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Informe 4
Informe 4
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RESUMEN
A B S T R A C T:
The analysis of iron by visible spectrophotometry is performed by the formation of an iron
complex with a hydroxylamine solution, which produces an orange-red solution. The amount of
iron in the sample is determined by measuring the absorbance of the solution at a specific
wavelength, usually 510 nm. To perform the analysis, standard solutions of iron and a blank
solution are prepared and treated in the same manner as the sample. The absorbance of each
solution is then measured and a calibration curve is constructed and used to determine the
amount of iron in the sample. This analysis is useful in a variety of applications, such as
determining the amount of iron in foods and dietary supplements.
Keywords: Amount of light absorbed, hydroxylamine, dietary supplements.
1. INTRODUCCIÓN:
El análisis de hierro por espectrofotometría visible es una técnica analítica ampliamente
utilizada en diversos campos, incluyendo la industria alimentaria y de suplementos
dietéticos. En este informe de laboratorio, se llevó a cabo el análisis de hierro mediante la
técnica de espectrofotometría del visible, con el objetivo de preparar soluciones de hierro,
construir una curva de calibrado, seleccionar la longitud de onda de trabajo, analizar el
contenido de hierro en un alimento por el método de la Fenantrolina, y evaluar
estadísticamente los resultados obtenidos. El objetivo general de este informe es mostrar
los procedimientos realizados y los resultados obtenidos en el análisis de hierro por
espectrofotometría visible, así como también demostrar la utilidad y precisión de esta
técnica analítica.
El método de la fenantrolina se basa en la reducción del hierro al estado ferroso mediante
el uso de cloruro de hidroxilamina como reactivo orgánico en un medio ácido con una
solución buffer ajustada a pH 3.5. Después, se agrega el reactivo complejante 1,10
fenantrolina, formando un compuesto complejo de hierro fenantrolina de color rojo
anaranjado. Este compuesto se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de
510 nm para determinar cuantitativamente la cantidad de hierro presente. La formación
del complejo se observa en un margen de pH entre 3 y 9, pero se recomienda un pH
cercano a 4 para evitar la precipitación de diversas sales de hierro.
2. METODOLOGÍA
Para preparar soluciones estándar inestables para un análisis. Se requirió 5 matraces
aforados de 50 ml que deben etiquetarse del 1 al 5, y se agrega 0.5 ml, 1.0 ml, 1.5 ml y
2.0 ml de la solución Stock a las fiolas 1 a 4, respectivamente. A la quinta fiola se agrega
agua destilada (solución blanca). Luego, se agrega hidroxilamina, fenantrolina y solución
buffer a cada fiola y se diluye con agua destilada. Las soluciones se dejan reposar durante
30 minutos y se obtiene una solución de color rojo anaranjado. Por último, se describe
cómo preparar una muestra para su medición en el aparato. Se debe pesar la muestra,
calcinarla, disolver en HCl 6 M, diluirla con agua destilada, filtrar si es necesario, y
medir una alícuota de 25 ml que se trata de la misma manera que las soluciones estándar
para obtener el color, lista para la medición.
A. MATERIALES:
● Crisol
● Pinzas
● espátula
● Pipetas
● Embudo
● Papel Filtro
● Fiola de 100mL
● Fiola de 50 mL
● Muestra de lentejas
● Probeta
● Becker
- REACTIVOS
● Solución de Hidroxilamina.
● Solución buffer.
● Solución de fenantrolina.
● Solución Stock de hierro.
- APARATOS
● Espectrofotómetro.
● Cubeta: 1 Cm. De trayecto óptico.
● Región de trabajo: Espectro visible.
● Longitud de onda: 510 nm.
● Blanco: Solución de reactivos y disolvente menos hierro.
- PROCEDIMIENTO:
Preparación de las soluciones estándares
Se utilizó 4 fiolas de 50 mL las cuales se rotula del 1 al 4 y se colocó las
siguientes concentraciones (TABLA N°1).
Preparación de la muestra
Se pesó con anticipación 6g de lenteja y se colocó en la mufla a 550°C por 3
horas. Posteriormente en un becker se añadió las cenizas de la muestra y 10 ml
de HCl 6M; en un Hot Plate colocamos el becker y lo calentamos hasta que esté
semi seco, añadimos con una probeta 20 ml de agua destilada, calentar ( no es
necesario que de hervor), para una mejor preparación lo filtramos con ayuda de
un embudo y un papel filtro en un fiola de 100 mL en la cual se ha
homogeneizado. Se mide una alícuota de 25 ml, se colocó en una fiola de 50 ml
y se le dio el mismo tratamiento que las soluciones estándar hasta obtener el
color y lo colocamos en el espectrómetro.
3. RESULTADOS:
A. Cuadro de soluciones patrón:
1 0.5 2 3 3 0.001 50
2 1 2 3 3 0.002 50
3 1.5 2 3 3 0.003 50
4 2 2 3 3 0.004 50
1 0.0010 0.189
2 0.0020 0.761
3 0.0030 0.563
4 0.0040 0.772
TABLA N°2: Tabla de resultados de los patrones
5 6 0.0019 0.402
6 6 0.0006 0.019
TABLA N°3: Tabla de medición de muestra
B. Cálculos:
1. Método gráfico (Curva de trabajo)
Gráfica de dispersión sobre de medición de muestra
2. Método analítico
- Cálculo de la absortividad media Ap = a. b. Cp
ANEXOS
CUESTIONARIO:
3. Si una muestra contiene hierro (II) y hierro (III), diseñe una técnica
mediante un diagrama de bloques para analizar estos componentes por
separado.
Para examinar la presencia de hierro (II) y hierro (III) en una muestra, se puede
emplear la técnica de separación mediante extracción líquido-líquido. Se
muestra a continuación un esquema en bloques de los procedimientos que se
pueden llevar a cabo:
- Preparar una solución de la muestra a analizar disolviéndose en un
disolvente apropiado, como agua o ácido clorhídrico.
- Ajustar el pH de la solución a un valor específico, utilizando un ácido o
una base según sea necesario. Para el análisis de hierro con fenantrolina, el
pH adecuado es de alrededor de 3.5 .
Para analizar el hierro (II) y el hierro (III) en una muestra, se debe añadir un
reactivo de fenantrolina y dejar que reaccione durante un tiempo determinado
hasta que se forme completamente el complejo. Luego, se debe separar el
complejo de hierro (II)-fenantrolina del hierro (III) que no reaccionó utilizando
un solvente orgánico como el cloroformo o el benceno. Es necesario medir la
absorbancia de cada capa para determinar la concentración de cada complejo.
Sin embargo, es importante realizar una calibración previa del
espectrofotómetro y tener una serie de blancos y estándares para asegurar una
medición precisa.
4. ¿Qué tipos de interferencia puede presentarse en un análisis
espectrofotométrico?
Existen varios tipos de interferencias que pueden afectar los resultados de un
análisis espectrofotométrico. Algunos de ellos son:
- https://inis.iaea.org/collection/NCLCollectionStore/_Public/31/016/31016173.pdf
- A. Molina - Díaz, J.M. Herrador - Mariscal, M.I. Pascual - Reguera y L.F. Capitan -
Valvey, Talanta, 40(7), 1059 (1993).
Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas Escuela Profesional De Ingeniería Biotecnológica, Universidad Católica de
Santa María
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RESUMEN
1. INTRODUCCIÓN:
El análisis de hierro por espectrofotometría visible es una técnica analítica ampliamente
utilizada en diversos campos, incluyendo la industria alimentaria y de suplementos
dietéticos. En este informe de laboratorio, se llevó a cabo el análisis de hierro mediante la
técnica de espectrofotometría del visible, con el objetivo de preparar soluciones de hierro,
construir una curva de calibrado, seleccionar la longitud de onda de trabajo, analizar el
contenido de hierro en un alimento por el método de la Fenantrolina, y evaluar
estadísticamente los resultados obtenidos. El objetivo general de este informe es mostrar
los procedimientos realizados y los resultados obtenidos en el análisis de hierro por
espectrofotometría visible, así como también demostrar la utilidad y precisión de esta
técnica analítica.
El método de la fenantrolina se basa en la reducción del hierro al estado ferroso mediante
el uso de cloruro de hidroxilamina como reactivo orgánico en un medio ácido con una
solución buffer ajustada a pH 3.5. Después, se agrega el reactivo complejante 1,10
fenantrolina, formando un compuesto complejo de hierro fenantrolina de color rojo
anaranjado. Este compuesto se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de
510 nm para determinar cuantitativamente la cantidad de hierro presente. La formación
del complejo se observa en un margen de pH entre 3 y 9, pero se recomienda un pH
cercano a 4 para evitar la precipitación de diversas sales de hierro.
2. METODOLOGÍA
Para preparar soluciones estándar inestables para un análisis. Se requirió 5 matraces
aforados de 50 ml que deben etiquetarse del 1 al 5, y se agrega 0.5 ml, 1.0 ml, 1.5 ml y
2.0 ml de la solución Stock a las fiolas 1 a 4, respectivamente. A la quinta fiola se agrega
agua destilada (solución blanca). Luego, se agrega hidroxilamina, fenantrolina y solución
buffer a cada fiola y se diluye con agua destilada. Las soluciones se dejan reposar durante
30 minutos y se obtiene una solución de color rojo anaranjado. Por último, se describe
cómo preparar una muestra para su medición en el aparato. Se debe pesar la muestra,
calcinarla, disolver en HCl 6 M, diluirla con agua destilada, filtrar si es necesario, y
medir una alícuota de 25 ml que se trata de la misma manera que las soluciones estándar
para obtener el color, lista para la medición.
A. MATERIALES:
● Crisol
● Pinzas
● espátula
● Pipetas
● Embudo
● Papel Filtro
● Fiola de 100mL
● Fiola de 50 mL
● Muestra de lentejas
● Probeta
● Becker
- REACTIVOS
● Solución de Hidroxilamina.
● Solución buffer.
● Solución de fenantrolina.
● Solución Stock de hierro.
- APARATOS
● Espectrofotómetro.
● Cubeta: 1 Cm. De trayecto óptico.
● Región de trabajo: Espectro visible.
● Longitud de onda: 510 nm.
● Blanco: Solución de reactivos y disolvente menos hierro.
- PROCEDIMIENTO:
Preparación de las soluciones estándares
Se utilizó 4 fiolas de 50 mL las cuales se rotula del 1 al 4 y se colocó las
siguientes concentraciones (TABLA N°1).
Preparación de la muestra
Se pesó con anticipación 6g de lenteja y se colocó en la mufla a 550°C por 3
horas. Posteriormente en un becker se añadió las cenizas de la muestra y 10 ml
de HCl 6M; en un Hot Plate colocamos el becker y lo calentamos hasta que esté
semi seco, añadimos con una probeta 20 ml de agua destilada, calentar ( no es
necesario que de hervor), para una mejor preparación lo filtramos con ayuda de
un embudo y un papel filtro en un fiola de 100 mL en la cual se ha
homogeneizado. Se mide una alícuota de 25 ml, se colocó en una fiola de 50 ml
y se le dio el mismo tratamiento que las soluciones estándar hasta obtener el
color y lo colocamos en el espectrómetro.
3. RESULTADOS:
A. Cuadro de soluciones patrón:
1 0.5 2 3 3 0.001 50
2 1 2 3 3 0.002 50
3 1.5 2 3 3 0.003 50
4 2 2 3 3 0.004 50
1 0.0010 0.189
2 0.0020 0.761
3 0.0030 0.563
4 0.0040 0.772
TABLA N°2: Tabla de resultados de los patrones
5 6 0.0019 0.402
6 6 0.0006 0.019
TABLA N°3: Tabla de medición de muestra
B. Cálculos:
1. Método gráfico (Curva de trabajo)
2. Método analítico
- Cálculo de la absortividad media Ap = a. b. Cp
ANEXOS
Figura 1: Muestra en 10 mL de HCl 6M
CUESTIONARIO:
3. Si una muestra contiene hierro (II) y hierro (III), diseñe una técnica
mediante un diagrama de bloques para analizar estos componentes por
separado.
Para examinar la presencia de hierro (II) y hierro (III) en una muestra, se puede
emplear la técnica de separación mediante extracción líquido-líquido. Se
muestra a continuación un esquema en bloques de los procedimientos que se
pueden llevar a cabo:
- Preparar una solución de la muestra a analizar disolviéndose en un
disolvente apropiado, como agua o ácido clorhídrico.
- Ajustar el pH de la solución a un valor específico, utilizando un ácido o
una base según sea necesario. Para el análisis de hierro con fenantrolina, el
pH adecuado es de alrededor de 3.5 .
Para analizar el hierro (II) y el hierro (III) en una muestra, se debe añadir un
reactivo de fenantrolina y dejar que reaccione durante un tiempo determinado
hasta que se forme completamente el complejo. Luego, se debe separar el
complejo de hierro (II)-fenantrolina del hierro (III) que no reaccionó utilizando
un solvente orgánico como el cloroformo o el benceno. Es necesario medir la
absorbancia de cada capa para determinar la concentración de cada complejo.
Sin embargo, es importante realizar una calibración previa del
espectrofotómetro y tener una serie de blancos y estándares para asegurar una
medición precisa.
4. ¿Qué tipos de interferencia puede presentarse en un análisis
espectrofotométrico?
Existen varios tipos de interferencias que pueden afectar los resultados de un
análisis espectrofotométrico. Algunos de ellos son:
● Interferencias de matriz: son causadas por las diferencias en la
composición de la muestra y la solución de calibración, lo que resulta en
una absorción diferente de la luz. Esto puede ser especialmente
problemático cuando la muestra es compleja, ya que puede contener varios
compuestos que interfieren con la medición.
● Interferencias químicas: pueden ser causadas por reacciones químicas
adicionales que ocurren en la muestra durante el análisis, lo que afecta la
absorción de la luz. Por ejemplo, la oxidación o reducción de compuestos
en la muestra puede producir resultados falsos.
● Interferencias espectrales: pueden ser causadas por la presencia de
compuestos en la muestra que absorben la misma longitud de onda que el
analito. Esto puede provocar una sobreestimación o subestimación de la
concentración del analito.
● Interferencias de fondo: pueden ser causadas por la presencia de luz
dispersada o absorbida por los componentes de la solución que no son el
analito. Esto puede hacer que la señal de absorción sea más débil o difícil
de detectar.
5. Calcular la absortividad molar del complejo rojo anaranjado
fe-fenantrolina, si se trató un volumen alícuota de 5 ml de una solución
estándar con un total de 20 microgramos de hierro y luego se diluyó a un
volumen final de 10 ml. La absorbancia de la solución medida a 510 nm es
de 0.4 y se empleó una celda de 1 cm
4. REFERENCIAS:
- https://inis.iaea.org/collection/NCLCollectionStore/_Public/31/016/31016173.pdf
- A. Molina - Díaz, J.M. Herrador - Mariscal, M.I. Pascual - Reguera y L.F. Capitan -
Valvey, Talanta, 40(7), 1059 (1993).