24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Wilson Terán
Departamento de Biología
wteran@javeriana.edu.co

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

¿En qué momento ocurre la regulación de la expresión génica?
Señal
Señales

Percepción (sensado)
Regulación
1.Descompactación degradación proteica
& acceso a la
información 2.Regulación
Transducción de señales transcripcional 6.Regulación
postraduccional:
plegamiento
pre- /procesamiento
mRNA / transporte
Ø Genes que se apagan 3. Regulación
= Represión del splicing

Ø Genes que se activan 5. Regulación

= Inducción 4. Transporte postranscripcional
al citoplasma
mRNA degradation

1
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

¿En qué momento ocurre la regulación de la expresión génica?
Señal
Señales

Percepción (sensado)
Regulación
1.Descompactación degradación proteica
& acceso a la
información 2.Regulación
Transducción de señales transcripcional 6.Regulación
postraduccional:
plegamiento
pre- /procesamiento
mRNA / transporte
Ø Genes que se apagan 3. Regulación
= Represión del splicing

Ø Genes que se activan 5. Regulación

= Inducción 4. Transporte postranscripcional
al citoplasma
mRNA degradation

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

Nucleoide

Cromatina
ADN no está desnudo dentro de las células:
Importancia de las interacciones proteína / ADN y proteína /proteína en la condensación del
ADN genómico
= Garantizar acceso a la información por parte de la maquinaria transcripcional (RNApol)

Þ Mayor complejidad en eucariotas : Histonas – nucleosomas (ver próxima clase).

2
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

EN PROCARIOTAS: METILACION DE ADN

Nucleoide

Cromatina
ADN no está desnudo dentro de las células:
Importancia de las interacciones proteína / ADN y proteína /proteína en la condensación del
ADN genómico
= Garantizar acceso a la información por parte de la maquinaria transcripcional (RNApol)

Þ Mayor complejidad en eucariotas : Histonas – nucleosomas (ver próxima clase).

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

EN EUCARIOTAS 3 MECANISMOS BASICOS E INTERCONECTADOS ASEGURAN
DESCOMPACTACIÓN /COMPACTACIÓN DE LA CROMATINA

1. METILACIÓN DE ADN

2. MODIFICACIÓN DE HISTONAS)

3. UNION DE PROTEINAS REGULADORAS

(FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN)
6

3
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

1. Metilación de ADN y silenciamiento génico
Preferencialmente en
• Modificación directa sobre el ADN: Metilación de citosinas regiones de repeticiones CG
(islotes CpG)
DNA Metil Transferasas (marcadoras)

MBDs
Proteínas de unión a
TETs citosinas metiladas
(Lectoras)
Desmetilasas (Borradoras)

Ambrosi et al., 2017. J. Mol. Biol.,Vol. 429 (10): 1459-1475

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

1. Metilación de ADN y silenciamiento génico
Þ Efecto resultante de la metilación de ADN
= Silenciamiento génico
Unión de proteínas represoras
Mayor compactación de la cromatina

• 10% DNA humano está metilado

(1.5 % es codificante)

• 30% genoma de las plantas

está metilado

4
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

2. Modificación de las histonas:
• Octameros de histonas forman NUCLEOSOMA
= Primera unidad de compactación de la cromatina / RICAS en cargas (+) Lys /Arg

• Modificaciones químicas de histonas afectan

compactación de nucleosomas: el “código histónico”

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

2. Modificación de las histonas:
Código histónico:
Ø Diferentes tipos de modificaciones químicas en las colas de las histonas
Efectos “activadores” = descompactación de la cromatina
Efectos ”represores” = compactación de la cromatina

10

5
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

2. Modificación de las histonas:
Ø Igual que para la metilación de ADN: enzimas marcadoras, borradoras y lectoras

Histona Acetil Transferasa (HAT)

Histona Metil Transferasa (HMT)
Quinasa
Ubiquitina Ligasa
Histona Desacetilasa (HDAC)
Histona Desmetilasa (HDM)
Fosfatasa
Desubiquitinasa (DUB)
Factores de transcripción
(Coactivadores/Corepresores)
Proteínas remodeladoras
de la cromatina

11

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

2. Modificación de las histonas:
Ejemplo: Acetilación / Desacetilación de las histonas influye sobre su afinidad por el ADN:
• Acetilación se produce por enzimas marcadoras HAT (Histone Acetyl Transferase)
Þ acetilos neutralizan las cargas positivas de Lys/Arg (aminas) de las histonas, disminuyendo su afinidad por ADN
(cargas negativas) = menor compactación de nucleosomas + unión de proteínas coactivadoras
Þ mayor transcripción
• Desacetilación se produce por
enzima borradora HDAC
(Histone Deacetylase)
Þ menor transcripción

12

6
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

Acción simultánea de proteínas marcadoras y borradoras determina patrón epigenético
dominante:

SINERGIA:
factores epigenéticos que
producen un mismo efecto
actúan conjuntamente en forma
de complejo
Ej. DNMTs – HDACs – HMTs

13

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Descompactación del cromosoma & acceso a la información

3. Unión de proteínas reguladoras: factores de transcripción : ver clase anterior
(activadores /represores, coactivadores /corepresores…)

Cooperación de todos los

mecanismos en forma
coordinada y complementaria:
Factores epigenéticos y
factores de transcripción se
reclutan mutuamente…

14

7
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

¿En qué momento ocurre la regulación de la expresión génica?
Señal
Señales

Percepción (sensado)
Regulación
1.Descompactación degradación proteica
& acceso a la
información 2.Regulación
Transducción de señales transcripcional 6.Regulación
postraduccional:
plegamiento
pre- /procesamiento
mRNA / transporte
Ø Genes que se apagan 3. Regulación
= Represión del splicing

Ø Genes que se activan 5. Regulación

= Inducción 4. Transporte postranscripcional
al citoplasma
mRNA degradation

15

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
EUCARIOTAS
• REGULACIÓN SPLICING
• ARNs REGULADORES

SPLICING ALTERNATIVO ACCIÓN DE ARNs REGULADORES

miRNAs

16

8
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
SPLICING ALTERNATIVO:
Proceso que permite obtener diversas proteínas a partir de un mismo gen:
plasticidad funcional de les genes eucariotas

17

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
SPLICING ALTERNATIVO:
Al igual que para la transcripción, para el splicing existen proteínas reguladoras que
reconocen elementos cis sobre la secuencia del ARN:
§ Activadores del splicing (Proteínas SR) : se unen a secuencias ESE o ISE (Splicing Enhancers)
§ Supresores de splicing (hnRNP) se unen a secuencias ESS o ISS (Splicing supresors)
Ø Ambos factores responden señales ambientales

Exonic Splicing Enhancer Intronic Splicing Supresor

18

9
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
• snRNA, snoRNA: miRNAs
intervienen en maduración (splicing)

• RNA reguladores:
Muy diversos y versátiles: pequeños y largos
Remodelación de la cromatina (Metilación ADN/ Histonas)
Interacción Proteína/ADN y Prot/prot, Splicing
Silenciamiento génico postrancripcional /Regulación traduccional
Regulación postraduccional (degradación proteica /transporte)

Traducción Epigenética

19

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
• snRNA, snoRNA: miRNAs
intervienen en maduración (splicing)

• RNA reguladores:
Muy diversos y versátiles: pequeños y largos
Remodelación de la cromatina (Metilación ADN/ Histonas)
Interacción Proteína/ADN y Prot/prot, Splicing
Silenciamiento génico postrancripcional /Regulación traduccional
Regulación postraduccional (degradación proteica /transporte)

Traducción Epigenética

20

10
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
Micro RNAs (miRNAs): Silenciamiento postranscripcional
miRNA gene

RNApol II Degradación del Degradación del

mRNA blanco polipeptido

Reconocimiento específico
del mRNA blanco

AGO Argonaute

AGO
RISC
Inhibición /bloqueo traducción

21

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
Micro RNAs (miRNAs): Silenciamiento postranscripcional
miRNA gene

RNApol II Región palindrómica Degradación del Degradación del

mRNA blanco polipeptido
autocomplementaria
= “hair-pin”

Reconocimiento específico
del mRNA blanco

AGO Argonaute

AGO
RISC
Inhibición /bloqueo traducción

22

11
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
Micro RNAs (miRNAs): Silenciamiento postranscripcional
miRNA gene

RNApol II Degradación del Degradación del

mRNA blanco polipeptido

Maduración nuclear
Reconocimiento específico
del mRNA blanco

AGO Argonaute

AGO
RISC
Inhibición /bloqueo traducción

23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
Micro RNAs (miRNAs): Silenciamiento postranscripcional
miRNA gene

RNApol II Degradación del Degradación del

mRNA blanco polipeptido

Reconocimiento específico
del mRNA blanco

Maduración
Por DICER: 21-26nt
AGO Argonaute

AGO
RISC
Inhibición /bloqueo traducción

24

12
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
Micro RNAs (miRNAs): Silenciamiento postranscripcional
miRNA gene

RNApol II Degradación del Degradación del

mRNA blanco polipeptido

Reconocimiento específico
del mRNA blanco

Maduración AGO Argonaute

Por Argonauta:
cadena antisentido
= complementaria
al mRNA AGO
RISC
Inhibición /bloqueo traducción

25

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
Micro RNAs (miRNAs): Silenciamiento postranscripcional
miRNA gene

RNApol II Degradación del Degradación del

mRNA blanco polipeptido

Reconocimiento específico
del mRNA blanco

AGO Argonaute

Complejo AGO
RISC
RISC Inhibición /bloqueo traducción

26

13
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ü Sistema de defensa contra retrovirus usan
una vía biosintética similar
RNAs interferentes (siRNAs):
Þ Silenciamiento postranscripcional por degradación de
ARNs víricos
Þ Sistema empleado para silenciar
Complejo
transposones/retrotransposones RISC reconoce
específicamente
mRNA
= fuentes de dsRNA “exógenas”

Þ APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA:
= Silenciamiento dirigido a un gen específico
(terapia génica, ingeniería metabólica, vacunas de ARN,
mejoramiento vegetal + investigación básica)
27

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ü Sistema de defensa contra retrovirus usan
una vía biosintética similar
RNAs interferentes (siRNAs):
Þ Silenciamiento postranscripcional por degradación de
ARNs víricos
Þ Sistema empleado para silenciar
Complejo
transposones/retrotransposones RISC reconoce
específicamente
mRNA
= fuentes de dsRNA “exógenas”

Þ APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA:
= Silenciamiento dirigido a un gen específico
(terapia génica, ingeniería metabólica, vacunas de ARN,
mejoramiento vegetal + investigación básica)
28

14
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ü Sistema de defensa contra retrovirus usan
una vía biosintética similar
RNAs interferentes (siRNAs):
Þ Silenciamiento postranscripcional por degradación de
ARNs víricos
Þ Sistema empleado para silenciar
transposones/retrotransposones

Mecanismo
= fuentes de dsRNA “exógenas” = degradación del mRNA

Þ APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA:
= Silenciamiento dirigido a un gen específico
(terapia génica, ingeniería metabólica, vacunas de ARN,
mejoramiento vegetal + investigación básica)
29

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES

miRNAs:
Origen endógeno(nuclear): Transcrito por RNApolII
Silenciamiento de genes propios
miRNAs primarios poseen estructura palindrómica
(dsRNA)

30

15
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES

miRNAs:
Origen endógeno(nuclear): Transcrito por RNApolII
Silenciamiento de genes propios
miRNAs primarios poseen estructura palindrómica
(dsRNA)

s
NA
miR

31

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES

Otros tipos de RNAs pequeños

interferentes = otros roles para
Complejo RISC:

siRNAs (small interfering):

Origen exógeno (virus, ARNds
artificial, ARNds derivado de
transposones) = silenciamiento
antiviral y de transposones

32

16
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
As
siRN

Otros tipos de RNAs pequeños

interferentes = otros roles para
Complejo RISC:

siRNAs (small interfering):

Origen exógeno (virus, ARNds
artificial, ARNds derivado de
transposones) = silenciamiento
antiviral y de transposones

33

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES

Complejo RISC puede entrar al núcleo y unirse a un

pre-mRNA blanco:

Promueve silenciamiento transcripcional

induciendo metilación de histonas y/o ADN
= RITS (RNA-induced transcriptional silencing)

34

17
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES
LncRNAs: Long NonCoding RNAs

• Largos > 200 nt

• Estructura secundaria
• Muy diversos y versátiles:
>10’000 en genoma humano!
• Alta plasticidad funcional
o Epigenética
o Postranscripcional
o Traduccional
o Postraduccional

35

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES : ¿Y en procariotas?
Antisense RNAs (asRNAs) & small RNAs (sRNAs):
= primeros ARNs reguladores en ser descubiertos (años 1980s)
• RNAs no codificantes (>50 - 1000 nt) complementarios a mRNAs

• Se han descubierto centenares de asRNAs diferentes en E.coli

• Regulan respuesta a estrés en bacterias

• Inhiben la traducción del mRNA o promueven su degradación

• Otros pueden activar la traducción !

= elementos reguladores trans

36

18
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES : ¿Y en procariotas?
asRNAs & small RNAs (sRNAs):
= primeros ARNs reguladores en ser descubiertos (años 1980s)
Unión complementaria con mRNA blanco:
- Inhibición de traducción

- En algunos casos:
activación traducción

- Degradación mRNA

37

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES : ¿Y en procariotas?
asRNAs & small RNAs (sRNAs):
= primeros ARNs reguladores en ser descubiertos (años 1980s)
– RNAs pequeños en procariotas:
Requiere Proteína central en guiar interacción sRNA/ mRNA:
Chaperona Hfq

38

19
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES : ¿Y en procariotas?
asRNAs & small RNAs (sRNAs):

Jörg Vogel & Ben F. Luisi

Nature Reviews Microbiology 9 (August 2011)

39

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

REGULACIÓN POSTRANSCRIPCIONAL:
ACCIÓN DE ARNs REGULADORES : ¿Y en procariotas?
asRNAs & small RNAs (sRNAs):

Elementos de reguladores claves en

la respuesta a estrés en bacterias

Jörg Vogel & Ben F. Luisi

Nature Reviews Microbiology 9 (August 2011)

40

20
 24/04/23

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Para llevarse a casa:

Modificaciones de histonas Metilación de ADN

+
TETs
Unión proteínas /ADN
DNA A

Silencer

+/- transcripción
Silencer-blocking
insulator

Factores de transcripción: Activadores / Represores

Elementos cis :
Enhancer, silencer, insulator, promotor
mRNA RISC / Hfq

+/- traducción ARNs reguladores:

miRNAs asRNAs/ sRNAs
lncRNAS
siRNAs
• Protein degradation
LncRNAs
PROTEIN • Post-tanslational mod.
• Transport

41

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Para llevarse a casa:
V/ F:
• Las modificaciones covalentes que tienen como blanco las colas de las histonas son suficientes
para tener efecto directo sobre los cambios en la expresión génica:
• Los RNAs reguladores que actúan a nivel postranscripcional tienen siempre un efecto negativo
sobre la expresión génica:

Indique si estas modificaciones epigenéticas, proteínas o RNAs tienen un efecto / acción positiva o
negativa sobre la expresión génica:
- Acetilación de Histonas
- Metilación de Citosinas
- Maduración de un miRNA dúplex por parte de DICER
- Acción de una HDAC sobre las histonas
- Unión complementaria del complejo Hfq/sRNA a la secuencia Shine Dalgarno de un gen procariota
- Secuestro por parte de un LncRNA de miRNAs eucariotas
- Unión de una proteína reguladora a un enhancer de un gen eucariota
42

21