Análisis de Lípidos

Grado de Biotecnología Técnicas de análisis de azúcares

 Extracción de lípidos ¡Evitar la oxidación!

✓ Evitar la exposición al aire, luz o calor.

✓ Mantener siempre las muestras en frío y conservar congeladas.
✓ Extraer con disolventes orgánicos.
✓ La evaporación no puede ser superior a 50ºC (añadir antioxidantes).

Método de Folch
CHCl3:MeOH (2:1, V:V)

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1. Cuantificación de lípidos totales
A. Determinación de glicerol
❑ Químico ❑ Enzimático

500-600 nm

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1. Cuantificación de lípidos totales

B. Determinación de triacilgliceridos
❑ Químico ❑ Enzimático
Hidrolisis de glicerol y cuantificación

500-600 nm

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1. Cuantificación de lípidos totales Prácticas

C. Determinación de acidez/índice de los grasos libres

El grado de acidez indica el contenido en % de los
ácidos grasos libres expresados en forma de un ácido
graso, generalmente ácido oleico.
El índice de acidez: Es un factor de mala calidad que
indica la hidrólisis previa por mal almacenamiento de
las materias primas, fabricación defectuosa.

D. Determinación del índice de iodo

Se mide el grado de instauración de los aceites y grasas,
mediante de iodo a la muestra para que reaccione con los dobles
enlaces.
Tipo IY
Prácticas
Aceite de Palma 50-55
Sebo de Cerdo 40-45
Aceite de Oliva 75-95
Acetite de Soja 120-135
Aceite de Girasol 135-145
Aceite de Linaza 170-190
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1. Cuantificación de lípidos totales
E. Determinación de ácidos grasos libres
❑ Enzimático

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1. Cuantificación de lípidos totales Prácticas

F. Estado de oxidación de las grasas/ Índice de peróxidos

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1. Cuantificación de lípidos totales Prácticas

G. Determinación de índice de saponificación

El índice de saponificación son los miligramos
de KOH (hidróxido potásico) necesarios para
saponificar (convertir en jabón) un gramo de
grasa.

ISAP = mg KOH gastados / gramos de grasa totales

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados

A. Cromatografía en capa fina

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados

A. Cromatografía en capa fina

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados

B. Cromatografía gaseosa (GC)

Los ac. grasos, intactos, no pueden separarse por GC ya que presentan un alto punto de
ebullición y se quedan retenidos en la columna (-COOH).
SOLUCIÓN: Se modifican haciendo que sean más volátiles.
Por ej., formando sus correspondientes ésteres metílicos (-COOCH3).

Inyector Automático / Compartimento columna

Desorción térmica

Detector: Espectrómetro de masas (MS)

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados

B. Cromatografía gaseosa (GC)

Detector de ionización de llama

(FID)

Detector de espectrómetro de masas

(MS)

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados

C. Determinación de fosfolípidos
HPLC 1. Fosfolípidos totales extraídos mediante extracto de Folch
2. Los fosfolípidos, al ser polares, se separan en columnas de fase normal
3. Disolventes ACN:MeOH:H3PO4 (96:3:1)

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados

D. Determinación de lipoproteínas
Ultracentrifugación

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2. Cuantificación de lípidos pormenorizados
D. Determinación de lipoproteínas
Electroforesis

Separación por su tamaño al ser sometidas

a un campo eléctrico sobre una matriz de
poliacrilamida con SDS (dodecil sulfato
sódico).

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