Q U I M I C A

DESNATURALIZACIÓN ; TEMPERATURA DE FUSIÓN

La proporción A+T/C+G está relacionada en primer lugar con la estabilidad de la molécula de ADN
de doble hélice. Cuanto mayor es el contenido de G+C de una molécula, mayor cantidad de G-C
presentará, como consecuencia tendrá una mayor cantidad de triples enlaces y, por consiguiente,
será necesario suministrar una mayor cantidad de energía a esa doble hélice para separar sus dos
hebras.

Cuanto mayor es el contenido en G+C, mayor cantidad de calor hay que suministrar a un ADN de
doble hélice para desnaturalizarla. La temperatura de fusión necesaria para desnaturalizar la
mitad del ADN de una mezcla esta directamente relacionada con el contenido de G+C, a mayor
contenido de G+C mayor temperatura de fusión.

CALENTAMIENTO; La forma más corriente de desnaturalizar el DNA es por la elevación

de temperatura.
PH; El ph elevado porque cambia la carga de algunos grupos que forman parte de los
puentes de hidrogeno
AGUA DESTILADA; Se produce la separación de las hebras

ABSORCIÓN A 2600ª
El estado físico de los ácidos nucleicos está relacionado con su capacidad de absorción de luz
ultravioleta a 2600a. El menor grado de absorción se produce en estado de doble hélice, la
absorción aumenta cuando se produce la desnaturalización pasando a estado de hélice
sencilla (efecto hipercrómico, aumento de la absorción), y por último, si degradamos al
ADN de hélice sencilla a nivel de nucleótidos libres, de nuevo aumenta la absorbancia.

RENATURALIZACIÓN DEL ADN La concentración salina debe ser alta

Una vez que el ADN ha sido desnaturalizado se hace descender lentamente (NaCl) entre 0.15 y 0.5 m) para
la temperatura hasta casi 25 grados centígrados por debajo de la eliminar la repulsión entre los grupos
temperatura de fusión, así las dos cadenas vuelven a unirse por completo. fosfato de las dos hebras
La renaturalización es un fenómeno de unión al azar, y por tanto la
molécula de ADN renaturalizada no contiene las hebras originales
La temperatura debe ser lo
suficientemente elevada como para
romper los puentes de hidrogeno