Jana Montero

PRÀCTICA LABORATORI
OBJECTIUS:
Extreure l’ADN de la nostra pròpia mucosa bucal

FONAMENTS:
L'extracció d'ADN requereix una sèrie d'etapes bàsiques: En primer lloc, s'ha de
trencar la membrana plasmàtica per poder accedir al nucli de la cèl·lula. A
continuació cal trencar també la membrana nuclear per deixar lliure l'ADN. Els
sabons utilitzats com a rentaplats emulsionen els lípids de les membranes cel·lulars
que fan que es trenquin.Aquest sería el procès de osmosis que causa que surti
l’aigua de les cèl·lules per a poder contrarestar la sal.
La sal evita la unió de les proteïnes al ADN
Per aïllar l'ADN cal fer-lo precipitar en alcohol. L'ADN és soluble en aigua, però quan
es troba en alcohol és desenrotllar i precipita a la interfície entre l'alcohol i l'aigua. A
més de permetre veure l'ADN, l'alcohol separa l'ADN d'altres components cel·lulars,
els quals són deixats a la solució aquosa.

MATERIAL:
- Mostra de la mucosa bucal
- Aigua destil·lada
- Fairy
- Alcohol de 96º (preferiblement fred per a que es pugui veure millor l’ADN) - Vareta
de vidre
- Tub d’assaig
- Vas de precipitats
- Pipeta
- Sal
- Escuradents
- Got de plàstic
- Aigua potable
- Paper per a protegir la taula
- Microscopi
- Colorant
- Bascula
- Vidre de rellotge
PROCEDIMENT:
- Posar 5 ml fairy (rentavaixelles) a un matràs de 250 ml. Completar amb aigua.
- Fer la tara a la bàscula quan afegim el vidre de rellotge damunt - Pesar 3 g de sal,
traspasar a un matràs i completar-ho amb 100 ml d’aigua - Posar aigua en un got de
plàstic per a poder glopejar dues vegades i després
amb un escuradents rascar la galta per dintre per a poder extreure la mucosa -
Afegeix 25 mil·lilitres d'aigua destil·lada. És necessari utilitzar la pipeta per extreure
la quantitat d'aigua adequada
- Agita vigorosament la barreja durant almenys 5 minuts, sense formar escuma -
Retira 5 ml. de la barreja a un tub d'assaig i afegeix amb la pipeta 5 mil·límetres
d'alcohol. S'ha de deixar escórrer lentament l'alcohol per la cara interna del tub
d’assaig, tenint aquest inclinat. L'alcohol queda flotant sobre la barreja.
- Deixa reposar durant 5 minuts fins que es formi una zona tèrbola entre les 2 capes.
- Introdueix una vareta just a sota de l'alcohol (la zona tèrbola que queda entre les 2
capes).
- Remena la vareta cap endavant i cap enrere i de mica en mica s'aniran enrotllant
els fragments
més gran d'ADN.
- Passat un minut, retira la vareta travessant la capa d'alcohol, de manera que l'ADN
quedarà adherit al seu extrem, amb l'aspecte d'un floc de cotó mullat.

CONCLUSIÓ:
- El producte filamentós obtingut de l'extracció no és ADN pur, ja que, barrejat amb
ell, hi ha fragments d'ARN. Una extracció “professional” es realitza afegint enzims
que fragmenten les molècules d'ARN i que impedeixen que s'uneixin a l'ADN.