METHODES D’EVALUATION DE

L’ACTIVITE ANTIPARASITAIRE

Pr. O. Aniq Filali

2019-2020

La leishmaniose

Le traitement des leishmanioses basé sur l'utilisation des

dérivées stibiés. Cette thérapeutique présente des
inconvénients liés à la toxicité des produits utilisés, à son coût
et sa lourdeur (antimoniés pentavalents, Amphotericine B).
certaines formes de leishmanioses manifestent des résistances
vis-à-vis des médicaments usuels.
la recherche de nouvelles molécules efficaces et peu toxiques
s'impose.

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Epidemiologie La leishmaniose

La leishmaniose
maladie chronique parasitaire, cutanée et/ou viscéral due à
des protozoaires flagellés : Leishmania (f/Trypanosomatidae),
transmises par la piqûre de certaines espèces de phlébotomes,
comprenant les insectes.

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 La leishmaniose

La contamination humaine se fait par piqûre de cette mouche

qui pique à la tombée de la nuit et transmet le germe dont il est
vecteur d'animal à animal. C'est de façon accidentelle qu'il le
transmet à l'homme.

La famille des Trypanosomatidés qui présentent deux stades

morphologiques successifs :

-le stade amastigote :

petit corpuscule arrondi , possédant un noyau,
un kinétoplaste et un flagelle interne.
situé à l’intérieur des cellules du système
de phagocytes mononuclés du vertébré mammifère.

-le stade promastigote :

stade flagellé, libre dans le tube digestif
du phlébotome vecteur.

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La leishmaniose

parasite migre dans les viscères comme le foie, la rate et

la moelle osseuse et en l’absence de traitement, aboutit
presque toujours à la mort de l’hôte.
Les symptômes : fièvre, amaigrissement, anémie,
hépatomégalie(gros foie) et la splénomégalie (grosse rate).

Le traitement local utilise l'antimoniate de méglumine

(Glucantime) en injections locales.
Dans les cas graves, le même produit est utilisé par voie
générale.

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 l'activité antileishmanienne de produits isolés de Artemisia
herba-alba a été étudié in vitro, très utilisée en médecine
populaire.
Parmi ces produits, l’intérêt s’est porté sur les
phénylpropanoïdes isolés de l’extrait dichlorométhanique des
rhizomes de artémisia herba alba.

L’étude in vitro de l’activité antileishmanienne d’un des

phénylpropanoïdes isolés sur des formes promastigotes de
Leishmania infantum, parasite responsable de la leishmaniose
viscérale, a montré une très forte inhibition de la croissance
des leishmanies en culture avec une CMI de 10µg/ml.

Evaluation de L’extrait aqueux et l’huile

essentielle d’Artemisia herba-alba Asso
(Asteraceae)

Matériel végétal utilisé

Les échantillons d’Artemisia herba-alba ont été récoltés dans

les Moyen, Anti et Haut Atlas. Les produits testés (extrait aqueux et
huile essentielle) ont été extraits de la partie aérienne des plantes.

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 L’extrait aqueux

Le matériel végétal récolté a été séché à l’ombre pendant une

semaine, puis réduit en poudre. 40 mg de ce broyat ont été
ajoutés à 200 ml d’eau à ébullition. Infusion et macération
pendant 24 heures. Après refroidissement, l’extrait a été filtré
sur papier wattman stérile, l’extrait obtenu a été stocké à +4 °C.

L’huile essentielle

l’huile brute obtenue est de couleur brune, stockée a +4 °C.

Étant non miscible dans l’eau, a été testé la toxicité de trois

solvants (hexane, éthanol et chloroforme) à différentes dilutions
vis-à-vis des deux souches.

L’éthanol à la dilution 1/100 s’est révélé sans action

antileishmanienne et a été utilisé pour dissoudre l’HE.

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 Souches utilisées

Deux souches de L e i s h m a n i a ont été utilisées:

Leishmania tropica d’origine humaine marocaine
(MHOM/MA/95/UERL10)

et Leishmania major, souche de référence de l’OMS

d’origine humaine (MHOM/SU/73/5ASKH)

Les numérations des promastigotes ont été effectuées

quotidiennement sur cellule de TH O M A S.
Le comptage a été réalisé en présence de bleu de
méthylène servant d’indicateur de la viabilité des cellules.

Résultats

Comptage de promastigotes (en millions) de L. major et L. tropica

en présence de l’extrait aqueux d’Artemisia herba-alba à différentes [c].

L. major L. tropica
concentration 2 μg 4 μg 20 μg 2 μg 4 μg 20 μg témoin
âge de la culture
J0 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
J1 4,0 3,0 0 3,6 2,9 0 4,0
J2 5,5 4,0 0 4,9 3,5 0 5,1
J3 6,5 4,6 0 6,2 4,4 0 6,2
J4 7,6 6,1 0 7,3 5,7 0 7,9
J5 6,0 3,5 0 5,3 6,5 0 4,0
J6 4,1 2,0 0 2,0 3,8 0 2,8
J7 2,0 1,2 0 0,9 1,2 0 1,3

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Comptage de promastigotes (en millions) de L. major et L. tropica en
présence de l’huile essentielle d’Artemisia herba-alba à différentes [c].

L. major L. tropica
concentration 2 μg 4 μg 20 μg 2 μg 4 μg 20 μg témoin
âge de la culture
J0 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
J1 2,6 0 0 4,0 0 0 4,2
J2 1,4 0 0 2,3 0 0 5,6
J3 0,9 0 0 1,1 0 0 7,4
J4 0 0 0 0 0 0 8,4
J5 0 0 0 0 0 0 4,8
J6 0 0 0 0 0 0 2,8
J7 0 0 0 0 0 0 1,5

On note qu’à la concentration de 2 μg/ml d’HE, les leishmanies

ne poussent plus au-delà du 3ème jour.
Aux concentrations de 4 et 10 μg/ml, il y a un effet leishmanicide
immédiat et total.

Exemple 4 Cladanthus mixtus

de la forêt de la Mamora située au nord-ouest du Maroc. La
récolte des échantillons a été réalisée en pleine floraison (juin).
les parties aériennes ont été collectées les feuilles, fleurs,
rameaux et tiges en début de matinée.

Elles ont été conservées 72 heures

à l’ombre à température ambiante
(25°C) avant l’hydrodistillation.

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 Cladanthus mixtus
Microorganismes étudiés

Quatre bactéries : (Bacillus subtilis, Escherichia coli, Micrococcus

luteus et Staphylococcus aureus) et
trois champignons : (Aspergillus niger, Penicillium parasiticus et
Trametes pini)
choisis pour leurs fréquences élevées à contaminer les denrées
alimentaires et pour leur pathogénicité.

Cladanthus mixtus

Activité antimicrobienne

L’HE a montré une forte activité contre tous les microorganismes

testés.

Chez les bactéries, Escherichia coli et Staphylococcus aureus ont

manifesté une certaine résistance jusqu’à 1/5000 (v/v).

Les champignons ont été tous complètement inhibés à 1/2000 (v/v).

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Résultats

Les bactéries ont été donc plus vulnérables que les champignons
à l’huile essentielle Cladanthus mixtus.

Résultat à rapprocher du fait que les terpénols sont abondants

par rapport aux hydrocarbures terpéniques.

Il a été signalé que les terpénols sont plus efficaces contre les
bactéries que contre les champignons.

Les terpènes

les terpènes sont des hydrocarbures mais de nombreux dérivés

(alcools, aldéhydes, cétones, acides), de structure apparentée,
sont considérés comme des composés terpéniques.
Ils sont présents, dans les végétaux, dont ils sont souvent les
constituants "de senteur" (térébenthine, camphre, menthol,
citronelle) ; on les extrait sous forme d'huiles essentielles pour la
parfumerie.

Certains d'entre eux ont un rôle biologique important

(hormones, vitamines).

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Les hydrocarbures terpéniques :
-Formule brute :

La formule brute générale est (C5H8)n

Avec n = 1 l'isoprène
n = 2 C10H16 monoterpènes
n = 3 C15H24 sesquiterpènes
n = 4 C20H32 diterpènes
N = 5 C25H40 sesterpènes
n = 6 C30H48 triterpènes
n = 8 C40H64 tétraterpènes

Les principaux phénols :

* Le thymol
* L’eugénol
* Le carvacrol
Vertus thérapeutiques des phénols :
* Guérir les infections bactériennes, virales ou fongiques
* Stimuler des défenses immunitaires
* Réchauffer l’organisme

LES MONOTERPÉNOLS

- Famille d’alcools dans les HE. Combattent les microbes et renforcent

l’immunité
qqs exples : linalol, géraniol, nérol, lavandulol, citronnellol, alpha-terpinéol,
thuyanol, etc…
- Ces molécules ont une activité anti-infectieuse contre des microbes.
- de très grands immunostimulants.
-Non toxiques.
- en pourcentage important dans les HE.

HE de la famille des monoterpénols ayant une activité anti-bactérienne :

* HE Thym CT thujanol
* HE Thym CT linalol
* HE Laurier noble
* HE Saro
* HE Bois de rose
* HE Bois de Hô
* HE Néroli

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LES SESQUITERPENOLS

- forte activité hormonale : cas des molécules comme le sclaréol,

le globulol, le patchoulol, le cédrol et le nérolidol.
dans de l’HE Sauge sclarée, le sclaréol (taux importt (6%)) a 1
activité oestrogénique.
- Molécule ressemble parfaitement à l’hormone féminine, qu’elle
sait réguler les troubles hormonaux de la pré-ménopause.

Quelques HE de la famille des sesquiterpénols :

* HE Sauge sclarée
* HE Eucalyptus globulus
* HE Patchouli
* HE Cyprès Précautions d’emploi concernant les
sesquiterpénols:
* HE Néroli
* Ne pas utiliser en cas de pathologies
hormono-dépendantes, comme les cancers
* Interdits pour les femmes enceintes, les
enfants pré-pubères

LES OXYDES

le 1.8 cinéole dans les eucalyptus :sont de puissants

expectorants au niveau broncho-pulmonaire. HE ayant des
vertus décongestionnant de la sphère respiratoire, Eucalyptus
radiata et Eucalyptus globulus.

Quelques HE de la famille des oxydes :

* HE Eucalyptus radiata
* HE Eucalyptus globulus
* HE Ravintsara
* HE Tea tree
* HE Niaouli

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LES MONOTERPÈNES : RÉGULER le SYSTÈME IMMUNITAIRE

Les monoterpènes se trouvent ds la plupart des HEs.

• Ttes les molécules monoterpéniques ont une excellente activité
de régénérer les forces de l’organisme.
• Dans la nature, ces molécules constituent la force d’adaptation de
la plante aux exigences climatiques et environnementales. C’est
le coeur de son système de défense.

LES SESQUITERPÈNES
se trouvent en faible quantité dans certaines HEs, et surtout dans les
HE distillées du bois d’arbres (par exemple, HE Cyprès, HE Santal, HE
Cèdre).
De très bons anti-inflammatoires

Quelques HE de la famille des sesquiterpènes :

*HE Cyprès
*HE Santal
*HE Cèdre
*HE Camomille allemande
*HE Inule odorante
Toutes les HEs de couleur verte ou bleue contiennent visiblement
une molécule sesquitérpénique, le chamazulène, qui a des
propriétés anti-histaminiques.

Tous les sesquiterpènes sont d’excellents anti-inflammatoires.

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