Objetivos

 Definir técnica cromatográfica, establecer las diferentes

clasificaciones, conocer la teoría básica de la cromatografía, los
parámetros fundamentales y la relación entre ellos.
 Conocer los fundamentos, metodología y aplicaciones de cada una de
las técnicas separativas cromatográficas y afines.
 Adquirir un criterio analítico para seleccionar la técnica cromatográfica
más adecuada y el detector más conveniente para la resolución de un
problema analítico dado.
 Entender la necesidad de efectuar la preparación de muestra en
Cromatografía y conocer la finalidad de la derivación
 Comprender con mayor profundidad la necesidad de efectuar la de
preparación de muestra en Cromatografía, concediendo a la
eliminación de interferencias la importancia que le corresponde y así
como poner de manifiesto la finalidad de la derivación.

Marco Teorico

Principios de cromatografía
La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas
estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de
separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.
En todas las separaciones cromatográficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser
un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase
estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las
fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto
entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con más fuerza
por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que
unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden
analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.(Chang, Química)

1. Azul de metileno:

El azul de metileno, cuyo nombre científico es Cloruro de Metiltionina, es un colorante

que se usa para tratar una enfermedad llamada metahemoglobinemia. Es un
compuesto químico heterocíclico aromático con fórmula molecular: C16H18ClN3S.
 2. Anaranjado de metilo:

Naranja de metilo es un colorante azoderivado, con cambio de color de rojo a naranja-

amarillo entre pH 3,1 y 4,4. El nombre del compuesto químico del indicador es sal
sódica de ácido sulfónico de 4-Dimetilaminoazobenceno. Se empezó a usar como
indicador químico en 1878.
Cromatografía en columna:
Se emplea para la separación de mezclas o purifi cación de sustancias a escala
preparati va. Como fase e s t a c i o n a r i a s e u s a , g e n e r a l m e n t e , g e l d e s í l i c e o
a l ú m i n a d e n t r o d e u n a c o l u m n a . L a e l e c c i ó n d e l disolvente es crucial para una
buena separación. Dicho disolvente pasa a través de la columna por efecto de la gravedad o
bien por aplicación de presión (cromatografía flash). La columna se prepara mezclando el
soporte con disolvente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de
algodón o lanade vidrio, para evitar que la sílica o la alúmina queden retenidas en
la columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A
conti nuación se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye
con el disolvente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo .Una columna de
cromatografí a es un tubo de vidrio relleno con una sustancia sólida de
propiedades adsorbentes constituida por pequeñas partículas: gel de sílice y alúmina son las
más usadas. Este rellenoes lo que se conoce en cromatografí a como la
fase estacionaria. A través de la columna se hará pasar una corriente de un disolvente o
mezcla de disolventes denominada eluyente y/o fase móvil .La mezcla de compuestos a
separar se disuelve en una pequeña cantidad de disolvente y se coloca sobre el adsorbente,
en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por el mismo. A
conti nuación se p a s a u n fl u j o d e e l u y e n t e a t r a v é s d e l a c o l u m n a . L o s
c o m p u e s t o s c o n s ti t u y e n t e s d e l a m e z c l a s o n arrastrados por el eluyente a
su paso, haciéndoles avanzar a lo largo de la columna. Sin embargo,
No todos los compuestos avanzan a la misma velocidad , y esta es precisamente la clave de la
cromatografía .Algunos compuestos se ven más fuertemente retenidos por el
adsorbente (fase estacionaria) y p o r l o t a n t o a v a n z a r á n m á s d e s p a c i o . P o r e l
c o n t r a r i o , o t r o s a p e n a s s o n r e t e n i d o s y a v a n z a r á n a m a y o r   velocidad

Cromatografia en capa fina

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un Pequeño
espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por tapitaridao, por la placa y
arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los componentes. En
la cromatografía en capa fina (ccf), el grado de elución de las sustancias depende tanto de su
profia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado' El adsorbente se coloca en forma
de una capa delgada adherida sobre un soporte rígido, que puede ser placas de vidrio,
aluminio o poliéster. Los tamaños de la placa para ccf.

Convencional son: 20 x 20; 't0 x20 y 5x2 cm

Fundamento de la cromatografía en papel

En todo proceso cromatográfico la fase móvil es la que provoca un movimiento de las distintas
especies para que abandonen el medio soporte (papel), y la fase estacionaria la que suministra
el efecto retardador, selectivo para cada componente, que condiciona que cada uno de ellos
se desplace con distinta velocidad .La movilidad de los componentes de la mezcla a separar
depende de la afinidad química o propiedades similares entre estos componentes y cada una
de las fases del sistema cromatográfico. Si uno de los componentes de la mezcla presenta
propiedades químicas muy similares a la fase móvil tendrá gran movilidad, es decir, el efecto
de retención que provocaría la fase estacionaria sería nulo. Lo contrario sucedería con un
componente de la mezcla que tenga una gran afinidad con la fase estacionaria .Por lo tanto, la
técnica se basa en la velocidad de desplazamiento diferencial de los soluto sal ser arrastrados
por una fase móvil sobre una estacionaria. Esta diferencia será la que nos permita identificar
cuantos componentes tiene una disolución y cómo separarlos.