Realización de Técnicas de Microscopía y Digitalización de Imágenes

30/10/2020 Realización de técnicas de microscopía y digitalización de imágenes.
Realización de técnicas de microscopía y digitalización de

imágenes.
Realización de técnicas de microscopía y digitalización de

imágenes.
Caso práctico
Carlos y Susana son dos estudiantes del ciclo de laboratorio clínico y biomédico que
están realizando el módulo de FCT en un laboratorio hospitalario. Son buenos amigos y
colaboran en lo que pueden. Con vistas a la elaboración del módulo Proyecto, recopilan
información relacionada con la evolución de la bacteriología a lo largo de la historia y
bromean al leer que en tiempos remotos se consideraba que las enfermedades en
general, y las infecciosas en particular, eran debidas a castigos divinos, fuerzas
sobrenaturales o factores físicos. Durante la conversación coinciden con Ana,
microbióloga del hospital, quien les re ere cómo Robert Koch, con la ayuda de un
microscopio diseñado por Carl Zeiss, demostró la relación causal entre un
microorganismo (el Bacillus anthracis) y la enfermedad de la que es responsable (el
ántrax).
—¡Qué difícil hubiera sido este descubrimiento si no hubiera podido utilizar el

microscopio!, comentan a dúo los dos amigos.
localhost:51237/temp_print_dirs/eXeTempPrintDir__aw2kk/TGL05_Contenidos/ 1/82
Reflexiona
¿Has pensado en alguna ocasión lo que ha representado el descubrimiento y desarrollo

de los distintos tipos de microscopios en la evolución de todas las ciencias biomédicas?
Mostrar retroalimentación
Sin duda ha sido uno de los descubrimientos fundamentales para su desarrollo.

Gracias a ellos se han podido realizar gran cantidad de estudios a nivel celular que
han permitido el enorme desarrollo actual de ciencias como la medicina, la biología
y otras muchas. El mundo del Laboratorio, por supuesto, ha sido uno de los
grandes bene ciados.
En tu vida diaria te será fácil comprobar cómo, gracias a nuestro aparato visual, puedes ver el
mundo que nos rodea. También habrás apreciado que cuando los objetos son muy pequeños,
no puedes verlos con claridad aunque te acerques mucho a ellos. Dado que en el laboratorio
clínico y biomédico vas a trabajar a nivel celular y que ese nivel no es accesible al ojo humano,
tendrás que utilizar instrumentos que agranden los objetos de muy pequeño tamaño para
que tu ojo pueda apreciarlos.
Por otra parte, cuando estabas estudiando en tu colegio o instituto, seguramente utilizaste
un microscopio más o menos elemental para ver las células del epitelio de la cebolla o de la
raíz del ajo. Por lo tanto, ya tienes un punto de partida que te permitirá comprender esta
unidad temática.
En esta unidad de trabajo vas a conocer cómo es un microscopio óptico, cuáles son sus
partes y para qué sirve cada una de ellas. También aprenderás que existen distintos tipos de
microscopios ópticos, e incluso otros, los electrónicos, que utilizan un haz de electrones en
lugar de un haz de luz para observar partículas diminutas. Por último, te presentaremos
distintos instrumentos y programas informáticos capaces de captar la imagen del
microscopio y digitalizarla, procesarla, almacenarla y transferirla.
Materiales formativos de FP Online propiedad del Ministerio de Educación y Formación

Profesional
Aviso Legal
1.- Tipos de microscopios.
Caso práctico
Carlos está completando su periodo de FCT en la sección del microbiología del

laboratorio. Como ya lleva allí algunos días, el personal que trabaja en esta sección le da
carta blanca para realizar buena parte de las tareas que ellos llevan a cabo diariamente.
Hoy va a manejar el microscopio para observan algunas tinciones con microorganismos.
Lo manipula con cierta habilidad y Juan, uno de los técnicos de la sección, le alaba su
pericia.
—Siempre me gustó observar las cosas que no se ven a simple vista —dice Carlos. De
hecho, ya de niño me regalaron un pequeño microscopio que no era más que una lupa
potente. Por eso, cuando llegué al instituto y me encontré con los microscopios que
había allí, no dejé pasar la oportunidad de manejarlos lo mejor posible. Lástima que no
haya tenido ocasión aún de manejar otros tipos de microscopios más potentes.
—Tranquilo —dice Juan. Aquí podrás manejar algún otro tipo. En todo caso alguna vez
podrás mirar a través de un microscopio electrónico si visitas la universidad. ¡Ese sí que
aumenta la imagen!
Debes saber que, en general, se denomina microscopio a todo instrumento capaz de producir
imágenes ampliadas de objetos pequeños. Lo vas a utilizar en gran parte para la
identi cación de microorganismos, células y tejidos así como para la localización de
reacciones inmunohistoquímicas (en las que harás reaccionar antígenos y anticuerpos y los
podrás de mani esto por diversos métodos y posterior observación microscópica).
Podrás encontrar dos variantes de microscopía según el principio en que se basa la

ampli cación de la imagen:
Microscopía óptica: la ampli cación se obtiene por un sistema de lentes ópticas.

También se conoce como microscopía de luz, ya que utiliza ondas luminosas para
transmitir la imagen que se va a ampli car. Las variantes más importantes que podrás
encontrar en este grupo son las siguientes:
Microscopía de campo luminoso o claro.

Microscopía de campo oscuro.
Microscopía de uorescencia.
Microscopía de contraste de fases.
Microscopía electrónica: se basa en utilizar un haz de electrones en lugar de ondas

luminosas para obtener la imagen ampli cada. Presenta algunas variantes, entre las
que destacan:
Microscopia electrónica de transmisión

Microscopia electrónica de barrido
En una primera fase vas a conocer el fundamento, los componentes, el manejo y el

mantenimiento del microscopio óptico de campo luminoso o claro, que es el que manejarás a
diario en tu futuro ejercicio profesional. Posteriormente conocerás los otros tipos de
microscopios ópticos, así como los microscopios electrónicos.
La microscopía óptica transmite la imagen a ampli car a través de ondas luminosas. Estas
ondas están formadas por una sucesión de fotones. Los fotones son las partículas
elementales portadoras de todas las formas de radiación electromagnética.
La microscopía electrónica, a diferencia de la óptica, no utiliza fotones, sino que los sustituye
por haces de electrones.
1.1.- Microscopio de campo luminoso o claro.
Habrás observado que cuando te alejas de un objeto, este parece hacerse de menor tamaño.
Por el contrario, cuando te acercas a un objeto, este parece ser de mayor tamaño. Estos
fenómenos se deben a que, al alejarte o acercarte a él, varía el ángulo visual de tu ojo. Este
parámetro depende de la capacidad de deformación del cristalino.
Cuando observas objetos cada vez más pequeños, te vas acercando cada vez más a ellos
para poder seguir viéndolos; en estas circunstancias llegará un momento en que no los veas
con claridad, ya que estás demasiado cerca y has sobrepasado la capacidad máxima de
deformación del cristalino.
Si en estas circunstancias sitúas entre tu ojo y el objeto un sistema óptico capaz de aumentar
el ángulo visual, volverás a verlo con claridad.
Ese sistema óptico puede estar formado por una simple lente convergente, llamándose
entonces microscopio simpre o lupa, pero también puede estar formado por varios sistemas
de lentes asociados entre sí; en este caso estarás ante un microscopio compuesto. Ambos
producen una imagen aumentada de un objeto, pero el segundo es capaz de conseguir
mayores aumentos y hacer que un objeto muy pequeño y no visible en condiciones
normales, sea perceptible por el ojo humano.
A partir de este momento vas a aprender los aspectos más importantes del microscopio
compuesto y de sus diferentes variedades, empezando por la de campo luminoso o claro, que
es el más habitual en un laboratorio clínico y biomédico.
En la imagen puedes ver el corte de un microscopio óptico compuesto en el que se aprecia la

trayectoria de la luz a través de los sistemas de lentes.
El microscopio óptico de campo luminoso es aquel en el que la preparación es iluminada por

una lámpara que produce luz visible para el ojo humano; en él, los objetos aparecen más
oscuros que el campo de observación.
Autoevaluación
Señala las a rmaciones correctas:

La microscopía electrónica utiliza ondas luminosas para ampli car la imagen.
El microscopio simple dispone de varios sistemas de lentes.
El microscopio compuesto consigue mayores aumentos que el simple.
El ángulo visual de nuestro ojo depende de la capacidad de deformación del

cristalino.
El microscopio óptico de campo luminoso utiliza haces de electrones.
Solución
1. Incorrecto
2. Incorrecto
3. Correcto
4. Correcto
5. Incorrecto
1.2.- Componentes básicos (I).
Caso práctico
Carlos está realizando su módulo de FCT en el laboratorio que se le asignó en su

momento. Hoy tiene que aprender cómo se realiza y visualiza un sedimento urinario.
Para ello, tras montarlo, coloca la preparación en el microscopio y comprueba el
resultado:
—No distingo bien los elementos que aparecen en el campo! —le dice a Celia, técnico de
Laboratorio con años de experiencia.
—¿Has puesto el condensador en la posición correcta y has ajustado la iluminación? —
pregunta ella.
—¡Es verdad! Había olvidado bajar el condensador —responde Carlos.
—¡No olvides repasar los componentes del microscopio y la utilidad de cada uno de
ellos! Te facilitará un montón su uso —Comenta Celia, al tiempo que recuerda que a ella
también le ocurrió lo mismo en su periodo de formación.
Habrás comprobado lo importante que es conocer las partes de un microscopio y, sobre todo,
la utilidad de cada una de ellas. En este apartado vamos a desarrollar estos aspectos en el
caso del microscopio de uso más frecuente: el óptico de campo luminoso o claro.
En todo microscopio óptico vas a encontrar tres tipos de componentes: la parte mecánica, la
parte óptica y el sistema de iluminación. El primer componente que vas a estudiar es la parte
mecánica:
La parte mecánica se organiza alrededor del soporte o pie, que sirve como base al
microscopio (dándole estabilidad) y donde se aloja la fuente luminosa. El soporte o pie
sostiene un brazo inclinado del que sale el tubo o cabezal, estructura hueca en cuyos
extremos se sitúan los elementos ópticos (los oculares en su parte superior y el revólver con
los objetivos en su parte inferior). La parte mecánica también incluye la platina.
El revólver es una pieza metálica giratoria en forma de casquete situada en el extremo

inferior del tubo donde quedan atornillados los objetivos de distintos aumentos (el más
corto es el de menor aumento, aumentando su longitud al tiempo que lo hacen los
aumentos).
Revolver con objetivos.
La platina es la zona donde se colocan las preparaciones. Su forma puede variar,

aunque generalmente es rectangular y presenta un ori cio central sobre el que se
coloca la preparación; dicho ori cio permite el paso de los rayos luminosos procedentes
de la fuente de iluminación. La platina puede deslizarse a lo largo del brazo mediante
un tornillo denominado macrométrico (o de avance rápido) y otro micrométrico (o de
avance lento). La platina dispone también de un sistema de desplazamiento que
permite mover la preparación de delante hacia atrás y de izquierda a derecha gracias a
un tornillo dotado de dos ruedas de desplazamiento. En la platina existe un sistema de
sujeción o pinza para mantener jas las preparaciones durante la observación. En la
parte lateral y posterior de la platina se encuentran unas escalas denominadas nonius
que permiten jar las coordenadas de cualquier campo óptico; de esta forma se puede
acudir directamente a él cuando interesa.
En la imagen puedes ver la platina de un microscopio óptico en la que también se observan

las pinzas de sujeción de las preparaciones y el nonius.
1.2.1.- Componentes básicos (II).
Además de la parte mecánica que acabas de estudiar, en el microscopio puedes encontrar

otros dos componentes importantes: la parte óptica y el sistema de iluminación.
La parte óptica.
La parte óptica resulta fundamental a la hora de valorar la calidad del microscopio que estés
utilizando, ya que es la encargada de producir la ampli cación del objeto observado. Está
formada por sistemas de lentes convergentes dispuestas a ambos extremos del tubo o
cabezal. En el microscopio compuesto encontrarás dos sistemas de lentes denominadas
objetivos (situados cerca del objeto que se observa y atornillados al revólver) y oculares
(colocados cerca del ojo del observador).
Los oculares están situados en la parte superior del cabezal. Son cilindros huecos
provistos de lentes convergentes cuyo aumento se indica en la parte superior de los
mismos (normalmente 10x, aunque los hay de distintos aumentos). Dependiendo de
que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden ser mono o binoculares.
También encontrarás microscopios con cabezales trioculares, en los que se pueden jar
cámaras fotográ cas o de vídeo. Por otra parte, existen microscopios con cabezales y
oculares múltiples, que permiten la observación a más de una persona al mismo
tiempo.
Los objetivos son sistemas de lentes convergentes situados en la parte inferior del
tubo, en el revólver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados
de forma creciente según sus aumentos; en el sentido de las agujas el reloj: 4x, 10x,
40x, 100x). Un anillo coloreado es distintivo de los aumentos de cada objetivo, que
también van indicados en el lateral del mismo. Existen dos tipos de objetivos, los secos
(entre ellos y la preparación sólo hay aire; generalmente son los de 4x, 10x y 40x) y los
de inmersión (entre ellos y la preparación se sitúa un líquido; generalmente es el de
100x).
El aumento primario del objeto es producido por el objetivo; posteriormente la imagen se

transmite al ocular donde se realiza el aumento nal, cuyo valor viene dado por el producto
del aumento del ocular por el del objetivo. La imagen resultante es agrandada y real, pero
invertida y con rotación de 180 º con respecto a la posición real.
El sistema de iluminación.
Por último, debes prestar atención al sistema de iluminación: la luz entra al sistema
procedente de una lámpara y, antes de alcanzar la preparación, pasa a través de un sistema
de lentes denominado condensador (conjunto de lentes convergentes que capta los rayos de
luz y los concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos
contraste; se regula en altura mediante un tornillo). En la imagen puedes observar el
condensador de un microscopio (derecha) y el diafragma (izquierda):
Condensador de un microscopio (derecha) y diafragma iris (izquierda).
El sistema de iluminación también incorpora un diafragma o iris que controla el diámetro del
círculo de la luz que pasa por el sistema, regulando la cantidad que alcanza la preparación.
También incluye un regulador que te va a permitir controlar la intensidad de luz emitida por
la lámpara.
Para saber más
En el siguiente vídeo podrás repasar los componentes de un microscopio óptico

compuesto de campo claro o luminoso. Tiene una duración de unos tres minutos y te
ayudará a a anzar lo aprendido hasta ahora.
Partes del microscopio y s…

s…
Resumen textual alternativo
Debes conocer
Abre la siguiente presentación y repasa todos los componentes de un microscopio

óptico compuesto de campo luminoso o claro.
1.3.- Términos que definen las características del

microscopio.
Cada vez que vayas a manejar un microscopio, te encontrarás con una serie de términos que
describen sus características. Entre ellos, debes conocer los siguientes:
Aumento: relación entre el tamaño de una imagen utilizando estos instrumentos y el

que obtenemos al observarla simplemente con el ojo. Viene dada por el aumento del
objetivo multiplicado por el del ocular. Fíjate en la imagen, en ella se representa de
forma esquemática cómo resulta aumentada de tamaño la imagen original al atravesar
el objetivo y el ocular del microscopio óptico.
Contraste: se de ne como la diferencia relativa en intensidad entre un punto de una

imagen y sus alrededores. Se basa en la diferencia en las características de absorción de
la luz de cada objeto. Un objeto, para poder ser percibido a través del microscopio, debe
poseer un cierto grado de contraste con el medio que lo rodea, el cual puede
aumentarse mediante procedimientos de tinción.
Poder de resolución: capacidad de un sistema de lentes para permitir distinguir como
diferentes dos puntos adyacentes. Es función de la longitud de onda de la luz que se
utiliza y de una característica de las lentes denominada apertura numérica (AN).
La apertura numérica es el ángulo máximo del cono de luz que penetra en el objetivo. Existe
una correlación entre apertura numérica y aumento del objetivo, de tal modo que las lentes
con mayores aumentos tendrán mayor apertura numérica.
El medio a través del cual pasa la luz es también un factor que in uye en la AN; si es el aire, la
AN nunca será mayor que uno. Para conseguir aperturas numéricas mayores debe utilizarse
un líquido con mayor índice de refracción que el aire (el aceite de cedro o de inmersión). El
límite de resolución, la apertura numérica y la longitud de onda de la luz se relacionan
mediante la siguiente expresión:
La apertura numérica es un valor que se calcula multiplicando el índice de refracción (n) por el
seno de la mitad del ángulo máximo formado por los rayos luminosos que penetran en la
lente frontal del objetivo (Ø).
Longitud mecánica del tubo: distancia entre la super cie de conexión del objetivo en el
revólver y el extremo del tubo en el cual se introduce el ocular.
Distancia de trabajo: distancia entre la lente frontal del objetivo y la super cie del
cubreobjetos, cuando está enfocada la imagen de una muestra. A mayor aumento del
objetivo, menor distancia de trabajo.
Numero de campo: diámetro en mm del campo de visión que puede ser observado a
través del ocular.
Campo real de observación: diámetro del área circular de la muestra efectivamente
cubierta bajo el microscopio.
Profundidad de foco: espesor de la muestra que aparece enfocado.
Para saber más
El siguiente vídeo te explicará el funcionamiento de las lentes convergentes, te

describirá en qué consisten sus aberraciones esférica y cromática y te explicará alguno
de sus parámetros más importantes.
Lentes y objetivos en micr…

micr…
Autoevaluación
Señala las a rmaciones ciertas:

El condensador regula la cantidad de luz que llega a la preparación.
Los oculares forman parte del sistema de iluminación del microscopio.
Los objetivos se sitúan en el revólver.
El tornillo macrométrico permite el avance lento de la platina.
El poder de resolución de un sistema de lentes es su capacidad para diferenciar

dos puntos próximos entre sí.
El aumento de un microscopio depende únicamente de sus objetivos.
Solución
1. Incorrecto
2. Incorrecto
3. Correcto
4. Incorrecto
5. Correcto
6. Incorrecto
1.4.- Manejo y mantenimiento del microscopio óptico.
A la hora de manejar el microscopio, uno de los aspectos que debes controlar con mayor
soltura es el proceso de enfoque de la preparación. Si no lo haces bien, la imagen resultante
será de mala calidad o inexistente.
En el caso de que necesites pocos aumentos, podrás emplear los objetivos secos, que no
necesitan aceite de inmersión. Si por el contrario necesitas muchos aumentos, emplearás los
objetivos de inmersión, poniendo previamente una gota de aceite de inmersión sobre la
preparación. Los objetivos secos suelen utilizarse en preparaciones con cubreobjetos,
mientras que los de inmersión se suelen utilizar en preparaciones sin cubreobjetos.
Los pasos que debes seguir para realizar el enfoque del microscopio correctamente son los
siguientes:
1. Sitúa el microscopio sobre una super cie estable y de cómodo acceso.

2. Coloca la preparación sobre la platina y céntrala.
3. Enciende la fuente de luz y ajusta la iluminación con el condensador y el diafragma.
4. Selecciona el objetivo, empezando por el de menor aumento./li>
5. Mueve la platina hasta que casi toque la preparación (pero sin tocarla).
6. Mirando por los dos oculares, ve retirando la platina de la preparación accionando el
tornillo macrométrico. Es importante graduar la distancia entre los dos oculares hasta
lograr que la imagen de cada uno de ellos se funda en una sola.
7. Una vez enfocado, ajusta la imagen mediante el tornillo micrométrico.
8. Pasa a objetivos de mayor aumento si es necesario y ajusta el enfoque mediante el
tornillo micrométrico.
9. Recorre la preparación a la vez que, durante la observación, mueves el tornillo
micrométrico con objeto de enfocar los distintos planos de la preparación.
Cuando manejes el microscopio, deberás situar el condensador en posiciones bajas con los
objetivos secos y cuando la preparación no esté teñida y su contraste sea pequeño. Colocarás
el condensador en posiciones altas con los objetivos de inmersión y con preparaciones

teñidas y bien contrastadas.
En el caso de que vayas a enfocar con objetivo de inmersión, lo primero que debes hacer es
colocar sobre la preparación una gota de aceite de inmersión. Los demás pasos son similares.
Al terminar la observación, y antes de retirar la preparación, hay que separar la platina del
objetivo para evitar estropear la lente focal. Por último, hay que eliminar el aceite que ha
quedado adherido a la lente; para ello lo más conveniente es secarlo con papel especial para
la limpieza de lentes.
Por otra parte, es importante que tengas en cuenta algunas normas de mantenimiento que
permitirán que el microscopio se mantenga en un buen nivel de funcionamiento durante
mucho tiempo. Como verás a continuación, son normas muy sencillas:
La lámpara de iluminación la mantendrás encendida exclusivamente durante el tiempo

de observación, evitando así recalentamientos innecesarios.
Cuando no uses el microscopio debes cubrirlo con su funda.
Cuando vayas a desplazar el microscopio de un lugar a otro debes quitarle los oculares.
Para desplazar el microscopio, sujétalo rmemente por el brazo con una mano y coloca
la otra bajo el soporte.
Tras utilizar los objetivos de inmersión, no olvides limpiarlos correctamente.
Limpia los oculares y objetivo exclusivamente con papel para lentes. No utilices de
manera habitual sustancias disolventes del tipo del xilol, ya que pueden degradar la
unión de la lente con la montura.
2.- Otras técnicas de microscopía óptica de luz transmitida.
Caso práctico
Susana, en compañía de Celia, la técnico de laboratorio del hospital que se le asignó

para su periodo de FCT, recorre las instalaciones dónde va a realizar sus prácticas. En un
momento dado, acceden a una sala cerrada en la que hay instalado un microscopio.
—¡Qué desagradable debe ser trabajar en esta sala tan aislada y oscura! —comenta
Susana.
Celia le dice que no es un capricho de un analista delicado, ni una imposición del

hospital por falta de otro espacio mejor, sino que es la sala del microscopio de
uorescencia de la sección de inmunología, donde se visualizan las técnicas de
determinación de autoanticuerpos y que esta sala debe estar a oscuras.
—Repasa tu material de clase para decirme por qué debe ser así —le encarga Celia a
Susana.
—Mañana, sin falta, tendrás la respuesta, contesta esta última, y además, para
compensar mi fallo, te hablaré de otros tipos de microscopios ópticos.
Ya has visto los componentes, la utilización y el mantenimiento de un microscopio óptico de

campo luminoso o claro. Ahora debes aprender lo fundamental sobre otros tipos de
microscopios ópticos, entre los que destacan el de uorescencia, el de campo oscuro y el de
contraste de fase. Además de estos, estudiarás de manera super cial otros, como el
microscopio invertido, el de luz ultravioleta y el de luz polarizada.
En las imágenes puedes observar un microscopio de uorescencia con una cámara de vídeo
acoplada y un corte de la retina del ojo que emite uorescencia verde que es captada por un
microscopio de uorescencia.
2.1.- Microscopio de fluorescencia.
El funcionamiento de este microscopio se basa en la capacidad de ciertas sustancias para

absorber luz de una determinada longitud de onda y, a continuación, emitir luz de longitud
de onda mayor que la absorbida. En este caso concreto, la luz incidente que va a ser
absorbida es radiación ultravioleta. Cuando la luz ultravioleta impacta sobre el material
uorescente con el que se tiñe o marca la muestra, provoca en él una redistribución de los
electrones de sus moléculas que, a continuación, da lugar a la emisión de una radiación
luminosa de longitud de onda distinta a la incidente y que está dentro del espectro visible.
De una manera sencilla, diríamos que el microscopio de uorescencia aprovecha la capacidad

de ciertas sustancias ( uorescentes) para absorber luz ultravioleta (de onda corta e invisible
para el ojo humano) y, posteriormente, emitir la energía recibida en forma de luz visible (de
onda más larga y perceptible por el ojo humano).
De esta forma, cuando una sustancia uorescente es expuesta a una luz ultravioleta, la
podremos ver como un elemento brillante sobre un fondo oscuro (recuerda la imagen del
corte de la retina que viste anteriormente). Las observaciones con el microscopio de
uorescencia deben hacerse en un cuarto oscuro para que la luz ambiental no “tape” a la
uorescente.
Además de los elementos comunes al microscopio óptico normal, el microscopio de

uorescencia incorpora los siguientes:
Una fuente de luz ultravioleta, generalmente se trata de una lámpara de mercurio, de

xenón o halógena de cuarzo.
Uno o varios ltros que seleccionan la longitud de onda de la luz que incide sobre la
muestra ( ltros de excitación o ltros primarios).
Un ltro que selecciona las longitudes de onda emitidas dentro del espectro visible
dejando pasar solo la luz emitida por la sustancia uorescente e impidiendo el paso de
la luz incidente ( ltro secundario, de emisión o de barrera).
Te podrás encontrar con dos tipos de microscopios de uorescencia:
Microscopios uorescentes de transmisión: la luz ultravioleta de la fuente

luminosa pasa por un ltro primario y atraviesa la muestra. A continuación, la luz
visible emitida por la sustancia uorescente presente en la muestra atraviesa el
objetivo, alcanza el ltro secundario (que no deja pasar la luz ultravioleta

transmitida) y sale por el ocular.
Microscopio de incidencia o epi uorescencia: en estos la luz incide sobre la
muestra desde arriba. La luz emitida por la fuente de iluminación pasa por un
ltro primario, se re eja en un espejo dicroico y alcanza la muestra pasando a
través del objetivo. El espejo dicroico, a su vez, deja pasar la uorescencia emitida
por la muestra hasta el ocular. La mayor parte de los microscopios de
uorescencia utilizados actualmente son de epi uorescencia debido a sus
ventajas entre las que podemos destacar:
Existe menos perdida de luz de excitación.

La visión de la uorescencia es más fuerte.
La imagen muestra de manera esquemática el recorrido de la luz ultravioleta desde la

lámpara hasta la preparación, así como el recorrido de la luz emitida por la muestra
hasta atravesar el ocular del microscopio de epi uorescencia
El microscopio de uorescencia lo utilizarás para observar muestras teñidas con

colorantes uorescentes y, sobre todo, en técnicas denominadas de
inmuno uorescencia, porque en ellas tiene lugar una reacción Ag-Ac que se puede
visualizar al microscopio gracias a un marcador uorescente. En la inmuno uorescencia
unimos un Ac a un marcador uorescente formando un conjugado. Dicho conjugado se
unirá al Ag especí co buscado si este está presente en nuestra muestra. En caso
positivo obtendremos una imagen brillante, lo que no ocurrirá si el Ag no está presente
en la muestra.
2.2.- Microscopio de campo oscuro.
Como sabes, la visibilidad de un objeto cualquiera tiene mucho que ver con el contraste que
dicho objeto tiene en relación al entorno que lo rodea. Existen elementos biológicos que
resultan ser transparentes y no pigmentados y, debido a su escaso contraste con el medio,
son casi invisibles con la iluminación normal del microscopio óptico de campo luminoso. En
estas circunstancias puedes recurrir a una variante de la microscopía óptica llamada de
campo oscuro.
El fundamento de esta técnica es similar a la que explica un fenómeno que habrás observado
frecuentemente: si en una habitación oscura entra un pequeño haz de luz por una rendija de
una ventana, en el fondo oscuro de la habitación se iluminan las partículas de polvo que
otan en el aire. Lo que en un principio era invisible se vuelve visible.
Cuando utilices este microscopio, observarás los objetos intensamente iluminados sobre un
fondo oscuro. Esto se consigue mediante iluminación indirecta con haces tangenciales al eje
óptico del microscopio, utilizando una clase especial de condensadores que enfoca sobre la
muestra un cono hueco de luz de tal forma que solo la luz dispersada por la muestra penetra
en el objetivo y es observada.
Para conseguir el cono de luz hueco, el condensador de campo oscuro dispone de un anillo de
campo que impide que los rayos luminosos centrales lleguen hasta la muestra.
De esta forma, en el objetivo no penetra luz directa de la fuente, sino únicamente la luz
desviada por el objeto, que aparece como una mancha brillante sobre fondo oscuro. Fíjate en
la imagen anterior, ya que muestra precisamente estas características (imagen brillante y
fondo oscuro).
Los microscopios dotados de condensadores que permiten este tipo de iluminación los
utilizarás especialmente para las observaciones en fresco sin jar ni teñir, es decir, sin matar
la muestra. También son muy útiles en la observación del sedimento urinario.
Para saber más
En el vídeo siguiente puedes ver una preparación de sangre visualizada a través de un

microscopio óptico de campo oscuro. Comprueba el aspecto brillante de las células y el
borde igualmente brillante de los hematíes.
https://www.youtube.com/embed/VeLdSBmA4YI
https://youtu.be/VeLdSBmA4YI
2.3.- Microscopio de contraste de fases.
La preparación microscópica normal es observable fundamentalmente a causa de las

diferencias de densidad y de índice de refracción de sus diferentes elementos, por lo que con
iluminación normal es muy difícil observar preparaciones con densidad homogénea y
transparente cuyos componentes apenas presentan diferencias de luminosidad entre ellos.
Una solución sería jar la preparación y teñirla, pero si lo observado es un elemento vivo, la
tinción supone su muerte. Podrás solucionar este problema utilizando el microscopio de
contraste de fases.
Los objetos que observas al microscopio, aunque sean de densidad homogénea, tienen
distintos componentes con diferentes índices de refracción. Cuando un haz luminoso los
atraviesa, debido a esas diferencias, aparecen retrasos o desfases en ella que no son
observables por el ojo humano, pero que el microscopio de contraste de fase acentúa para
que sí lo sean. De esta forma, las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones
más densas del objeto observado, mientras que las partes claras de la imagen corresponden
a porciones menos densas.
Si comparas un microscopio óptico de campo luminoso con el de contraste de fase, verás que
son parecidos. La diferencia fundamental es que en este último existe un condensador
especial (llamado de fase y dotado de un disco que proyecta un haz de luz con forma anular).
Además, los objetivos de contraste de fase están provistos de unas placas de difracción.
Debido a la difracción incompleta de la luz, en las observaciones con el microscopio de

contraste de fases aparecen aureolas en las imágenes entre muestras y medio. Para evitarlo
se emplea una variante de la microscopia de fases que es la microscopia de fases de
interferencia diferencial (DIC). En ella la luz se polariza y se divide en rayos principales y de
interferencia de forma que un rayo pasa a través del objeto y el otro a través del medio;
cuando se unen los dos rayos en condiciones adecuadas, se originan imágenes en relieve en
las que destacan especialmente las líneas y los bordes.
Utilizarás el microscopio de contraste de fases para observar células sin colorear, resultando
especialmente útil para células vivas.
Autoevaluación
Señala las a rmaciones ciertas, en relación a los microscopios ópticos distintos del de
campo luminoso o claro:
El microscopio de uorescencia se utiliza con objetos de densidad homogénea.
Los ltros de excitación y de emisión son propios del microscopio de campo

oscuro.
En la microscopía de campo oscuro sólo se aprovecha la luz dispersada por la
muestra.
En la microscopía DIC, la luz se polariza.
Los objetivos de contraste de fase son idénticos a los de campo claro.
Solución
1. Incorrecto
2. Incorrecto
3. Correcto
4. Correcto
5. Incorrecto
2.4.- Otros.
Aunque las variantes de microscopios ópticos que has visto son las más utilizadas, existen
algunas más que se describen a continuación brevemente:
Microscopio invertido: su principal diferencia en relación a un microscopio óptico normal

es que la fuente de iluminación está por encima de la platina y los objetivos se sitúan
por debajo de ella. Es útil para el estudio de suspensiones en medio líquido, observación
de cultivos celulares, estudios de fecundación in vitro, etc.
Microscopio de luz ultravioleta: como ya has visto, el poder de resolución de un

microscopio depende, entre otras cosas, de la longitud de onda de la luz incidente.
Efectivamente, el poder de resolución será mayor cuanto menor sea la longitud de
onda de la luz empleada en el microscopio. Como la luz visible presenta un rango de
longitudes de onda que van de los 400 a los 700 nm y la luz ultravioleta entre los 180 y
los 400 nm, no te será di cíl deducir que si se utiliza una fuente de luz ultravioleta, la
resolución del microscopio mejorará. A pesar de esta ventaja, el microscopio de luz
ultravioleta no es de uso frecuente porque en su construcción hay que utilizar lentes de
cuarzo (más caras y complejas) y, además, como la luz ultravioleta es invisible, la
imagen obtenida tiene que convertirse en imagen visible por fotografía, uorescencia u
otras técnicas.
Microscopio de luz polarizada: son microscopios a los que se les han añadido dos
polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el
observador). Los polarizadores son ltros que sólo dejan pasar la luz que vibra en un
plano determinado (luz polarizada); de esta manera el microscopio hace que el campo
aparezca oscuro y sobre él destaquen las sustancias birrefringentes (como los lípidos en
la orina, por ejemplo) con unas características particulares de coloración y luminosidad.
Debes saber que la birrefringencia es una propiedad de ciertos cuerpos de desdoblar un
rayo de luz incidente en dos rayos polarizados de manera perpendicular entre sí.
Para saber más
En el siguiente vídeo podrás observar la formación de unos cristales de timol vista a

través de un microscopio de luz polarizada. Las imágenes son realmente atractivas, no
dejes de verlas.
https://www.youtube.com/embed/lffePrl-UCU
https://youtu.be/lffePrl-UCU
3.- Procesamiento de muestras.
Caso práctico
Susana, siempre que puede recorre las instalaciones del laboratorio, cámara fotográ ca
en ristre, para tener imágenes de los distintos aparatos y técnicas que va a manejar. Le
gusta tomar fotografías porque luego puede buscar en internet información sobre todo
lo fotogra ado y, así, llevar una idea general antes de enfrentarse a sus prácticas. Al
pasar por diferentes secciones, comprueba que en muchas de ellas se hacen y manejan
preparaciones para el microscopio y comprueba que no todas tienen el mismo proceso
de elaboración.
—¿Estás montando una preparación en fresco? —le pregunta a uno de los técnicos del
laboratorio.
—Sí, porque quiero ver a los organismos vivos y la tinción los mataría —contesta este.
—¿Nosotros hemos montado preparaciones vitales y secas en nuestro instituto. ¡Qué
difícil me fue conseguir buenos frotis! —dice Susana.
—¿Pero al nal seguro que lo conseguiste, ¿verdad? Todo es cuestión de esforzarse y
de repetirlo las veces que sean necesarias.
Un portaobjetos junto a una caja con cubreobjetos.
Una de las tareas que realizarás con mucha frecuencia en el laboratorio será la de montar
preparaciones para el microscopio. Para ello deberás trabajar las muestras de distintas
formas.
La mayor parte de las veces que vayas a realizar una preparación para el microscopio,
deberás colocar la muestra que estés estudiando entre dos láminas de vidrio denominadas
portaobjetos y cubreobjetos. La primera (normalmente llamada porta) te servirá de soporte
para tu muestra, mientras que la segunda (generalmente llamada cubre) te permitirá “tapar”
la preparación.
Podrás encontrar diferentes portaobjetos en función, sobre todo, de su tamaño, aunque los
más habituales presentan unas medidas de 76 x 26 mm. Si los examinas detenidamente,
comprobarás que algunos de ellos tienen los bordes redondeados; son los portaobjetos
esmerilados. En cualquier caso, encontrarás otros tipos de cubreobjetos, como los excavados
(dotados de un hueco en su centro), los de inmuno uorescencia (con una serie de posiciones
donde se jan elementos celulares), etc.
En cuanto a los cubreobjetos, también podrás encontrarlos de diferentes tamaños (aunque el

más común es el de 22 x 22 mm). Sean del tamaño que sean, todos ellos están fabricados en
un vidrio muy delgado (lo más normal es que tengan 0,17 mm de espesor). El cubreobjetos se
utiliza frecuentemente, sobre todo en preparaciones húmedas o líquidas, pero en caso de
preparaciones secas puede no ser necesario, ya que en ellas suelen utilizarse objetivos de
inmersión (con su correspondiente aceite de inmersión).
3.1.- Examen en fresco. Preparaciones vitales.
Con este tipo de preparaciones microscópicas podrás observar organismos vivos y otros
elementos suspendidos en un líquido (sedimento de orina, por ejemplo).
Pueden ser de dos tipos:
Preparaciones húmedas: las conseguirás colocando una gota del líquido que estés
estudiando sobre un portaobjetos y, posteriormente, lo cubrirás con un cubreobjetos
procurando que no se formen burbujas entre ambos. Si la observación no va a ser
inmediata, deberás sellar el espacio entre cubre y porta con para na o alguna sustancia
parecida. De esta manera disminuirás la evaporación y evitarás que la preparación se
seque.
Preparaciones de gota pendiente: para esta preparación necesitarás un portaobjetos

excavado (con un hueco en el centro). Lo primero que debes hacer es colocar una gota
del líquido a estudiar en el centro de un cubreobjetos. Sobre la gota colocarás el hueco
del portaobjetos y, a continuación, girarás rápidamente el conjunto de manera que la
gota quede colgando del cubre dentro del hueco del portaobjetos. Como en el caso
anterior, si la observación no va a ser inmediata, puedes sellar el espacio entre cubre y
porta.
Como has visto, las preparaciones en fresco no utilizan colorantes para teñir las estructuras
presentes en la muestra. Sin embargo, debes tener en cuenta que existen algunos tinciones,
denominadas vitales, que pueden utilizarse sobre organismos y células vivas, siempre y
cuando se les deje actuar durante poco tiempo y se usen a baja concentración.
Las ventajas de las preparaciones en fresco son que te permiten ver elementos vivos y que
te serán muy fáciles de montar. Sin embargo, tienen un inconveniente que debes tener en
cuenta: El contraste entre los distintos elementos de la preparación es muy pobre, por lo que
tendrás di cultades para realizar una buena observación. Podrás solucionar en parte este
problema colocando el condensador en una posición baja y no abusando de la iluminación.
Mejor solución será utilizar microscopía de campo oscuro o de contraste de fases.
Autoevaluación
Las preparaciones en fresco se observan mejor si colocamos en condensador en

posiciones elevadas. ¿Verdadero o Falso?
Verdadero.
Falso.
No es correcto. Repasa lo que has visto hasta ahora.
Es correcto, exacto. El condensador debe estar bajo y no debes utilizar una alta
intensidad de luz.
Solución
1. Incorrecto
2. Opción correcta
3.2.- Preparaciones secas y tinción.
Es el tipo de preparación microscópica que montarás con mayor frecuencia. Para realizarla
deberás pasar por varias fases: Realización de una extensión de la muestra (película o frotis),
secado de la misma, jación y coloración o tinción.
Realización de la extensión o frotis: una extensión o frotis es una na película de la

muestra que se distribuye más o menos homogéneamente sobre el porta. A veces, si la
muestra es líquida, te bastará con tomarla con un asa de siembra y extenderla por el
portaobjetos. Si es sólida, lo más habitual será que prepares previamente una
suspensión de la muestra en agua o solución salina. Sin embargo, frecuentemente
deberás realizar la extensión utilizando otro porta como elemento de ayuda. En este
caso, estos son los pasos que tendrás que seguir:
Sobre un extremo de un portaobjetos limpio y desengrasado, coloca una gota de

la muestra.
Apoya otro portaobjetos (preferentemente esmerilado) sobre el primero en un
ángulo de unos 45º y muévelo hasta tocar la gota de muestra. Esta se extenderá
por capilaridad a lo ancho del segundo portaobjetos.
Desplaza el segundo portaobjetos sobre el primero con un movimiento rápido y
regular.
El grosor de la extensión puede graduarse modi cando el ángulo de contacto de
los portaobjetos, de tal manera que lograrás extensiones más delgadas si colocas
los portas en ángulos inferiores a 45º
Para saber más
En el vídeo siguiente podrás comprobar cómo se hace una extensión, en este caso de
sangre, con ayuda de dos portaobjetos.
https://www.youtube.com/embed/O3d_4dkVVSE
https://youtu.be/O3d_4dkVVSE
Secado: puedes hacerlo a temperatura ambiente. Para ello agitarás el porta

repetidamente en el aire hasta comprobar que la preparación se ha secado.
Fijación: gracias a este proceso conseguirás que la extensión que realizaste antes quede
adherida con fuerza al portaobjetos sin sufrir grandes alteraciones morfológicas.
Dispones de distintas sustancias capaces de lograr este n, entre las que hay que
destacar los alcoholes del tipo del etanol, el metanol, así como diversas mezclas
jadoras (deberás cubrir la preparación con alguna de ellas y, tras un tiempo de espera,
escurrir y dejar secar). Además, puedes jar con ayuda del calor; para ello pasarás la
preparación por encima de la llama de un mechero Bunsen hasta calentarla
ligeramente.
Coloración o tinción: si quieres realizarla, deberás utilizar sustancias capaces de dar
color (y, por tanto, contraste) a los diferentes elementos de la preparación. Para ello
utilizarás sustancias naturales o arti ciales que tienen apetencia por los diferentes
elementos de la preparación (ya sea porque tienen cargas eléctricas de signo contrario
al elemento a teñir o porque sean solubles en dicho elemento).
En general, se utilizan cuatro grandes tipos de colorantes: Ácidos, básicos, neutros e

indiferentes:
Ácidos: son colorantes generalmente citoplasmáticos. La eosina, por ejemplo.

Básicos: son colorantes generalmente nucleares. El azul de metileno, por ejemplo.
Neutros: incluyen un colorante ácido y otro básico. El eosinato de azul de metileno
puede servir de ejemplo.
Indiferentes: tiñen algunas estructuras especí cas porque se disuelven mejor en ellas
que en el medio. El Sudán III, por ejemplo, tiñe las grasas.
En ciertas ocasiones, antes de hacer uso de un colorante, deberás aplicar un “mordiente” que
sea capaz de actuar sobre algunas estructuras celulares y hacerlas accesibles al colorante que
pensabas utilizar.
Autoevaluación

Las preparaciones en gota pendiente se hacen con portaobjetos excavados.
Los colorantes básicos tiñen bien los citoplasmas celulares.
La jación de una preparación puede hacerse con calor o con alcoholes.
Las preparaciones secas y teñidas permiten observar elementos vivos.
El grosor de un frotis depende del ángulo existente entre los portas con los que
se hace.
Solución
1. Correcto
2. Incorrecto
3. Correcto
4. Incorrecto
5. Correcto
Para saber más
En el siguiente vídeo podrás comprobar cómo se realiza una extensión con ayuda de un
asa de siembra. Posteriormente, la extensión es sometida a secado, jación y tinción.
https://www.youtube.com/embed/1Zu6HHcEXSA
https://youtu.be/1Zu6HHcEXSA
4.- Técnicas de microscopía electrónica.
Caso práctico
Carlos y Susana están visualizando una preparación microscópica en la que se observan

células procedentes de una biopsia. Lo hacen acompañados del patólogo del hospital,
Miguel, que quiere explicarle algunas características llamativas de la muestra.
Durante la observación, Carlos le comenta a Susana que, con los aumentos de los que
dispone el microscopio óptico convencional, hay algunos elementos celulares que han
estudiado en el instituto, pero que no pueden distinguirse.
—Para eso sería necesario disponer de microscopios dotados de mayor aumento y

basados en otra tecnología —les contesta Miguel, al tiempo que les hace llegar un atlas
de imágenes obtenidas con diversos microscopios electrónicos.
—¡Fíjate! —le dice Susana a Carlos, —no sólo se pueden observar esos componentes de
los que hablabas antes, sino que incluso algunas imágenes dan aspecto tridimensional.
—¡Es verdad! ¡Qué imágenes más impresionantes!
La aparición del microscopio electrónico ha supuesto uno de los mayores descubrimientos

cientí cos del siglo XX y ha dado lugar a una auténtica revolución en el conocimiento de
multitud de campos cientí cos, entre los que destacan todos los del área biomédica.
Efectivamente, si comparas la capacidad de aumento de un microscopio óptico con la de uno
electrónico, verás que mientras el primero puede alcanzar valores de 1.000 o 2.000
aumentos, el segundo puede llegar hasta 1.000.000. Pero no sólo eso, el microscopio
electrónico presenta un poder de resolución hasta 1.000 veces mayor que el del óptico, lo
que permite observar como distintos dos puntos separados por distancias inferiores 10 Å (1
angstrom es igual 1 · 10-10 metros).
Como ya has tenido ocasión de comprobar anteriormente, el poder de resolución de un

microscopio óptico está limitado por la longitud de onda de la luz visible. El microscopio
electrónico no utiliza luz para iluminar el objeto observado, sino que hace uso de un haz de
electrones. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la
luz, pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas. La longitud de onda más corta de la
luz visible es de alrededor de 3.500 a 4.000 angstroms. La longitud de onda de los electrones
que se utilizan en los microscopios electrónicos es de alrededor de 0,5 angstroms.
En cualquier caso, debes considerar que el fundamento del microscopio electrónico tiene
similitudes con el del microscopio óptico, pero sustituyendo la fuente de luz por un chorro de
electrones y las lentes de vidrio por otras de naturaleza electromagnética.
Hay dos tipos básicos de microscopios electrónicos: el microscopio electrónico de transmisión

(Transmission Electron Microscope, TEM) y el microscopio electrónico de barrido (Scanning
Electron Microscope, SEM).
En la imagen puedes ver un esquema en el que aparece representado el recorrido de la luz en

un microscopio óptico comparada con el recorrido de los electrones en el microscopio
electrónico de transmisión y en el microscopio electrónico de barrido. Más adelante
profundizarás en su estudio.
4.1.- Microscopio electrónico de transmisión (TEM).
El microscopio electrónico de transmisión toma este nombre debido a que los electrones
producidos en su interior atraviesan la muestra que queremos observar.
Flagelo visto al microscopio electrónico de transmisión.
No debe resultarte difícil comprender su funcionamiento, ya que este se basa en el hecho de

que un haz de electrones, al atravesar un campo electromagnético, se comportará de manera
similar a como lo hace un haz de luz al atravesar una lente óptica.
De acuerdo con lo dicho arriba, en todo microscopio electrónico de transmisión encontrarás

los siguientes componentes:
Cañón de electrones.
Lentes electromagnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones.
Sistema de vacío.
Placa fotográ ca o pantalla uorescente que se coloca detrás del objeto a visualizar
para registrar la imagen aumentada.
Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones.
Al aplicar una corriente eléctrica de alto voltaje a un lamento de tungsteno, se genera un

haz de electrones. Este haz de electrones discurre por un tubo donde se ha hecho el vacío e
incide sobre la muestra. Al atravesar el objeto, el haz de electrones queda retenido por las
zonas donde existe mayor densidad y en cambio pasa con más facilidad por las áreas
restantes. En su recorrido, el haz de electrones se verá afectado por las lentes
electromagnéticas (condensadora, ampli cadora y ocular) para luego incidir sobre una
pantalla y originar uorescencia.
La imagen generada en la pantalla uorescente se obtiene con poco contraste y falta de

luminosidad, lo que hace difícil la observación directa en la pantalla, por ello es imprescindible
situar a continuación una cámara fotográ ca o de vídeo que capte la imagen en buenas
condiciones. La imagen obtenida es bidimensional (plana) y en blanco y negro, aunque se
puede colorear con ayuda de aplicaciones informáticas.
Dado que el aire puede afectar a la movilidad de los electrones, es imprescindible utilizar una
bomba de vacío para eliminarlo del interior del tubo del microscopio.
Una limitación que debes tener en cuenta al utilizar este tipo de microscopio es que la
muestra debe estar cortada en secciones delgadísimas (no mayores de un par de miles de
angstroms).
Para poder realizar los cortes tan delgados necesarios en la microscopía electrónica de
transmisión, las muestras que vas a utilizar en ella deben ser sometidas a distintas técnicas
de procesamiento del tipo de la jación (química o por congelación) y la inclusión en resinas.
4.2.- Microscopio electrónico de barrido (SEM).
Para crear una imagen ampliada de la super cie de un objeto, el microscopio electrónico de
barrido explora dicha super cie punto por punto, creando una imagen tridimensional de él.
Este tipo de microscopía funciona de manera diferente a la vista hasta ahora. Efectivamente,
mientras que en las variantes óptica y electrónica de transmisión, la luz o los electrones se
transmiten a través de muestras muy delgadas, en esta variante el haz de electrones incide
sobre la super cie de la muestra desde arriba, sin atravesarla, por lo que su grosor o tamaño
no son impedimento para su uso.
Su funcionamiento se basa en recorrer (o barrer) la muestra con un haz muy concentrado de

electrones que, al chocar con ella, pueden dispersarse o provocar la aparición de electrones
secundarios (de baja energía). Los electrones dispersados y los secundarios son recogidos y
contados por un dispositivo electrónico situado a los lados de la muestra. Cada punto leído
de ella corresponde a un píxel en un monitor de televisión. A medida que el haz de electrones
barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios
electrónicos de barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces o más (aumentos
inferiores al TEM) pero, en contrapartida, permiten obtener imágenes tridimensionales y
realistas de la super cie del objeto. La imagen siguiente te muestra los distintos
componentes de la sangre humana vistos con un microscopio electrónico de barrido.
Las muestras para SEM no requiere la realización de cortes ultra nos. Sin embargo será
necesario que las sometas a un proceso de deshidratación y luego a una completa
desecación (utilizando cámaras de punto crítico). Posteriormente las muestras desecadas se
someten a recubrimiento mediante metalización con oro o platino para conseguir una
super cie conductora de la electricidad que emita electrones secundarios con facilidad.
Para saber más
En el siguiente vídeo podrás observar una serie de imágenes tomadas con microscopios
electrónicos. Te resultarán muy interesantes por su espectacularidad.
https://www.youtube.com/embed/nlOz1KlwU4A
https://youtu.be/nlOz1KlwU4A
Autoevaluación
Uno de los siguientes componentes NO lo podrás encontrar en un microscopio

electrónico:
Cañón de electrones.
Sistema de vacío.
Fuente de luz visible.
Lentes electromagnéticas.
Condensador.
Solución
1. Incorrecto
2. Incorrecto
3. Correcto
4. Incorrecto
5. Correcto
En relación al microscopio de barrido (SEM). ¿Cuál de las a rmaciones siguientes es

cierta?
Sus muestras deben haber sido cortadas en láminas nísimas.
Genera imágenes tridimensionales de la muestra observada.
Los electrones atraviesan la muestra que estamos estudiando.
La muestra se recorre con un haz de electrones.
Solución
1. Incorrecto
2. Correcto
3. Incorrecto
4. Correcto
5.- Sistemas de captación de imágenes digitales.
Caso práctico
Durante una visita al servicio de anatomía patológica del hospital dónde realizan su
periodo de FCT, Carlos y Susana observan a los profesionales que trabajan allí
realizando tomas fotográ cas de diversas preparaciones microscópicas. Dado que
Susana es a cionada a la fotografía, pregunta por el tipo de cámara que utilizan.
—Es una cámara digital de 10 Megapíxeles, le contesta José, técnico del servicio. No
hace tanto que la tenemos y no puedes imaginarte lo cómoda que resulta frente a las
antiguas cámaras de carrete.
—¡Claro!, responde Susana. Así evitáis el proceso de revelado.
—¡Y no sólo eso! Ahora podemos disponer de la imagen de manera instantánea y,
además, la podemos enviar a otros colegas para realizar consultas. ¡Es una ventaja
enorme!
Lo más probable es que tengas a tu disposición una cámara fotográ ca (o de vídeo) digital.
Con ellas habrás realizado miles de fotografías o vídeos en diferentes momentos de tu vida.
Es por ello que estarás familiarizado con términos como “píxel”, “tarjetas de memoria”,
“archivos JPEG”, etc.
En este apartado, y hasta el nal de la unidad temática, vas a utilizar esos términos y los
aplicarás a la fotografía realizada a través de un microscopio (fotografía microscópica).
Gracias a ella, los profesionales del laboratorio pueden compartir sus conocimientos y
hallazgos y enviarlos a largas distancias de manera rápida y able.
La digitalización de imágenes en el entorno del laboratorio clínico y biomédico, así como en el

de anatomía patológica te aportará innumerables ventajas. Las imágenes digitales son fáciles
de almacenar, de guardar, de copiar, de añadir a presentaciones multimedia y, además,
pueden transmitirse a distancia.
Una imagen digital es una representación bidimensional de una imagen a partir de una
matriz numérica en la que se emplea el lenguaje binario (unos y ceros).
Existen distintos sistemas de captación de imágenes digitales (cámaras fotográ cas, de vídeo
e incluso escáneres). En general, en todos estos dispositivos encontrarás un elemento
común: el sensor CCD (Charge Coupled Device o Dispositivo de Carga Acoplada). Este
dispositivo no es sino un circuito integrado que se organiza como una estructura en forma de
rejilla distribuida en las y columnas. Cada uno de los cuadros resultantes (o píxel) está
dotado de elementos fotosensibles capaces de transformar la luz en voltaje.
La capacidad de resolución (o detalle) del CCD depende de su número de píxeles, de tal

manera que la resolución aumenta conforme lo hace dicho número.
Los píxeles del CCD registran gradaciones de los tres colores básicos: Rojo, verde y azul
(abreviado "RGB", del inglés red, green, blue), por lo cual tres píxeles, uno para cada color,
forman un conjunto de elementos fotosensibles capaz de captar cualquier color de la imagen.
Además de los CCD, podrás encontrar otros sensores útiles para capturar imágenes digitales.
Estamos hablando de los CMOS (Complementary Metal Oxide Semiconductor).
Habitualmente se utilizan en cámaras web, pero ya existen modelos con la su ciente
resolución para su uso profesional.
5.1.- Calidad de la imagen digital.
La imagen que vas a obtener con una cámara fotográ ca o de vídeo digitales presentará más
o menos calidad en función de los siguientes aspectos:
Número de píxeles del sensor CCD: como ya has podido ver antes, a mayor número de
píxeles, mayor resolución de la imagen obtenida.
Tamaño físico del sensor CCD: los sensores con tamaño muy reducido tienen los
elementos fotosensibles muy próximos entre sí, lo que puede interferir en su correcto
funcionamiento. El tamaño de CCD que encontrarás con mayor frecuencia es 2/3 de
pulgada.
Profundidad de color: se re ere a la cantidad de bits de información necesarios para
representar los tonos de grises o el color de un píxel en una imagen digital. Los valores
de profundidad de color suelen ser divisores o múltiplos de 8, a saber 1, 2, 4, 8, 16, 24 y
32. Una profundidad de color de 1 bit sólo te permitirá distinguir dos tonos o colores
(blanco y negro), sin embargo, profundidades de color de 8 bits te permitirán distinguir
256 tonos de grises o colores y profundidad de color de 24 bits te llevarán a valores
superiores a los 16.000.000 de colores. A mayor profundidad, mejor representación del
color en la imagen.
Óptica de la cámara: en este apartado deberás prestar atención a varios parámetros
importantes:
La apertura de foco: se relaciona con el diafragma del objetivo de la cámara. Indica

la cantidad de luz que deja pasar al realizar la fotografía y también la profundidad
de campo, es decir lo que aparecerá enfocado en la imagen obtenida. Se expresa
con una “f” seguida de un número. Cuanto menor sea el número, menos luz
necesitarás para hacer la fotografía. Lógicamente, la calidad de la óptica de la
cámara se relacionará con números bajos.
La distancia focal: es la distancia ente el centro de la lente y el lugar donde la

imagen se proyecta (sensor CCD, en el caso de cámaras digitales). Lo que
encontrarás con mayor frecuencia son objetivos de 6 a18 mm. Para cifras
menores, necesitarás un objetivo especial denominado “gran angular”.
Distancia mínima de enfoque: es un parámetro que te resultará especialmente útil
si vas a utilizar tu cámara fotográ ca tanto para realizar fotografía microscópica
como macroscópica. En esta última situación, a veces tendrás que acercar la
cámara a muy poca distancia de la muestra a fotogra ar. Las cámaras digitales
suelen disponer de un modo MACRO que disminuye sensiblemente la distancia
de enfoque (a veces hasta tan solo 2 o 3 cm). En estas condiciones, deberás hacer
uso de fuentes de iluminación externa, ya que, si usas el ash, la fotografía
quedará sobreexpuesta.
Zoom: es un mecanismo que permite modi car la distancia focal del objetivo,
produciendo un aparente acercamiento de la imagen. Es un factor importante a la hora
de elegir cámaras digitales que serán instaladas en microscopios debido a que los tubos
adaptadores sobre los que se colocan las cámaras frecuentemente crean un anillo
oscuro alrededor del área central de la imagen enfocada. Haciendo uso del zoom
eliminamos esta zona oscura. Las cámaras digitales disponen de zoom óptico y de
zoom digital, pero sólo debes prestar atención al primero de ellos, ya que el segundo
(digital) se obtiene por interpolación de puntos en la imagen (la cámara añade puntos
nuevos entre los originales). En todo caso, el zoom digital nunca podrá crear nuevos
detalles que no fueron captados con la resolución original.
Autoevaluación
Señala aquellas a rmaciones que te parezcan correctas:

El dispositivo CCD transforma la luz que recibe en voltaje.
La cantidad de bits de información necesaria para representar un color en un píxel

se llama apertura de foco.
El zoom permite controlar la cantidad de luz que entra en la cámara.
El macro disminuye la distancia de enfoque necesaria para captar la imagen.

Solución
1. Correcto
2. Incorrecto
3. Incorrecto
4. Correcto
5.2.- Cámaras fotográficas digitales.
La fotografía digital, en relación a la fotografía convencional basada en procedimientos

químicos, presenta enormes ventajas en cuanto a facilidad y comodidad de uso, ya que
permite prescindir del engorroso proceso de revelado, que suponía importantes inversiones
en dinero y tiempo. Si a esto le añades sus enormes posibilidades para archivarla y
recuperarla posteriormente, así como la increíble capacidad de edición y retoque y la facilidad
que aporta en cuanto a su envío a distancia o a la posibilidad de ser compartida en tiempo
real a través de las redes de comunicación, es fácil entender el enorme auge que ha
alcanzado en muy poco tiempo.
La fotografía digital consiste en la obtención de imágenes estáticas mediante una cámara

oscura, de forma similar a la fotografía química. Sin embargo, así como en esta última las
imágenes quedan grabadas sobre una película fotosensible y se revelan posteriormente
mediante un proceso químico, en la fotografía digital las imágenes son capturadas por un
sensor electrónico (CCD) que dispone de múltiples unidades fotosensibles, las cuales
aprovechan el efecto fotoeléctrico para convertir la luz en una señal eléctrica, que es
digitalizada gracias a un dispositivo DAC (Digital-Analog Converter) y almacenada en una
memoria o enviada a un ordenador.
El uso de cámaras fotográ cas digitales, frecuentemente conectadas al microscopio, frente al

de cámaras convencionales, presenta una serie de ventajas y de inconvenientes:
Ventajas:
Permite disponer de las imágenes grabadas al instante, sin necesidad de llevar la

película al laboratorio y revelar los negativos para poder ver las imágenes; esta
rapidez en la disponibilidad de la imagen permite que se puedan hacer cambios y
correcciones en el momento.
Se pueden realizar múltiples tomas y elegir e imprimir sólo las mejores
fotografías.
Las posibilidades de edición y retoque son casi ilimitadas.

La conexión al ordenador es muy sencilla.
El envío a distancia se ve enormemente facilitado.
Desventajas:
El precio de las cámaras digitales es más elevado que el de las convencionales,

aunque la brecha existente entre ambas se ha reducido en los últimos años de
manera muy signi cativa.
Al ser montadas en el microscopio, la pantalla o visor de la cámara queda
orientada hacia arriba, lo que resulta incómodo de cara a su uso. Existen algunas
cámaras con visor orientable que solucionan este problema.
Autoevaluación
NO es una característica de las cámaras fotográ cas digitales, frente a las

convencionales de carrete:
Las imágenes tomadas con cámaras digitales precisan de revelado.
Las cámaras digitales permiten realizar correcciones al momento.
Las imágenes tomadas con cámaras digitales son escasamente editables.
La conexión de la cámara digital al ordenador es muy sencilla.
Solución
1. Correcto
2. Incorrecto
3. Correcto
4. Incorrecto
5.3.- Cámaras de vídeo.
Al igual que las cámaras fotográ cas digitales, las cámaras de vídeo son dispositivos de
captación de imágenes dotadas de sensores CCD. Sin embargo, en lugar de tomar una única
imagen ja o estática, son capaces de tomar un determinado número de imágenes por
segundo y reproducirlas posteriormente a la velocidad adecuada.
Podrás encontrar dos tipos de cámaras acopladas a los microscopios: Las analógicas y las
digitales.
Cámaras de vídeo analógicas: captan la imagen gracias a un sensor CCD y los voltajes
obtenidos en cada uno de sus píxeles son enviados a un ordenador dotado de una
tarjeta de vídeo o digitalizadora encargada de transformarlos en señales digitales. Si la
información de color y luminosidad viajan juntas en un mismo cable, estarás ante el
llamado “vídeo compuesto”, mientras que si las señales de color y luminosidad van por
separado, estarás ante un sistema de “S-vídeo”, dotado de más calidad y resolución que
el anterior.
Dependiendo de la velocidad de reproducción del vídeo (medido en fotogramas por

segundo) y de su resolución, podrás encontrar tres formatos diferentes: PAL (Phase
Alternating Line), NTSC (National Television System Committee) y Secam (Séquentiel
Couleur à Mémoire). El primero es el utilizado en España y buena parte de Europa
occidental (con la excepción de Francia, que utiliza el Secam).
Las cámaras de vídeo analógicas presentan algunas ventajas, como son su menor
precio y su fácil conexión a una pantalla de televisión, pero también tienen
inconvenientes, como son su limitada resolución y la necesidad de disponer de tarjetas
digitalizadoras en el ordenador al que se conecten.
Cámaras de vídeo digitales: al igual que las anteriores, estas cámaras captan la imagen
con ayuda de sensores CCD, pero son ellas mismas las encargadas de transformar los
voltajes obtenidos en señales digitales gracias a un dispositivo DAC (Digital-Analog
Converter), por lo que no tendrás que hacer uso de tarjetas digitalizadoras.
Las cámaras de vídeo digitales tienen como principales ventajas sobre las analógicas su
comodidad (al no tener que digitalizar posteriormente) y su resolución (mayor que la de
las cámaras analógicas). Las principales desventajas con las que te encontrarás al usar
estas cámaras son su gran consumo de memoria en el ordenador y la necesidad de que
dicho ordenador tenga un mínimo de prestaciones para poder manejar la información a
velocidades y resolución adecuadas. Además, la transmisión de estas señales a
distancia exige disponer de anchos de banda elevados.
Autoevaluación
Las cámaras de vídeo analógicas disponen de un dispositivo DAC. ¿Verdadero o Falso?

Verdadero.
Falso.
No es correcto. Vuelve a leer los contenidos. Sólo las cámaras digitales tienen tales
dispositivos.
Es correcto. Las cámaras de vídeo analógicas envían los datos a un ordenador con
tarjeta digitalizadora para transformar la imagen analógica en digital.
Solución
1. Incorrecto
2. Opción correcta
5.4.- Escáneres.
En el laboratorio, sobre todo en el de Anatomía Patológica, te será cada día más necesario
captar imágenes para transmitirlas a distancia. La fuente de estas imágenes va ser la mayor
parte de las veces tu microscopio con cámara fotográ ca o de vídeo acoplada, pero a veces
harás uso de un tercer sistema de captura de imágenes: El escáner.
Un escáner (palabra procedente del inglés scanner, explorador) es un dispositivo capaz de

examinar y captar imágenes procedentes de papel, libros, negativos o diapositivas para
posteriormente digitalizarlas y guardarlas o editarlas en un ordenador.
El principio de funcionamiento de un escáner es la digitalización, es decir, la conversión de

una información analógica a datos comprensibles por el ordenador. Para ello, se vale de una
serie de componentes internos que posibilitan este objetivo:
Fuente de luz: va iluminando, línea por línea, la imagen, documento o diapositiva en

cuestión, produciendo luz re ejada en la imagen, la cual es recogida por
El CCD, dispositivo que, como ya sabes, convierte la luz recibida en información
analógica. Esta imagen pasará al
DAC (Digital-Analog Converter): convierte los datos analógicos en valores digitales.
En cualquier caso, cuando manejes el escáner necesitarás hacer uso de un software que
actúe de intermediario entre el escáner y la aplicación que tratará el archivo digitalizado
(programas de análisis y procesamiento de imágenes). Con este n, encontrarás un estándar
denominado TWAIN (la palabra viene de Technology Without An Interesting Name, algo así
como "Tecnología sin nombre interesante"). Se trata de un controlador que puede ser
utilizado por cualquier aplicación que cumpla con dicho estándar; su diseño permite que
podamos digitalizar una imagen desde la aplicación con la que acabaremos retocándola,
evitando pasos intermedios.
En el terreno de los laboratorios clínico y biomédico y de anatomía patológica, podrás utilizar

los escáneres con dos nes principales:
Digitalizar imágenes procedentes de fotografías en papel, diapositivas, negativos o

transparencias existentes previamente.
Digitalizar directamente la imagen procedente de una preparación microscópica,
utilizando el portaobjetos como si fuera una diapositiva. Algunos escáneres son
capaces de ampli car la imagen captada a la manera de un microscopio, en este caso
estamos hablando de la llamada microscopía virtual, que ampliaremos más adelante.
Debes tener en cuenta un detalle de interés si vas a manejar un escáner para obtener
imágenes microscópicas: Tienes que trabajar con los valores más altos de calidad que te
ofrezca tu dispositivo, pero sin entrar en aquellos que supongan utilizar imágenes
interpoladas (ya sabes que, en estas circunstancias, el escáner “inventaría” píxeles no
existentes).
De acuerdo con lo dicho arriba, deberás capturar la imagen con profundidad de color de 24
bits (más de 16.000.000 de colores por píxel) para lograr un resultado lo más real posible. El
principal problema que encontrarás con esta profundidad de color es el tamaño del archivo
resultante, que será muy grande. La solución, como veremos en apartados posteriores, será
que comprimas el archivo en un formato JPEG o similar, como verás más adelante.
También deberás situar la resolución de tu dispositivo en valores altos, aunque esto también
te generará archivos grandes. Sólo si la imagen tiene como único destino una pantalla de
televisión o de ordenador (para una página web, por ejemplo), podrás utilizar resoluciones
menores (cercanas a 100 puntos por pulgada).
5.5.- Adaptadores de la cámara al microscopio.
Ya debes ser consciente de la importancia que la microfotografía tiene en tu futuro entorno

profesional. Los fabricantes de microscopios hace ya mucho tiempo que son conscientes de
ello y es por eso que diseñan sus dispositivos con la posibilidad de incorporar tubos
trioculares que permiten la adaptación de cámaras fotográ cas y de vídeo.
Como se da la circunstancia de que muchos de estos fabricantes de microscopios también lo

son de cámaras digitales, pueden poner en el mercado dispositivos integrados con ambos
componentes. El principal inconveniente de esta sencilla solución es el alto precio y lo
rápidamente que una cámara se queda anticuada (ya sabes lo deprisa que evoluciona todo el
mundo digital).
Ante esta situación, y dado la mejora y disminución de precio que han experimentado las
cámaras digitales domésticas y las semiprofesionales, en la actualidad se intenta hacer uso
de este tipo de dispositivos para acoplarlos al microscopio. El problema que podrás encontrar
si quieres hacerlo así será la compatibilidad de cámara y microscopio, lo que te obligará a
utilizar sistemas de adaptación basados en roscas más o menos universales.
La alternativa más corriente para adaptar un microscopio a una cámara fotográ ca o de

vídeo es la utilización de una rosca estándar denominada ROSCA C. Dicha rosca, que tiene un
diámetro de una pulgada, puede conectarse directamente a la cámara digital o mediante el
uso de otro tubo adaptador. Este tubo puede disponer de una lente propia que minimiza o
elimina el anillo negro periférico que aparece con el uso de los tubos adaptadores. Si tu tubo
adaptador no dispone de lente, la zona oscura periférica deberás eliminarla con ayuda del
zoom óptico de tu cámara.
En cualquier caso, si no dispones de tubo adaptador, puedes conseguir imágenes aceptables

apoyando el objetivo de la cámara fotográ ca directamente en el ocular del microscopio y
haciendo uso del zoom para eliminar el área oscura periférica.
Para saber más
Para cámaras fotográ cas domésticas, existen adaptadores diferentes a los vistos más
arriba. En el siguiente vídeo puedes ver un ejemplo de ellos:
https://www.youtube.com/embed/oVXofvRk03A?controls=0
https://youtu.be/oVXofvRk03A
5.6.- Transferencia de imágenes al ordenador.
Reflexiona
¿Te has preguntado alguna vez cómo tiene lugar el proceso que permite pasar las
imágenes obtenidas en la cámara de tu microscopio hasta el ordenador dónde vas a
analizarlas, procesarlas y enviarlas a distancia?
Lógicamente dependerá de que utilices sistemas analógicos o digitales. En

cualquier caso, el ordenador sólo será capaz de interpretar la información cuando
se haya digitalizado.
Dispones de distintas formas de conectar tu sistema de captura de imágenes al ordenador,

pero antes de hacerlo tienes que tener claro con qué tipo de imágenes estás trabajando,
analógicas o digitales. Dado que los ordenadores funcionan solamente con información
digital (secuencias de unos y ceros), si utilizas cámaras analógicas deberás en primer lugar
transformar la información a formato digital y, para ello, deberás contar con un dispositivo
que se encargue de esta función.
Actualmente, los ordenadores disponen de tarjetas de vídeo capaces de recoger la imagen

procedente del sistema de captura analógica y transformarla en digital; posteriormente, el
ordenador volverá a transformar la señal en analógica para que pueda ser vista en el
monitor.
En el caso improbable de que tu tarjeta grá ca no sea capaz de cumplir estas funciones
(ordenadores con algunos años de trabajo a sus espaldas), necesitarás hacer uso de una
tarjeta digitalizadora.
En todo caso, los conectores que necesitarás para que la transmisión de información al
ordenador sea posible serán cables de tipo RCA o S-vídeo.
Si estás utilizando sistemas digitales de captación de imagen no será necesario añadir ningún
mecanismo de traducción, con lo que la conexión de la cámara con el ordenador puedes
hacerla directamente, a través de alguno de los puertos de comunicación de los que dispone
tu ordenador.
Efectivamente, tu ordenador dispone de una serie de puertos de entrada/salida de

información. Vamos a verlos a continuación:
Puertos serie y paralelo: están presentes en todos los ordenadores; transmiten

información a baja velocidad, por lo que no son los adecuados para la conexión de las
cámaras o los escáneres.
Puerto USB (Universal Serie Bus): transmiten datos a alta velocidad y tiene un sistema
de conexión muy sencillo. En realidad, sólo necesitarás conectar el dispositivo de
captura, dotado de su correspondiente cable USB, a este puerto para que el sistema
operativo lo reconozca e instale (sistema plug and play). Otra ventaja de este tipo de
puerto es que alimenta eléctricamente al dispositivo conectado, siempre y cuando este
no supere los 5 voltios de consumo.
Puerto Firewire: es capaz de transmitir datos a muy alta velocidad, lo que lo hace
idóneo para la conexión de cámaras de vídeo al ordenador. Como en el caso anterior,
este puerto alimenta eléctricamente al dispositivo conectado a él.
Además de las conexiones físicas que has visto más arriba, también puedes disponer de otro
tipo de conexiones sin cable denominadas inalámbricas. A continuación puedes ver
brevemente cuáles son:
Conexión IrDA (Infrared Data Association): utiliza señales luminosas infrarrojas (como
las de los mandos a distancia). Sus principales limitaciones tienen que ver con la
necesidad de que los elementos conectados estén a muy poca distancia y no existan
obstáculos entre ellos.
Conexión por radiofrecuencia (Bluetooth): hace uso de señales de radio de baja
frecuencia para transmitir los datos. Puede enviar información a distancias no mayores
de 10 metros, aunque existen sistemas de ampli cación que pueden aumentar la
distancia entre los dispositivos conectados por este tipo de conexión
5.7.- Formatos de imagen digital.
Cuando trabajes con imágenes digitales, podrás encontrarte con tres tipos principales de
archivos electrónicos de imágenes denominados bitmap, grá cos vectoriales y metaarchivos.
A continuación vas a conocer lo fundamental en relación a los formatos de archivos digitales:
Las imágenes de tipo bitmap se encuentran formadas por miles o millones de pixeles
individuales, cada uno representando un punto blanco, negro o de color. Como ya
sabes, si la imagen es en blanco y negro, solo se necesita un bitpor píxel para describir
la imagen, ya que cada pixel solo puede tener uno de dos posibles valores (0 o 1). Las
imágenes de tipo bitmap pueden tener diferentes profundidades de color por pixel (8 o
24 generalmente). Cuanta más profundidad tenga la imagen más niveles de bits
contendrá, y esto producirá imágenes que reproducirán al original con más precisión.
Los grá cos vectoriales se usan para trazados artísticos. Una imagen vectorial es una
imagen digital formada por objetos geométricos independientes (segmentos,
polígonos, arcos, etc.), cada uno de ellos de nido por distintos atributos matemáticos
de forma, de posición, de color, etc. Los objetos pueden modi carse y moverse
fácilmente sin afectar a otros objetos. Los grá cos vectoriales no suelen utilizarse en el
manejo de imágenes en patología.
Efectos del aumento de tamaño en un grá co vectorial (izquierda) y en una imagen

bitmap (derecha).
Los metaarchivos son archivos grá cos que contienen datos en formatos vectorial y
bitmap. Se utilizan para transportar datos vectoriales o datos bitmap entre plataformas
distintas de hardware o entre programas de software diferentes.
Autoevaluación
El puerto Firewire es el que transmite los datos de vídeo a mayor velocidad. ¿Verdadero
o Falso?
Verdadero.
Falso.
Es correcto. El puerto Firewire transmite datos a muy alta velocidad, por lo que es
el más adecuado para archivos de vídeo.
No es correcto. Repasa los contenidos. Los puertos serie, paralelo y USB son más
lentos que el Firewire.
Solución
1. Opción correcta
2. Incorrecto
5.8.- Formatos de archivo de imágenes digitales.
Cuando hayas captado imágenes digitales, deberás decidir que formato le darás a tu archivo
para guardarlo en el ordenador.
Reflexiona
¿Te has planteado alguna vez los problemas que puede generar el gran tamaño de los
archivos digitales? ¿Cómo crees que se puede solucionar este problema?
El tamaño de los archivos digitales es realmente grande, por lo que, además de

necesitar ordenadores de un cierto nivel tecnológico, será necesario comprimir los
citados archivos para facilitar su almacenamiento y envío.
La compresión de datos es la reducción del volumen de los datos que representan una
determinada información empleando una menor cantidad de espacio.
La compresión se consigue mediante un sistema de codi cación cuya característica principal

es que el código resultante tiene menor tamaño que el original. Para entenderlo, debes tener
en cuenta que esta técnica se basa fundamentalmente en buscar repeticiones en series de
datos para después almacenar sólo el dato junto al número de veces que se repite. Existen
dos tipos de sistemas de compresión:
Sin pérdidas: los datos antes y después de comprimirlos son los mismos. Se transmite
toda la información básica, pero eliminando la redundante.
Con pérdidas: se eliminan datos relevantes además de redundantes para reducir aún
más el tamaño, con lo que se suele reducir la calidad nal. En cualquier caso, dicha
pérdida de calidad no siempre es percibida por el ojo humano. En la imagen puedes
comprobar el efecto sobre la calidad nal de un exceso de compresión con pérdida.
Cada formato de archivo de imágenes digitales viene de nido por unas siglas y permite
realizar procesos de compresión sin/con pérdida de calidad para disminuir su tamaño.
A continuación vas a conocer los principales sistemas de archivo y compresión de imágenes

digitales estáticas o jas, obtenidas con cámaras fotográ cas o escáneres, que son las que
manejarás más frecuentemente:
BMP (Bit Mapped Picture): formato propio del programa Windows. Guarda imágenes
de 2 a 24 bits y permite sistemas de compresión sin pérdida.
TIFF (Tagged-Image File Format): formato muy común en la mayoría de entornos de
imagen. Guarda imágenes de hasta 32 bits y permite sistemas de compresión sin
pérdida.
JPGE (Joint Photographic Experts Group): pensado para el lenguaje HTML de internet.
Guarda imágenes de 8 a 32 bits y permite compresión graduable con pérdida.
GIF (Graphics Interchange Format): formato de 8 bits pensado para el lenguaje HTML
de internet. Permite compresión con pérdida.
PNG (Portable Network Graphics): formato libre de licencias. Guarda imágenes de
hasta 24 bits y permite compresión con pérdida.
ECW (Enhanced Compression Wavelet): formato que consigue importantes tasas de
compresión manteniendo altos niveles de calidad grá ca.
Por otra parte, existen sistemas generales de compresión que generan archivos tipo ZIP o
RAR cuyo tamaño es sensiblemente menor que el del archivo original. Los archivos de este
tipo, cuando van a ser utilizados, necesitan ser descomprimidos por un programa adecuado
(WinZip, WinRar, gzip, 7z, etc.). Con estos sistemas se consiguen tasas de compresión
elevadas en archivos de texto, medianas en archivos tipo BMP o TIFF y escasas en archivos
ya muy comprimidos como los JPEG.
5.9.- Programas de procesamiento de imágenes digitales.
Una vez que hayas capturado las imágenes digitales, podrás trabajarlas con el objetivo nal
de mejorarlas o modi carlas. Cuando realices esta actividad, estarás procesando la imagen
digital.
En general, el procesamiento de imágenes digitales incluye una serie de técnicas a realizar

sobre los píxeles de la imagen original de tal manera que el resultado nal del proceso sea
otra imagen más adecuada que la primera para nuestras necesidades.
Existen muchos programas comerciales y de uso libre que podrás utilizar para procesar las
imágenes digitales. Todos ellos permiten una gran variedad de opciones del tipo del retoque
de colores, rotaciones e inversiones, enfoque, redimensionado, modi caciones en el brillo y el
contraste, en la saturación del color y un largo etcétera. El manejo de alguno de estos
programas te será de mucha utilidad y, aunque sus posibilidades son enormes, sólo con el
empleo de sus funciones básicas podrás lograr grandes mejoras en la imagen digital
originalmente obtenida.
Los programas comerciales más utilizados son:
Adobe Photoshop, probablemente el más utilizado.

Corel Draw.
PhotoSuite.
Entre los de uso libre destacaremos:
Gimp (GNU image manipulation program), uno de los programas de procesamiento de

imagen más completos y extendidos de entre los gratuitos.
Paint Shop Pro.
ACDsee.
Para saber más
El siguiente enlace te llevará a un tutorial para el programa Gimp. En él podrás empezar

a conocer cómo se pueden editar las imágenes digitales para conseguir los resultados
más adecuados a nuestras necesidades.
Primeros pasos con Gimp.
Autoevaluación

Los sistemas de compresión con pérdida no afectan a la calidad de la imagen.
La compresión actúa sobre todo en los datos repetidos y redundantes.
El sistema ZIP logran altas tasas de compresión con archivos JPEG.
El procesamiento de imágenes actúa sobre los píxeles de la imagen para mejorar

sus características de acuerdo con nuestras necesidades.
Solución
1. Incorrecto
2. Correcto
3. Incorrecto
4. Correcto
5.10.- Sistemas de microscopía virtual (I).
Existen sistemas capaces de ampli car la imagen de una preparación y digitalizarla de

manera totalmente automática. Son los sistemas de microscopía virtual. En el siguiente vídeo
podrás hacerte una idea de su potencia:
https://www.youtube.com/embed/ihaM3DvyUHE
https://youtu.be/ihaM3DvyUHE
Los sistemas de microscopía virtual son aquellos capaces de digitalizar de manera automática
imágenes ampliadas obtenidas a partir de las preparaciones microscópicas.
Te podrás encontrar con dos grandes sistemas de microscopía virtual: Los microscopios
robotizados y los escáneres de preparaciones:
Microscopios robotizados: poseen los componentes propios de un microscopio óptico

normal (incluyendo los oculares), un sistema de movimiento robotizado, una cámara
fotográ ca digital acoplada y un software de control del microscopio y la cámara. En la
imagen puedes ver un ejemplo de ellos, de la marca Olympus.
Escáneres de preparaciones: no disponen de sistemas de oculares típicos del microscopio

óptico. Son sistemas cerrados cuyo único punto de acceso es la bandeja de preparaciones.
También se controlan por ordenador. En la imagen puedes observar un modelo de la marca
Nikon.
Pues bien, cuando manejes estos sistemas comprobarás que, en general, disponen de los
siguientes componentes:
1. Sistema de captación digital (cámara o escáner): ya conoces sus características

fundamentales. Su conexión al ordenador debe hacerse preferentemente a través de
un puerto USB o Firewire.
2. Hardware: el equipo informático necesario para controlar el sistema debe disponer de
procesadores lo su cientemente rápidos, elevada memoria RAM y alta capacidad de
almacenamiento en el disco duro.
3. Monitor: debe ser de gran formato, plano y de alta resolución.
Durante la captación digital de imágenes se irán capturando fragmentos de la preparación

para luego unirlos y crear la imagen virtual. La captura puede hacerse cuadro a cuadro o línea
a línea. Cuando la captura ha nalizado, deberá realizarse el ensamblaje de los cuadros o las
líneas. Puede hacerse de dos formas:
Ajuste mecánico: alineando lo bordes de cada cuadro o línea.

Ajuste por software: cada cuadro o línea incluye unos bordes que se solapa en parte
con los vecinos. El ajuste lo hace el programa informático haciendo coincidir las zonas
comunes.
Una vez obtenida la imagen, se guardará en los formatos ya conocidos (JPEG, ECW y TIFF,
habitualmente), generándose archivos de 1,5 a 2 MB.
Para saber más
Aquí tienes un vídeo que te muestra un escáner de preparaciones de la marca Nikon.

Podrás ver cómo carga la preparación y la presenta en pantalla:
5.10.1.- Sistemas de microscopía virtual (II).
Ya tienes todo dispuesto para realizar la visualización de la imagen capturada. Pues bien,
toda preparación virtual debería permitirte realizar las siguientes operaciones:
Desplazamientos laterales y verticales: como puedes ver en la imagen, los sistemas de

microscopía virtual disponen de echas de desplazamiento para poder moverse por
toda la super cie de la preparación. En estos movimientos suele plantearse el problema
de la lentitud, ya que el ordenador, al desplazarse por la imagen, debe cargar y
descargar continuamente gran cantidad de información. Para facilitar los
desplazamientos, es necesario que la imagen virtual disponga de una imagen general
en la que se marque la zona visualizada.
Cambio de aumento (zoom): los visores de las preparaciones virtuales deben

comportarse de manera similar a los objetivos de los microscopios convencionales,
permitiendo realizar aumentos de 4x, 10x, 20x y 40x.
Planos de foco múltiples: de esta manera, los visores permitirán asemejarse al
movimiento del tornillo micrométrico, que permite examinar planos focales distintos.
Para ello previamente fue necesario digitalizar previamente en varios planos.
Otras características:
Desplazamiento simultáneo y sincronizado de varias ventanas abiertas al mismo

tiempo.
Marcaje de las áreas visitadas anteriormente.
Posibilidad de realizar anotaciones digitales.
Acceso a teleconsulta y multiconferencia.
Posibilidad de edición de la imagen digitalizada.
Reconstrucción tridimensional.
Software para matrices de tejidos: Las matrices de tejidos son colecciones de
hasta 1.000 pequeñísimas muestras de tejidos depositadas en un solo porta.
Opción de exportación de imágenes en formatos estándares.
Para saber más
Visitando la siguiente página web, podrás ampliar tus conocimientos sobre los sistemas
de microscopía virtual. No dejes de hacerlo, podrás conocer muchos detalles de interés.
Microscopía virtual.
Autoevaluación
Los microscopios robotizados no disponen de sistemas de oculares similares a los de los

microscopios convencionales. ¿Verdadero o Falso?
Verdadero.
Falso.
No es correcto. En este sentido, los microscopios robotizados son como los

convencionales.
Es correcto. La falta de oculares es propia de los escáneres de preparaciones.
Solución
1. Incorrecto
2. Opción correcta
Para saber más
En el enlace siguiente podrás ver un ejemplo de preparación digitalizada.
Preparación con un corte del intestino.
6.- Telepatología estática.
Caso práctico
En una de sus visitas al servicio de anatomía patológica, Susana y Carlos comprueban

que los profesionales de dicho servicio realizan frecuentemente envíos de las imágenes
digitales obtenidas a partir de preparaciones de casos clínicos diversos.
—¿Por qué es tan importante realizar esos envíos? —preguntan ambos.

—¿No es difícil de entender —contesta el patólogo. A veces tenemos dudas en relación
a un diagnóstico y, de esta manera, podemos realizar consultas con otros colegas de
manera rápida y sin tener que enviar la preparación, que podría perderse o deteriorarse.
—¡Claro!, además estos envíos también podrán utilizarse para formar a otros
profesionales y estudiantes. ¿Verdad? —añade Susana.
—Por supuesto, esa es otra de sus ventajas —concluye el patólogo.
Reflexiona
¿Has pensado alguna vez en las ventajas que supone para un paciente en proceso de
diagnóstico, el hecho de que sus muestras histológicas puedan ser examinadas por
profesionales expertos en la materia que se encuentren a muchos kilómetros de
distancia?
Sin duda comprenderás que son muchas, ya que cuanto antes se realice el
diagnóstico, antes se instaurará el tratamiento, todo ello avalado por segundas
opiniones de expertos.
Imagen histológica teñida con hematoxilina-eosina.
Como norma, es siempre recomendable que toda patología maligna sea revisada por otro
profesional para su con rmación. Esta rutina eleva el control de calidad y garantiza una mejor
atención al paciente. Desafortunadamente patólogos y técnicos de laboratorio que trabajan
en equipos pequeños no tienen la ventaja de aquellos otros que trabajan en grupos más
grandes, los cuales pueden llevar su preparación al compañero o compañera junto a quien
trabaja. Este problema puede quedar solucionado mediante la telepatología.
Cuando escuches el término telepatología debes saber que se está hablando de la

transmisión a distancia de imágenes patológicas a través de sistemas de telecomunicación
con nes de consulta, diagnóstico, investigación o docencia.
Cuando las imágenes transmitidas sean jas, te encontrarás ante la telepatología estática. Sin
embargo, si las imágenes transmitidas fueron captadas por una cámara de vídeo, entonces
estarás ante la telepatología dinámica.
En este apartado te vas a centrar en el primero de los casos, es decir en los principales
aspectos de la telepatología estática.
Para poder transmitir las imágenes digitales debes haber pasado por todas las fases que has
estudiado en apartados anteriores: Selección y captación de las imágenes con la cámara
fotográ ca acoplada al microscopio, procesamiento de dichas imágenes con los programas
adecuados para mejorar su calidad y, muy importante, compresión de las imágenes para que
su tamaño no sea un impedimento a la hora de realizar su envío a distancia.
En cualquier caso, para que todo el proceso sea realmente válido, la e cacia de la respuesta
obtenida dependerá en buena parte de la rapidez con la que se hace llegar al remitente la
imagen capturada inicialmente.
Hasta el desarrollo de la telepatología, los envíos se hacían fundamentalmente por vía postal,
lo que suponía invertir 24 a 48 horas o más en conseguir que el material llegara a su destino
(todo eso sin tener en cuenta las posibles pérdidas y deterioros que podía sufrir en el
traslado). Actualmente, con los sistemas de telepatología se consigue realizar el envío en

pocos minutos u horas, sin el peligro de la pérdida o el deterioro.
6.1.- Imágenes destinadas a la telepatología.
Dando por hecho que has seleccionado en la imagen macroscópica el campo microscópico
más representativo de la lesión, así como que has incluido alguna imagen que muestre una
panorámica general de la misma, debes tener en cuenta algunos aspectos generales en
relación a las imágenes que vas a enviar:
Ya sabes que a mayor número de píxeles por imagen, mayor será la calidad de la
misma. Esta norma queda limitada por el tamaño del archivo resultante, de tal forma
que este no debería ser demasiado grande para evitar consumir muchos recursos en el
envío. El tamaño de la imagen se obtiene multiplicando el número de píxeles de su
anchura por los de su altura. En telepatología estática se recomiendan valores de unos
1.600 · 1.200 píxeles, en todo caso deben ser superiores a 1 MP (1 megapíxel =
1.000.000 de píxeles). En la imagen puedes ver la misma toma microscópica
fotogra ada con un número de píxeles adecuados y con otro demasiado bajo.
Dado que las imágenes serán visualizadas en monitores de ordenador, su tamaño
debería ser menor que la resolución de estos. Así evitarás tener que recurrir
continuamente a las barras de desplazamiento para ver la imagen al completo.
Debes prestar mucha atención a la privacidad de los datos personales del paciente. Si
es necesario que guren, deben ser encriptados para impedir su identi cación.
Las imágenes patológicas que vas a transmitir, sean estas macroscópicas o microscópicas,
habrán sido captadas por una cámara fotográ ca digital (las cámaras convencionales son de
uso cada más día menos frecuente), por una cámara de vídeo (ya sea analógica o digital) o a
partir de un escáner digital.
Si la captación se hizo en formatos no digitales, será necesario transformar la imagen

analógica en imagen digital. En el caso de fotografías convencionales, dicha transformación
exige su revelado previo (a papel o diapositiva, preferentemente esta última, por su mayor
resolución) y un escaneado posterior. Si la imagen procede de una cámara de vídeo
analógica, esta deberá ser conectada al ordenador a través de una tarjeta de vídeo adecuada
capaz de pasar la imagen analógica a digital.
Una vez que la imagen analógica ha sido digitalizada, o ya fue captada en formato
primariamente digital, estarás listo para su transmisión a distancia
Autoevaluación
El tamaño de la imagen depende del número de píxeles de su anchura, multiplicado por

el de su altura. ¿Verdadero o falso?
Verdadero.
Falso.
Exacto. Si multiplicas el número de pixeles de su altura por el número de píxeles de

su anchura, tendrás el tamaño de la imagen.
No estás en lo cierto. Vuelve a leer los contenidos.
Solución
1. Opción correcta
2. Incorrecto
6.2.- Transmisión de imágenes y datos.
Cuando vayas a enviar las imágenes patológicas, debes tener en cuenta los siguientes
aspectos: la privacidad de los datos, las líneas y sistemas de transmisión y los métodos de
transmisión.
a. Privacidad de los datos enviados: Sin duda eres consciente de la importancia que en el
entorno sanitario tiene el mantenimiento de la privacidad. No tenerlo en cuenta puede
ponerte en situaciones muy comprometidas. Lo normal será que junto con las
imágenes, se envíen textos explicativos con determinados datos clínicos. Si es posible,
no se deben enviar nombres o informaciones que permitan la identi cación de los
pacientes, pero, si no queda más remedio, estos datos se enviarán encriptados. La
encriptación es un sistema matemático que convierte los datos originales en
incomprensibles para todo aquel que no disponga del código de descifrado. Existen
muchos sistemas y programas de encriptación, algunos de ellos gratuitos, como el PGP
(Pretty Good Privacy).
b. Líneas y sistemas de transmisión: Se encargan de enviar la información a una
determinada velocidad. Dicha velocidad se mide en kilobits por segundo (Kbps).
Actualmente se utilizan líneas de alta velocidad del tipo del ADSL (Asymetrical Digital
Subscriber Line) que utilizan el soporte telefónico, pero tienen el inconveniente de ser
asimétricas, es decir que su velocidad es muy diferente en función de que reciban la
información (bajada o descarga de archivos) o de que la envíen (subida de archivos). La
subida es mucho más lenta que la descarga, lo que supone un problema si enviamos
imágenes digitalizadas.
Otras opciones son la utilización de cables coaxiales o de bra óptica, así como enlaces por
microondas o por satélite y líneas SMDS (Shared Multimegabit Data Service), que ofrecen
mayor velocidad y calidad de transmisión que las líneas telefónicas.
c. Métodos de transmisión de la imagen: Podrás realizar la

transmisión de tus imágenes a través de tres métodos: Correo electrónico, FTP (File
Transfer Protocol) y páginas web:
Correo electrónico (e-mail): los archivos conteniendo las imágenes se envían

agregados a un mensaje que contiene la información básica del caso patológico.
Dichas imágenes guran como archivo adjunto al correo electrónico.
FTP: Es un sistema de envío de archivos directamente de un ordenador a otro,
que suele ser un servidor en la web; desde este servidor, el archivo podrá ser
recuperado por el receptor. Para poder utilizar este sistema necesitarás disponer
de un programa especí co (WS_FTP, CuteFTP, CoreFTP, Filezilla, etc.). En la
imagen puedes ver un esquema que muestra el recorrido de la información desde
el usuario hasta el servidor.
Páginas web: La gran ventaja de este modo de transmisión de imágenes es que
pueden ser visualizadas por muchas personas al mismo tiempo y en cualquier
parte del mundo, ya que están accesibles para cualquiera que acceda a la dirección
de la página web donde se han cargado.
Para saber más
En el siguiente enlace podrás acceder a la página web de Telepathology, en la que

podrás observar algunas imágenes histológicas de interés.
Telepathology.
Autoevaluación
Señala las a rmaciones correctas:

La telepatología dinámica trabaja con imágenes jas.
En telepatología, los datos personales enviados deben ir encriptados.
La transmisión de datos por FTP utiliza como soporte el correo electrónico.
Solución
1. Incorrecto
2. Correcto
3. Incorrecto
Anexo.- Licencias de recursos.
Recurso
Datos del recurso (1)
(1)
Autoría: Ronald Taylor, Tom Kirn, Louisa Howard.
Licencia: Dominio público.
Procedencia: http://wikimediafoundation.org/wiki/File:Cholera_bacteria_SEM.jpg
Autoría: Moisey.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: http://wikimediafoundation.org/wiki/File:Optical_microscope_nikon_alp
Autoría: Tamas ex.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Revolver02.jpg
Autoría: Szöcs Tamás Tamas ex.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Kondenzor.jpg
Autoría: U.S. Navy photo by Journalist 2nd Class Ryan C. McGinley.
Procedencia: http://wikimediafoundation.org/wiki/File:US_Navy_060207-N-3019M-
006_Hospital_Corpsman_2nd_Class_Vanessa_Smith,_assigned_to_Navy_Environm
6%29,_examines_an_organism_sample_through_a_microscope.jpg
Autoría: DavidChoi.
Licencia: CC by.
Procedencia: http://wikimediafoundation.org/w/index.php?title=File:Retina_40x_Gre
Autoría: J3D3.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:IFI-Nuclear_and_inespeci c_citopla
Autoría: Zephyris.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: Montaje sobre: http://en.wikipedia.org/wiki/File:Dark_Field_Microscope
Autoría: Francisco Javier Carrasco Idáñez.
Licencia: CC by-nc-sa.
Procedencia: Modi cada a partir de la imagen: Autoría: gjshepherd_br Licencia: CC by

http://www. ickr.com/photos/gjshepherd/2860957481/
Autoría: Epop.
Procedencia: http://wikimediafoundation.org/wiki/File:AgNO3_microscope_2.JPG
Autoría: KristianMolhave.
Licencia: CC by.
Procedencia: Montaje sobre: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:SimpleSEMandTEM
Autoría: Ortisa.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: Montaje sobre: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Scheme_TEM.es.png
Autoría: Bruce Wetzel (photographer). Harry Schaefer (photographer).
Procedencia: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:SEM_blood_cells.jpg
Autoría: Sven Storbeck (sst).
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Normalobjektiv_sst.jpg
Autoría: Wassily.
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:PowerShot_A650_IS.jpg
Autoría: Rich Gibson.
Procedencia: http://www. ickr.com/photos/rich_gibson/5144662682/
Licencia: CC by-nc.
Procedencia: Modi cada a partir de la imagen: Autoría: Chealion Licencia: CC by-nc P

http://www. ickr.com/photos/chealion/2982864943/
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: Modi cada a partir de la imagen: Autoría: Catabernal Licencia: CC by-sa

http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:PixelZoom.png
Autoría: realtimecounter.
Procedencia: http://www. ickr.com/photos/42151495@N07/4038294343/
Autoría: Olympus.
Licencia: Copyright (cita).
Procedencia: http://www.olympusamerica.com/seg_section/seg_vm.asp
Autoría: Nikon.
Licencia: Copyright (cita).
Procedencia: http://www.microscopyu.com/tutorials/java/coolscope/index.html
Licencia: CC by-sa.
Procedencia: Modi cada a partir de la imagen: Autoría: Department of Histology, Jag

Procedencia: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Blood_smear.jpg

Realización de Técnicas de Microscopía y Digitalización de Imágenes

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Realización de Técnicas de Microscopía y Digitalización de Imágenes

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

30/10/2020 Realización de técnicas de microscopía y digitalización de imágenes.

Realización de técnicas de microscopía y digitalización de

Realización de técnicas de microscopía y digitalización de

—¡Qué difícil hubiera sido este descubrimiento si no hubiera podido utilizar el

¿Has pensado en alguna ocasión lo que ha representado el descubrimiento y desarrollo

Sin duda ha sido uno de los descubrimientos fundamentales para su desarrollo.

Materiales formativos de FP Online propiedad del Ministerio de Educación y Formación

1.- Tipos de microscopios.

Carlos está completando su periodo de FCT en la sección del microbiología del

Podrás encontrar dos variantes de microscopía según el principio en que se basa la

Microscopía óptica: la ampli cación se obtiene por un sistema de lentes ópticas.

Microscopía de campo luminoso o claro.

Microscopía electrónica: se basa en utilizar un haz de electrones en lugar de ondas

Microscopia electrónica de transmisión

En una primera fase vas a conocer el fundamento, los componentes, el manejo y el

elementales portadoras de todas las formas de radiación electromagnética.

1.1.- Microscopio de campo luminoso o claro.

En la imagen puedes ver el corte de un microscopio óptico compuesto en el que se aprecia la

El microscopio óptico de campo luminoso es aquel en el que la preparación es iluminada por

Señala las a rmaciones correctas:

El microscopio simple dispone de varios sistemas de lentes.

El microscopio compuesto consigue mayores aumentos que el simple.

El ángulo visual de nuestro ojo depende de la capacidad de deformación del

1.2.- Componentes básicos (I).

Carlos está realizando su módulo de FCT en el laboratorio que se le asignó en su

El revólver es una pieza metálica giratoria en forma de casquete situada en el extremo

Revolver con objetivos.

La platina es la zona donde se colocan las preparaciones. Su forma puede variar,

En la imagen puedes ver la platina de un microscopio óptico en la que también se observan

1.2.1.- Componentes básicos (II).

Además de la parte mecánica que acabas de estudiar, en el microscopio puedes encontrar

El aumento primario del objeto es producido por el objetivo; posteriormente la imagen se

Condensador de un microscopio (derecha) y diafragma iris (izquierda).

Para saber más

En el siguiente vídeo podrás repasar los componentes de un microscopio óptico

Partes del microscopio y s…

Resumen textual alternativo

Abre la siguiente presentación y repasa todos los componentes de un microscopio

Resumen textual alternativo

1.3.- Términos que definen las características del

Aumento: relación entre el tamaño de una imagen utilizando estos instrumentos y el

Contraste: se de ne como la diferencia relativa en intensidad entre un punto de una

Para saber más

El siguiente vídeo te explicará el funcionamiento de las lentes convergentes, te

Lentes y objetivos en micr…

Resumen textual alternativo

Señala las a rmaciones ciertas:

Los oculares forman parte del sistema de iluminación del microscopio.

Los objetivos se sitúan en el revólver.

El tornillo macrométrico permite el avance lento de la platina.

El poder de resolución de un sistema de lentes es su capacidad para diferenciar

1.4.- Manejo y mantenimiento del microscopio óptico.

1. Sitúa el microscopio sobre una super cie estable y de cómodo acceso.

el condensador en posiciones altas con los objetivos de inmersión y con preparaciones

La lámpara de iluminación la mantendrás encendida exclusivamente durante el tiempo

2.- Otras técnicas de microscopía óptica de luz transmitida.

Susana, en compañía de Celia, la técnico de laboratorio del hospital que se le asignó

Celia le dice que no es un capricho de un analista delicado, ni una imposición del

Ya has visto los componentes, la utilización y el mantenimiento de un microscopio óptico de

2.1.- Microscopio de fluorescencia.

El funcionamiento de este microscopio se basa en la capacidad de ciertas sustancias para

De una manera sencilla, diríamos que el microscopio de uorescencia aprovecha la capacidad

Además de los elementos comunes al microscopio óptico normal, el microscopio de

Una fuente de luz ultravioleta, generalmente se trata de una lámpara de mercurio, de