TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de Tehuacán

MICROBIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

EQUIPO 6

PRÁCTICA No. 5

MANEJO DE PIPETAS Y MICROPIPETAS PARA

PREPARACIÓN DE DILUCIONES

PRESENTAN:

PACHECO FLORES ARELY 20360438

ORTIZ MARTINEZ AIDEE JACQUELINE 20360609

MARROQUÍN REMIGIO ALEJANDRA 19361430
MONFIL CANSECO JULIO LIZANDRO 20360424
CASTRO VILLEGAS JAIR 20360348

ASESORA:
ING. ROSA MARÍA ZAVALETA MARTÍNEZ

ENERO – JUNIO

TEHUACÁN, PUEBLA, FEBRERO DEL 2023

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 Objetivo
Aprender a manipular las micropipetas y pipetas como herramienta para
preparar diluciones.
 Fundamento teórico
En el laboratorio de Microbiología hay una serie de operaciones básicas, como
son la medida de los reactivos sólidos o la medida del volumen de un líquido,
cuya correcta ejecución es determinante para la obtención de unos resultados
analíticos fiables. Las micropipetas son un instrumento básico en el laboratorio,
imprescindible para tomar y dispensar pequeños volúmenes de líquidos de
manera precisa. Su correcto manejo es esencial para conseguir unos resultados
fiables en nuestro trabajo de laboratorio.
Las partes básicas de la pipeta y micropipetas son un botón de émbolo, botón
de expulsión de punta, dial de ajuste de volumen, pantalla de volumen, eyector
de punta y eje. Dependiendo de su presupuesto y preferencia, hay muchas
micropipetas en el mercado que se adaptan específicamente a sus necesidades.

Cuando queremos medir y transferir pequeños volúmenes de un líquido, en el

rango desde unos pocos microlitros a mililitros, es muy aconsejable el uso de
micropipetas. Existen diferentes tipos de micropipetas según si son manuales o
electrónicas, de volumen fijo o variable, monocanal o multicanal, de
desplazamiento de aire o de desplazamiento positivo, etc. La técnica utilizada
para pipetear con cada una de ella requiere unas condiciones específicas de uso.
Una dilución es un procedimiento, cuya finalidad es disminuir la cantidad de
soluto por unidad de volumen de dilución. Este procedimiento se logra mediante
la adición de una cantidad específica de diluyente en una cantidad determinada
de soluto para generar una mezcla homogénea entre dos o más sustancias.

 Materiales

 Autoclave
 Gradilla
 5 tubos de ensayo con tapón de rosca
 1 pipeta de vidrio de 5ml o 10 ml
 1 perilla o jeringa
 1 micropipeta (del volumen que se tenga)
 Puntas para micropipeta (según el volumen de la micropipeta)
 Colorante vegetal
 1 vaso de precipitados de 250ml
 1 mechero Fisher
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 Metodología

MANEJO DE PIPETA
1. Como primer paso tenemos que revisar si la pipeta se encuentre limpia y en
buen estado.
2. Para nuestro manejo ajustamos en la base de la pipeta la perilla
3. Introducimos la punta de la pipeta en el líquido que medimos y succionamos
con ayuda de la perilla.

4. Tenemos que verificar que el volumen medido sea el requerido. Considerar

que el líquido debe formar una muesca sobre la línea del volumen deseado.

5. Depositamos el volumen de líquido en nuestro tubo de ensayo para ello,

apretamos la perilla hasta que haya salido todo el líquido contenido en la pipeta.

6. Repetimos este procedimiento tantas veces como sea necesario para tener
un adecuado manejo.
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7. Practicamos la transferencia de líquido de un contenedor a otro,

pero ahora utilizamos el mechero encendido para adquirir habilidad en el manejo
de materiales y sustancias en el área aséptica.

MANEJO DE MICROPIPETA

1. Como mencionado antes tenemos que revisar que la micropipeta se

encuentre limpia y en buen estado. Y verificar el volumen mínimo y máximo de
la micropipeta. Que en nuestro caso nos tocó una micropipeta de 2 a 20.

2. Para proceder colocamos una punta limpia en el soporte de la micropipeta

y nos aseguramos de que se ha ajustado lo suficiente para evitar que se caiga.
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3. Con nuestro dedo pulgar o índice, bajamos el botón pulsador de

la micropipeta hasta el primer tope y mantuvimos pulsado.

4. Introducimos la punta en el líquido que será medido y soltamos el botón

pulsador, verificando que se ha transferido el volumen deseado.
5. Ahora bien depositamos el volumen de líquido al contenedor a nuestro tubo
de ensayo, para ello, bajamos el botón pulsador hasta el segundo tope y
verificamos que ha salido todo el líquido contenido en la punta.

6. Para finalizar con técnica desechamos la punta en un contenedor adecuado

pulsando el botón de eyección de puntas.
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7. Y repetir el procedimiento tantas veces como sea necesario para

tener un manejo adecuado

8. Tenemos que practicar la transferencia de líquido de un contenedor a otro,

pero ahora como lo hicimos anteriormente utilizando el mechero encendido para
adquirir habilidad en el manejo de materiales y sustancias en el área aséptica.

PREPARACIÓN DE DILUCIONES

1. Dilución decimal:
Preparamos nuestra dilución esta nos sugiere colocar 9ml de agua destilada
y 1ml de solución concentrada. Para preparar la solución concentrada,
agregamos unas cuantas gotas de colorante vegetal en un vaso precipitado al
que previamente se le agregaron 10 ml de agua de la llave.

2. Dilución no decimal:
Nuestro quipo trabajo con un factor de dilución 1:4 y un volumen final de 20ml.
En este caso, se colocarán 5 ml de solución concentrada y 15 ml de diluyente
(agua de la llave). Tomamos en cuenta que, para preparar cualquier dilución,
basta con conocer el volumen final y el factor de dilución. Posteriormente este se
divide el volumen entre el factor de dilución y de esta manera se obtiene el
volumen de solución concentrada que se debe medir el resto es el volumen de
diluyente.
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 Cuestionario
1.- ¿Qué es un factor de dilución?
Es el número que indica las veces que debe diluirse una solución para
obtenerse una de menor concentración.

2.- ¿Para preparar 400ml de una dilución 1:75 a partir de una solución
concentrada, ¿Qué volumen de diluyente se deberá medir y que volumen de
solución concentrada?
Si se hacen las operaciones, se tiene que para la solución concentrada será
de 5.3ml y el diluyente será de 4.7ml.

3.- ¿Cuál es el significado de precisión y exactitud en el pipeteo?

Partiendo del concepto de precisión, este nos indica que es el detalle con el
que un instrumento o procedimiento puede medir una variable, por lo que se tiene
que para la precisión se identifican con un volumen nominal (el volumen mayor y
el volumen menor), mientras que si se revisa el concepto de exactitud nos dice
que es lo que se acerca esta medición al valor real, es decir que para tener una
mayor exactitud, este se verá influenciado por otros factores, como lo es la
técnica, etc.
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 Conclusión
Se concluyó en esta práctica, lo útil y necesario que han sido las prácticas del
manejo de material en el laboratorio de microbiología, junto con esta se ha enseñado
cómo usar el material, el manejo y la práctica que se tuvo que hacer con lo ya
Se hizo el manejo de las micropipetas, desde elegir la cantidad requerida y
el líquido al primer tope, luego soltarlo en la pared de un recipiente, oprimiendo hasta
el segundo tope. Además hacer cálculos de concentraciones a escala y usar la
micropipeta con el mechero. Para pipetear se usó la misma mecánica, usando una
jeringa para succionar el líquido y depositarlo en un recipiente, de la misma manera
usando el mechero para esterilizar cualquier muestra.

 Referencias web

https://docs.google.com/document/d/1oSjsl8oXh9zhxnriIWXMhnxB2AMZ5Dja/ed
it?rtpof=true&sd=true

https://ttehuacantecnmmy.sharepoint.com/:w:/g/personal/l20360348_tehuacan_t
ecnm_mx/EYE0g9MAkLNCul80tNGqkAcBZHBf57xsFEsPEOMkrL5Ygg?rtime=5
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La práctica fue realizada el día martes 14 de febrero del presente año, en el

laboratorio de biología de las instalaciones académicas.