, jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok kedua. smlahtabung (+) gas penanaman Kelompok ketiga. ‘$= jumlah mi sampel yang dtanam, IN = juumlah ml sampel yang negatif. * Contoh untuk Ragam IL G+24 DX (VGIIX TD) *X 100 = 94,91. * Sisa pengenceran pada pemerksaan angla kuman dapat digunaian untuk pemeritsean MPN. PERITUNGAN BACTERI ENTEROPATHOGENIC DAN BACTERI INDICATOR DI DALAM MAKANAN DENGAN METHODE PLATE ‘A. BACTERI YANG DIHITUNG + L.Bacter indicator : Coliform - Escherichia coli ~ Enterococci 2.Bacteri enteropathogenic = Vibrio parahaemolytica + Stapliylococeus aureus = Bacillus cereus + Clostridium perfringens 3.Mould & Yeast (kapang dan khami) B, PENGENCERAN SAMPEL : Dilakukan seperti pada pemeriksaan angka kuman, atau sisa pengenceran untuk angka kuman boleh juga digunakan. 106 Dipindai dengan CamScannerC.PENUANGAN MEDIA DAN MEDIA YANG DIGUNAKAN : * Tiap-tiap pengeneeeran sampel 10 X, 100 X, dan 1000 X diambil masing-masing 1 ml dimasukkan kedalam petrie dish sterl (1 serial pengenceran ada 3 dish). * Kepada 1 seri pengenceran dituangi media sesuai dengan jenis pemeriksaan yang akan dilakukan, Jumlah media yang dituangi adalah 15 - 20 ml per-dish, + Dicampur sampai homogen,diamkan diaas meja ampai agar-agaraya membeku. * Kemudian diinkubasikan dengan posisiterbalik, pada sul 37° C selama 48 jam. * Jenis media yang dituangkan untuk pemeritsaan : 1. Coliform : Violet red bile agar. Escherichia coli: Tergitol 7 agar Enterococci : KF streptococcus agar Vibrio parahaemotytica : Thiosulfate Citrate Bile Sucrose agar + NaCl 6% Staphylococcus aureus : Mannitol Salt agar + 5% Egg yolk Bacillus cereus : Bacillus cereus agar Egg yolk Clostridium perfringens : Handfort agar modified Mould de Yeast : Potato Dextrose agar (inkubasi 30 ~ 37° C 45 hari, * Control sterltas dibuat 1 petrie dish steril pemeriksaan, eaawayy D. PERHITUNGAN KOLONI : i 1 ml pelarut, dituangi media yang digunakan untuk tiap-tiap Perhitungannya seperti pada angka kuman, hanya Saja koloni yang dihitung adalah koloni yang sesuai dengan ciri- tung, iri bacteri yang dikitung. ‘TABEL MPN Sl MENURUT FORMULA THOMAS JUMLAH TABUNG (+) GAS PADA PENANAMAN INDEX MPN 3X10 1X tml 1X Om PER 100 ml ° ° 0 ° ° 0 1 2 ° 1 o 2 ° 1 1 4 1 ° ° a 1 0 1 4 1 1 ° 4 1 1 1 7 2, ° ° $ 2 ° 1 8 2 1 ° 8 4 i 1 0 3 ° ° 9 3 ° 1 2 3 1 ° 2 3 1 1 16 2 ° ° "7 4 ° 1 a a 1 ° 2 4 1 1 n 5 ° 0 a 5 ° 1 4 5 1 0 265 5 1 1 7979 107 i Dipindai dengan CamScanner‘TABEL MPN 333 MENURUT FORMULA THOMAS Ef Z8lesearRnRaRaRRRRTRATES ReesSReage ER ® e E Pees rerestetet aie) loa airs toy ai estry con) ech tela. et ee Bla Blg)e oc oe - ee nn anananammocce ee z= Ele g\e 1 ee ze Zglomeaneanveongangarrasg eegaeegeeags ik fe iE mA nec madian mann ne a awieminmioim aiatetin ns se Els z 2 Blelec oon mn mn naman e scorn nanan e|% Ele x 108 Dipindai dengan CamScanner—_ ‘TABEL MPN $55 MENURUT FORMULA THOMAS Rl toe a a yom So a heere ae as = ee MR ee A eR 28 zE =z E[slo -anwnonanenonanenenanenenamenon nae & i BIE AN ee ee ree ear c nenenfenee e enea $|5 ele aie: Late 2 Bee a | we eee eee eee eee 5 | a eee Ea FBlone mr anenn ane enon teroattr oat nbaanee zz es [Ejecnoceccs cece ne ceeceeeeeee ez es Ble]o co coo ope nem e eee eT ai Ele Hie| orstojere ee ectete te tole teres eres s ererem lolol a eeiio or 109 ® Dipindai dengan CamScanner‘TABEL MPN 555 MENURUT FORMULA ‘THOMAS ®t 3 wSRSfeeZTVPASHRAFHAKRARAKRARRRARARRARKRARRRRA de ae Ge eg ep ne : = Blg|oo oo oo -- ~~~ nnnnnnnn eer e enna es Ele Be cra alata tet ntntstey tote va eitetetata fava atte afin aia in a Bx ge Galan ant krone eat SSAaN HAART HANARSASNARR ik fz Els We eee 2 ee ae Ble Blzl]ecc ose ne nn nna eee een zo ele BE EM ics sence ene Fecbeon cafes eal ec eveay cobs elon ate Se engealeorene te 5 |< 110 ® Dipindai dengan CamScanner‘TABEL MPN S55 MENURUT FORMULA THOMAS et a FBlaAeSRSRVARSERRSKRSERBRRGSKRARTELSRHZRIS ik z _\z Melee ge igs ek ge cc ee ee : z B\Z|oo coc on eH remnant ee eT 25 Ela Ale) ne enna ale ann onwinGmnnandnhn goin nom no 14 v7 a m4 28 3 8 a 25 28 2 36 2 6 29 33 37 4 7 30 4 38 a 46 2 36 40 “4 48 3 3” a 46 50 55 59 ‘5X01 mi | Pet 100 ml 3X1 mal 0 0 0 ° 0 ° 1 1 1 1 1 1 2 a 2 2 2 a 3 3 3 I 3 3 4 4 4 4 4 4 Jumlah TB. (+) Gas pd penanaman | iajey wevveve vee e ere rere etree 3X mi mw ® Dipindai dengan CamScanner