INSTITUT DES TECHNICIENS SPECIALISES EN AGRICLTURE

SIDI HAMMADI

Compte rendu de TP de TECHNIQUE DES

ANALYSES microbiologie

Réalisé par :
OUABOU OUSSAMA
 Sommaire

I. Introduction ...................................................................................

II. Préparation de matériels et produits .........................................................

III. La manipulation ...............................................................................

IV. Conclusion ......................................................................................

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 Introduction :

Le lait est un aliment complet et riche en plusieurs éléments nutritifs,

ce qui le rend susceptible d’être facilement contaminé et altéré par les
microorganismes. Pour assurer la qualité hygiénique et commerciale de
ces aliments doit être contrôlée par plusieurs analyses microbiologiques
et ces travaux pratiques nous a permet de connaitre nombreux
manipulation avec DES bonnes méthodes .

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I. LES BPH :

• • Port d'une blouse en coton fermée.

• • Nettoyage des paillasses et du matériel éventuellement contaminé.

• • Jeter chewing-gum ou autre aliment en cours de consommation

• • Déposer les vêtements de ville dans le vestiaire, ou à l’écart des zones à

risque (éteindre téléphone portable)

• • Attacher les cheveux longs vers l’arrière

• • Ôter les bijoux des doigts et poigne

• • Fermer les portes et les fenêtres

• • Nettoyer et désinfecter la paillasse avec l’eau de Javel (1/3 Javel et

2/3 Eau)

• • Se laver les mains à l’aide d’un désinfectant

 I. Préparation de matériels et produits :
La verrerie :
Les boites pétries, les pipettes, les tubes à essai, pipettes pasteur, portoirs, les
flacons. LES TUBES A ESSEI. FLACONS.

Boite de pétrie

On a utilisé la verrerie qui comprend la boite de pétri, le tube à essai, pipette,

pipette pasteur et lame on les fait entourer par un papier aluminium puis in les fait
stériliser via l’étuve à 150 C° pendant 15 minutes

Le matériel :

LA HAUTE

Appareil de comptage Étuve

BALANCE PLAQUE CHAUFANTE AUTOCLOVE

 Préparation des produits chimiques :

L’eau physiologique :

Pour la préparation de l’eau physiologique on prend 0,85% équivalent de 9g de NaCl

dans un litre de l’eau distillée avec une bien agitation, et le peser dans l’autoclave
pour stériliser à une température de 150°C pendant 20min.

Le milieu de culture :

On met sur une balance un flacon avec un entonnoir puis on fait tarer la balance pour

raison de facilité la mesure. On a ajouté une quantité de EMB ensuite on a ajouté une

quantité spécifique de l’eau distiller.

La même chose concernant le milieu de culture PCA.

ALORS QUE LES DEUX MILIEUX DE CULTURE On a effectué une agitation manuelle.

À l’aide du barreau magnétique et d’agitateur donc on a pu

mélanger et éblouir la solution sur la plaque chauffante et le

rendre homogène.

Après l’agitation on stérilisé le milieu de culture dans

l’autoclave à une température de 121°C pendant 20min.

II. La manipulation :
Avant la manipulation :
• Nettoyage et désinfection de paillasse.

• Stérilisation de la haute.

• On organise le paillasse de haute par suite :

➢ À gauche : tubes à essai, boite de pétrie, l’eau physiologique,

échantillon

➢ À droite : pipettes, bécher d’eau de javel, vortex, milieu de culture

Pendant la manipulation :

1. LES coliformes fécaux et totaux :

Pour pouvoir effectuer la dilution on a utilisé 3 tubes à essai (le premier

tube desolution mère) et 12 boites de pétris. On a pris de l’eau

physiologique déjà préparé (9 ml de « Na Cl » mélanger avec 1 litre d’eau

distillé) on a rempli les 2 tubes par 9 ml de l’eau physiologiques puis on a pris

1 ml de lait ultra haute température. On l’a ajouté juste dans le premier

tube à essai ensuite ont changé lapipette après chaque dilution. On a ajouté

1 ml de l’échantillon précédant puis on lerajoute à l’échantillon suivant et

cette méthode est présentée ci-dessous :

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 2. Les FMAT :

Préparer des dilutions décimales dans de l'eau physiologique à partir de l'échantillon à

analyser - Fondre le milieu gélosé par chauffage. - Laisser refroidir jusqu'à environ 48°C de
préférence dans un bain-marie réglé à cette température.

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Ensemencement :
➢ Les coliformes fécaux et totaux :

Après la dilution on fond le milieu gélosé par chauffage, A l'aide d'une

pipette stérile, ensemencer les boîtes de Pétri à partir des dilutions en

transférant 1 ml de chaque dilution. - Ajouter 15 ml, environ, du milieu

EMB fondu et ramené à une température d'environ 48°C. - Agiter

immédiatement après l'addition du milieu en faisant décrire à la boîte

de Pétri, 5 à 10 fois, un cercle sur la paillasse ou dans l'air pour bien

homogénéiser. Il faut veiller à ce que l'homogénéisation soit faite de la

même façon pour toutes les boîtes (même nombre de cercles ayant à

peu près le même diamètre). - Laisser solidifier sur la paillasse en

gardant les boîtes entrouvertes à côté du bec bunsen. - Après

solidification, ajouter une couche de 2 à 3 mm (environ 5 ml) du même

milieu maintenu en surfusion à 48°C. Laisser solidifier

La lecture :
Compter les colonies violettes-rouges ayant un diamètre de 2 à 3 mm, une couleur
violette foncée et entourées d'une zone rougeâtre de précipitation d'acides
biliaires.

Enlevé les boite et faire la lecture des boites pétrie .on déterminer les boites
comptables (30˃NB˂300)

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 ➢ Les FMAT :

Préparer des dilutions décimales dans de l'eau physiologique à partir de l'échantillon à

analyser - Fondre le milieu gélosé par chauffage. - Laisser refroidir jusqu'à environ 48°C de
préférence dans un bain-marie réglé à cette température. - Prélever 1 ml de chaque dilution à
l'aide d'une pipette stérile de 1 ml et le déposer dans une boîte de Pétri stérile en commençant
par la dilution la plus forte (la moins concentrée en microorganismes). - Couler la gélose
préalablement fondue et ramenée à une température d'environ 48°C. - Laisser refroidir sur la
paillasse à proximité du bec Bunsen jusqu'à la solidification du milieu gélosé, de préférence en
laissant les boîtes de Pétri entrouvertes pour éviter la formation de condensats à la surface du
milieu.

L’incubation :

Après ensemencement et solidification du milieu de culture, placer les boîtes de Pétri à l'envers
(couvercle en bas) dans un incubateur à 37°C (±2) pendant 72 heures.

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 Les résultats trouve :
✓ Les coliformes fécaux et totaux :

Le nombre de colonies trouve est :

61

Donc :

UFC : 61×1000 ÷ 1 = 𝟔𝟏𝟎𝟎𝟎

✓ Les FMAT :

Alors que celui-ci nous avons vu des napes

ou bien des tapies de contamination a cause
de :

✓ Absence de lavage des mains

✓ La discussion au cours de la manipulation

✓ Nous avons pas travailler dans la zone stérile ( la haute )

✓ Nous avons pas fermer la porte de laboratoire

✓ Contamination par le combinaison (on peut dire que ce dernier il est un

source de contamination )

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 Conclusion :

Le travail pratique réalisé nous a permet de consolider nos

connaissances acquises au cours de microbiologique générale et

connaitre la méthode correcte de manipulation.

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