第4章 酶

酶 是 一 类 具 有 高 效 率 、 高 度 专 一 性 、 活 性 可 调
节 的 高 分 子 生 物 催 化 剂 。
1957 巴 斯 德 提 出 酒 精 发 酵 是 酵 母 细 胞 活 动 的 结
果 。

1 分 子 Glc→2 分 子 乙 醇 +2 分 子 CO2 从 Glc 开 始 ， 经 过 12

种 酶 催 化 ， 12 步 反 应 ， 生 成 乙 醇 。
1897 Buchner 兄 弟 证 明 发 酵 与 细 胞 的 活 动 无 关 ， 不 含
细 胞 的 酵 母 汁 也 能 进 行 乙 醇 发 酵 。

1913 Michaelis 和 Menten 提 出 米 氏 学 说 — 酶 促 动 力 学 原

理 。
1926 Sumner 首 次 从 刀 豆 中 提 出 脲 酶 结 晶 ， 并 证 明 具
有 蛋 白 质 性 质 。
1969 化 学 合 成 核 糖 核 酸 酶 。

1967-1970 从 E.coli 中 发 现 第 I 、 第 II 类 限 制 性 核 酸 内 切

酶 。

1986 Cech 发 现 四 膜 虫 细 胞 大 核 期 间 26S rRNA 前 体 具 有

自 我 剪 接 功 能 。

ribozyme ， deoxyribozyme

E.coRI
5’——GAATTC——3’
3’——CTTAAG——5’
限制作用 修饰作用
5’——GAATTC——3’ 5’——GAATTC——3’
3’——CTTAAG——5’ 3’——CTTAAG——5’

1
 第1 节 酶 学 概 论

1、 酶 的 生 物 学 意 义

大 肠 杆 菌 生 命 周 期 20 分 钟 ， 生 物 体 内 化 学 反 应

变 得 容 易 和 迅 速 进 行 的 根 本 原 因 是 体 内 普 通 存 在
生 物 催 化 剂 — 酶 。 没 有 酶 ， 生 长 、 发 育 、 运 动 等
等 生 命 活 动 就 无 法 继 续 。

限 制 性 核 酸 内 切 酶 （ 限 制 - 修 饰 ）

2、 酶 的 概 念 及 其 作 用 特 点

1、 酶 是 一 种 生 物 催 化 剂

酶 是 一 类 具 有 高 效 率 、 高 度 专 一 性 、 活 性 可 调
节 的 高 分 子 生 物 催 化 剂 。

生物催化剂 ：酶 (enzyme) ， 核 （ 糖 ） 酶 (ribozyme) ， 脱 氧 核

（ 糖 ） 酶 (deoxyribozyme)

2、 酶 催 化 反 应 的 特 点

（ 1 ） 、 催 化 效 率 高

酶 催 化 反 应 速 度 是 相 应 的 无 催 化 反 应 的 108-1020 倍 ，

并 且 至 少 高 出 非 酶 催 化 反 应 速 度 几 个 数 量 级 。

2
 （ 2 ） 、 专 一 性 高

酶 对 反 应 的 底 物 和 产 物 都 有 极 高 的 专 一 性 ， 几
乎 没 有 副 反 应 发 生 。

（ 3 ） 、 反 应 条 件 温 和

温 度 低 于 100℃ ， 正 常 大 气 压 ， 中 性 pH 环 境 。

（ 4 ） 、 活 性 可 调 节

根 据 据 生 物 体 的 需 要 ， 许 多 酶 的 活 性 可 受 多 种
调 节 机 制 的 灵 活 调 节 ， 包 括 ： 别 构 调 节 、 酶 的 共
价 修 饰 、 酶 的 合 成 、 活 化 与 降 解 等 。

（ 5 ） 、 酶 的 催 化 活 性 离 不 开 辅 酶 、 辅 基 、 金

属 离 子

3、 酶 与 非 生 物 催 化 剂 相 比 的 几 点 共 性 ：

① 催 化 效 率 高 ， 用 量 少 （ 细 胞 中 含 量 低 ） 。
② 不 改 变 化 学 反 应 平 衡 点 。
③ 降 低 反 应 活 化 能 。

P234 图 4-1 非 催 化 过 程 及 催 化 过 程 自 由 能 的 变 化

④ 反 应 前 后 自 身 结 构 不 变 。
催 化 剂 改 变 了 化 学 反 应 的 途 径 ， 使 反 应 通 过 一
条 活 化 能 比 原 途 径 低 的 途 径 进 行 ， 催 化 剂 的 效 应
只 反 映 在 动 力 学 上 （ 反 应 速 度 ） ， 不 影 响 反 应 的
热 力 学 （ 化 学 平 衡 ） 。

3
3、 酶 的 化 学 本 质

（1 ） 酶 的 蛋 白 质 本 质

经 典 概 念 ： 所 有 的 酶 都 是 蛋 白 质 ， 酶 是 具 有 催
化 功 能 的 蛋 白 质 ， 因 此 酶 具 有 蛋 白 质 的 一 切 共 性 。

1、 酶 的 蛋 白 质 组 成

有 些 酶 仅 由 蛋 白 质 组 成 ， 例 如 ， 脲 酶 、 溶 菌 酶
淀 粉 酶 、 脂 肪 酶 、 核 糖 核 酸 酶 等
有 些 酶 不 仅 含 有 蛋 白 质 （ 酶 蛋 白 ） ， 还 含 有 非
蛋 白 质 成 分 （ 辅 助 因 子 ） ， 只 有 酶 蛋 白 与 辅 助 因
子 结 合 形 成 复 合 物 （ 全 酶 ） 才 表 现 出 酶 活 性 ， 如
超 氧 化 物 歧 化 酶 Cu2+ 、 Zn2+ ） 、 乳 酸 脱 氢 酶 （ NAD+ ）
酶 的 专 一 性 由 酶 蛋 白 的 结 构 决 定 ， 辅 助 因 子 传
递 电 子 或 某 些 化 学 基 团 。

2、 酶 的 辅 助 因 子

酶 的 辅 助 因 子 主 要 有 金 属 离 子 （ Fe2+ 、 Fe3+ 、

Cu+ 、 Cu2+ 、 Mn2+ 、

、 Mn3+ 、 Zn2+ 、 Mg2+ 、 K+ 、 Na+ 、 Mo6+ 、 Co2+
等 ） 和 有 机 化 合 物 。
辅 酶 ： 与 酶 蛋 白 结 合 较 松 ， 可 透 析 除 去 。
辅 基 ： 与 酶 蛋 白 结 合 较 紧 。

酶 辅助因子
CuZn-SOD Cu2+ Zn2+
Mn-SOD Mn2+

过氧化物酶 Fe2+ 或 Fe3+

II 型限制性核酸内切酶 Mg2+

羧肽酶 Zn2+

4
 P235 表 4-1 一 些 酶 的 辅 助 因 子 （ 金 属 离 子 ）

P237 表 4-2 基 团 反 应 中 的 辅 酶 和 辅 基 。

酶 蛋 白 决 定 酶 专 一 性 ， 辅 助 因 子 决 定 酶 促 反 应
的 类 型 和 反 应 的 性 质 。 比 如 ， NAD+ 可 与 多 种 酶 蛋 白
结 合 ， 构 成 专 一 性 强 的 乳 酸 脱 氢 酶 、 醇 脱 氢 酶 、
苹 果 酸 脱 氢 酶 、 异 柠 檬 酸 脱 氢 酶 。
生 物 体 内 酶 种 类 很 多 ， 而 辅 助 因 子 种 类 却 很 少
原 因 是 一 种 辅 助 因 子 可 与 多 种 酶 蛋 白 结 合 。

（ 2 ） ribozyme 核 酶 （ 具 有 催 化 功 能 的 RNA ）

1980 以 前 ， 已 知 所 有 的 生 物 催 化 剂 ， 其 化 学 本
质 都 是 蛋 白 质 。
80 年 代 初 ， 美 国 科 罗 拉 多 大 学 博 尔 德 分 校 的
Thomas Cech 和 美 国 耶 鲁 大 学 Sidney Altman 各 自 独 立 发 现 RNA
具 有 生 物 催 化 功 能 ， 此 发 现 被 认 为 是 近 十 年 生 化
领 域 最 令 人 鼓 舞 的 发 现 ， 此 二 人 分 亨 1989 诺 贝 尔 化
学 奖 。

ribozyme 种 类 ： ① 自 我 剪 接 ribozyme ② 自 我 剪 切 ribozyme ③

催 化 分 子 间 反 应 ribozyme

后 边 细 讲

4、 按 酶 蛋 白 的 亚 基 组 成 及 结 构 特 点 分 类

1、 单 体 酶

由 一 条 或 多 条 共 价 相 连 的 肽 链 组 成 的 酶 分 子

牛 胰 RNase 124a.a 单 链

鸡卵清溶菌酶 129a.a 单 链

胰凝乳蛋白酶 三条肽链

5
 单 体 酶 种 类 较 少 ， 一 般 多 催 化 水 解 反 应 。

2、 寡 聚 酶

由 两 个 或 两 个 以 上 亚 基 组 成 的 酶 ， 亚 基 可 以 相
同 或 不 同 ， 一 般 是 偶 数 ， 亚 基 间 以 非 共 价 键 结 合 。
① 含 相 同 亚 基 的 寡 聚 酶

苹 果 脱 胱 氢 酶 （ 鼠 肝 ） ， 2 个 相 同 的 亚 基

② 含 不 同 亚 基 的 寡 聚 酶

琥 珀 酸 脱 氢 酶 （ 牛 心 ） ， αβ2 个 亚 基

寡 聚 酶 中 亚 基 的 聚 合 ， 有 的 与 酶 的 专 一 性 有 关
有 的 与 酶 活 性 中 心 形 成 有 关 ， 有 的 与 酶 的 调 节 性
能 有 关 。
大 多 数 寡 聚 酶 是 胞 内 酶 ， 而 胞 外 酶 一 般 是 单 体
酶 。

3、 多 酶 复 合 体

由 两 个 或 两 个 以 上 的 酶 ， 靠 非 共 价 键 结 合 而 成
其 中 每 一 个 酶 催 化 一 个 反 应 ， 所 有 反 应 依 次 进 行 ，
构 成 一 个 代 谢 途 径 或 代 谢 途 径 的 一 部 分 。 如 脂 肪
酸 合 成 酶 复 合 体 。
例 如 ： 大 肠 杆 菌 丙 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 体 由 三 种 酶
组 成

① 丙 酮 酸 脱 氢 酶 （ E1 ） 以二聚体存在 2×9600

② 二 氢 硫 辛 酸 转 乙 酰 基 酶 （ E2 ） 70000

③ 二 氢 硫 辛 酸 脱 氢 酶 （ E3 ） 以二聚体存在 2×56000

复 合 体 ： 12 个 E1 二聚体 24×96000

24 个 E2 单体 24×70000

6
 6 个 E3 二聚体 12×56000

总 分 子 量 560 万

4、 多 酶 融 合 体

一 条 多 肽 链 上 含 有 两 种 或 两 种 以 上 催 化 活 性 的
酶 ， 这 往 往 是 基 因 融 合 的 产 物 。

例 如 ： 天 冬 氨 酸 激 酶 I--- 高 丝 氨 酸 脱 氢 酶 I 融 合

体 （ 双 头 酶 ）

该 酶 是 四 聚 体 α4 ， 每 条 肽 链 含 两 个 活 性 区 域 ：

N- 端 区 域 是 Asp 激 酶 ， C 端 区 域 是 高 Ser 脱 氢 酶 。

5、 酶 在 细 胞 中 的 分 布

一 个 细 胞 内 含 有 上 千 种 酶 ， 互 相 有 关 的 酶 往 往
组 成 一 个 酶 体 系 ， 分 布 于 特 定 的 细 胞 组 分 中 ， 因
此 某 些 调 节 因 子 可 以 比 较 特 异 地 影 响 某 细 胞 组 分
中 的 酶 活 性 ， 而 不 使 其 它 组 分 中 的 酶 受 影 响 。
1. 分 布 于 细 胞 核 的 酶
核被膜 酸性磷酸酶
染色质 三磷酸核苷酶
核仁 核糖核酸酶
核内可溶性部分 酵解酶系、乳酸脱氢酶
2. 分 布 于 细 胞 质 的 酶
参与糖代谢的酶 酵解酶系
磷 酸 戊 糖 途 径 酶 系
参与脂代谢的酶 脂肪酸合成酶复合体

参 与 a.a 蛋白质的酶 Asp 氨 基 转 移 酶

参与核酸合成的酶 核苷激酶 核苷酸激酶

3. 分 布 于 内 质 网 的 酶
光滑内质网 胆固醇合成酶系
粗糙内质网 蛋白质合成酶系
（ 细 胞 质 一 侧 ）

7
 4. 分 布 于 线 粒 体 的 酶

外 膜 ： 酰 基 辅 酶 A 合 成 酶

内 膜 ： NADH 脱 氢 酶

基 质 ： 三 羧 酸 循 环 酶 系

脂 肪 酸 β- 氧 化 酶 系

5. 分 布 于 溶 酶 体 的 酶
水 解 蛋 白 质 的 酶
水 解 糖 苷 类 的 酶
水 解 核 酸 的 酶
水 解 脂 类 的 酶
6. 标 志 酶
有 些 酶 只 分 布 于 细 胞 内 某 种 特 定 的 组 分 中 ，

核： 尼克酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶，功能： DNA 、 RNA 生 物 合 成

线 粒 体 ： 琥 珀 酸 脱 氢 酶 （ 电 子 转 移 、 三 羧 酸 循
环 ）
溶 酶 体 ： 酸 性 磷 酸 酶 （ 细 胞 成 分 的 水 解 ）
微 粒 体 ： （ 核 蛋 白 体 、 多 核 蛋 白 体 、 内 质 网 ）
Glc-6- 磷 酸 酶
上 清 液 ： 乳 酸 脱 氢 酶

第2 节 酶 的 国 际 分 类 及 命 名

1、 习 惯 命 名

1961 年 6 以 前 使 用 的 酶 沿 用 习 惯 命 名

1. （ 绝 大 多 数 酶 ） 依 据 底 物 来 命 名
如 ： 催 化 蛋 白 质 水 解 的 酶 称 蛋 白 酶 。 催 化 淀 粉
水 解 的 酶 称 淀 粉 酶 。
2. 依 据 催 化 反 应 的 性 质 命 名
如 ： 水 解 酶 、 转 氨 酶

8
 3 结 合 上 述 两 个 原 则 命 名 ， 琥 珀 酸 脱 氢 酶 。
4. 有 时 加 上 酶 的 来 源
如 ： 胃 蛋 白 酶 、 牛 胰 凝 乳 蛋 白 酶
习 惯 命 名 较 简 单 ， 但 缺 乏 系 统 性 。

2、 国 际 系 统 命 名

系 统 名 称 应 明 确 标 明 酶 的 底 物 及 催 化 反 应 的 性
质 。
如：草酸氧化酶（习惯名），系统名称： 草酸：氧氧化酶

又如：谷丙转氨酶（习惯名），系统名： 丙氨酸： α- 酮 戊 二 酸 氨 基

转 移 酶

反 应 ： 丙 氨 酸 +α-- 酮 戊 二 酸 → Glu+ 丙 酮 酸

3 、 国 际 系 统 分 类 法 及 编 号 （ EC 编 号 ）

原 则 ： 将 所 有 酶 促 反 应 按 性 质 分 为 六 类 ， 分 别
用 1、 2、 3、 4、 5、 6 表 示 。
再 根 据 底 物 中 被 作 用 的 基 团 或 键 的 特 点 ， 将 每
一 大 类 分 为 若 干 个 亚 类 ， 编 号 用 1、 2、 3…… ， 每 个
亚 类 又 可 分 为 若 干 个 亚 一 亚 类 ， 用 编 号 1、 2、 3……
表 示 。

每 一 个 酶 的 编 号 由 4 个 数 字 组 成 ， 中 间 以 “ ·” 隔

开 。 第 一 个 数 字 表 示 大 类 ， 第 二 个 数 字 表 示 亚 类 ，
第 三 个 表 示 亚 - 亚 类 ， 第 四 个 数 字 表 示 在 亚 - 亚 中
的 编 号 。

1、 氧 化 还 原 酶 类

催化氧化还原反应： A·2H+B=A+B·2H

乳 酸 ： NAD+ 氧 化 还 原 酶 （ EC1.1.1.27 ）， 习惯名：乳酸脱氢

9
酶
图

2、 转 移 酶 类

AB+C=A+BC

Ala ： 酮 戊 二 酸 氨 基 移 换 酶 （ EC2.6.1.2 ）， 习惯名：

谷 丙 转 氨 酶
图

3、 水 解 酶 类

催 化 水 解 反 应 ， 包 括 淀 粉 酶 、 核 酸 酶 、 蛋 白 酶
脂 酶 。

亮 氨 酸 氨 基 肽 水 解 酶 （ EC3.4.1.1 ）， 习惯名： Ile

氨 肽 酶 。

4、 裂 合 酶 类 （ 裂 解 酶 ）

催 化 从 底 物 上 移 去 一 个 基 团 而 形 成 双 键 的 反 应
或 其 逆 反 应

二 磷 酸 酮 糖 裂 合 酶 （ EC4.1.2.7 ）， 习惯名：醛缩酶

5 、 异 构 酶 （ EC5.3.1.9 ）

催 化 同 分 异 构 体 相 互 转 化 ， 6- 磷 酸 Glc 异 构 酶

6、 合 成 酶 （ 连 接 酶 ）

催 化 一 切 必 须 与 ATP 分 解 相 偶 联 、 并 由 两 种 物 质

合 成 一 种 物 质 的 反 应 。

10
 P241 表 4-8 酶 的 国 际 分 类 — — 大 类 和 亚 类

举例：乙醇脱氢酶的分类编号是 EC1.1.1.1 ， 乳 酸 脱 氢 酶 EC1.1.1.27 ， 苹

果 酸 脱 氢 酶 EC1.1.1.37

第一个数字表示大类： 氧化还原
第 二 个 数 字 表 示 反 应 基 团 ： 醇 基

第 三 个 数 字 表 示 电 子 受 体 ： NAD+ 或 NADP+

第 四 个 数 字 表 示 此 酶 底 物 ： 乙 醇 ， 乳 酸 ， 苹 果
酸 。
前 面 三 个 编 号 表 明 这 个 酶 的 特 性 ： 反 应 性 质 、
底 物 性 质 （ 键 的 类 型 ） 及 电 子 或 基 团 的 受 体 ， 第
四 个 编 号 用 于 区 分 不 同 的 底 物 。

酶 的 物 种 和 组 织 的 差 异
来 自 不 同 物 种 或 同 一 物 种 不 同 组 织 或 不 同 细 胞
器 的 同 一 种 酶 ， 虽 然 它 们 催 化 同 一 个 生 化 反 应 ，
但 它 们 的 一 级 结 构 可 能 不 相 同 ， 有 时 反 应 机 制 也
可 能 不 同 ， 可 是 无 论 是 酶 的 系 统 命 名 法 还 是 习 惯
命 名 法 ， 对 这 些 均 不 加 以 区 别 ， 而 定 为 相 同 的 名
称 ， 这 是 因 为 命 名 酶 的 根 据 是 酶 所 催 化 的 反 应 。

例如， SOD 不 管 来 源 如 何 ， 均 催 化 如 下 反 应

2O2-+2H+→H2O2+O2 H2O2 再 由 过 氧 化 氢 酶 催 化 、 分 解

它 们 有 同 一 个 名 称 和 酶 的 编 号 EC1.15.1.1

实 际 此 酶 可 分 三 类 ：
CuZn-SOD 真 核 生 物 细 胞 质 中
Mn-SOD 真 核 生 物 线 粒 体 中
Fe-SOD

即 使 同 是 CuZn-SOD ， 来 自 牛 红 细 胞 与 猪 红 细 胞 的 ，

其 一 级 结 构 也 有 很 大 不 同 。
因 此 ， 在 讨 论 一 个 具 体 的 酶 时 ， 应 对 它 的 来 源
与 名 称 一 并 加 以 说 明 。

11
 第3 节 酶 促 反 应 动 力 学

酶 促 反 应 动 力 学 是 研 究 酶 促 反 应 的 速 度 以 及 影
响 酶 促 反 应 速 度 的 各 种 因 素 ， 包 括 低 物 浓 度 、 酶
浓 度 、 pH 、 温 度 、 激 活 剂 与 抑 制 剂 、 等 。

1、 酶 的 量 度

酶 的 含 量 不 能 直 接 用 重 量 和 摩 尔 数 表 示 （ 不 纯
失 活 、 分 子 量 不 知 ） ， 而 采 用 酶 的 活 力 单 位 表 示

1、 酶 活 力 与 酶 促 反 应 速 度

酶 活 力 ： 用 在 一 定 条 件 下 ， 酶 催 化 某 一 反 应 的
反 应 速 度 表 示 。 反 应 速 度 快 ， 活 力 就 越 高 。
酶 量 — 酶 活 力 一 反 应 速 度
酶 促 反 应 速 度 的 表 示 方 法 ： 单 位 时 间 、 单 位 体
积 中 底 物 的 减 少 量 或 产 物 的 增 加 量 。

单 位 ： 浓 度 / 单 位 时 间

P243 图 4-4 酶 反 应 速 度 曲 线

研 究 酶 促 反 应 速 度 ， 以 酶 促 反 应 的 初 速 度 为 准
因 为 底 物 浓 度 降 低 、 酶 部 分 失 活 产 物 抑 制 和 逆 反
应 等 因 素 ， 会 使 反 应 速 度 随 反 应 时 间 的 延 长 而 下
降 。

2、 酶 的 活 力 单 位 （ U）

国 际 酶 学 会 标 准 单 位 ： 在 特 定 条 件 下 ， 1 分 钟

内 能 转 化 1umol 底 物 的 酶 量 ， 称 一 个 国 际 单 位

12
（ IU ） 。 特 定 条 件 ： 25℃ pH 及 底 物 浓 度 采 用 最 适 条

件 （ 有 时 底 物 分 子 量 不 确 定 时 ， 可 用 转 化 底 物 中
1umol 的 有 关 基 团 的 酶 量 表 示 ） 。
实 际 工 作 中 ， 每 一 种 酶 的 测 活 方 法 不 同 ， 对 酶
单 位 分 别 有 一 个 明 确 的 定 义 。
如 ：限制性核酸内切酶

用 粘 度 法 测 活 性 ： 定 义 为 30℃ ， 1 分 钟 ， 使 底 物

DNA 溶 液 的 比 粘 度 下 降 25% 的 酶 量 为 1 个 酶 单 位 。

转 化 率 法 ： 标 准 条 件 ， 5 分 钟 使 1ug 供 体 DNA 残 留

37% 的 转 化 活 性 所 需 的 酶 量 为 1 个 酶 单 位 。

凝 胶 电 泳 法 测 活 ： 37℃ ， 1 小 时 ， 使 1ugλDNA 完 全

水 解 的 酶 量 为 1 个 酶 单 位 。
可 见 ， 同 一 种 酶 采 用 不 同 的 测 活 方 法 ， 得 到 的
酶 活 单 位 是 不 同 的 ， 即 使 是 同 一 种 测 活 法 ， 实 验
条 件 稍 有 相 同 ， 测 得 的 酶 单 位 亦 有 差 异 。
如 淀粉酶，两种定义

A ： 1 g 可 溶 性 starch ， 在 1h 内 液 化 所 需 的 enzyme 量 。

B ： l ml 2% 可 溶 性 starch ， 在 1h 内 液 化 所 需 的 enzyme 量 。

1g 酶 制 剂 溶 于 1000ml H2O ， 取 0.5ml 与 2% 的 starch 20ml 反 应 ，

pH6.0 ， 10 分 钟 完 全 液 化 ， 求 酶 活 力 。

A ： 60/10×20×2%×1/0.5×1000=4800u/ 克 enzyme 制 剂

B ： 60/10×20/0.5×1000=240000u/ 克 enzyme 制 剂

3、 酶 的 比 活 力 Specific activity

每 毫 克 酶 蛋 白 所 具 有 的 酶 活 力 。 酶 的 比 活 力 是
分 析 酶 的 纯 度 是 重 要 指 标 。

单 位 ： U/mg 蛋 白 质 。

有 时 用 每 克 酶 制 剂 或 每 毫 升 酶 制 剂 含 有 多 少 个

13
活 力 单 位 表 示 。

举 例 ： 一 个 酶 的 分 离 纯 化 分 为 4 步 。

步骤 1 2 3 4

总 活 力 （ U） 6 4 3 2

总 蛋 白 质 （ mg ） 20 10 5 2

比 活 力 （ U/mg ） 6/20 4/10 3/5 2/2

酶 的 提 纯 过 程 中 ， 总 蛋 白 减 少 ， 总 活 力 减 少 ，
比 活 力 增 高 。

每一步比活力
酶 的 纯 化 倍 数第一步总活力
：
每一步比活力
第一步总活力
酶的回收率： ×100%

4、 酶 的 转 换 数 和 催 化 周 期

分 子 活 性 定 义 ： 每 mol 的 enzyme 在 1 秒 内 转 化 substrate 的

mol 数 。

亚 基 或 催 化 中 心 活 性 定 义 ： 每 mol 的 active subunit 或

active center 在 一 秒 内 转 化 的 substrate 的 mol 数 ， 称 为 转 换 数

Kcat

P244 图 表 4—4

转 换 数 的 倒 数 即 为 催 化 周 期 ： 一 个 酶 分 子 每 催
化 一 个 底 物 分 子 所 需 的 时 间 。

如 ： 乳 糖 脱 氢 酶 转 换 数 为 1000/ 秒 ， 则 它 的 催 化

14
周 期 为 10-3 秒 。

2、 底 物 浓 度 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响

单 底 物 酶 促 反 应 ， 包 括 异 构 酶 、 水 解 酶 及 大 部
分 裂 合 催 化 的 反 应 。

1913 Michaelis 和 Menten 提 出 米 — 曼 方 程 。

（1 ） 底 物 浓 度 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响 — — 米 式 学

说 的 提 出

1903 Henri 研 究 蔗 糖 水 解 反 应 。

sucrose +H2O acid glucose +fructose

sucrase

酸 水 解

V V

[sucrose]

酶水解

15
 V

[enzyme]( substrate 不 变 ) [sucrose]

底 物 浓 度 与 酶 促 反 应 速 度 的 关 系 ：
初速度 V
Vmax

零级反应
混合级反应
1/2 Vmax

一级反应

Km [S]

当 底 物 浓 度 不 断 增 大 时 ， 反 应 速 度 不 再 上 升 ，
趋 向 一 个 极 限 ， 酶 被 底 物 饱 和 （ 底 物 饱 和 现 象 ） 。
中 间 产 物 假 说 ： 酶 与 底 物 先 络 合 成 一 个 中 间 产
物 ， 然 后 中 间 产 物 进 一 步 分 解 成 产 物 和 游 离 的 酶 。

证 据 ： （ 1 ） 竞 争 性 抑 制 实 验 （ 2 ） 底 物 保 护 酶

不 变 性 （ 3 ） 结 晶 ES 复 合 物 的 获 得 。
米 式 学 说 ：

1913 年 ， Michaelis 和 Menten 继 承 和 发 展 了 中 间 产 物 学

说 ， 在 前 人 工 作 基 础 上 提 出 酶 促 动 力 学 的 基 本 原
理 ， 并 以 数 学 公 式 表 明 了 底 物 浓 度 与 酶 促 反 应 速
度 的 定 量 关 系 ， 称 米 式 学 说 ：

V max*[ S ]
V=
Km + [ S ]

16
（2 ） 米 式 方 程 的 导 出 ：

1、 基 于 快 速 平 衡 假 说 — — 早 年 的 米 式 方 程

最 初 ， Michaelis 和 Menten 是 根 据 “ 快 速 平 衡 假 说 ” 推

出 米 式 方 程 。
快 速 平 衡 假 说 ：

E +S←
K
→
1 ES ←
K
→
3 P + E

K3 
K4

1 在 反 应 的 初 始 阶 段 ， 底 物 浓 度 远 远 大 于 酶 浓

度 ， 因 此 ， 底 物 浓 度 {S} 可 以 认 为 不 变 。
2 游 离 的 酶 与 底 物 形 成 ES 的 速 度 极 快 ， E + S

ES ， 而 ES 形 成 产 物 的 速 度 极 慢 ， ES 分 解 成 产

物 P 对 于 [ES] 浓 度 的 动 态 平 衡 没 有 影 响 ， 不 予 考

虑 。

K1 、 K2 》 K3

3 因 为 研 究 的 是 初 速 度 ， P 的 量 很 小 ， 由 P ES 可

以 忽 略 不 记 。

ES 的 生 成 速 度 ： K1 （ [E] - [ES] ） [S]

ES 的 分 解 速 度 ： K2[ES]

K1 （ [E] - [ES] ） [S] = K2[ES]

K 1[ E ][ S ]
[ ES ] =
K 2 + K 1[ S ]
反 应 速 度 ：

17
 V = K 3 [ ES ]
K 3 [ E ][ S ]
=
K2
+ [S ]
K1
Vmax [ S ]
=
K S + [S ]

KS 现 在 称 为 底 物 常 数

2 、 Briggs 和 Haldane 的 “ 稳 态 平 衡 假 说 ” 及 其 对 米

式 方 程 的 发 展 ：

稳 态 平 衡 假 说 ：

E +S←

→
K1
ES →
K3
← P+E
K2 K4

[ES] 的 的 生 成 与 分 解 处 于 动 态 平 衡 （ 稳 态 ） ， 有

时 必 须 考 虑 [ES] 分 解 成 产 物 P 对 于 [ES] 动 态 平 衡 的 影 响

（ [ES] 分 解 速 度 ） 。 或 者 说 ， [ES] 的 动 态 平 衡 （ 分 解

速 度 ） 不 仅 与 ES E+S 有 关 ， 还 与 ES P+E 有 关 。

稳 态 平 衡 假 说 的 贡 献 在 于 第 ② 点 。

用 稳 态 假 说 推 导 米 式 方 程 ：
ES 生 成 速 度 ：

k1 （ [E] - [ES] ） [S]

ES 分 解 速 度 ：
k2[ES]+k3[ES]
以 上 两 个 速 度 相 等 。

k1 （ [E] - [ES] ） [S] = k2[ES]+k3[ES]

[ E ][ S ] [ E ][ S ]
[ ES ] = =
K2 + K3
+ [ S ] Km + [ S ]
K1

18
 反 应 速 度 ：

K 3 [ E ][ S ] V max [ S ]
V = K 3 [ ES ] = =
Km + [ S ] Km + [ S ]

K2 + K3
Km =
K1

Vmax=k3 [E]

Km 称 米 氏 常 数 ， 当 Km 及 Vmax 已 知 时 ， 即 可 确 定 酶

反 应 速 度 与 底 物 浓 度 的 关 系 。

（3 ） 米 式 方 程 讨 论

1、 快 速 平 衡 假 说 与 稳 态 平 衡 假 说 的 实 质 区 别

E +S←

→
K1
ES →
K3
← P+E
K2 K4

当 K1 、 K2 ＞ ＞ K3 时 ， 即 ES P 是 整 个 反 应 平 衡 中

极 慢 的 一 步 ， 那 么
Km =
K 2 + K3
K1
≈ KK12 ≈ K S

V=
V max [ S ]
Km + [ S ]
≈ VK max [S ]
S + [S ]

这 就 是 早 年 提 出 的 米 式 方 程

因此说，稳态平衡 = 快速平衡 + 慢 速 平 衡 ，

K2 + K3 K2 K3
= +
K1 K1 K1

当 ES P （ 即 K3/K1 ） 极 慢 时 ， 稳 态 平 衡 基 本 等 于

19
快 速 平 衡

2 、 Km 的 物 理 意 义

当 反 应 速 度 v=1/2 Vmax 时 ， Km = [S] ，

Km 的 物 理 意 义 是 ： 当 反 应 速 度 达 到 最 大 反 应 速
度 的 一 半 时 底 物 的 浓 度 。

单 位 ： 与 底 物 浓 度 的 单 位 一 致 ， mol·L-1 或 mmol·L-1

Km 是 酶 的 特 征 常 数 之 一 。 一 般 只 与 酶 的 性 质 有

关 ， 与 酶 的 浓 度 无 关 。 不 同 的 酶 Km 值 不 同 。

P248 表 4-5 一 些 酶 的 Km 值 。

3 、 Km 与 天 然 底 物

如 果 一 个 酶 有 几 种 底 物 ， 则 每 一 种 底 物 各 有 一

个 特 定 的 Km ， 其 中 Km 最 小 的 底 物 称 该 酶 的 最 适 底

物 或 天 然 底 物 。 因 为 Km 愈 小 （ 达 到 Vmax 一 半 所 需 的
V

1/2Vma
x
Km

[S]

20
 4 、 Km 、 Ks 与 底 物 亲 和 力

Km 称 米 式 常 数 ， Km= （ K2+K3 ） ／ K1 ， 从 某 种 意 义

上 讲 ， Km 是 ES 分 解 速 度 （ K2+K3 ） 与 形 成 速 度 （ K1 ）

的 比 值 ， 它 包 含 ES 解 离 趋 势 （ K2 ／ K1 ） 和 产 物 形
Ks 称 为 底 物 常 数 ， Ks=K2 ／ K1 ， 它 是 ES 的 解 离 常

数 ， 只 反 映 ES 解 离 趋 势 ， 因 此 ， 1/Ks 可 以 表 示 酶 与

底 物 的 亲 和 力 大 小 （ ES 形 成 趋 势 ） ， 不 难 看 出 ，

只 有 当 K2 、 K1 ＞ ＞ K3 时 ， Km≈Ks ， 因 此 ， 1/Km 只 能

近 似 地 表 示 底 物 亲 和 力 的 大 小 。
问 题 ：

（ 1 ） Km 越 小 ， 底 物 亲 和 力 越 大 （ X ）

（ 2 ） Ks 越 小 ， 底 物 亲 和 力 越 大 （ √ ）

（ 3 ） 天 然 底 物 就 是 亲 和 力 最 大 的 底 物 （ X ）

（ 4 ） 天 然 底 物 就 是 Km 值 最 小 的 底 物 （ √ ）

5 、 Km 与 米 式 方 程 的 实 际 用 途

已 知 V 求 [S]

已 知 [S] 求 V

相 对 速 度 （ 酶 活 性 中 心 被 占 据 分 数 Y ） ：

V [S ] Y
Y= = [S ] = × Km
V max Km + [ S ] 1−Y
21
 当 v=Vmax 时 ， 表 明 酶 的 活 性 部 位 已 全 部 被 底 物 占

据 ， v 与 [S] 无 关 ， 只 和 [Et] 成 正 比 。 当 v=1/2 Vmax 时 ， 表

设 定 达 到 最 大 反 应 速 度 的 0.9 倍 时 ， 所 需 底 物 浓

度 为 [S]0.9
[S]0.9=9Km

同 理 有 ： [S]0.8=4Km

[S]0.7=2.33Km
[S]0.6=1.5Km
[S]0.5=1Km
[S]0.1=1/9Km
[S]0.9 /[S]0.1=81
[S]0.7/[S]0.1=21

（ 4 ） Km 和 Vmax 的 求 解 方 法

1、 双 倒 数 作 图 法

要 从 实 验 数 据 所 得 到 的 v-[S] 曲 线 来 直 接 决 定 Vmax

是 很 困 难 的 ， 也 不 易 求 出 Km 值 。
由 米 式 方 程 两 边 取 倒 数 ：

1 Km 1 1
= ∗ +
V V max [S ] V max

将 实 验 所 得 的 初 速 度 数 据 v 和 [S] 取 倒 数 ， 得 各

种 1/v 和 1/[S] 值 ， 将 1/v 对 1/[S] 作 图 ， 得

P250 图 4-6

22
 1/V

1/Vmax
1/Km

1/[S]

上 图 [S] 范 围 在 0.330—2.0Km ， 最 适 。

若 [S] 范 围 在 3.3—20 Km ， 直 线 斜 率 太 小 。

若 [S] 范 围 在 0.033––0.2 Km ， 直 线 斜 率 太 大 。

如 当 Km=1×10-5mol/L 时 ， 实 验 所 取 底 物 浓 度 范 围 应 在

0.33×10-5 － 2.0×10-5mol/L 。

一 般 选 底 物 浓 度 应 考 虑 能 否 得 到 1/[S] 的 常 数 增

量 。

如 当 选 [S] 为

1.01 、 1.11 、 1.25 、 1.42 、 1.66 、 2.0 、 2.5 、 3.33 、 5.0 、 10 时

1/[S] 为

0.1 、 0.2 、 0.3 、 0.4 、 0.5 、 0.6 、 0.7 、 0.8 、 0.9 、 1.0 是 常
数 增 量 。

反 之 ， 若 选 [S] 为 常 数 增 量

1.0 、 2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 、 10 时 ，

1/[S] 为 0.1 、 0.111 、 0.125 、 0.5 、 1.0 ， 是 非 常 数 增 量 ，

点 多 集 中 在 1/v 轴 附 近 。

23
 2 、 V—V/[S] 作 图 法

P250 图 4-7

3、 多 底 物 的 酶 促 反 应

前 面 讨 论 的 米 氏 方 程 （ 推 导 米 氏 方 程 时 用 的 是
单 底 物 ） ， 适 用 于 单 底 物 酶 促 反 应 ， 如 异 构 、 水
解 及 大 部 分 裂 合 反 应 ， 不 适 用 于 多 底 物 反 应 。

A、 B、 C 表 示 底 物 ， 按 照 底 物 与 酶 的 结 合 顺 序 ，

产 物 则 按 它 们 从 酶 产 复 合 物 中 释 放 次 序 分 别 用
P、 Q、 R 表 示 。
双 底 物 酶 促 反 应 已 知 有 三 种 机 理

1、 有 序 顺 序 反 应 机 理

底 物 A、 B 与 酶 结 合 的 顺 序 是 一 定 的 ， 产 物 P、 Q

的 释 放 顺 序 也 是 一 定 的 。
P251

举 例 ： P251 乙 醇 脱 氢 酶

2、 随 机 顺 序 反 应 机 理

底 物 A、 B 与 酶 结 合 的 顺 序 是 随 机 的 ， 产 物 P、 Q

的 释 放 顺 序 也 是 随 机 的 。

P252
如 糖 原 磷 酸 化 酶

24
 3、 乒 乓 反 应 机 理

先 结 合 第 一 个 底 物 A ， 释 放 第 一 个 产 物 P ， 酶 的

构 象 发 生 变 化 ， 结 合 第 二 个 底 物 B ， 释 放 第 二 个 产
物 Q。
P252

举例： 谷丙转氨酶

4 、 pH 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响

1. pH 影 响 酶 活 力 的 因 素

① 影 响 酶 蛋 白 构 象 ， 过 酸 或 过 碱 会 使 酶 变 性 。
② 影 响 酶 和 底 物 分 子 解 离 状 态 ， 尤 其 是 酶 活 性
中 心 的 解 离 状 态 ， 最 终 影 响 ES 形 成 。
③ 影 响 酶 和 底 物 分 子 中 另 一 些 基 团 解 离 ， 这 些
基 团 的 离 子 化 状 态 影 响 酶 的 专 一 性 及 活 性 中 心 构
象 。

2 ． 酶 的 最 适 pH 和 稳 定 性 pH

最 适 pH ： 使 酶 促 反 应 速 度 达 到 最 大 时 的 介 质

pH 。

酶 在 试 管 反 应 中 的 最 适 pH 与 它 所 在 细 胞 中 的 生

理 pH 不 一 定 完 全 相 同 ， 为 什 么 ？

几 种 酶 的 最 适 pH ， 见 P253 表 4—6 。

稳 定 性 pH ： 在 一 定 pH 范 围 内 ， 酶 不 会 变 性 失 活 ，

此 范 围 称 酶 的 稳 定 性 pH 。
图

25
 A ． 最 适 pH 曲 线 ： 最 适 pH=6.8

B ． 稳 定 性 pH 曲 线 ： pH5~8

曲 线 B ： 将 酶 在 不 同 pH 下 保 温 ， 再 调 回 pH6.8 ， 测

定 反 应 速 度 。

曲 线 B 说 明 ， 在 pH6.8~8 及 5~6.8 范 围 内 反 应 速 度 的 降

低 ， 不 是 由 于 酶 蛋 白 变 性 失 活 造 成 的 ， 而 是 由 于
酶 或 底 物 形 成 了 不 正 常 的 解 离 ， 而 在 pH ＞ 8 和 pH ＜
5 范 围 ， 则 是 由 两 种 因 素 共 同 作 用 的 结 果 。

虽 然 大 部 分 酶 的 pH— 酶 活 曲 线 是 钟 形 ， 但 也 有

半 钟 形 甚 至 直 线 形 。

P254 图 4-9 酶 的 pH— 酶 活 曲 线

5、 温 度 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响。

1 ． 最 适 温 度 及 影 响 因 素

温 度 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响 有 两 个 方 面 ：
① 提 高 温 度 ， 加 快 反 应 速 度 。
② 提 高 温 度 ， 酶 变 性 失 活 。
这 两 种 因 素 共 同 作 用 ， 在 小 于 最 适 温 度 时 ， 前
一 种 因 素 为 主 ； 在 大 于 最 适 温 度 时 ， 后 一 种 因 素
为 主 。 最 适 温 度 就 是 这 两 种 因 素 综 合 作 用 的 结 果。

温 度 系 数 Q10 ： 温 度 升 高 10℃ ， 反 应 速 度 与 原 来

的 反 应 速 度 之 比 ， Q10 一 般 为 1~2 。

温 血 动 物 的 酶 ， 最 适 温 度 35℃—40℃ ， 植 物 酶 最 适

温 度 40℃—50℃ ， 细 菌 Taq DNA 聚 合 酶 70℃ 。

2 ． 酶 的 稳 定 性 温 度

在 某 一 时 间 范 围 内 ， 酶 活 性 不 降 低 的 最 高 温 度
称 该 酶 的 稳 定 性 温 度 。

26
 酶 的 稳 定 性 温 度 有 一 定 的 时 间 限 制 。
稳 定 性 温 度 范 围 的 确 定 方 法 ： 将 酶 分 别 在 不 同
温 度 下 预 保 温 一 定 时 间 ， 然 后 回 到 较 低 温 度 （ 即
酶 的 热 变 性 失 活 作 用 可 忽 略 的 温 度 ） ， 测 酶 活 性 。
图
酶 浓 度 高 、 不 纯 、 有 底 物 、 抑 制 剂 和 保 护 剂 会
使 稳 定 性 温 度 增 高 。
酶 的 保 存 ：

① 液 体 酶 制 剂 可 以 利 用 上 述 5 种 因 素 中 的 几 种 ，

低 温 （ 几 个 月 ） 。
② 干 粉 ， 可 在 室 温 下 放 置 一 段 时 间 ， 长 期 保 存 ，
应 在 低 温 冰 箱 中 。

6、 酶 浓 度 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响

如 果 底 物 浓 度 足 够 大 ， 使 酶 饱 和 ， 则 反 应 速 度
与 酶 浓 度 成 正 比 。

V max [ S ]
V =
Km + [ S ]

Vmax = K3 [E]

K 3 [ E ] [S ]
V=
Km + [ S ]
K 3 [S ]
= ∗ [E]
Km + [ S ]

[S] 过 量 且 不 变 时 ， v∝[E] 。

7、 激 活 剂 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响

凡 是 能 提 高 酶 活 性 的 物 质 ， 都 称 为 激 活 剂 。
activator
激 活 剂 作 用 包 括 两 种 情 况 ：

27
 一 种 是 由 于 激 活 剂 的 存 在 ， 使 一 些 本 来 有 活 性
的 酶 活 性 进 一 步 提 高 ， 这 一 类 激 活 剂 主 要 是 离 子
或 简 单 有 机 化 合 物 。
另 一 种 是 激 活 酶 原 ， 无 活 性 → 有 活 性 ， 这 一 类
激 活 剂 可 能 是 离 子 或 蛋 白 质 。

1、 无 机 离 子 的 激 活 作 用

（ 1 ） 金 属 离 子 ： K+ 、 Na+ 、 Mg2+ 、 Zn2+ 、 Fe 2+ 、 Ca2+

（ 2 ） 阴 离 子 ： cl- 、 Br -

（ 3 ） 氢 离 子

许 多 金 属 离 子 是 酶 的 辅 助 因 子 ， 是 酶 的 组 成 成
分 ， 参 与 催 化 反 应 中 的 电 子 传 递 。
有 些 金 属 离 子 可 与 酶 分 子 肽 链 上 侧 链 基 团 结 合
稳 定 酶 分 子 的 活 性 构 象 。
有 的 金 属 离 子 通 过 生 成 螯 合 物 ， 在 酶 与 底 物 结
合 中 起 桥 梁 作 用 。
注 意 ：

（ 1 ） 无 机 离 子 的 激 活 作 用 具 有 选 择 性 ， 不 同

的 离 子 激 活 不 同 的 酶 。

（ 2 ） 不 同 离 子 之 间 有 拮 抗 作 用 ， 如 Na+ 与

K+ 、 Mg+ 与 Ca+ ， 但 Mg+ 与 Zn+ 常 可 替 代 。

（ 3 ） 激 活 剂 的 浓 度 要 适 中 ， 过 高 往 往 有 抑 制

作 用 ， 1~50mM

2、 简 单 有 机 分 子 的 激 活 作 用

① 还 原 剂 （ 如 Cys 、 还 原 型 谷 胱 甘 肽 ） 能 激 活 某

些 活 性 中 心 含 有 — SH 的 酶 。

② 金 属 螯 合 剂 （ EDTA ） 能 去 除 酶 中 重 金 属 离 子 ，

解 除 抑 制 作 用 。

28
8、 抑 制 剂 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响

酶 是 protein ， 凡 可 使 酶 蛋 白 变 性 而 引 起 酶 活 力 丧

失 的 作 用 称 为 酶 的 失 活 作 用 。
抑 制 作 用 ： 使 酶 活 力 下 降 但 并 不 引 起 酶 蛋 白 变
性 的 作 用 称 为 抑 制 作 用 。 （ 不 可 逆 抑 制 、 可 逆 抑
制 ）

抑 制 剂 （ inhibitor ） ： 不 引 起 酶 蛋 白 变 性 ， 但 能 使

酶 分 子 上 某 些 必 需 基 团 （ 活 性 中 心 上 一 些 基 团 ）
发 生 变 化 ， 引 起 酶 活 性 下 降 ， 甚 至 丧 失 ， 此 类 物
质 称 为 酶 的 抑 制 剂 。
研 究 抑 制 剂 对 酶 的 作 用 有 重 大 的 意 义 ：

（ 1 ） 药 物 作 用 机 理 和 抑 制 剂 型 药 物 的 设 计 与

开 发 ： 抗 癌 药

（ 2 ） 对 生 物 体 的 代 谢 途 径 进 行 认 为 调 控 ， 代

谢 控 制 发 酵

（ 3 ） 研 究 酶 的 活 性 中 心 的 构 象 及 其 化 学 功 能

基 团 ， 不 仅 可 以 设 计 农 药 ， 而 且 也 是 酶 工
程 和 化 学 修 饰 酶 、 酶 工 业 的 基 础

（1 ） 不 可 逆 抑 制 作 用 （ 非 专 性 必、 专 一 性 ）

抑 制 剂 与 酶 活 性 中 心 基 团 共 价 结 合 ， 使 酶 的 活
性 下 降 ， 无 法 用 透 析 法 除 去 抑 制 剂 。

1、 非 专 一 性 不 可 逆 抑 制 剂

此 类 抑 制 剂 可 以 和 一 类 或 几 类 基 团 反 应 。 它 们
不 但 能 和 酶 分 子 中 的 必 需 基 团 作 用 ， 同 时 也 能 和
相 应 的 非 必 需 基 团 作 用 。

29
 （ 1 ） 、 酰 化 剂

二 异 丙 基 磷 酰 氟 酯 （ DFP ， 神 经 毒 气 ） 和 许 多 有

机 磷 农 药 都 属 于 磷 酰 化 剂 ， 能 与 酶 活 性 中 心 Ser 的
— OH 结 合 ， 抑 制 某 些 蛋 白 酶 及 酯 酶 。 这 类 化 合 物
的 作 用 机 理 是 强 烈 地 抑 制 与 中 枢 神 经 系 统 有 关 的
乙 酰 胆 碱 脂 酶 ， 使 乙 酰 胆 碱 不 能 分 解 为 乙 酰 和 胆
碱 。 乙 酰 胆 碱 的 堆 积 ， 引 起 一 系 列 神 经 中 毒 症 状 。

Ｐ 258 结 构 式 ： 磷 酰 化 剂 与 DFP

P259 反 应 式 ： 磷 酰 化 剂 与 胆 碱 酯 酶 形 成 磷 酰 化
胆 碱 酯 酶

解 毒 剂 ： PAM （ 解 磷 定 ） ， 可 以 把 酶 上 的 磷 酸

根 除 去 。

（ 2 ） 、 烷 化 剂

许 多 有 机 汞 、 有 机 砷 都 是 烷 化 剂 ， 可 以 使 酶 的
巯 基 烷 化

P259 反 应 式 ： 对 氯 汞 苯 甲 酸 与 巯 基 酶 的 反 应

有 机 汞 、 有 机 砷 化 合 物 和 重 金 属 还 可 以 与 还 原
型 硫 辛 酸 （ 人 体 重 要 的 辅 酶 ） 反 应
解 毒 剂 ： 二 巯 基 丙 醇

（ 3 ） 、 氰 化 物

与 含 铁 扑 啉 的 酶 中 的 Fe2+ 结 合 ， 阻 抑 细 胞 呼 吸 。

30
 （ 4 ） 、 重金属

Ag 、 Cu 、 Hg 、 Cd 、 Pb 能 使 大 多 数 酶 失 活 ， EDTA

可 解 除 。

（ 5 ） 、 还 原 剂

以 二 硫 键 为 必 需 基 团 的 酶 ， 可 以 被 巯 基 乙 醇 、
二 硫 苏 糖 醇 等 巯 基 试 剂 还 原 失 活 。

（ 6 ） 、 含 活 泼 双 键 试 剂 （ 与 — Ｓ Ｈ 、 — Ｎ Ｈ ２

反 应 ）

Ｎ — 乙 基 顺 丁 烯 二 酰 亚 胺
图

（ 7 ） 、 亲 电 试 剂

四 硝 基 甲 烷 ， 可 使 Tyr 硝 基 化 。

2、 专 一 性 不 可 逆 抑 制

此 类 抑 制 剂 仅 仅 和 活 性 部 位 的 有 关 基 团 反 应 。

（ 1 ） 、 Ks 型 专 一 性 不 可 逆 抑 制 剂

Ks 型 抑 制 剂 不 仅 具 有 与 底 物 相 似 的 、 可 与 酶 结
合 的 基 团 ， 同 时 还 有 一 个 能 与 酶 的 其 它 基 团 反 应
的 活 泼 基 团 。
专 一 性 ： 抑 制 剂 与 酶 活 性 部 位 某 基 团 形 成 的 非
共 价 络 合 物 和 抑 制 剂 与 非 活 性 部 位 同 类 基 团 形 成

31
的 非 共 价 络 合 物 之 间 的 解 离 常 数 不 同 。
举 例 ：

胰 凝 乳 蛋 白 酶 的 Ks 型 不 可 逆 抑 制 剂 ： 对 一 甲 苯

磺 酰 -L- 苯 丙 氨 酰 氯 甲 烷 （ TPCK ） 与 该 酶 的 最 佳 底 物
对 - 甲 苯 磺 酰 -L- 苯 丙 氨 酸 甲 酯 的 结 构 相 似 ， 都 含 有
对 - 甲 苯 磺 酰 -L- 苯 丙 氨 酰 基 ， 酶 通 过 对 这 个 基 团 的
强 亲 和 力 ， 把 TPCK 误 认 为 底 物 而 与 之 结 合 ， 形 成 Ks
很 小 的 非 共 价 络 合 物 。

《 酶 学 》 P119

最 佳 底 物
TPCK

-CH2-cl 与 酶 活 性 部 位 的 一 个 His- 咪 唑 基 距 离 很 近 ，

很 易 使 之 烷 基 化 ， 而 非 活 性 部 位 的 咪 唑 基 ， 由 于
远 离 -CH2-cl ， 则 不 被 烷 基 化 。

（ 2 ） 、 Kcat 型 专 一 性 不 可 逆 抑 制 剂

这 种 抑 制 剂 是 根 据 酶 的 催 化 过 程 来 设 计 的 ， 它
们 与 底 物 类 似 ， 既 能 与 酶 结 合 ， 也 能 被 催 化 发 生
反 应 ， 在 其 分 子 中 具 有 潜 伏 反 应 基 团 （ latent reactive
group ） ， 该 基 团 会 被 酶 催 化 而 活 化 ， 并 立 即 与 酶 活
性 中 心 某 基 团 进 行 不 可 逆 结 合 ， 使 酶 受 抑 制 。 此
种 抑 制 专 一 性 强 ， 又 是 经 酶 催 化 后 引 起 ， 被 称 为
自 杀 性 底 物 。

举 例 1 ：

β- 羟 基 癸 酰 硫 酯 脱 水 酶 的 Kcat 型 不 可 逆 抑 制 剂 ：

CH3(CH2)5-C=C-CH2-CO-S-R
此 酶 催 化 的 反 应 ：
P260 反 应 式

32
 当 有 Kcat 抑 制 剂 时 ， 此 抑 制 剂 被 催 化 生 成 连 丙 二

烯 结 构 ， 连 丙 二 烯 易 与 His 咪 唑 反 应 ， 使 酶 失 活 。
P261 反 应 式

举 例 2 ：

以 FMN （ 黄 素 单 核 苷 酸 ） 、 FAD （ 黄 素 腺 嘌 呤 二

核 苷 酸 ） 为 辅 基 的 单 胺 氧 化 酶 的 Kcat 型 不 可 逆 抑 制
剂 ； 炔 类 化 合 物 。
迫 降 灵 是 一 种 单 胺 氧 化 酶 的 自 杀 性 底 物 ， 是 治
疗 高 血 压 的 良 药 。
图

单 胺 氧 化 酶 能 氧 化 某 些 血 管 舒 张 剂 （ 如 组 胺 ）
图

由 于 迫 降 灵 能 抑 制 单 胺 氧 化 酶 ， 也 就 能 抑 制 一
些 血 管 舒 张 剂 （ 如 组 胺 ） 的 氧 化 ， 因 而 有 降 血 压
的 作 用 。
Kcat 型 专 一 性 不 可 逆 抑 制 剂 的 专 一 性 很 强 ， 近 来
已 设 计 出 多 种 酶 的 Kcat 逆 制 剂 ， 在 医 疗 方 面 起 到 很
大 作 用 。

（2 ） 可 逆 抑 制 作 用 Reversible Inhibition

此 类 抑 制 剂 与 酶 蛋 白 的 结 合 是 可 逆 的 ， 可 以 用
透 折 法 除 去 抑 制 剂 ， 恢 复 酶 的 活 性 。

1 、 竞 争 性 抑 制 （ Competitive inhibition ）

抑 制 剂 与 底 物 竞 争 酶 的 活 性 中 心 。
竞 争 性 抑 制 剂 具 有 与 底 物 类 似 的 结 构 ， 可 与 酶
形 成 可 逆 的 EI 复 合 物 ， 阻 止 底 物 与 酶 结 合 。 可 以 通
过 增 加 底 物 浓 度 而 解 除 此 种 抑 制 。

33
 P258 图 4-11 酶 与 底 物 及 竞 争 性 、 非 竞 争 性 抑 制 剂

结 合 的 模 型

举 例 1 ： 丙 二 酸 抑 制 琥 珀 酸 脱 氢 酶

举 例 2 ： 磺 胺 类 药 物 及 其 作 用 机 理

磺 胺 类 药 物 可 以 抑 制 细 菌 的 生 长 繁 殖 ， 治 疗 细
菌 引 起 的 各 种 疾 病 。
磺 胺 类 药 物 是 对 氨 基 苯 磺 酰 胺 或 其 衍 生 物 ， 它
是 对 氨 基 苯 甲 酸 的 结 构 类 似 物 ， 竞 争 性 抑 制 二 氢
叶 酸 合 成 酶

P261 结构式：对氨基苯甲酸 对氨基苯磺酰胺 叶酸

磺 胺 类 药 物 的 药 理 （ 对 氨 基 苯 磺 酰 胺 ） ：
嘌 呤 核 苷 酸 的 合 成 必 需 要 由 四 氢 叶 酸 （ 辅 酶 ）
提 供 一 碳 单 位 ； 四 氢 叶 酸 可 由 二 氢 叶 酸 或 叶 酸 转
化 而 成 ； 二 氢 叶 酸 是 在 二 氢 叶 酸 合 成 酶 作 用 下 ，
利 用 蝶 呤 、 对 氨 基 苯 甲 酸 及 Glu 合 成 。
动 物 体 内 的 叶 酸 可 从 食 物 中 获 取 ， 细 菌 体 内 的
叶 酸 只 能 在 二 氢 叶 酸 合 成 酶 作 用 下 ， 利 用 对 氨 基
苯 甲 酸 合 成 。
如 果 动 物 体 内 含 有 大 量 的 对 氨 基 苯 磺 酰 胺 ， 可
与 对 氨 基 苯 甲 酸 竞 争 二 氢 叶 酸 合 成 酶 的 活 性 中 心 ，
抑 制 细 菌 二 氢 叶 酸 合 成 。

2、 非 竞 争 性 抑 制

特 点 ： 抑 制 剂 与 酶 活 性 中 的 以 外 的 基 团 结 合 ，
其 结 构 可 能 与 底 物 无 关 。
酶 可 以 同 时 与 底 物 及 抑 制 剂 结 合 ， 但 是 ， 中 间
产 物 ESI 不 能 进 一 步 分 解 为 产 物 ， 因 此 ， 酶 的 活 性
降 低 。 显 然 ， 不 能 通 过 增 加 底 物 的 浓 度 的 办 法 来
消 除 非 竞 争 性 抑 制 作 用 。
非 竞 争 性 抑 制 剂 多 是 与 酶 活 性 中 心 之 外 的 巯 基
可 逆 结 合 ， 包 括 某 些 含 金 属 离 子 的 化 合 物

34
（ Cu2+ 、 Hg2+ 、 Ag+ ） 和 EDTA ， 。

3、 反 竞 争 性 抑 制

酶 只 有 在 与 底 物 结 合 后 ， 才 能 与 抑 制 剂 结 合 。
E+S→ES+I ≠ P

（3 ） 可 逆 抑 制 作 用 的 动 力 学

用 书 上 P263-266 的 方 法 可 推 出 三 种 抑 制 方 程 。

1、 竞 争 性 抑 制 ：

动 力 学 方 程 ：

V max [ S ]
V=
[I ]
Km ( 1 + ) + [S ]
Ki

[I ]
Km (1 + )
1 Ki 1 1
= ∗ +
V V max [S ] V max

竞 争 性 抑 制 曲 线 :

P263 图 4-12 竞 争 性 抑 制 曲 线

竞 争 性 抑 制 作 用 小 结 ：

（ 1 ） Vmax 不 变 ， Km 变 大 。 要 达 到 同 一 个 给 定 的

Vmax 分 数 ， 必 须 要 有 比 无 抑 制 剂 时 大 得 多 的

35
 底 物 浓 度 。

（ 2 ） 竞 争 性 抑 制 剂 对 酶 促 反 应 的 抑 制 程 度 ，

决 定 于 [I] 、 [S] 、 Km 和 Ki
A. [I] 一 定 ， 增 加 [S] ， 可 减 少 抑 制 程 度 。

B. [S] 一 定 ， 增 加 [I] ， 可 增 加 抑 制 程 度 （ Km’ 增

加 ） 。

C. Ki 值 较 低 时 ， 任 何 给 定 [I] 和 [S] ， 抑 制 程 度 都

较 大 ， Ki 越 大 ， 抑 制 作 用 越 小 。
D. [I]=Ki 时 ， 所 作 双 倒 数 图 直 线 的 斜 率 加 倍 。

E. 在 一 定 [S] 、 [I] 下 ， Km 值 愈 低 ， 抑 制 程 度 愈 小 。

2、 非 竞 争 性 抑 制

动 力 学 方 程 ：
V max
∗ [S ]
[I ]
1+
V= Ki
Km + [ S ]

相 对 速 度 ：
Ki
a=
Ki + [I ]

抑 制 分 数 ：
Ki [I ]
i =1 − =
Ki + [ I ] Ki + [ I ]

非 竞 争 抑 制 曲 线 ：

P265 图 4-13

非 竞 争 性 抑 制 剂 可 使 酶 促 反 应 的 Vmax 降 至

Vmax/ （ 1+[I]/Ki ） ， 而 对 Km 无 影 响 。 它 对 酶 促 反 应 的 抑

36
制 程 度 决 定 于 [I] 和 Ki ， 与 酶 的 Km 和 [S] 无 关 。

3、 反 竞 争 性 抑 制

动 力 学 方 程 ：

相 对 速 度 ：

抑制分数：

P265 图 4-14 反 竞 争 抑 制 曲 线

在 反 竞 争 性 抑 制 作 用 下 ， Km 及 Vmax 都 变 小 ， 且

Km’<Km

P266 表 4-7 小结： 三种可逆抑制作用的酶促反应速度 V 与 Km 值

9、 有 机 介 质 中 的 酶 促 反 应 （ 只 是 一 部 分 酶 ）

传 统 观 点 ： 酶 是 水 溶 性 生 物 大 分 子 ， 只 能 在 水
介 质 中 进 行 催 化 反 应 ， 有 机 介 质 会 使 酶 变 性 。
其 实 在 细 胞 中 ， 许 多 生 物 膜 上 的 酶 就 是 在 低 极
性 的 微 环 境 中 发 挥 催 化 功 能 的 。
优点： ①利于疏水性底物的反应。
② 可 提 高 酶 的 热 稳 定 性 ， 提 高 催 化 温 度 。
③ 能 催 化 在 水 中 不 能 进 行 的 反 应 。
④ 可 改 变 反 应 平 衡 移 动 方 向 。
⑤ 可 控 制 底 物 专 一 性 。
⑥ 防 止 由 水 引 起 的 副 反 应 。

⑦ 可 扩 大 pH 值 的 适 应 性 等 等 。

37
 1、 有 机 介 质 中 酶 促 反 应 的 条 件

（ 1 ） 、 必 需 水 （ 结 合 水 ）

酶 催 化 活 性 所 必 需 的 构 象 ， 是 由 水 分 子 直 接 或
间 接 地 通 过 氢 键 等 非 共 价 相 互 作 用 来 维 持 的 ， 因
此 只 有 与 酶 分 子 紧 密 结 合 的 单 层 水 分 子 ， 对 酶 的
催 化 活 性 才 是 至 关 重 要 的 。
这 紧 紧 吸 附 在 酶 分 子 表 面 ， 维 持 酶 催 化 活 性 所
必 需 的 最 少 量 的 水 称 为 必 需 水 （ 或 结 合 水 、 束 缚
水 ） 。
酶 的 活 性 由 必 需 水 决 定 ， 而 与 溶 剂 里 的 水 含 量
无 关 ， 只 要 必 需 水 不 丢 失 ， 其 它 大 部 分 水 即 使 都
被 有 机 溶 剂 取 代 ， 酶 仍 然 保 持 其 催 化 活 性 。
因 此 ， 可 把 有 机 介 质 中 酶 促 反 应 理 解 为 宏 观 上
是 在 有 机 介 质 中 ， 而 在 微 观 上 仍 是 水 中 的 酶 促 反
应 。 正 因 如 此 ， 才 能 使 用 有 机 介 质 代 替 水 溶 液 ，
进 行 酶 促 反 应 。
一个干燥的酶水合： 吸附水量：

酶分子表面电荷基团： 0-0.07g/g ( 水 / 酶 )

酶分子表面极性基团： 0.07-0.25g/g

弱极性、非极性基团： 0.25-0.28g/g

表 面 完 全 水 化 ， 被 一 层 水 分 子 包 围 。
酶 的 必 需 水 含 量 因 酶 而 异 。

脂 肪 酶 ： 几 个 水 分 子 / 每 个 酶 分 子

胰 凝 乳 蛋 白 酶 ： 50 个 水 分 子 / 每 个 酶 分 子

乙 醇 脱 氢 酶 ： 几 百 个 水 分 子 / 每 个 酶 分 子

（ 2 ） 、 对 酶 的 要 求

具 有 对 抗 有 机 介 质 变 性 的 经 能 力 。

38
 （ 3 ） 、 合 适 的 溶 剂 及 反 应 体 系

（ 4 ） 、 合 适 的 pH

保 证 有 机 介 质 中 酶 的 微 环 境 具 有 最 适 pH 值 。 酶

应 从 具 有 最 适 pH 值 的 缓 冲 液 中 冻 干 或 沉 淀 出 来 。

2、 有 机 介 质 对 酶 性 质 的 影 响

（ 1 ） 、 稳 定 性

大 多 数 酶 在 低 水 有 机 介 质 中 比 在 水 介 质 中 更 稳
定 。
a. 热 稳 定 性 提 高
例 如 ： 猪 胰 脂 肪 酶 在 醇 和 酯 中 进 行 催 化 反 应 ，
在 100℃ 半 衰 期 长 达 12h ， 其 活 性 比 25℃ 时 还 高 几 倍
b. 储 存 稳 定 性 提 高

胰 凝 乳 蛋 白 酶 在 20℃ 时 ， 在 水 中 半 衰 期 只 几 天 。

在 辛 烷 中 ， 可 放 6 个 月 ， 仍 保 持 全 部 活 性 。

（ 2 ） 、 活性

有两类影响 升高活性
降 低 活 性
酶 的 超 活 性 ： 高 于 水 溶 液 中 酶 活 性 值 的 活 性 。

（ 3 ） 、 专 一 性

某 些 有 机 溶 剂 会 使 某 些 酶 的 专 一 性 发 生 变 化 ，
如 脂 肪 酶 在 有 机 介 质 中 有 合 成 肽 键 的 功 能 。 星 号
活 力 （ 第 二 活 力 ） 。

39
 （ 4 ） 、 反 应 平 衡

有 机 介 质 能 改 变 某 些 酶 催 化 的 反 应 平 衡 。
例 如 ： 水 解 酶 类 （ 蛋 白 水 解 酶 ）

在 水 介 质 中 ， 水 的 浓 度 为 55.5mol/L ， 平 衡 趋 向 水

解 方 向 ，
如 在 含 水 量 极 低 的 有 机 介 质 中 ， 平 衡 向 含 成 方
向 偏 移 。

实例：（酶） 合成）产物 溶剂 合成收率

枯草杆菌蛋白酶 核糖核酸酶 甘油90% 50%

无色杆菌蛋白酶 胰岛素 乙醇30% 80%

凝血酶 人生长素 甘油80% 20%

（ 5 ） 、 分 子 印 迹 和 pH 记 忆

酶 在 冻 干 前 可 用 配 体 作 印 迹 。
竞 争 性 抑 制 剂 ， 可 诱 导 酶 活 性 中 心 构 象 发 生 变
化 ， 形 成 一 种 高 活 性 构 象 ， 而 此 种 构 象 在 除 去 抑
制 剂 后 ， 因 酶 在 有 机 介 质 中 的 高 度 刚 性 而 得 到 保
持 。
pH 记 忆 ：
酶 在 有 机 介 质 中 能 “ 记 住 ” 它 最 后 存 在 过 的 水
溶 液 的 pH 值 ， 因 该 pH 值 决 定 了 酶 分 子 上 有 关 基 团
的 解 离 状 态 ， 这 种 状 态 在 冻 干 过 程 和 分 散 到 有 机
介 质 中 之 后 仍 得 到 保 持 。

40
 第4 节 酶 的 作 用 机 理

1、 专 一 性 的 机 理

（1 ） 酶 专 一 性 类 型

一 般 说 来 ， 一 种 分 子 能 成 为 某 种 酶 的 底 物 ， 必
须 具 备 两 个 条 件 ：
分 子 上 有 被 酶 作 用 的 化 学 键 。
分 子 上 有 一 个 或 多 个 结 合 基 团 能 与 酶 活 性 中 心
结 合 。

1、 结 构 专 一 性

（ 1 ） 、 键 专 一 性 （ 对 底 物 结 构 要 求 最 低 ）

酶 只 对 其 作 用 的 的 键 有 要 求 ， 而 对 键 两 侧 基 因
无 特 殊 要 求 。

如 ： 酯 酶 可 催 化 酯 键 水 解 ， R—CO—OR’ ， 对 R 和 R’

无 要 求 ， 但 不 同 底 物 水 解 速 度 不 同 。 又 如 ： 磷 酸
酯 酶 可 水 解 各 种 磷 酸 酯 分 子 。

（ 2 ） 、 基 团 专 一 性 Group Specificity

酶 不 仅 对 键 有 要 求 ， 还 对 键 一 端 的 基 团 有 要 求
但 对 另 一 端 基 团 要 求 不 严 格 。

如 ： α—D—Glc 苷 酶 ， 不 仅 要 求 作 用 的 键 是 α— 糖 苷

键 ， 且 要 求 此 键 一 端 必 须 是 Glc 残 基 ， 对 此 键 另 一
端 基 团 无 要 求 ， 如 此 酶 可 水 解 蔗 糖 和 麦 芽 糖 。

41
 以 上 （ 1 ） 、 （ 2 ） 两 类 称 为 相 对 专 一 性

P268 表 4—9 消 化 道 中 蛋 白 酶 的 专 一 性

（ 3 ） 、 绝 对 专 一 性

酶 只 能 作 用 于 一 个 底 物 ， 或 只 催 化 一 个 反 应 。
如 ： 大 麦 芽 中 的 麦 芽 糖 酶 只 作 用 于 麦 芽 糖 ， 脲
酶 只 催 化 尿 素 水 解 。

2、 立 体 异 构 专 一 性

（ 1 ） 、 旋 光 异 构 专 一 性

当 底 物 具 有 旋 光 异 构 体 时 ， 酶 只 能 作 用 于 其 中
的 一 种 异 构 体 ， 它 是 酶 促 反 应 中 相 当 普 遍 的 现 象 。

如 ： Glu 脱 氢 酶 只 作 用 L—Glu ， 乳 酸 脱 氢 酶 只 作 用

L— 乳 酸 。

（ 2 ） 、 几 何 异 构 专 一 性

顺 式 反 式 异 构 体 。
如 ： 反 丁 烯 二 酸 水 化 酶 只 催 化 反 丁 烯 二 酸 生 成
苹 果 酸 ， 对 顺 丁 烯 二 酸 无 作 用 。
立 体 化 学 专 一 性 还 表 现 在 酶 能 区 分 从 有 机 化 学
观 点 看 属 于 对 称 分 子 中 的 两 个 等 同 的 基 团 ， 只 催
化 其 中 一 个 ， 而 对 另 一 个 无 作 用 。

例 如 ： a. 甘 油 在 甘 油 激 酶 的 催 化 下 只 有 一 个

CH2OH 基 能 被 磷 酸 化 。
b. 糖 代 谢 中 的 顺 一 乌 头 酸 酶 作 用 于 柠 檬 酸 时 ，
两 个 CH2COOH 对 酶 来 说 是 不 同 的 。

42
 图
立体专一性在实践中的应用：（1）药物的构效关系（2）立体异构性药物和其它化合物的酶
法不对称合成或拆分。

用 乙 酰 化 酶 制 备 L— 氨 基 酸 ： 有 机 合 成 的 D 、 L—a.a

乙 酸 化 ， 然 后 用 乙 酰 化 酶 使 L—a.a 水 解 出 来 。

（2 ） 酶 作 用 专 一 性 的 解 释

1、 三 点 结 合 及 锁 钥 模 型 （ 刚 性 模 板 学 说 ）

底 物 结 合 部 位 由 酶 分 子 表 面 的 凹 槽 或 空 穴 组 成
这 是 酶 的 活 性 中 心 ， 它 的 形 状 与 底 物 分 子 形 状 互
补 。 底 物 分 子 或 其 一 部 分 像 钥 匙 一 样 ， 可 专 一 地
插 入 酶 活 性 中 心 ， 通 过 多 个 结 合 位 点 的 结 合 ， 形
成 酶 — 底 物 复 合 物 ， 同 时 酶 活 性 中 心 的 催 化 基 团
正 好 对 准 底 物 的 有 关 敏 感 键 ， 进 行 催 化 反 应 。
三 点 结 合 学 说 指 出 ， 底 物 分 子 与 酶 活 性 中 心 的
基 团 必 须 三 点 都 互 补 匹 配 ， 酶 才 作 用 于 这 个 底 物 。

P270 、 图 4—16 、 4—17

刚 性 模 板 学 说 较 好 地 解 释 了 立 体 专 一 性 ， 但 不
能 解 释 酶 专 一 性 中 所 有 的 现 象 ， 如 既 能 催 化 正 反
应 ， 又 能 催 化 逆 反 应 ； 那 么 ， 酶 的 结 构 不 可 能 既
适 合 于 底 物 又 适 合 于 产 物 。

2、 诱 导 楔 合 模 型

酶 分 子 与 底 物 分 子 接 近 时 ， 酶 蛋 白 质 受 底 物 分
子 诱 导 ， 构 象 发 生 有 利 于 与 底 物 结 合 的 变 化 ， 酶
与 底 物 在 此 基 础 上 互 补 楔 合 ， 进 行 反 应 。

P271 图 4—18

43
2、 高 效 性 的 机 理

1、 邻 近 效 应 与 定 向 效 应

酶 把 底 物 分 子 （ 一 种 或 两 种 ） 从 溶 液 中 富 集 出
来 ， 使 它 们 固 定 在 活 性 中 心 附 近 ， 反 应 基 团 相 互
邻 近 ， 同 时 使 反 应 基 团 的 分 子 轨 道 以 正 确 方 位 相
互 交 叠 ， 反 应 易 于 发 生 。
两 种 效 应 对 反 应 速 度 的 影 响
① 使 底 物 浓 度 在 活 性 中 心 附 近 很 高

甚 至 比 溶 液 中 高 10 万 倍 ， 提 高 反 应 速 度 。

② 酶 对 底 物 分 子 的 电 子 轨 道 具 有 导 向 作 用
举 例 ： 酚 羟 基 和 羧 基 环 化 成 内 酸
图

3 个 CH3 固 定 了 -OH 和 -COOH 的 相 对 方 位 。

③ 酶 使 分 子 间 反 应 转 变 成 分 子 内 反 应

反 应 速 度 提 高 ： 107

图
④ 邻 近 效 应 和 定 向 效 应 对 底 物 起 固 定 作 用
酶 底 复 合 物 寿 命 比 一 般 双 分 子 相 互 碰 撞 的 平 均
寿 命 长 ， 前 者 10-7-10-4 秒 ， 后 者 10-13 秒 ， 增 大 了 产 物 形
成 的 机 率 。

2、 扭 曲 变 形 和 构 象 变 化 的 催 化 效 应

酶 中 某 些 基 团 可 使 底 物 分 子 的 敏 感 键 中 某 些 基
团 的 电 子 云 密 度 变 化 ， 产 生 电 子 张 力 。

P276 图 4-20

44
 环 状 反 应 物 I 水 解 开 环 ， 环 扭 曲 能 量 大 量 释 放 ，

加 速 反 应 。
底 物 与 酶 蛋 白 接 触 ， 加 速 反 应 。
① 酶 从 低 活 性 形 式 转 变 为 高 活 性 形 式
② 底 物 扭 曲 、 变 形
③ 底 物 构 象 变 化 ， 变 得 更 像 过 度 态 结 构 ， 大 大
降 低 活 化 能 。

3、 共 价 催 化

酶 作 为 亲 核 基 团 或 亲 电 基 团 ， 与 底 物 形 成 一 个
反 应 活 性 很 高 的 共 价 中 间 物 ， 此 中 间 物 易 变 成 过
渡 态 ， 反 应 活 化 能 大 大 降 低 ， 提 高 反 应 速 度 。
① 亲 核 共 价 催 化

丝 氨 酸 羟 基 、 Cys 的 -SH 、 His 的 咪 唑 基 。

举 例 ： 咪 唑 基 催 化 对 硝 基 苯 乙 酸 酯 水 解 。
图

② 亲 电 共 价 催 化
亲 电 基 团 攻 击 底 物 的 富 电 子 基 团

例 ： Asp 转 氨 酶 催 化 Asp 转 氨 反 应

P278 表 4-13 形 成 共 价 ES 复 合 物 的 某 些 酶

4、 酸 碱 催 化

酶 分 子 的 一 些 功 能 基 团 起 质 子 供 体 或 质 子 受 体
的 作 用 。
参 与 酸 碱 催 化 的 基 团 ： 氨 基 、 羧 基 、 巯 基 、 酚
羟 基 、 咪 唑 基 。

P279 表 4-14 酶 分 子 中 可 作 为 广 义 酸 碱 的 功 能 基 团

影 响 酸 碱 催 化 反 应 速 度 的 两 个 因 素

45
 ⑴ 酸 碱 强 度 ， 咪 唑 基 在 pH6 附 近 给 出 质 子 和 结 合

质 子 能 力 相 同 ， 是 最 活 泼 的 催 化 基 团 。
⑵ 给 出 质 子 或 结 合 质 子 的 速 度 ， 咪 唑 基 最 快

① 酸 催 化 酯 、 酰 胺 和 肽 的 水 解
图

过 程 ： 共 轭 酸 与 ＞ C=0 氧 形 成 氢 键 ， 使 ＞ C=0 碳 带

更 多 正 电 荷 ， 更 易 吸 引 H2O 分 子 上 的 氧 ， 降 低 ＞ C=0
碳 与 H2O 氧 形 成 共 价 键 的 活 化 能 ； 接 着 ， 共 轭 酸 将
H+ 转 移 给 ＞ C=0 氧 ， 自 己 成 为 共 轭 碱 ， 并 从 H2O 分 子
吸 引 一 个 H+ ， 回 复 原 状 。
② 碱 催 化 酯 、 酰 胺 水 解
图

过 程 ： 共 轭 碱 先 与 H2O 中 H 形 成 氢 键 ， 使 H2O 中 氧

的 电 负 性 增 强 ， 更 易 对 ＞ C=0 碳 进 行 亲 核 进 攻 ， 降
低 碳 氧 键 生 成 的 活 化 能 。

5、 活 性 中 心 的 微 环 境

⑴ 疏 水 环 境
酶 活 性 中 心 附 近 往 往 是 疏 水 的 ， 介 电 常 数 低 ，
可 加 强 极 性 基 团 间 的 反 应 。
⑵ 电 荷 环 境
在 酶 活 性 中 心 附 近 ， 往 往 有 一 电 荷 离 子 ， 可 稳
定 过 渡 态 的 离 子 ， 增 加 酶 促 反 应 速 度 。 如 溶 菌 酶
Asp52 带 负 电 荷 ， 可 以 稳 定 过 渡 态 的 正 离 子 。
酶 催 化 反 应 的 高 效 性 ， 可 能 是 由 于 以 上 五 种 因
素 中 的 几 种 因 素 协 同 作 用 的 结 果 ， 而 非 酶 催 化 反
应 往 往 只 有 一 种 催 化 机 制 。

46
3、 某 些 酶 的 活 性 中 心 及 其 作 用 机 理

（1 ） 酶 的 活 性 中 心

1、 活 性 中 心 的 概 念

对 于 不 需 要 辅 酶 的 酶 来 说 ， 活 性 中 心 就 是 酶 分
子 在 三 维 结 构 上 比 较 靠 近 的 少 数 几 个 氨 基 酸 残 基
或 是 这 些 残 基 的 某 些 基 团 ， 它 们 在 一 级 结 构 上 相
距 可 能 很 远 ， 通 过 肽 链 的 盘 绕 、 折 叠 而 在 空 间 构
象 上 相 互 靠 近 。
对 于 需 要 辅 酶 的 酶 来 说 ， 辅 酶 分 子 或 辅 酶 分 子
的 某 一 部 分 结 构 往 往 就 是 活 性 中 心 的 组 成 部 分 。
一 般 认 为 ， 活 性 中 心 有 两 个 功 能 部 位 ： 底 物 结
合 部 位 ， 催 化 部 位
活性中心外的部位为活性中心的形成提供了结构基础 。

2、 活 性 中 心 的 氨 基 酸 残 基

有 七 种 a.a 在 酶 活 性 中 心 出 现 的 频 率 最 高 ， 它 们

是 Ser 、 His 、 Cys 、 Tyr 、 Asp 、 Glu 、 Lys 。

活 性 中 心 的 a.a 残 基 往 往 分 散 在 相 互 较 远 的 a.a 顺

序 中 ， 有 的 甚 至 分 散 在 不 同 的 肽 链 上 ， 如 α- 胰 凝 乳
蛋 白 酶 活 性 中 心 的 几 个 a.a 残 基 ， 分 别 位 于 B 、 C 两
个 肽 链 上 ， 靠 分 子 空 间 结 构 的 形 成 ， 集 中 在 酶 分
子 特 定 区 域 ， 成 为 具 有 催 化 功 能 的 活 性 中 心 。

酶 分 子 a.a 残 基 分 类

（ 1 ） 接 触 残 基

它 们 与 底 物 接 触 ， 参 与 底 物 的 化 学 转 变 ， 此 类
a.a 残 基 的 一 个 或 几 个 原 子 与 底 物 分 子 中 一 个 或 几
个 原 子 的 距 离 都 在 一 个 键 距 离 之 内 （ 1.5-2A ） 。
它 们 的 侧 链 起 与 底 物 结 合 作 用 的 称 为 结 合 基 团
起 催 化 作 用 的 称 为 催 化 基 团 。

47
 （ 2 ） 辅 助 残 基

它 不 与 底 物 接 触 ， 而 是 在 使 酶 与 底 物 结 合 及 协
助 接 触 残 基 发 挥 作 用 方 面 起 作 用 。
上 述 两 类 残 基 构 成 酶 活 性 中 心 。

（ 3 ） 结 构 残 基

在 维 持 酶 分 子 正 常 三 维 构 象 方 面 起 重 要 作 用 ，
它 们 与 酶 活 性 相 关 ， 但 不 在 酶 活 性 中 心 范 围 内 ，
属 于 酶 活 性 中 心 以 外 的 必 需 残 基

上 述 三 类 残 基 统 称 酶 的 必 需 基 团 ， 若 被 其 它 a.a

取 代 ， 往 往 造 成 酶 失 活 。

（ 4 ） 非 贡 献 残 基 （ 非 必 需 基 团 ）

它 们 对 酶 活 性 的 显 示 不 起 作 用 ， 可 由 其 它 a.a 代

替 ， 且 在 酶 分 子 中 占 很 大 比 例 。
它 们 可 能 在 免 疫 ， 酶 活 性 调 节 ， 运 输 转 移 ， 防
止 降 解 等 方 面 起 作 用 。
结 合 底 物 作 用 （ 结 合 残 基 ）
接 触 残 基
活性中心 催化作用（催化基团）
必需基团 辅助残基
活 性 中 心 外 （ 结 构 残 基 ）
酶 蛋 白
非 必 需 基 团

3、 活 性 中 心 区 域 的 一 级 结 构

由 于 一 些 酶 的 活 性 中 心 一 级 结 构 结 构 与 催 化 机
理 极 其 相 似 ， 可 把 它 们 归 为 一 族 。
蛋 白 水 解 酶 就 有 几 个 族 ：

（ 1 ） 丝 氨 酸 蛋 白 酶 （ 胰 凝 乳 蛋 白 酶 、 胰 乳 蛋

白 酶 、 弹 性 蛋 白 酶 、 枯 草 杆 菌 蛋 白 酶 等 ）

（ 2 ） 锌 蛋 白 酶 （ 羧 肽 酶 等 ）

48
 （ 3 ） 巯 基 蛋 白 酶 （ 木 瓜 蛋 白 酶 等 ）

（ 4 ） 羧 基 蛋 白 酶 （ 胃 蛋 白 酶 等 ）

在 同 一 族 酶 中 ， 活 性 中 心 一 级 结 构 的 a.a 顺 序 极

相 似 。

酶 a.a

顺 序

胰蛋白酶（牛） Asp-Ser-Cys-Gln-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Val-Val-Cys-

Ser-Gly-Lys

胰凝乳蛋白酶（牛） Ser-Ser-Cys-Met-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Leu-Val-Cys-Lys-

Lys-Asn

弹性蛋白酶（猪） Ser-Gly-Cys-Gln-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Leu-His-Cys-

Leu-Val-Asn

凝血酶（牛） … Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-

Met-Lys-Ser-Pro

这 4 个 源 于 哺 乳 动 物 的 酶 活 性 中 心 ， 都 含 有 一

个 包 括 Ser 在 内 的 完 全 相 同 的 六 肽 ：
…Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro…

 同 源 的 趋 异 进 化

来 自 胰 脏 的 胰 凝 乳 蛋 白 酶 （ Phe 、 Tyr 、 Trp 、 ） 、

胰 蛋 白 酶 （ Lys 、 Arg ） 和 弹 性 蛋 白 酶 （ 疏 水 残 基 ） ，
活 性 中 心 Ser 附 近 的 a.a 顺 序 相 同 ， 且 分 子 一 级 结 构
中 有 40%a.a 顺 序 相 同 ， 三 维 结 构 也 相 同 ， 表 明 它 们
起 源 于 共 同 的 祖 先 ， 但 是 它 们 的 底 物 专 一 性 不 同 。
这 种 来 源 于 共 同 祖 先 ， 经 基 因 突 变 而 得 出 不 同
专 一 性 的 结 果 称 为 同 源 的 趋 异 进 化 。

 异 源 的 趋 同 进 化

49
 来 自 枯 草 杆 菌 的 Ser 蛋 白 酶 的 结 构 与 上 述 三 种 酶

很 不 同 ， 且 活 性 中 心 Ser 附 近 的 a.a 顺 序 也 不 同 （ -Gly-

Thr-Ser-Met-Ala-Ser ） 。
电 荷 中 继 网 的 位 置 也 不 同 ：
Asp102-His57-Ser195 （ 胰 凝 乳 蛋 白 酶 和 弹 性 蛋 白 酶 ）
Asp32-His64-Ser221 （ 枯 草 杆 菌 蛋 白 酶 ）
这 表 明 枯 草 杆 菌 蛋 白 酶 与 胰 凝 乳 蛋 白 酶 等 三 个
酶 来 源 不 同 ， 但 它 们 的 电 荷 中 继 网 相 同 ， 功 能 相
同 ， 这 种 情 况 称 异 源 的 趋 同 进 化 。

4、 判 断 和 研 究 活 性 中 心 的 主 要 方 法

（ 1 ） 通 过 酶 的 专 一 性 （ 2 ） 酶 的 化 学 修 饰 法

（ 3 ） 亲 合 标 记 法 （ 4 ） X 射 线 晶 体 衍 射 法

（2 ） 酶 作 用 机 理 举 例

1、 胰 凝 乳 蛋 白 酶 的 作 用 机 理 ：

（ 1 ） 、 专 一 性

该 酶 需 要 底 物 有 一 个 疏 水 基 团 结 合 于 酶 上 的 疏
水 部 位 ， 这 个 结 合 起 定 位 作 用 ， 使 底 物 敏 感 键 对
准 酶 的 催 化 基 团 。

疏 水 定 位 基 团 ： Phe 、 Tyr 、 Trp

（ 2 ） 、 催 化 机 理

① 活 性 中 心 ： Ser195—His57—Asp102 ， 三 者 构 成 一 个 氢

键 体 系 ， His57 的 咪 唑 基 是 Ser195 的 羟 基 和 Asp102 的 羧 基

50
之 间 的 桥 梁 ， 这 个 氢 键 体 系 称 为 电 荷 中 继 网 （ harge

relay network ） 。 通 过 电 荷 中 继 网 ， 进 行 酸 碱 催 化 及 共
价 催 化 。 Ser195 由 于 His57 和 Asp102 的 影 响 而 成 为 很 强 的
亲 核 基 团 ， 它 是 活 性 中 心 的 底 物 结 合 部 位 ， His57 是
活 性 中 心 的 催 化 部 位 。

Ｐ P285 图 4-27 ， P287 图 4-30 胰 凝 乳 蛋 白 酶 中 的 电 荷

中 继 网

② 胰凝乳蛋白酶对多肽的水解过程

P288 图 4—31 胰 凝 乳 蛋 白 酶 对 多 肽 的 水 解 过 程

第一阶段 酰化
Ser195--OH 中 的 氧 攻 击 肽 键 的 羰 基 碳 ， 形 成 四 联 体
过 渡 态 （ Ser195—OH 、 底 物 的 酰 基 、 底 物 的 氨 基 、 His
的 咪 唑 ） ， 敏 感 肽 键 断 裂 ， 底 物 中 的 胺 成 分 通 过
氢 键 与 酶 的 His57 咪 唑 基 相 连 ， 底 物 的 羧 基 部 分 酯 化
到 Ser195 的 羟 基 上 。
第二阶段 脱酰
电 荷 中 继 网 从 水 中 吸 收 一 个 质 子 ， 结 果 产 生 的
OH- 攻 击 连 在 Ser195 上 底 物 的 羧 基 碳 原 子 ， 形 成 四 联 体
过 渡 态 ， 然 后 His57 供 出 一 个 质 子 给 Ser195 上 的 氧 原 子 ，
结 果 底 物 中 的 酸 成 分 从 Ser195 上 释 放 。

除 胰 凝 乳 蛋 白 酶 外 ， 在 催 化 中 具 有 Asp-His-Ser 电 荷

中 继 网 的 还 有 胰 蛋 白 酶 ， 弹 性 蛋 白 酶 ， 枯 草 杆 菌
蛋 白 酶 等 ， 但 它 们 的 底 物 结 合 部 位 不 同 ， 底 物 专
一 性 也 不 同 。

P288 图 4-32 三 种 胰 脏 中 的 蛋 白 酶 的 底 物 结 合 部 位

51
 胰凝乳蛋白酶 胰蛋白酶 弹性蛋白酶

可供芳香环及大 可供带电荷的 只能让 Ala 等 小 分 子

的非极性侧链伸入 Lys. 、 Arg 进入 进入

第5 节 多 酶 体 系 与 酶 活 性 的 调 节 控 制

1、 多 酶 体 系

（1 ） 多 酶 体 系 及 其 分 类

细 胞 中 的 许 多 酶 ， 常 常 在 一 个 连 续 的 反 应 链 中
起 作 用 ， 前 一 个 反 应 的 产 物 是 后 一 个 反 应 的 底 物 。

多 酶 体 系 ： multienzyme system 在 完 整 细 胞 内 的 某 一 代

谢 途 径 中 ， 由 几 个 酶 形 成 的 反 应 链 体 系 。
可 分 为 三 种 类 型 ： 可 溶 性 的 （ 分 散 性 的 ） ， 结
构 化 的 （ 多 酶 复 合 体 ） ， 在 细 胞 结 构 上 有 定 位 关
系 的 （ 结 构 化 程 度 更 高 ） 。

P297 图 4—42 （分散性的多酶体系） 图 4-43 （ 多 酶 复 合 体 ）

（2 ） 多 酶 体 系 的 自 我 调 节

（ 1 ） 大 部 分 具 有 自 我 调 节 能 力 的 多 酶 体 系 ，

第 一 步 反 应 就 是 限 速 步 骤 ， 它 控 制 着 全 部 反 应 序
列 的 总 速 度 。

（ 2 ） 反 馈 抑 制 与 底 物 激 活

催 化 第 一 步 反 应 的 酶 ， 大 多 都 是 别 构 酶 ， 能 被
全 部 反 应 序 列 的 最 终 产 物 所 抑 制 ， 有 时 则 是 反 应

52
序 列 分 叉 处 的 酶 受 到 最 终 产 物 的 抑 制 ， 称 为 反 馈
抑 制 ； 有 的 被 底 物 激 活

P299 图 4-45 反 馈 抑 制 与 底 物 激 活

正 调 节 物 ： 一 般 是 别 构 酶 的 底 物 ， 可 以 激 活 别
构 酶 。
负 调 节 物 ： 可 以 抑 制 别 构 酶 ， 一 般 是 代 谢 序 列
的 最 终 产 物 。
通 过 多 酶 体 系 的 自 我 调 节 （ 反 馈 抑 制 和 底 物 激
活 ） ， 可 使 代 谢 过 程 得 以 协 调 地 、 有 条 不 紊 地 合
理 进 行 。
下 面 讨 论 具 体 到 每 个 酶 是 怎 样 调 节 的

2、 酶 活 性 的 调 节 控 制 和 调 节 酶

调 节 酶 ： 活 性 可 被 调 节 的 酶 ， 主 要 是 别 构 酶 和
共 价 调 节 酶 。

（1 ） 别 构 效 应 的 调 控

别 构 效 应 ： 调 节 物 （ 效 应 物 ） 与 别 构 酶 分 子 中
的 别 构 中 心 （ 调 节 中 心 ） 结 合 后 ， 诱 导 产 生 或 稳
定 住 酶 分 子 的 某 种 构 象 ， 使 酶 活 性 中 心 对 底 物 的
结 合 催 化 作 用 受 到 影 响 ， 从 而 调 节 酶 促 反 应 的 速
度 。

（ 1 ） 、 别 构 酶 的 结 构 特 点 和 性 质

（ 1 ） 已 知 的 别 构 酶 都 是 寡 聚 酶 ， 含 有 两 个 或

两 个 以 上 亚 基

（ 2 ） 具 有 活 性 中 心 和 别 构 中 心 （ 调 节 中 心 ）

活 性 中 心 负 责 底 物 结 合 和 催 化 ， 别 构 中 心

53
 负 责 调 节 酶 反 应 速 度 。 活 性 中 心 和 别 构 中
心 处 在 不 同 的 亚 基 上 或 同 一 亚 基 的 不 同 部
位 上 。

（ 3 ） 多 数 别 构 酶 不 止 一 个 活 性 中 心 ， 活 性 中

心 间 有 同 种 效 应 ， 底 物 就 是 调 节 物 ： 有 的
别 构 酶 不 止 一 个 别 构 中 心 ， 可 以 接 受 不 同
的 代 谢 物 的 调 节 。

（ 4 ） 别 构 酶 由 于 同 位 效 应 和 别 构 效 应 ， 不 遵

循 米 式 方 程 ， 动 力 学 曲 线 也 不 是 典 型 的 双
曲 线 型 ， 而 是 S 型 （ 同 位 效 应 为 正 协 同 效 应 ）
和 压 低 的 近 双 曲 线 （ 同 位 效 应 为 负 协 同 效
应 ） 。

（ 2 ） 、 别 构 酶 的 动 力 学 曲 线

① 同 位 效 应 为 正 协 同 效 应 的 别 构 酶 是 S 型 曲 线

P303 图 4-46 4-47

这 种 S 形 曲 线 体 现 为 ， 当 底 物 浓 度 发 生 较 小 变

化 时 ， 别 构 酶 可 以 极 大 程 度 地 控 制 反 应 速 度 ， 这
是 别 构 酶 可 以 灵 活 地 调 节 反 应 速 度 的 原 因 。

米 氏 酶 ： [S]0.9/[S]0.1=81

别 构 酶 ： [S]0.9/[S]0.1=3

表 明 当 底 物 浓 度 发 生 较 小 变 化 时 ， 如 上 升 3 倍 ，

别 构 酶 的 酶 促 反 应 速 度 可 以 从 0.1Vmax 升 至 0.9Vmax 。

当 增 加 正 调 节 物 浓 度 时 Km 减 小 ， 亲 和 力 增 大 ，

协 同 性 减 小 ： 当 增 加 负 调 节 物 的 浓 度 时 Km 增 加 ，
亲 和 力 减 小 ， 协 同 性 增 大 （ 对 底 物 浓 度 的 反 应 灵

54
敏 度 增 加 ） 。
② 同 位 效 应 为 负 协 同 效 应 的 别 构 酶 是 近 似 双 曲
线

P304 图 4-48

负 协 同 效 应 时 酶 的 反 应 速 度 对 底 物 浓 度 的 变 化
不 敏 感

（ 3 ） 、 别 构 酶 调 节 活 性 的 机 理

① 序 变 模 型 ：
酶 分 子 中 亚 基 结 合 底 物 后 ， 构 象 逐 个 地 依 次 变
化 。
② 齐 变 模 型 ：

（ 4 ） 、 别 构 酶 的 鉴 定

1 S 型 曲 线 是 必 要 但 不 充 分 条 件

2 脱 敏 作 用

3 [S]0.9 ／ [S]0.1

Rs=81 米 氏 酶

Rs ＜ 81 正 协 同

Rs ＞ 81 负 协 同

④ Hill 系 数 法

（2 ） 可 逆 共 价 修 饰 的 调 控 （ 共 价 调 节 酶 ）

共 价 调 节 酶 ： 酶 分 子 被 其 它 的 酶 催 化 进 行 共 价
修 饰 ， 从 而 在 活 性 形 式 与 非 活 性 形 式 之 间 相 互 转
变 。
举例：糖原磷酸化酶

55
 P313 图 4-57

信 号 的 级 联 放 大 ：
1 分 子 磷 酸 化 酶 激 酶 ， 活 化 生 成 几 千 个 磷 酶 化

酶 a
1 分 子 磷 酸 化 酶 a ， 催 化 生 成 几 千 个 1-P-G

共 价 调 节 酶 的 两 种 常 见 类 型

① 磷酸化 去磷酸化 -OH ATP

② 腺苷酰化 脱腺苷酰化 腺苷酰基由 ATP 提 供

（3 ） 酶 原 的 激 活

具 有 不 可 逆 性 。 属 于 此 类 的 有 消 化 系 统 中 的 酶
（ 胰 蛋 白 酶 ， 胰 凝 乳 蛋 白 酶 ， 胃 蛋 白 酶 ） 和 血 液
凝 固 系 统 中 的 酶 。

（ 1 ） 、 胰 凝 乳 蛋 白 酶 原 的 激 活 （ 由 胰 蛋 白 酶

激 活 ）

P314 图 4-58

（ 2 ） 、 胰 蛋 白 酶 对 胰 脏 蛋 白 酶 原 的 激 活

肠 激 酶

胰 蛋 白 酶 原 胰 蛋 白 酶

胰凝乳蛋白酶原 弹性蛋白酶原
56
 胰 蛋 白 酶

胰凝乳蛋白酶 弹性蛋白酶

羧肽酶原 羧肽酶

（4 ） 专 一 性 调 控 蛋 白 （ 调 控 因 子 ） 对 酶 活 性 的 调

节 控 制

钙 调 蛋 白 、 激 素 结 合 蛋 白 ， 促 进 或 抑 制 特 异 的
酶 活 性

第6 节 酶 与 抗 体 — — 抗 体 酶 abzyme(antibody enzyme)

参阅 P293

又 称 催 化 性 抗 体 （ catalytic antibody ） ， 是 一 种 具 有 催

化 功 能 的 抗 体 分 子 。
过 渡 态 理 论 ： 酶 与 底 物 不 是 在 基 态 ， 而 是 在 过
渡 态 结 构 互 补 ， 亲 和 力 最 强 ， 释 放 出 的 结 合 能 使
过 渡 态 结 合 物 能 级 降 低 ， 利 于 反 应 物 分 子 越 过 能
垒 ， 加 速 反 应 。
而 抗 体 与 抗 原 是 基 态 结 合 。

57
 第7 节 同 工 酶、 诱 导 酶

1、 同 工 酶

能 催 化 同 一 种 化 学 反 应 ， 但 其 酶 蛋 白 本 身 的 分
子 结 构 不 同 的 一 组 酶 ， 存 在 于 生 物 的 同 一 种 属 或
同 一 个 体 的 不 同 组 织 中 ， 甚 至 同 一 组 织 、 同 一 细
胞 中 。

哺 乳 动 物 乳 酸 脱 氢 酶 有 5 种

CH3CHOH-COO-+NAD+ LDH CH3COCOO-+NADH+H+

均 由 4 个 亚 基 组 成

HHHH 在 心 肌 中 占 优 势
HHHM
HHMM
HMMM
MMMM 在 骨 骼 肌 中 占 优 势

2、 诱 导 酶

酶 可 相 对 地 区 分 为 结 构 酶 和 诱 导 酶 。
结 构 酶 ： 指 正 常 细 胞 内 存 在 的 酶 ， 它 的 含 量 较
稳 定 ， 受 外 界 因 素 影 响 很 小 。
诱 导 酶 ： 在 正 常 细 胞 中 含 量 极 少 或 没 有 ， 当 细
胞 中 加 入 特 定 诱 导 物 后 ， 诱 导 产 生 的 酶 ， 含 量 在
诱 导 物 存 在 下 显 著 增 高 ， 诱 导 物 往 往 是 该 酶 的 底
物 或 底 物 类 似 物 。

如 ： 大 肠 杆 菌 中 的 β- 半 乳 糖 苷 酶

E.coli 在 含 Glc 的 培 养 基 中

E.coli 在 只 含 乳 糖 的 培 养 基 中 ： Glc-β(1→4)Gal 苷

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 第8 节 酶 工 程

计 划 ： 8 学 时

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