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144 140 2 PB
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Resumen
En diferentes estudios realizados, Bacillus sporothermodurans ha sido caracterizado
fenotípicamente como un microorganismo aerobio estricto. Sin embargo, IBLAB, al
realizar la prueba de esterilidad comercial de leches UHT producidas en Colombia,
siguiendo la Norma NTC 4433, en la que se inoculan medios de cultivo en condiciones de
aerobiosis y anaerobiosis a diferentes temperaturas (35±2°C y 55±2°C), ha obtenido
crecimientos atípicos de este microorganismo en ausencia de oxígeno, evidenciando que
este bacilo no sólo puede crecer como aerobio estricto sino también como anaerobio
facultativo. Para confirmar el crecimiento anaerobio, se realizaron siembras en agar
infusión cerebro corazón (BHI) suplementado de vitamina B12, las cuales fueron
incubados en las mismas condiciones iniciales (anaeróbicas). Se observaron las
características microscópicas de las cepas aisladas en la muestra 87020 y confirmadas
por tinción de Gram y pruebas bioquímicas. Para la confirmación del microorganismo se
utilizó la técnica de PCR tradicional con base a la identificación del gen 16S ribosomal y
posterior secuenciación. El análisis filogenético demostró un 99% de identidad con otras
cepas de B.sporothermodurans. Estos análisis confirmaron la presencia de Bacillus
sporothermodurans anaeróbicos facultativos en las muestras de leche UHT analizadas.
http://portal.fedegan.org.co/pls/portal/docs/PA
GE/FNG_PORTAL/PG_SERVICIOS/COYUNTURA_L
ECHERA1/LO_QUE_USTED_NECESITA_SABER_CA
RTILLA.PDF
FIGURA 1
Fig 1. Bacillus sporothemodurans traits from aerobic and anaerobic culture, A) in UHT
milk (aerobic), B) pure culture from supplemented BHI agar (aerobic), C) UHT
milk (anaerobic), D) pure culture from supplemented BHI agar (anaerobic).
Hydrolysis of:
Urea - - -
Gelatin - - -
Starch - - -
Growing conditions:
Strict aerobic + + -
Facultative anaerobic - - +
Growth at 53 ± 2 ° C - V V
Growth at 35 ± 2 ° C + + +
Growth at pH 5.8 + + +
Growth at pH 6.8 + + +
Others
Catalase + + +
Oxidase + + +
Citrate - - -
Growth in NaCl
0% + + +
2% + + +
5% + + +
7% - + V
Growth at
15°C + + +
20°C + + +
45°C + + +
53°C + - V
V= variability
aisladas en el laboratorio presentan gran
Análisis molecular similitud con el gen 16S rRNA BSPO-F2
y BSPO-R2 primeros BSPO
Los métodos moleculares seleccionados para el estudio de genes
permitieron la confirmación de específicos amplificados 16S rRNA para
B.sporothermodurans en leches UHT. BS, la generación de una banda de 648
Los resultados de la PCR tradicional para pares de bases (pb), que está al mismo
el B sporothemodurans DSMZ 10599 nivel (tamaño) de la cepa referencia
cepa utilizada como control mostraron DSMZ 10599 utilizada en este estudio,
que las cepas aerobias y anaerobias confirmando así que las cepas aerobias y
Análisis filogenético
BS (aerobia y anaerobia) fue más
El análisis filogenético de la secuencia similar a la cepa SC-H.
del gen 16S rRNA de Las cepas estudiadas de Bacillus
B.sporothermodurans (1465pb) a partir sporothermodurans y de otras cepas
de 87017 y 87020 (cepas aerobias y cercanas genéticamente se agruparon
anaerobia respectivamente) aisladas a en el mismo clado, y mostraron una
partir de la prueba de esterilidad similitud mayor al 94% en su gen 16S
comercial, permitió agrupar a la cepa rRNA. El grado más alto de disimilitud
anaerobia con la cepa No.19, que existe entre especies del género
encontrándose una similitud del 99% a Bacillus es del 7% (Fig.3).
nivel nucleotídico (Fig 3). Las cepas de
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Langeveld L., Wagendorp A., Heumer I., sources. J. Appl Microb. 92 (5): 983–
Weerkamp A.H. Genotypical and 991.
phenotypical characterization of Bacillus
Vaerewijck, M., Vos P., Lebbe1 L., Los autores agradecen a la junta
Scheldeman P., Hoste B., Heyndrickx M. directiva y al equipo de microbiología de
(2001). Occurrence of Bacillus IBLAB, por el patrocinio y colaboración
sporothermodurans and other aerobic en la realización del presente estudio.
spore-forming species in feed
concentrate for dairy cattle. J. Appl Igualmente a Corpogen, y en especial
Microb. 91: 1074-1084. al Dr, Walter Ocampo por los aportes en
la revisión del documento
Von Hammer, P., Walte H. G., (1996).
Zur Pathogenita¨t hitzeresistenter