TRANSFORMACIÓN DE AGROBACTERIUM TUMEFANCIENS POR ELECTROPORACIÓN

-Desarrollo.

1.- En hielo enfriar las celdas de electroporación, por 10 minutos como mínimo.

2.- Templar en hielo durante 20 minutos las células electrocompetentes mediante una
micropipeta agregar 1 ul del vector pbi 121+TtLCV (en este paso se realizó una dilución 1:5),
homogenizar con la micropipeta.

3.- Transferir la mezcla a la celda de electroporación con mucho cuidado evitando la formación
de burbujas en el interior de esta, para ello se sugiere colocar la punta de la micropipeta en
contacto con una de las paredes y permitir que el líquido fluya atreves de ellas. Este paso debe
de realizarse en frío.

4.- Tras haber corroborado la ausencia de burbujas en la celda, colocarla en hielo y acudir al
electroporador lo más rápido posible. Para configurar en la pantalla se debe seleccionar
“Agrobacterium”.

5.- Colocar la celda en el equipo, correr el proceso. En caso de observar un arco eléctrico y un
“Crack”, el proceso puede repetirse, si en la pantalla se muestra una gráfica se puede
proseguir.

6.- Colocar la celda nuevamente en hielo y añadir 1 ml de caldo YEP, homogenizar con la micro
pipeta. Posteriormente transferir a un tubo de 1.5 ml y reposar 28°C por 1 hora.

7.- Tomar 260 ul y plaquear por extensión en medio YEP con kanamicina y rifampicina.

8.- Incubar a 28°C durante 48 hrs.

-Resultado.

Las bacterias crecieron adecuadamente, esto sugiere que fueron transformadas ya que el
plásmido confiere resistencia a la kanamicina.