吉尔森 GX-281 制备 HPLC 系统

启动软件，输入用户名和密码

User Name:用户名称，输入 Administrator

Password:密码，输入 gilson，点击 ok

进入页面后，点击左侧的 Liquid Chromatography and Fraction Collection，在随后出现的右面菜单中

点击 Project Library 进入程序。
在页面左下方点击 Create New Project，在弹出对话框中输入 Project Name 名称及相关描述

在建立好的 Project Name 上点击右键，选择 Create Application

输入 Application Name 及相关描述

在建立好的 Application 上点击右键，选择 Create Method

页面进入 Method Builder

Method Builder 是分析方法的建立，主要分三部分：

Configuration：定义构造（仪器配置）

Bed Layout：定义样品区、收集区、溶剂区及洗针区托盘及管架

Control：定义分析方法和过程

Configuration

进入 Method Builder 后，点击右上方“Scan”自动扫描系统连接的组件，在系统连接正常时，软件

会扫描出每个组件并且显示在下图中的白色区域，设置每个组件的参数。这里以手动选择组件来注解

每个步骤。
以 GX-281 制备色谱为例，需要设置以下几个常用组件及相应参数

Detector：检测器

Liquid Handler：液体处理系统，自动进样及馏分收集

Mobile Phase：高压输液泵

Injector：进样组件（根据需要设置）

Syringe Pump：注射泵（根据需要设置）

1、Detector

根据仪器配置的检测器类型选择，如 156Detector

156 检测器是双通道检测器，将右侧的 Data Channel1、Data Channel2 的“Use”都选中

2、Liquid Handler

选择 GX-281 Liquid Handler

在 Properties 中有三个选项卡：Setup、Contacts、General

Setup：

Z clamp Height(mm)：125 Z 臂高度，跟洗针口高度相匹配，根据实际调节位 125mm、175mm 或

者 210mm

Rinse Park Location：Left 1 根据安装位置设定

Transfer Tubing(mL)：30 进样针出口到容积泵入口之间弯管体积

Left GX Direct Inject Vavle：Not Installed 左边直接进样模件，根据配置选择 1/8”，1/16”，未安装

Right GX Direct Inject Vavle：Not Installed 右边直接进样模件，根据配置选择 1/8”，1/16”，未安装

Z Injection Vavle：选中 直接进样模件

Port 1 ： Waste 选中 排废液位置，位置 1

Fraction Collection Delay Volume(mL)：10 收集延迟体积：检测器出口到收集阀入口之间管路体积

Contacts：连接其他附件信息

3、Mobile Phase

根据配置选择泵类型，如 322HPLC Pump

在 Properties 中有三个选项卡：Setup Pump A，Setup Pump B，General

Setup Pump A

Head Type：H2 泵头类型，H2 泵头流速 30mL，压力 30MPa；H1 泵头流速 15mL，压力 60MPa

Pump Usage：Mobile Phase 默认选中

Organic Pump：不选中 是否是有机泵，选择否。Pump A 一般走水

Solvent：Water Pump A 流动相名称，点击箭头出现选项

Sovlent Name： 当 Solvent 选项中没有需要的流动相名称时可自定义名称

Compressibility(Mbar-1)：压缩补偿 选择某种溶剂后，该系数恒定

Refill Speed（ms）：300 活塞时间（速度），活塞完成一次往复所需时间，125-400 之间。通常 H1

泵头设置为 125，H2 泵头设置为 300。

Mixing Chamber Size(μL)：10000 混合器体积：0.2~2.2mL 之间。泵流速小于 25mL 时设置在

0.2~1.8mL 之间，泵流速在 25mL 时设置为 1.8~2.2mL 之间。

Setup Pump B

Head Type：H2

Organic Pump：选中 Pump B 一般走有机溶剂

Sovlent Valve Configuration：No Sovlent Valve 是否接溶剂选择阀？此处根据仪器配置选择。如果

接溶剂选择阀，系统可自动选择四种溶剂；如果不接，手动更换溶剂

瓶
Sovlent Name：Methlanol 根据需要选择有机溶剂类型

Bed Layout

前面操作完成后点击页面上方的 Bed Layout 按钮，出现如下页面，设置托盘管架区域

下面竖长方框从左到右为样品区，收集区，中间六个圆点为洗针区，上方 2 个方框为直接进样模件。

每个区域管架顺序、洗针位置等都按照仪器硬件配置而设定。
Zone Management 显示每个工作区域名称和数量

Add Zone 下方是试管排列顺序，可根据使用情况选择排列方式

1、 样品区：选择样品区：假定左边第一个区域为样品区，鼠标左键双击方框内白色区域，页面出现

如下，选择管架类型，如 Code208，点击 OK

管架编号：在中间下方管架排列方式中选择一种排列方式，左键单击后，鼠标放在前面已选择好的样

品区，从左上到右下拖动，样品管被编号。在 Zone Management 中 Sample Zone 的数量显示为 70

2、馏分收集区：方法同样品区，根据需要及管架型号设置其他样品区和馏分收集区

假设第二个管架为收集区，给收集区编号，在 Zone Management 中 Fraction Zone 的数量显示为 75。

3、洗针区：根据洗针安装位置在软件中进行相应设置。假设 Inside Rinse（洗针内部）和 Outside

Rinse（洗针外部）顺序为左边 1、2 位置。

Inside Rinse：在 Zone Management 单击 Inside Rinse 使之反色选中。拖动鼠标选择左边第一个

孔，左键双击，弹出对话框，选择安装的洗针柱类型。
 Outside Rinse：在 Zone Management 单击 Outside Rinse 使之反色选中。拖动鼠标选择左边第

一个孔，左键双击，弹出对话框，选择安装的洗针柱类型。

注：到此为止，硬件配置工作完成，如配置没有变动，设计方法可以不用重新配置。

Control

Bed Layout 完成后点击 Control，进入 Control 控制页面

在 Control 中对 Detector、Pump、Fraction Collection、Liquid Handler 等组件的参数进行设置。

一、Detector 检测器

在 左 边 的 Configured Instrument 中 单 击 “ 156 Detector （ 1 ） ” ， 在 下 拉 菜 单 中 点 击 “ 155 156

Detector Settings”用鼠标左键将其拖动到右边空白区域。弹出对话框，设置参数

Time：0 min 2 个命令之间间隔时间，最小间隔为 0.1min。首个命令时间可设为 0

Detector：156 Detector（1） 检测器型号

Detector Mode：DUAL / SINGLE 检测器类型：双波长/单波长。此处 156 型为双波长

Peak Width：4.0 半峰宽，一般可设置为 4.0

Single/Dual Sensitivity1：0.1 灵敏度，范围为 0.025-50。流速 30mL，半制备池可设为 0.1

Single/Dual Sensitivity2：0.1 同上

Wavelength 1 （nm）： 254 波长 1

Wavelength 1 （nm）： 280 波长 2

以上设置完成后点击 OK 完成

二、Detector Autozero Channel 检测器归零

三、Fraction Collection Settings 馏分收集设置

在左边的 Configured Instrument 中单击“GX-281 Liquid Handler（1）”，在出现的下拉菜单中选择

“Fraction Collection Settings”随后弹出的对话框中包含 2 个菜单：Main、Fraction Sites。

Time：0.5 min 命令开始执行时间，根据试验需求设置，与上一条命令最小间隔 0.1min

Main

General

Peak Slope/Level： 馏分收集方式，有三个下拉项：Slope/Level/None，分别为斜率/水平/否

当选择 Level（峰水平）时，需继续设置以下参数

Peak Level：10 纵坐标绝对值，表示峰高大于 10 的馏分都将被收集

Collect Positive Peak：TRUE 默认值 正峰：收集

Collect Negative Peak：FALSE 默认值 负峰：不收集

Collect Non Peak：FALSE 默认值 不出峰：不收集

当选择 Slope（峰斜率）时，需设置以下参数

Peak Front Slope：峰前斜率

Front Sensitivity Auto Calculate：TRUE 默认值 自动计算峰前灵敏度：是

Peak Back Slope：峰后斜率

Back Sensitivity Auto Calculate：TRUE 默认值 自动计算峰后灵敏度：是

Co-eluted Peaks：FALSE

Collection Region：ALL

其余同 Level 设置。

Peak Per Tube

Time/Volume：有 3 个下拉选项：Time/Volume/None，分别对应时间/体积/否。当上一步 General 中

Peak Slope/Level 中选择 Slope 或 Level 时，此处应选择 Volume，即规定每管收集体积；当选择

None 时，此处可选择 Time 或 Volume，即规定以时间或体积来收集。

Time Per Tube（min）：每管收集时间。只在选择以时间方式收集时有效

Volume Per Tube（μL）：每管收集体积。除以时间方式收集外，都应根据试管容量设定合适值。

Fraction Sites

系统配置一个收集器时只设置 Fraction Sites 1 即可

Fraction Collector 1 ：GX-281 Liquid Handler（1） 收集器

Fraction Zone 1 ：Fraction Zone 收集区

Fraction Well 1 ：#Fraction Well 收集管号：#代表变量

四、Sync Task 同步命令

在 Configured Instrument 中单击“Auxiliary”，在下拉菜单中选择“Sync Task”，设定命令执行时

间，Tasks 中选择“Fraction Collection Settings”，选项中选择“Sync to end of Task”。点击 OK。

五、GX-281 Liquid Handler 进样及收集设置

在 Configured Instrument 中单击“GX-281 Liquid Handler（1）”，在下拉菜单中选择“GX-281 Z

Inject Prep Injection with Collection Properties”。在弹出菜单中有两个选项卡：Main、Rinsing。

Main

Instruments Liquid Handler：GX-281 Liquid Hander（1）

Pump：GX-281 Liquid Hander（1）

Injector：GX-281 Liquid Hander（1）

Solvent Valve Position：2 洗针溶剂位置

Zones/Wells Sample Zone：Sample Zone

Sample Well：#Sample Well

Injection Properties Air Gap Volume（μL）： 10 吸气泡体积

Pull Volume（μL）： 400 吸空气（让针到定量管入口部分液体排入定量管）

Injection Volume（μL）：1000 或#Sample Volume。 进样体积

Flow Rates Aspirate Flow Rate（mL）： 2 取液速度

Air Gap Flow Rate（mL）： 1 吸空气速度

Rinsing 用系统默认参数即可

六、Sync Task 同步命令

操 作 同 第 四 步 ， Task 中 选 择 “ GX-281 Z Inject Prep Injection…” ， 选 项 选 择 “ Sync with

synchronize”
七、Start Data Collection 开始数据采集

在 Configured Instrument 中单击“Auxiliary”，在下拉菜单中选择“Start Data Collection”。设置开

始数据采集：设定执行命令时间后，点击 OK。

八、Start Fraction Collection 开始馏分收集

在 Configured Instrument 中 单 击 “ GX-281 Liquid Handler （ 1 ） ”， 在 下 拉 菜 单 中 选 择 “ Start

Fraction Collection”。设置开始馏分收集：设定命令执行时间，点击 OK。

九、Mobile Phase 流动相

在 Configured Instrument 中 单 击 “ Mobile Phase” 在 下 拉 菜 单 中 选 择 “ Gradient Task with

Variables”，设定 Flow Rate（流速）及 Time（时间）。

Property 中“322 HPLC PUMP(1)B” 和“322 HPLC PUMP(1)A”代表 2 个泵头。Vavle 值代表流动

相比列。可根据实际需求设定具体数值比列，如 70/30，也可用变量“#”表示，如设定为“#B1”，

另一个梯度可设定为“#B2”
同样方法可设定一个完整的流动相梯度

十、Stop Fraction Collection 停止馏分收集

十一、Stop Data Collection 停止数据采集

方法编辑完成。点击左下方的 Save 保存方法，输入 Name 及相关信息，点击 Save 保存。

日常系统维护

GX-281

 经常清洗塑料管材和进样针，可达到维护最高性能
 每天用蒸馏水或离子水冲洗进样针和清洗槽。每星期, 30% 乙醇,10%漂白剂或稀释清洁剂冲洗进
样针和清洗槽。

 当液体溢出, 立刻全部抹去或清洗
  定期检查各连接配件是否有松紧

 冷的样品和溶剂会导致漏液, 在使用前必须把各样品和溶剂达至室温, 才可使用系统中

 系统维护-泵
 使用酸、碱和缓冲溶剂后，更换成蒸馏水清洗各泵头

 溶剂脱气（流速稳定）

系统维护-H322 泵
 系统维护-检测器

 基线不稳/噪音大：紫外/可见光灯问题或灯已老化

 基线上下波动：系统漏液，检测各连接头
 测试没有任何紫外吸收或灵敏度低：清洗检测池和更换紫外/可见检测器灯