Лекция 6.

Рост, размножение и
культивирование прокариот
План:
1. Размножение бактерий;
2. Культивирование микроорганизмов;
3. Основные типы питательных сред;
4. Получение культур и их культивирование;
5. Рост бактериальной популяции в статической культуре;
6. Культивирование иммобилизационных клеток;
7. Особенности культивирования анаэробных и аэробных бактерий.

Лектор: к.б.н., О.В. Ковзунова

Способы деления прокариот

А – Поперечная перегородка;
Б – Перетяжка;
В – Почкование;
Г – Множественное деление.

1- клеточная стенка, 2 – ЦПМ,

3- мембранная структура,
4-ЦП,5 – фибриллярный слой
 Время генерации (период от одного деления клетки
до другого) при благоприятных условиях для многих
бактерий (Escherichia coli, Steptococcus faecalis,
Clostridiurn perfringens) составляет 15–20–30 мин, в то
время как для клеток млекопитающих в культуре тканей
– 1 сутки. За 24 ч у бактерий сменяется столько
поколений, сколько у человека за 5000 лет.
Скорость размножения прокариот зависит от
вида микроорганизма, возраста культуры,
питательного субстрата, условий аэрации,
температуры, влажности и других факторов.
Популяция микроорганизмов, или культура – это совокупность
бактерий одного или разных видов, развивающихся в ограниченном
пространстве. Выращивание микроорганизмов на питательных средах
называется культивированием, а культивирование при определенной
температуре – инкубированием.

По степени однородности клеток культуры

делятся на:

чистые смешанные накопительные

 По происхождению питательные среды:
1) Натуральные;
2) Полусинтетические;
3) Синтетические.
По назначению питательные среды:
1. Среды общего назначения;
2. Селективные;
3. Дифференциально-диагностические.
По физическому состоянию среды: жидкие,
сыпучие и плотные.
Получение чистой культуры включает
несколько стадий:
- получение накопительной культуры;
- выделение чистой культуры;
- проверка чистоты и идентификация
выделенной культуры.
Способы культивирования микроорганизмов
 ФАЗЫ РОСТА КУЛЬТУРЫ:
1). Лаг-фаза начинается с момента посева бактерий в свежую питательную среду. В
этот период клетки адаптируются к данным условиям культивирования и достигают
максимальной скорости роста.
2). Экспоненциальная, или логарифмическая (лог-фаза), характеризуется
максимальной скоростью деления бактерий. Нарастание клеток идет в
геометрической прогрессии.
3). Линейная фаза роста, характеризуется постоянной скоростью прироста биомассы.
4). Стационарная фаза роста, характеризуется равновесием между погибающими и
вновь образующимися клетками. Наблюдается максимальная величина биомассы и
максимальная суммарная численность клеток
5). Фаза отмирания, характеризуется уменьшением числа живых клеток.
6). Фаза выживания, характеризуется наличием отдельных клеток,
сохранившихся в течение длительного времени, жизнеспособностью в условиях
гибели большинства клеток популяции.
Непрерывные культуры
микроорганизмов
 Микробные популяции
Колонии микроорганизмов, видимые невооруженным
глазом скопления клеток (бактерии, дрожжевые грибы) или
разрастания мицелия (плесневые грибы) одного вида
микроорганизмов
Биоплёнка - множество (конгломерат) микроорганизмов,
расположенных на какой-либо поверхности, клетки которых
прикреплены друг к другу.
Зооглея — слизистые образования, образующиеся при
жизнедеятельности бактерий, имеющих слизистые капсулы
или выделяющих слизь.
 Применение иммобилизованных клеток
обеспечивает:
- упрощение схемы выделения конечного продукта;
- возможность длительного (месяцы и даже годы)
использования их биокаталитических свойств;
- повышение их устойчивости к действию
различных неблагоприятных факторов;
- повышение продуктивности осуществляемых
превращений субстратов в конечные продукты;
- снижение энергоемкости процесса.
 Культивирование аэробных микроорганизмов
проводят следующим образом:
• на поверхности плотных сред или в тонком слое
жидких сред, когда микроорганизмы получают
кислород непосредственно из воздуха;
• в жидких средах (глубинное культивирование). В
этом случае микроорганизмы используют
растворенный в среде кислород. В связи с низкой
растворимостью кислорода, для обеспечения роста
аэробных бактерий в толще среды, требуется
постоянное аэрирование.
Культивирование анаэробных микроорганизмов более сложно,
чем выращивание аэробов, так как здесь должен быть сведен до
минимума контакт микроорганизмов с молекулярным кислородом.
К химическим методам относится:
1) Использование химических веществ, поглощающих молекулярный кислород
(раствор пирогаллола, металлическое железо, хлорид одновалентной меди и др.).
2) Использование восстанавливающих агентов, для снижения ОВ потенциала
среды: тиогликолат натрия, цистеин, аскорбиновая кислота.
К физическим методам: культивирование в микроанаэростате – вакуумном
аппарате для выращивания микроорганизмов, в котором воздух замещен газовой
смесью. Наиболее часто используемая смесь имеет следующий состав: азот с 5 %
СО2 и 10 % Н2.
Культивирование анаэробных микроорганизмов
Биологический способ: выращивание совместно с аэробными или
факультативно-анаэробными бактериями.
Для культивирования анаэробных бактерий используют и
другие методы, ограничивающие доступ воздуха к растущей
культуре:
• выращивание в высоком слое среды;
• выращивание в толще плотной среды;
• культивирование в вязких средах, в которых диффузия
молекулярного кислорода в жидкость уменьшается с
увеличением ее плотности;
• заливка среды с посевом высоким слоем стерильного
вазелинового масла или парафина.
Пуассонер
 http://kovzunova.by/
Раздел
«Микробиология с основами биотехнологии»
ИЛИ