PRACTICA Enzimas Por: Prof. Doris B. Vergara C. Objetivos: 1. Observar el efecto de fos catalizadores en una reaccién quimica, 2. Estudiar algunas propledades de las enzimas. 3. Observer el efecto de la temperatura, ph, y concentracion del sustrato en ta actividad enziniatica, Introduceién: Para que una célula pueda llevar @ cabo todas sus funciones vitales (crecer, moverse, reproducirse, etc.) es nece sari que dentro de elfa se lleven a cabo una serie de reacciones quimicas cue en conjunto reciben e! nromiare metabolismo. EI metabolismo celular encierra dos grandes fases: una fase degradativa, en donde las moléculas complejas son transformadas en otras més simples. a menudo con liberacién de energia, denominada ‘catabolismo y una fase consiructiva, de elaboracién o sintesis de moléculas grendes a partir de otras mas simpies, que requisren aporte, de energia, denominada anabolismo. Todos estos cambios ocurren en el organismo, gracias a [a intervencién de sustancias que actian como catalizadores biolégicos, conocides como enzimas. Las enzimas, son proteinas catalizadoras, producidas por las células vivas que ragutan la rapidez y especificidad de miles de reacciones quimicas intracelulares. Muchas de las enzimas se encuentran disuieltas en el citoplasm de la célula, otras estén intimamente unidas 2 otros cuerpos celulares (mitocondrias, ribosomes, etc), Sin embargo, la enzima * tiene que estar en al interior de la oélula para que pueda actuar como catalizador, muchas enzimas se han extraido de célvlas y atin conservan su ectividad completa En su accién como catalizador biolégico, la enzima se une a las moléculas de sustrato (Sustancias sobre la cual actin), formarido un complejo transitotio intermediario, Namado enzima-sustrato_, Este complejo es inestable y 32 descompone, liberando los productos de la Teaccién y dejando intacta 1 la enzima. De esla forma fa enzima puede nuevamente ‘combinarse con més sustrato pare seguir reatizando su trabajo. Como protainas que son, fas enzimas estan sujetas a ser afectadas por, diferentes agentes fisicos y quimicos. Aigunas veces la accién enzimatica se destruye completamente, otras apenas se modifica, Dentro de ciertos limites: let velocidad de una reaccién enzimatica es directamente: proporcional a la concentracién de la enzima presente. Cuando ta reaccion ha progresado un tiempo, es probable que se produzca cambios en su velocidad, debido a que la concentracién del sustrato disminuye, pudiendo converfirse juego en un factor limitante o ‘sea que la aoumulacién de los productos retarda o inhibe el proceso. También, para actuar, las enzimas deben hacerlo sobre un sustrato especifice lo cusl, ademas, debe ocurrir dentro de ciertos limites de temperatura y ac.idez (0 alcalinidad). Asi podemos hablar de condiciones dptimas de temperatura y pH para cxida lipe de enzima. ll, MATERIALES: Bidxido de Manganeso — ‘Soslucién con pH 4 (solucion acida) ~ Arena Soluicidn con pH 14 (solucién Basica) ‘Agua oxigenada (perdxido de Hiigado de res crudo Hidrogeno) Papa cruda Tubos de ensayo 0 frascos pequefios Cuchilla Hielo Mortero Vaso quimico de 250 mi 0 frasco Mechero de Bunsen Agua destitada Balanza Probeta de 10 ml “Fermémetro Marcador de vidrio Bafio Maria GraditaPROCEDIMIENTO: A. Propieciades de las enzinas 1. Efecto cle un catalizador La catalaza es una enzima presente en las células que acelera la hidrélisis del perdxido de hidrogeno, un quimico téxico, que se descompone en agua y oxigeno. Cuando ésta reaccién ocurre se clesarrolla una efervescencia facil de observa. Marque 4 tubes de ensayo con letras A B, C y D. En cada uno de los tubos vierta 1 mi de ‘agua oxigenada. Seguidamente, al tubo A, aflada un poco de arena, al tubo B, un poco de biéxido de manganeso; al tubo C, un pedacito de higado crudo y al tubo D un pedacito de igual tamario de papa cruda. Observe la velocidad de la reaccién en cada caso y reporte los resultados de la siguiente manera Noefervescencia =0 — Moderada efervescencia = ++ Poca efervescencia=+ Mucha efervescencia + CUADRO |. Efecto de un catalizador Tubo. ido Resultado A Arena =ace 4El biéxido de manganeso (Mn0:) en que se parece a la catalasa? 2En que difieren?__ De acuerdo a los resultados. eQue podemos concluir? = as Rehiso de una enzima: En un tubo de ensayo vierta 2 m1 de agua oxigenada y seguidamente agregue un pedacito de higado crudo. Una vez haya terminado la reaccién divida el contenido liquido en dos tubos de ensayo (A y 8), divida también e! pedacito de higado en dos y agregue la mitad a cada tubo. Luego al tubo A le pone un pedacito de higado fresco y al tubo B, | m1 de agua oxigenada. Que observa?, 2Cémo explica io observado? Enzimas extracelulares. Ponga en dos tubos de ensayo. higado macerado con arena en uno y en el otro, popia oruda macerada también arena. Afiada 1 mi de agua oxigenada en cada tubo do ensayo. Que observa? Repita la pruebo anterior pero ufiizando un pedacito de higado crudo y un pedacito de papa ‘ruda, ambos sin macerar eQue observa?_B. Factores que afectan la velocidad enzimética: 1. Efecto de la temperatura en la actividad enzimatica. Marque tres tubos de ensayo 0 frascos de vidrio pequeftos agregue higado crudo macerado. Luego efectie las siguientes, pruebas. Tubo A. déjelo hervir por 30 minutos en bafio Maria. Vierta luego 1 mi de agua oxigeneda, ZQve observa? Explique:_ Tubs &. Déjelo por 20 minutos en hielo, Vierta luego 1 mI de agua oxigenada. Que observa? ee nen Por qué? eee aS Tubo C. Déieto por 30 minutos en aqua @ 37C. Agregue luego 1 mt de agua oxigenada. Que observa? — s ay Con base en sus resultados, eQue —concluye del_—efecte enzimstica?_ a: ‘A que temperatura trabajan las enzimai jlesiro cuerpo normaimente?___ 2. Efecto del pH en ta actividad enzimética Marque 3 tubos de ensayo con las letras A, B, C. En el tubo A vierta 1 mi de agua; en el tubo B, vierta 1 mi de una solucién con pH 11, Luego, agregue un pedacito de higado crudo en cada uno de los tubos, Déjelo reposar por 3 minutos. Finalmente vierta en cada uno de los tubos 3 mi de agua exigenada y observe. En qué tubo hubo neacciéa? ePorque? 2Qué podemos concluir?_ 3, Efecto de la concentracién del sustrato en la actividad enzimatica. Enumere 5 tubos de ensayo 0 frascos pequefios de vidrio de! 4 al 5. Vierta en cada uno de ellos 0.2, 0.8, 1.0, 20, 4.0. mi. de agua oxigenad'a respectivamente. Mantenga fijo el volumen ‘total (4ml)'en cada tubo con agua destilada. Luego agregue 1 gramo de higado crudo ( pequefio trocito) en cada (ubo. Observe Ia velocidad de la reaccién en cada tubo. CUADRO 2, EFECTOS DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO EN LA ACTIVIDAD ENZiMATICA. TUBO CONTENIDO RESULTADOS: 1.9 de higado 0.2 mi (02 gotas) ig de higado 0,5 mi ( 0 5 gotas) 1g de higado 1.0 mi (020 gotas) 11g de higado 20 mi (0 40 gotas) 1gde higado 4,0 ml (0 60 gotas) Con base a sus resultados. ¢Que puede conciuir?eQué esperaria usted que suceda si repetimos este prueba, pero manteniendo constante la concentracién del sustrato y més bien variaramos la concentracién de la enzima en cada tubo? V. CUESTIONARIO. 1. Detina los términos enzima y sustrato. 2. La amilasa salival es una enzima que esta presente en la saliva y acttia sobre los carbohidratos. 3. ¢Qué efectos podria tener esta enzima sobre las grasas y proteinas? Explique. 4. Qué factores pueden alterar el funcionamiento de las enzimas? Vi. BIBLIOGRAFIA. Audersik, T. ; Audersik, G.: Byres, B. 2003. Biologia. La Vide en la Tierra. Sexta Edicion, Prentice may. México. 889 p. Curtis, H.; Barnes, N.S. 2000. Biologia. Editorial Médica Panamericana. Sexta Edicion. Argentina. 1491 p. Fried, G.H. 1990. Biologia, Me Graw-Hill Interamericana de México, S.A. de C.V. México 427 p. Oo, J.H.; Towle, A. 1995. Biologia Modema. Mc Graw- Hill interamericana de México, S.A. de CV. México 620 p.