Biotecnologia

Áreas e campos de atuação

 Biotecnologia
DEFINIÇÕES:
• Em geral:
• “Geração de produtos comercializáveis utilizando seres vivos
ou parte deles”.

Medicamentos
Combustíveis
Alimentos e bebidas
Tratamentos médicos
Cosméticos
etc
 Biotecnologia
Micro-organismos
Plantas
DNA, RNA, plasma sanguíneo,
Animais
proteínas, produtos etc

• “Aplicação da ciência e engenharia para uso

direto ou indireto de organismos vivos ou
parte deles, nas suas formas naturais ou
modificadas, de maneira inovadora, para a
produção de bens e serviços ou para melhoria
de processos industriais existentes”.
Técnicas de ponta de biologia
OGMs: Medicamentos, vacinas, molecular, imunologia,
Recombinantes, biocombustíveis, insumos para engenharia, citologia etc
transgênicos etc medicina diagnóstica,
tratamentos médicos
 Campos de atuação da Biotecnologia

Áreas
Saúde Saúde Agrone- Meio
principais humana animal gócios ambiente

• Diagnósticos • Veterinária • Plantas • Biorremedia-

• Fármacos • Reprodução ornamentais e ção
• Fitofármacos animal medicinais • Tratamento de
• Vacinas e • Vacinas • Bioinseticidas resíduos
soros • Aquacultura • Biofertilizantes • Biocombustí-
• Identificação • Identificação • Transgênicos veis
genética genética • Recuperação
• Transgênicos de florestas
Instrumental Fornecedores Outros

Atividades Pesquisa básica Equipamentos Serviços

sinérgicas e insumos

Fonte Biominas e Instituto Inovação

Biotecnologia e saúde humana

GLOSSÁRIO:
Hemoderivados:
produzidos pela
separação
industrial de
plasma
sanguíneo.
Imunoglobulina:
utilizada no
tratamento de
AIDS, outros
déficits
imunológicos,
doenças auto-
imunes e
diversas doenças
infecciosas.
 INDÚSTRIAS FARMACÊUTICAS QUE ATUAM NO BRASIL E
OS FÁRMACOS BIOLÓGICOS

Ideia central: Brasil gasta cifras elevadas com importações de fármacos

biológicos para distribuí-los gratuitamente em hospitais e farmácias de alto custo.
O governo federal incentiva a utilização da expertise brasileira já estabelecida
devido a produção de similares, para fazer no país, fármacos biológicos que
sejam “cópias” dos originais (neste caso chamados de biossimilares). Fato que
diminuiria os custos de importação, desenvolveria este setor no país e criaria
empregos.

EXEMPLOS DE INDÚSTRIAS
• BLAŪ: Cotia/SP,

• BIONOVIS (associação entre Aché, EMS, Hypermarcas e União Química): em

construção Rio de Janeiro/RJ,

• ORYGEN BIOTECNOLOGIA (associação entre Biolab e Eurofarma): construção

planejada para Campinas/SP,

• CRISTÁLIA: Itapira/SP, inaugurada em ago/2013,

• LIBBS BIOTEC: divisão Biotecnologia inaugurada em 2016 em Embu das Artes/SP,

 Produtos biotecnológicos e fármacos

• Muitas indústrias farmacêuticas estão investindo em

medicamentos BIOLÓGICOS ou BIOTECNOLÓGICOS
devido aos altos custos de comercialização,

• Grandes Indústrias Farmacêuticas: migrarão para o

segmento, como forma de compensar a perda de
patentes.
• Exemplo:
– Pfizer teve a patente expirada em 2010-2011 do Viagra e
Lipitor, dois blockbusters históricos. Para compensar as
perdas lançou o Enbrel: este novo blockbuster é um
fármaco biológico para artrite reumatoide.
 Produzindo uma fármaco recombinante
• Ex. hGH (hormônio do crescimento humano)
• Indicação: nanismo (prevalência: 1 em cd 15 mil crianças)
• hGH é produzido na glândula pituitária (ou hipófise, localizada no
cérebro), vai para a corrente sanguínea, atinge o fígado e produz os
peptídeos IGF3 e IGF1 que estimulam o crescimento.
Gene humano
DNA do horm.
bacteriano crescimento

Escherichia coli (bactéria hospedeira)

Plasmídeo bacteriano

Extração do hGH por hGH é produzido no espaço periplasmático

choque térmico e
purificação por
cromatografia
 Biofármacos mais vendidos
Biofármaco Indicações Preço

G-CSF recombi- Tratamento de neoplasias não R$ 2677,67

nante/Filgrastim mielóides. O fator de crescimento
(fator de crescimento hematopoietico atua no aumento da
hematopoiético da formação dos granulócitos
classe II) neutrófilos.
Rituximabe* Anticorpo monoclonal quimérico que R$ 3.052,27
trata artrite reumatóide e Linfomas
não-Hodgkin.
Etanercepte artrite reumatóide e artritre crônica R$ 3.052,27
recombinante juvenil (semanal)
(Enbrel®)
Alfa-TNF* Anticorpo monoclonal que trata R$ 3.449,41
(Remicade®) Artrite reumatoide, Espondilite
anquilosante, Doença de Crohn,
Doença de Crohn fistulizante, Artrite
psoriásica, Psoríase, Colite ou
retocolite ulcerativa.
 Biofármacos mais vendidos
Biofármaco Indicações Preço
Alfa-EPO Anemia causada por insuficiência renal crônica,
(alfaepoetina tratamento auxiliar de pacientes com AIDS e que
recombinante) fazem quimioterapia para câncer.
Darbepoetina alfa Estimulante de eritropoese em pacientes com
(eritropoetina insuficiência renal ou sob tratamento com
recombinante) quimioterápicos anticancerígenos.
Interferon alfa Hepatite B e C, o interferon alfa (glicoproteína R$ 6000,00 (30
peguilado1 + ribavirina2 produzida pelo linfócito B) age diretamente contra o dias de
e Interferon alfa-2a vírus e aumenta a resposta imune. tratamento)
peguilado + copegus

Interferon beta-1a formas recidivantes de esclerose múltipla R$ 5832,14

(30 dias de
tratamento)
Interferon beta-1b esclerose múltipla por surtos de exacerbação- R$ 6171,91 (30
remissão dias de
tratamento)
1Peguilação: adição de uma molécula de polietilenoglicol (PEG) que faz com que o interferon não seja reconhecido
pelo sistema imune e fique por mais tempo em contato com o vírus. O Interferon peguilado pode ser ministrado
apenas 1 X por semana, ao invés de 3 X, como ocorre com o não peguilado.
2Ribavirina: fármaco antiviral (para vírus de RNA e DNA), sozinho não tem ação contra os vírus, age apenas em

associação com interferon. Não é um biofármaco. A Ribavirina também é conhecida como Copegus.
Fármacos biológicos
 Produtos Biotecnológicos

Segundo a Anvisa (RDC n. 55, dez /2010):

“Produto farmacêutico de origem biológica, obtido por

processo biotecnológico, com finalidades profiláticas,
curativas, paliativas ou para fins de diagnóstico in vivo”.

Incluindo: soros hiperimunes, hemoderivados, biomedicamentos (obtidos

por fluidos biológicos ou de tecidos de origem animal e por
procedimentos biotecnológicos), anticorpos monoclonais, medicamentos
contendo micro-organismos vivos, atenuados ou mortos.
 FÁRMACOS BIOTECNOLÓGICOS
 Princípios gerais:
 Maioria é produzida por biossíntese em células vivas.
 Diferem dos fármacos tradicionais (origem sintética).

• Biológicos ou biofármacos típicos:

oProduzidos em cultura de células geneticamente modificadas (OGMs).
o A maioria tem estrutura proteica e estas não podem ser sintetizadas por
métodos tradicionais.
o Maior fonte de inovação atual da indústria farmacêutica mundial.

 Produtos naturais (não são fármacos biológicos):

 Organismo produtor não teve nenhuma alteração genética (no DNA).

OGMs: organismos geneticamente modificados

 FÁRMACOS BIOLÓGICOS
• Tratam doenças cuja terapia com fármacos sintéticos não é eficaz.
• Exemplos:
o Diabetes, hepatites, artrite reumatoide, câncer, infarto do miocárdio, derrames e
tromboembolismos.

• Produtos heterogêneos:
o Hormônios: insulina, hormônio do crescimento, Liraglutida etc.
o Fatores de crescimento: eritropoietina e fator de crescimento de leucócitos
(Filgrastima).
o Citocinas: Interferons e Interleucinas.
o Enzimas trombolíticas: ativador do plasminogênio tecidual (Alteplase,
Reteplase).
o Fatores de coagulação: fatores VII, VIII, IX.
o Anticorpos monoclonais: Infliximabe, Rituximabe etc.
o Proteínas de fusão: Etanercepte, Abatacepte.
Fármacos biológicos
Esclerose múltipla:
Interferon beta recombinante
(melhora na qualidade de vida,
podendo diminuir crises ou
relapsos em 30%)

Diabetes:
Análogos da insulina permitem
um melhor controle dos níveis
de glicemia e reduzem as
complicações da doença.

Artrite reumatóide:
Novas bioterapias revertem a
degeneração das articulações
após 48 h após o início do
tratamento.

Câncer:
Novos agentes só atacam as
células tumorais e são menos
tóxicos que a quimioterapia.
 FÁRMACOS
SINTÉTICOS
• Produzidos artificialmente,
• Moléculas simples (baixo P.M.),
• Poucas centenas de átomos,
 Estrutura química conhecida,
 Custo menor,
 Podem ser replicados de maneira idêntica,
 Intercambiáveis e estáveis,
 Alvo menos seletivo,
 Manufatura mais simples (baixo custo).
BIOLÓGICOS
• Produzidos em seres vivos,
• Moléculas complexas e heterogêneas
(alto P.M.),
• Milhares de átomos,
 Alto custo (processo de produção caro),
 Instáveis: suscetíveis a alterações no
armazenamento,
 Não podem ser replicados (não
intercambiáveis)
 Alvo mais seletivo (proteína age em um
ponto específico do sistema imune
essencial para o controle de uma
doença por exemplo).
 Manufatura mais trabalhosa (alto
custo),
 Fármacos
sintéticos X biológicos
β-Interferon
Acido acetil salicílico

Síntese química
R$ 55,58 (Aspirina®)

Produzido em E. coli modificada por

engenharia genética
R$ 5995,95 (Avonex®)
Principais diferenças entre fármacos sintéticos e
biológicos
 FÁRMACOS BIOLÓGICOS DE PRIMEIRA E
SEGUNDA GERAÇÃO
Vencimento das Vendas mundiais
Produtos patentes em 2008 Nº produtos
(US$ bilhões)
Insulinas,
interferons, 2007-2015 40,5 13
eritropoetina
(primeira geração)

Anticorpos
monoclonais 2015-2020 45,1 8
(segunda geração)
 FÁRMACOS BIOLÓGICOS: aspectos econômicos

• Representam cerca de 20% do setor farmacêutico global,

• Cresce a uma velocidade cinco vezes maior que o mercado de fármacos

sintéticos (20% ao ano),

• Estima-se que 50% dos fármacos em desenvolvimento sejam biológicos,

• Produção nacional incipiente,

• Custos elevados com importação para suprir demanda nacional.

 Principais técnicas de produção dos fármacos
biológicos
Muito
importante

• TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE: Conjunto de técnicas que permite

alterar a constituição genética de células.
o Sistema de expressão em Escherichia coli
 Proteínas simples. Ex. Insulina e Interferon

o Sistema de expressão em Saccharomyces cerevisiae ou CHO (cél. de

ovário de hamster chinês)
 Proteínas glicosiladas. Ex. Liraglutida e Etanercepte.

• TECNOLOGIA DOS HIBRIDOMAS

o Anticorpos monoclonais: derivados de um único clone de linfócitos B
com atividade contra um epítopo de um antígeno
EXEMPLOS DE MEDICAMENTOS BIOLÓGICOS E CÉL PRODUTORAS

PRINCÍPIO ATIVO INDICAÇÃOI Cél produtoras

Insulina Controle hiperglicêmico da diabetes tipo I e II E. coli

Liraglutida Aumento da secreção de insulina no pâncreas na diabetes tipo II S. cerevisae

α-interferon Induzem resposta imunológicas contra os vírus da Hepatite C, HPV, Sarcoma de E. coli
Kaposi associado a HIV
β-interferon Ação imunomoduladora na Esclerose múltipla E. coli
Eritropoietina Tratamento da anemia causada por baixo número de eritrócitos na insuficiência CHO
renal crônica, pacientes em quimioterapia ou em tratamento da AIDS com
Zidovudina
Filgrastima Redução da neutropenia em pacientes em quimioterapia para neoplasias não- E. coli
mieloides e naqueles submetidos à terapia mieloablativa seguida de transplante
de medula óssea.
Interleucinas Regulador do sistema imune para o tratamento do carcinoma de rim, melanoma E. coli
metastático e em formas graves de artrite reumatoide.

Alteplase Ação trombolítica em infarto agudo do miocárdio, embolia pulmonar grave e CHO ou E. coli
acidente vascular cerebral isquêmico.
Etanercepte Media a inflamação aguda na artrite reumatoide e na artrite idiopática juvenil, CHO
espondilite anquilosante e psoríase em placas.
 TECNOLOGIA DO DNA
RECOMBINANTE
Sistemas de expressão em E. coli
o A ligação de um fragmento de DNA de interesse
(chamado de inserto) em uma molécula de DNA que recebe
o nome de vetor (ou plasmídeos), para formar o chamado
DNA recombinante.

o A molécula de DNA recombinante é introduzida numa

célula hospedeira compatível, numa processo chamado
transformação. A célula hospedeira que adquiriu a
molécula de DNA recombinante é agora chamada de célula
transformada. Um único transformante, em condições ideais
produz milhares de cópias de DNA recombinante.
 Célula com o gene de
interesse Bactéria Tecnologia do
Cromossomo
DNA
Síntese
proteica
bacteriano recombinante:
visão geral

Proteína de
interesse

DNA recombinante

Transformação

Multiplicação

Clones de
bactéria

Bactéria será uma manufatura

para produção de um fármaco
 Ferramentas e técnicas básicas para produção de
um DNA recombinante em bactérias
• Plasmídeos (vetores): moléculas de DNA dupla fita com os elementos
necessários para sua replicação e pelo menos um gene que confere
resistência à antibiótico. Variam de 5000 a 400 mil pb e estão presentes
em duas ou mais cópias por célula.
 Clonagem: processo que produz indivíduos idênticos entre si.

 Transformação bacteriana: introdução de DNA recombinante numa

célula hospedeira compatível.

 Enzimas de restrição (endonucleases de restrição): reconhecem

sequências específicas de 4 a 8 pares de bases (pb) na molécula de DNA e
fazem dois cortes, um em cada fita.
 DNA ligase: promove a ligação dos fragmentos de DNA em vetores
previamente clivados por uma enzima de restrição.
 Inserto: fragmento de DNA de interesse que será ligado a uma outra
molécula de DNA (vetor ) para formar o DNA recombinante.
 Tecnologia do DNA recombinante

Bactéria
Vetor como plasmídeo
é isolado

Cromossomo Plasmídeo
bacteriano
Várias opções de
plasmídeos são
comercializadas
Obtenção do DNA de interesse (inserto)

DNA é clivado com DNA contendo o gene de

enzimas de restrição interesse
em fragmentos

Gene de
interesse
 Enzimas de restrição

Enzima de restrição

a b

c d
 Obtenção de insertos sintéticos
Exemplo de um gene eucarionte
promotor íntron éxon terminador

P I E I E T

TATATGACGTCCCTACGGCTAATCGCCTTTTT
Síntese artificial

P E E T

TATATCCTACAATCGCCTTTTT
Gene otimizado para utilização em bactérias (procariotos)
 Gene heterólogo (inserto) é inserido
no plasmídeo utilizando enzimas de
ligação

DNA recombinante inserto

(plasmídeo + inserto)

Plasmídeo é inserido na
célula bacteriana

Célula hospedeira
Transformação
 Métodos de transformação bacteriana

Bactérias
Escherichia coli competente
(tratamento com cloreto ou fosfato de cálcio)

Plasmídeo e inserto

Transformação por Transformação por

choque térmico:
eletroporação
Incubação no gelo
seguida por
incubação a 42°C
 Clonagem
Multiplicação do DNA recombinante na bactéria hospedeira

Clones:
indivíduos geneticamente idênticos à bactéria inicial.
Métodos de seleção de recombinantes

lacZ inserto Seleção por

coloração das
colônias

plasmídeo

Gene de
resistência
a antibiótico

Meio de cultura com

Xgal: colônias brancas
receberam o inserto
(pois gene lacZ foi
interrompido)
 Métodos de seleção de recombinantes

Bactérias resistentes à antibiótico

lacZ inserto

Bactéria SEM plasmídeo Bactéria COM plasmídeo

com DNA recombinante com DNA recombinante

NÃO cresce em meio de Cresce em meio de

cultura com antibiótico cultura com antibiótico

Plasmídeo com Plasmídeo religado

inserto (sem inserto)
 Produção da
insulina humana
recombinante

Insulina A: 21 aminoácidos
Insulina B: 30 aminoácidos
Humulin R®:
Insulina regular
Produção da insulina humana recombinante

Promotor Gene lacZ

Gene da
insulina
subunidade A
Uma vez ativado
Gene de resistência pelo promotor é
transcrito e
a antibiótico traduzido pela
bactéria
 Modificações na molécula da insulina e diferentes formas
comerciais
Insulina Lispro

Insulina Asparte

Ação rápida

Insulina Glulisina

Insulina Glargina

Ação prolongada
Insulina Detemir
 Produção da Beta interferona 1b Betaferon® : Bayer Schering Pharma.
recombinante Indicação: esclerose múltipla.

plasmídeo E. coli contendo seu

próprio cromossomo

DNA
recombinante
3 5
E. coli contendo a
molécula de DNA
recombinante 6
fibrobasto 2

7
1
E. coli produz o Interferon
interferon beta 1b beta 1b
purificado

Produto final
Do laboratório à indústria (processo biotecnológico)

FASE DE LABORATÓRIO

FASE INDUSTRIAL
(LARGA ESCALA)
Esterilização

Esterilização

biorreator

PURIFICAÇÃO
Anticorpos monoclonais
 Anticorpos monoclonais
(sigla em inglês: Mabs)

o Nova opção para tratamentos de tumores de pulmão,

mama, colorretal e hematológicos (leucemias e linfomas
principalmente),

o Tratam também doenças inflamatórias agudas (como

artrite reumatóide), vírus (VSR) e até asma,

o Possuem alta seletividade ao alvo (contra antígeno

específico de um determinado tipo de célula tumoral) e por
isso são menos tóxicos do que quiomioterapia tradicional
(que não atua de maneira seletiva),
 Recordando um pouco de imunologia:
Anticorpos são imunoproteínas produzidas pelos plasmócitos
(linfócitos B secretores de anticorpos) que atuam
reconhecendo e ligando-se à um único antígeno complexo
(presentes em bactérias, vírus ou células tumorais).
 Recordando um pouco de imunologia:
Sítio de ligação ao antígeno

Um antígeno possui
diferentes epítopos e vários
anticorpo anticorpos (um específico
Superfície da
célula a ser para cada epítopo), são
combatida secretados pelos
Sítio de
ligação ao plasmócitos a resposta do
antígeno
sistema imune é
naturalmente policlonal, ou
seja utiliza diferentes
anticorpos (chamados de
anticorpos policlonais),
Diferentes
para um mesmo antígeno.
epítopos do
antígeno
 Anticorpos monoclonais
o Utilizam a ideia de empregar no tratamento de uma
doença uma substância que se ligue apenas ao alvo sem
destruir as células normais.
o Possível a partir de 1975 com a “Técnica de hibridização
celular somática” (Tecnologia dos hibridomas).

plasmócitos
Plasmócitos derivados de um
único linfócito B produzem
anticorpos monoclonais, que
Anticorpo são portanto idênticos entre si.
monoclonal
 Como produzir em grandes quantidades e em laboratório
apenas um tipo de anticorpo?
Antígeno
Células do mieloma

Anticorpo
Camundongo Linfócitos B Hibridoma monoclonal

Tecnologia dos Hibridomas. Um camundongo é sensibilizado com antígeno e produz

linfócitos B (produtores de anticorpos policlonais contra os epítopos do antígeno), que são
fundidos com células tumorais (utilizadas por terem crescimento indefinido) e podem crescer em
laboratório secretando quantidades imensas de anticorpos. Cada hibridoma pode produzir
quantidades idênticas de um único anticorpo, chamado de monoclonal.
 Tecnologia
dos
1. Células tumorais são injetadas no camundongo e
Hibridomas estimulam a produção de linfócitos B que produzem
(com mais diferentes tipos de anticorpos
detalhes)

2. Células de mieloma
imortalizadas (crescem em
laboratório) são coletadas

Anticorpos Células de
Mieloma
linfócitos B

3. Os linfócitos B fundem-se
Hibridoma A
com as células de mieloma
formando células híbridas que
produzem anticorpos
Hibridoma
B
4. Hibridomas que produzem o Hibridoma C
anticorpo necessário é
clonados para produzir em
quantidades ilimitadas
anticorpos monoclonais.
 Principais anticorpos monoclonais utilizados e indicações

Nome Nome Laboratório Classifica- Indicações

genérico comercial ção
Rituximabe Rituxan® e Roche Antineoplásico Tratamento de linfomas
Mabthera® não-Hodgkin e leucemias

Infliximabe Remicade® Johnson & Antinflamatório Artrite reumatóide

Johnson (diferentes formas), doença
de Crohn e espongilite
anquilosante
Trastuzumabe Herceptin® Roche Antineoplásico Tratamento de câncer de
mama inicial e metatástico

Palivizumabe Synagis® MedImmune Antiviral Prevenção de complicações

do vírus VSR em pacientes
pediátricos
Adalimumabe Humira® Abbott Antinflamatório Artrite reumatóide
(diferentes formas), doença
de Crohn e espongilite
anquilosante
Bevacizumabe Avastin® Genentech e Antineoplásico tratamento de cânceres
Roche metastáticos ou recorrentes
de pulmão (não pequenas
cel), colorretal, mama e
renal.