Siembra en medios de cultivo El asa bacteriolégica es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino que puede terminar en aro, en punta (pinche) o en triéngulo (rastrillo) Se emplea para transportar 0 arrastrar o trasvasar indculos (pequerio volumen que contiene microorganismos en suspensién) al medio de cultivo (sdlido 0 liquido) o de tin medio a oto (resiembra). También sirve para la realizaci6n de frotis La cantidad de indculo que se trasvasa viene determinado por el diametro del aro, que se encuentra calibrado y normalmente oscila entre 0,1 y 0,01 ml. La pipeta Pasteur per cultivo, placas, etc. tomar material y depositarlo en vidrios, medios de Asas bacteriolégicas Pipeta Pasteuri n placas Siembra por aislamiento 0 agotamiento en PI : ilizada (se debe quemar hasta un 75% jembra, previamente ester 2 " on ee cere ‘se toma una muestra del cultivo de microorganismos y 20 a ee 0O oun area pequefia de la superticie de la placa con agar, en forma se extiel 2 : de estrias juntas, pero sin hacer presion para no dafar el agar. ; la tapa y después de rozar la siembra réalizada ‘evo por otra zona de la placa haciendo nuevas ucesivamente, flameando y enfriando el asa al bras en estria. : Se flamea el asa, se enfria en |: previamente, se extiende de nu estrias, Este proceso se repite si comienzo de las sucesivas siem| Mediante esta técnica de aislamiento o agotamiento cada vez mayor de una muestra en un medio de cultivo genera la separacion de las células que van a dar lugar a colonias aisladas (Ver Grafico 1) nese eee Siembra en medio liquido Con el uso del asa se levantara una asada del material y lentamente se introducira en el tubo, inclinando suavemente el contenido hasta que sobre una pared interior encuentre al asa. : dete gd Ul (Ver Grafico 2) Siembra por trasplante o repiique Se utlliza para Pasar una colénia gislada de una poblacién mixta a otro medio para #2 obtener-un cultivo puro; nanitener un thictoorganismo conocido cambiado de ineaip de cultivo; estudiar las caracteristicas de los microorganismos para luego roi ler a Su identificacion, o inocular £n.un medio para promover la produccion guna sustancia éspécifica. La-si mbra. por trasplante consiste enla transferencia de colohias aisladas y r habia é isladas ff i S liquidos, Semisélidos 0 sélidos. a : Mles, a medios de cultivo ya sean Para ello se deb jonar Seleccionar una coloni: tubo nee I 1 i nla separada de las demas ya sea Pl con ae microbiano. Flamear el asa Y enfriarla, tee { F i Ba remanes nel asa y transferirla a la superficie de u; di Tae & la transferencia quemar el asa de siembrg MeN ra. Usando el asa de sine ae a de siembra ino ——siguiente-forma- cular las cepas en los Medios de cultiva delaa) En el medio semi-sélido introducir el asa de siembra al interior del tubo y retire por el mismo lugar (picadura profunda) - b) En el agar realizar estrias c) En el agar sdlido inclinado en pico de flauta introducir el asa en el interior del tubo, luego trace estrias sobre la parte inclinada (picadura y estrias) d) En el caldo nutritivo, agitar la aguja inoculada en el medio de cultivo Siempre se debe trabajar cerca de la flama! Elupen se manga con al mehique de ta mmo dereeta.>- vlodificado de Atlas RM. Principles of microbiology, St Louis, TECNICAS DE COLORACION PARA LA MICROSCOPIA OPTICA Preparacion de los extendidos Los métodos de coloracién se utilizan ya sea en forma directa con las muestras del paciente o se apli- can a los preparados a partir del desarrollo de los mi- croorganismos en cultivos. En la parte VII se presen- tan los detalles sobre los procesamientos de las mues- tras y en la mayoria de los casos la preparacion de cada muestra incluye la aplicacion de alguna parte de la muestra sobre un portaobjeto (es decir, “extendi- do”) para una evaluaci6n microsc6pica ulterior. Por lo general, las muestras se colocan sobre el portaobjeto empleando un hisopo que contiene el material del paciente 0 con una pipeza dentro de la cual se encuentra la muestra de liquido aspirado (fig. 9-2). Se coloca una gota (si la muestra es liquida) del material a colorear o se rota (si esta en un hisopo) so- bre la superficie de un portaobjeto limpio y seco. Es importante evitar la contaminacién de los medios de cultivos; una vez que el hisopo tocé la superficie de un portaobjeto no estéril no debe utilizarse para la inoculacién posterior de los medios de cultivo. En el caso de la coloracién de microorganismos que crecen en cultivos, puede utilizarse una aguja es- téril para transferir una pequefia cantidad del cultivo desarrollado en un medio sélido a la superficie del portaobjeto. Este material se emulsiona en una gotade agua o soluci6n fisiolégica estéril sobre el por- taobjeto. En el caso de cantidades pequefias que po- drian perderse, incluso en una gota de solucién fisio- légica, puede utilizarse un aplicador de madera esté- ril para obtener el material; luego éste se frota direc- tamente donde puede observarse con facilidad. El material colocado sobre el portaobjeto que va a co- lorearse se deja secar y se fija al portaobjeto colocan- dolo sobre una platina caliente (a 60°C) durante por lo menos 10 minutos, o cubriéndolo con metanol al 95% durante 1 minuto. Para examinar los microor- ganismos que se desarrollan en un medio liquido, se aplica una muestra aspirada de los caldos de cultivo sobre el portaobjeto, se seca y se fija antes de la co- loracién. La preparacion de los extendidos varia de acuerdo con el tipo de muestra a procesar (véanse capitulos en la parte VII que se refieren a los tipos de muestras especificas) y los métodos de coloraci6n a utilizar. No obstante, la regla general para la preparacién del extendido es que debe aplicarse la cantidad suficien- te sobre el portaobjeto de modo de maximizar las posibilidades de detectar y diferenciar los microorga- nismos. Al mismo tiempo, debe evitarse la aplicaci6n de cantidad excesiva de material que pueda interferir con el pasaje de luz a través de la muestra 0 que pue- da distorsionar los detalles de los microorganismos. Por ultimo, el método de coloracién a utilizar esta determinado por el tipo de microorganismo buscado. Como se menciona en el cuadro 9-1, la microsco- pia Optica tiene aplicaciones para bacterias, hongos y parasitos. Sin embargo, los colorantes utilizados pa- ra estos grupos microbianos difieren mucho. Los des- tinados sobre todo a la observacién de parasitos y hongos por microscopia Optica se tratan en los capi- tulos 52 y 53, respectivamente. Las coloraciones pa- ra la observacion de bacterias, la coloraci6n de y las coloraciones para bacilos acido-alcohol re tentes se tratan en este capitulo.| , Fig. 9-2. Extendidos realizados por rotacién de un hisopo (A) y depédsito con pipeta (B) de la muestra del paciente so- bre un portaobjeto de vidrio.