A Ciclo de Krebs Temas a desarrollar: Introduccién al metabolismo Conversion de Piruvato a Acetil CoA Ciclo de Krebs Reacciones Anapleroticas Puntos de FugaIntroduccion Antes de empezar de lleno con lo que seria Ciclo de Krebs, hagamos un breve repaso de lo que es “Respiracién Celular’ La respiracién celular es el conjunto de reacciones por las cuales obtenemos energia en nuestro cuerpo, para ello, tenemos que oxidar las diferentes biomoléculas y metabolizarlas. La respiracién celular consta de 3 pasos: 1, Metabolismo de las biomoléculas 2. Ciclo de Krebs 3. Cadena de transporte de electrones y fosforilacion oxidativa Si o si si quiero generar energia, NECESITO REALIZAR ESTOS 3 PASOS. éNieron cuando dicen que todos los caminos conducen a Roma? Bueno, todos los caminos conducen a Ciclo de Krebs. Por ende, si yo quiero generar energia a partir del metabolismo de las biomoléculas, los productos de la degradacién tienen que ingresar si o si a esta via (obviamente existen diferentes formas de hacerlo, pero siempre terminamos en lo mismo). Aminodeidos catodcidos CICLO DE KREBS Transporte de electrones. Fosforilacién, oxidative, on2Qué va a ingresar a Ciclo de Krebs? = Los esqueletos carbonados de los aa = El Acetil CoA producto de la degradacién de acidos grasos = El Acetil CoA producto de la degradacién de cuerpos cetdnicos (en ayunos muy ‘extremos) = El Acetil CoA producto de la conversién del Piruvato (producto final de la glucolisis aerdbica). En los anteriores restimenes ya vimos como obtener los esqueletos carbonados, y el Acetil CoA por parte de acidos grasos y cuerpos ceténicos, asique en este resumen vamos a ver coma obtener el Acetil CoA a partir del Piruvato. De qué depende el destino del Piruvato? + Del tejido + Dela presencia o ausencia de O2 + Del estado metabolica Como sabemos, e! Piruvato proviene de la oxidaci6n de la Glucosa (giucolisis), proceso que se da a nivel citosdlico, y la conversién de Piruvato a Acetil CoA y todo el ciclo de Krebs tiene lugar en la mitocondria, por lo tanto, el Piruvato debera ingresar. Como sabemos, ia membrana mitocondtial externa (MME) es permeable a la mayoria de los solutos, incluyendo el Piruvato, pero cuando el mismo quiere pasar por la membrana mitocondrial interna (MMI) se encuentra con un obstaculo, ya que esta es impermeable a la mayoria de los solutos, por lo que el Piruvato debe ingresar por una proteina transportadora llamada MPC, y una vez en la matriz mitocondrial puede convertirse a Acetil CoA. La conversion de Piruvato a Acetil CoA esta dada por el Complejo de la Piruvato DSH 0. 0" NAD+ NADH +H" wa " °o i ie Hc7 Ss CH, hessscomneme A Coa-SH CO,El complejo de la Piruvado DSH esta formado por 3 enzimas: Cada una de ellas posee diferentes cofactores para llevar a cabo la reaccién (5): Utliza 5 cofactores Este complejo y cada una de las diferentes enzimas catalizan los siguientes pasos: 1. La eliminacién del grupo carboxilo del piruvato, liberando Co2 2. Elresto de la molécula (hidroxi-etil) es capturado temporaimente por la timina, oxidado a un acetil y transferido a la Lipoamida. 3. La Lipoamida transfiere el grupo acetilo a la Coenzima A, generando asi al Acetil CoA 2 H+ son transferidos al FAD convirtiéndose en FADH2 Finalmente esos H+ son transferides al NAD generando NADH+H. as Regulacién del complejo enzimatico: * Regulacién Alostérica + NADH, Acetil CoA, ATP y Acidos grasos de cadena larga EI NADH+H es una moiécula que se utiliza en cadena de transporte de electrones para generar energia y me permite regular la actividad del Ciclo de Krebs, si ya tengo mucho NADH+H (que es sinénimo de alta energia), tiene sentido que me disminuya la conversion para el ingreso a ciclo de Krebs, cuyo objetivo es generar mas coenzimas reducidas. El Acetil CoA es el producto final de la reaccién, si lo niveles de Acetil CoA comienzan a acumularse tiene sentido que se inhiba la sintesis. Una de las razones por las cuales el Acatil CoA se acumula es por disminucién de la actividad del Ciclo de Krebs (quien se regula por los altos niveles energéticos), EI ATP lo inhibe porque nosotros generamos esta conversién para ingresar el Acelil CoA al Ciclo de Krebs para generar coenzimas reducidas que vayan a Cadena de transporte de electrones y fosforilacién oxidativa, Si ya tenemos energia, no hace falta que sigamos estimulando tanto esta conversion. La degradacién de acidos qrasos de cadena larga me genera abundante cantidad de Acetil CoA que ya vimos por que inhibe la reaccion..+ NAD, CoA-SH, AMP. En este caso todo lo contrario, tanto NAD como AMP son sinénimos de baja energia, por lo que deberiamos estimular la conversion de Piruvato a Acetil CoA para ingresar a Ciclo de Krebs y generar posteriormente un aumento en la cantidad de energia. ® Modificacién Covalente P: Inactiva OH: activa . lacién a Inducida por Insulina (toda lo que es a nivel genémico son regulaciones lentas, no es inmediato). Una vez vistas las diferentes fuentes de Acetil CoA que pueden ingresar al Ciclo de Krebs, empecemos... + gQué es? — Una serie de reacciones por las cuales se oxida el Acetit CoA » ZEmdonde se produce? —» Mitocondrias + @Cuédntas reacciones involucra? + 8 ‘+ gAnabdlicas 0 catabélicas? - Ambas El objetivo del Ciclo de Krebs es generar las coenzimas reducidas necesarias para que se dirijan a cadena de transporte de electrones y poder sintetizar ATP.#20, ; toh xalacetato tis Sintetasa NAD + Malato mf, = CICLODE Fumgrato KRERS ian YR Sechaba deshidrogenasa NAD + dechidogesa ir SuccinlCoh tee -cetoglutarato Suetin eal ‘ss tg tA 5 AP + “o™ 1. Citrato sintasa: El Acetil-CoA (2C) transfiere el acetil al Oxalacetato (4C) para Malta deshidrogenasa is-Aconitato D+ formar Gitrato (6C). paso catalizado por la E. Citrato Sintasa consumiendo una molécula de H20. 2. El Citrate se convierte en cis-Aconitato mediante la E. Aconitasa, misma enzima que posteriormente convierte el cis-Aconitato en Isocitrato (6C) 3. El lsocitrato es oxidado a Alfacetoglutarato (5G) por la E. socitrato eshidrogenasa y se produce la reduccién del NAD* a NADH.Ademas, esta reaccion cataliza la primera descarboxilacién oxidativa del ciclo, produciendd Ia liberacion de un carbono en forma de Co2. 4. La E_ alfa-cetoglutarato deshidrogenasa convertira posteriormente el a- cetoglutarato en Succinil-CoA (4C) generandose asi la segunda descarboxilacion oxidativa, con la liberacién de 1C en forma de Co2, ademas de reducir un NAD* y generar otro NADH. 5. El Succinil-GoA sera hidrolizado por la E. Succinil-CoA sintetasa para dar Succinato. Esta enzima rompe el enlace entre la Goenzima A y el Succil. El cosustrate de esta reaccidn es el GDP que aprovechard la energia de la reaccion Para unir un fosforo inorganico (Pi) y formar GTP, esta reaccion es muy importante y se conoce como “FOSFORILACION A NIVEL DEL SUSTRATO" (Basicamente, a partir de la ruptura de un enlace del sustrato que contiene alta energia, podemos sintetizar un nuclestido altamente energético). 6. El Suecinato (4C) es convertido a fumarate (4C) por la E.succinato deshidrogenasa, generando ademas, la reduccién de un FAD a FADH:. 7. El Fumarato mediante la £, fumarasa es convertido en L-malato mediante la hidrataci6n con un grupo OH desde una molécula de H20. 8. El Malato se oxida por la E, Malato deshidrogenasa dando Oxalacetate, generando una dltima molécula de a NADH. Al final de este paso obtenemos nuevamente Oxalacetato (4C), que puede ser utiizado por el primer enzima del ciclo.Caracteristicas importantes de las enzimas del ciclo de Krebs: + Citrato Sintasa —-Regulada por la disponibilidad de Oxalacetato y Acetil CoA + Aconitasa — Intermediario -+ CisAconitato. ocitrato DSH — Requiere Mg+ y Cat / -—» ATP y NADH+H / + ADP’ + AlfaCetoGlutarato DSH — Posee 3 subunidades: E1 (ppi de Tiamina) E2 (Lipoamida y CoA-SH) y E3 (NAD y FAD) /- + ATP y NADH / + — ADP + Succinil CoA Sintetasa -- Fosforilacién a nivel de sustrato + Succinato DSH —- Unida a MMI + Fumarasa —+ Solo produce L-Malato + Malato DSH- Delta G + —+ Se acopla por la reaccién de la Citrato Sintasa Balance Energético Regulacion + Los estados de fosforilacion de los nucledtides de Adenina (Es decir los altos niveles energéticos: ATP, io van a disminuir, mientras que los bajas niveles energéticos: ADP/AMP lo van a estimular) * El estado de reduccién de NAD: Los altos niveles de NADH+H lo van a inhibir, mientras que los altos niveles de NAD lo van a estimular.Reacciones Anapleroticas + gQué son? — Son aquellas que me permiten repaner intermediarios al ciclo de Krebs para poder mantener el flujo Las reacciones Anapleréticas tienen como objetivo introducir intermediarios a Krebs, esto se hace cuanda necesitamos energia, 6sea cuando los niveles energéticos son bajos. Por ende, las reacciones Anaplertticas van a predominar durante el ayuno. 4. Conversion de Glutamato a Alfa-cetoglutarato Alf 1 El Glutamato es un aa, cuyo c esqueleto carbonado es el alfa- co Cetog utarato cetoglutarato, por lo que como vimos en metabolismo de aa, por reacciones de desaminacién, puede perder su grupo amino y darnos alfa-cetogiutarato, que ingresara a Ciclo de Krebs para Glutamato obtener energie. * Ubicaci6n tisular + Higado y Musculo * Ubicacién celular — Mitocondria 2, Degradacién de Acidos Grasos de cadena impar para la formacién de Succinil CoA por la E-Metil Malonil CoA mutasa:3. La conversién de Piruvato a Oxalacetato Piruvato +Co2 . Ubicacién tisular —- Higado y SNC + Ubicacién celular + Mitocondria (Misma enzima que utilizabamos en la Lanzadera del Citrato y en Gluconeogenesis) Oxalacetato 4. Conversién de Piruvato a Malato: (Misma enzima que utilizabamos en la Lanzadera de! 7 Citrato y me permitia obtener NADPH) Piruvato » Ubicacién tisular — Ampliamente distribuida * Ubicacion celular — Citosol Malato 5. Via degradacion de aa Gluconeogenicos + Arginina, Glutamina, Histidina y Prolina > Alfa-Cetoglutarato + Isoleucina, Metionina, Treonina y Valina —- Succinil CoA + Fenilalanina y Tirosina FumaratoPuntos de Fuga + Qué son? — Son las intermediarios que salen de Krebs para dirigirse a otras vias metabélicas En este caso, los puntos de fuga van a predominar cuando los niveles energéticos se encuentren altos, después de haber metabolizado los diferentes compuestos de la dieta. Siempre lo principal es mantener los niveles energéticos, una vez que eso esta satisfecho, vamos a destinar los intermediarios de Krebs (gracias a que el ciclo va a estar enlentecido y se van a empezar a acumular) a otras vias metabdlicas. 1. Conversion de Citrato a Acetil CoA. Citrato = Acetil CoA — Sintesis de Ac.G y Esteroles. + Ubicacién Tisular —- Higado y Tejide Adiposo + Ubicacién celular Citosol Acetil CoA 2. Conversion de alfa-cetoglutarato a Glutamate Alfa-cetoglutarato * Ubicacién Tisular + Higado y Mascula + Ubicaci6n celular — Mitocondria Glutamato 3. Conversion de Succinil CoA para la sintosis de Homo: Succinil CoA + Glicina + Ubicacién Tisular —- Higado y MO + Ubicacién celular — Mitocondria Biosintesis de Porfirinas y Hemo4, Conversion de Malato a Oxalacetato QUE SE USA COMO SUSTRATO GLUCONEOGENICO, SINO NO Malato ES PUNTO DE FUGA. = Via Gluconeogénesis. * Ubicacién Tisular — Higado * Ubicacién celular —+ Mitocondria y Citosol Oxalacetato Reacciones que NO son Anapleroticas ni Puntos de Fuga + Qué son? + Son reacciones donde no hay pérdida ni ganancia neta de intermediarios, ya que se utiliza como sustrato un intermediario del Ciclo de Krebs, pero se obtiene como producto otro intermediario del Ciclo. Aspartato + Ubicacién —. Mitocondria y Citosol En esta reaccion, tanto el Alfacetoglutarato como el Oxalacetato forman parte de Krebs, por lo tanto se puede seguir manteniendo el flujo normal del cicto, va ° Lanzadera Malato-Aspartato. Glutamato Acetoacetato En este caso sucede lo mismo, tanto el Succinil CoA como el Succinato son parte de Krebs, por lo que no hay ni perdida ni ganancia neta. . Via utilizacién de cuerpos ceténicos + Ubicacion tisular -- Tejidos Extrahepaticos Passe ° —— Ubicacién celular —- Mitocondrias CoA