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Projeto LU
Projeto LU
20 a 24 de outubro de 2008
INTRODUÇÃO
1 Acadêmico do Curso de Ciências Biológicas do Centro Universitário de Maringá - CESUMAR, Maringá – PR.
Programa de Iniciação Científica do Cesumar (PICC). renan_sc_002@hotmail.com
2 Graduado em Ciências Biológicas pelo Centro Universitário de Maringá – Cesumar. digo.sapim@gmail.com
3 Orientador e Docente do Centro Universitário de Maringá – CESUMAR. fiorini@cesumar.br
MATERIAL E MÉTODOS
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Figura 1. Gel de agarose a 0,7 % com DNA do fago λ nos volumes de 4,26 (A), 2,13 (B) e
1,07 (C) µL corado com solução contendo 0,1 µg/mL de brometo de etído em água
descontaminada pelo método de “Lunn Sansone”
Esse teste foi realizado para verificar qual a concentração mínima de EtBr suficiente
para a visualização de amostras de DNA na eletroforese em gel de agarose, com o
objetivo de diminuir a quantidade de resíduos. Sabendo-se que a concentração mínima de
DNA para ser observada com precisão em gel de agarose é de 9 ng, foi utilizado um
volume de 2,13 µL do padrão para se atingir uma concentração de 8,90 do fragmento de
2027 pb (Figura 2). A concentração padrão de EtBr utilizada na maioria dos protocolos é
0,1 µg/mL em gel ou tampão de eletroforese, sendo possível a visualização de todas as
bancas de DNA, inclusive na concentração de 2,48 µL (Figura 2, seta).
A concentração de 0,03 µg/mL de EtBr também foi avaliada, com o objetivo de
verificar se esta concentração é suficientes para a visualização do fragmento de 2027 pb
do DNA do marcador (9 ng). Foi observado que é possível visualizar a banda
apresentando 8,90 ng (Figura 3, seta) com a concentração 0,03 µg/mL de EtBr.
Figura 2. Gel de agarose a 0,7 % com 0,1 Figura 3. Gel de agarose a 0,7 % com 0,03
µg/ml de EtBr. DNA do fago λ nos volumes de µg/ml de EtBr. DNA do fago λ nos
4,26(A), 2,13(B) e 1,07(C) µL.
volumes de 4,26(A), 2,13(B) e 1,07(C) µL.
A B C
Considerando que EtBr é uma substância perigosa, de alto risco para a população
e o meio ambiente, mesmo sem a existência de estudos concretos que comprovem o seu
potencial carcinogênico é de extrema importância que medidas de segurança sejam
adotadas para a manipulação deste agente. Com os resultados deste trabalho foi possível
observar que concentrações menores que as comumente utilizadas de EtBr servem para
visualizar fragmentos acima de 9 ng em procedimentos eletroforéticos de rotina em
laboratórios de biologia molecular. Mesmo quando se utiliza concentrações maiores deste
agente existem métodos seguros e práticos de descontaminação, como o método de Lunn
e Sansone, que pode ser usado como uma alternativa para métodos definitivos, como a
incineração. Vale lembrar que as concentrações de EtBr utilizadas para coloração de géis
de agarose (0,1 µg/ml) não são consideradas perigosas quanto a efeitos mutagênicos,
mas deve-se considerar outros perigos relacionados com o EtBr.
REFERÊNCIAS
BAIRD, D.J. et al. Ecotoxicology: ecological dimensions. New York: Chapman & Hall,
1996.
BRUN, R.; LEON, W. Effect of ethidium bromide on growth and morphology of Leishmania
tarentolae promastigotes in vitro. Acta Trop, n. 35, v. 3, p. 239-246, 1978.