instagram: Perdidaenuss @ Bioqui. 12-1 REGULACION DE LA EXPRESION GENETICA: ONCOGENES. La expresién regulada de los genes se requiere para el desorrollo, Giferenciacién y adaptacién celular. Existen 2 tipos de regulacién genético: @ Regulacién positive @ Regulacién negativa, REGULACION POSITIVA: A+B>C Si aumentamos cuantitativamente la cantidad de A, este elemento A inducird la formacién de B y B induciré la formacién C. Es decir, el elemento inductor A uments los niveles de B. Los niveles de B aumentaron los niveles de C. Asi, la regulacién positive ocurre cuando la expresién de la informacién genética se incrementa en forma cuantitativa por la presencia de un elemento regulador especifico, llamado activador o inductor. REGULACION NEGATIVA; El elemento A inhibe sintesis de B y el elemento B inhibe la sintesis de C. De alguna manera el elemento quimico A acttia como un elemento regulador especifico llamado represor. Asi, la regulacién negativa ocurre cuando la expresion de la regulacién génica esta disminuido por la presencia de un elemento regulador especifico, llamado represor. Habitualmente el gen represor sintetiza uno proteina represora. Esta proteina represora acta sobre el sitio promotor, inhibe al gen estructural y asi se inhibe la formacién de una determinade enzima. eC | 7 aa ronal Instagram: Perdidaenuba @instagram: Perdidaenuss @ EFECTORES E INDUCTORES EFECTOR Un efector que inhibe la funcién de un regulador negativo conileva a uno regulocién positive. Por ejemplo: B inhibe a A, el cual es un represor € inhibe o C. Asi, la inhibicién de una inhibicién trae un efecto estimulatorio. 1 B aa I ic Inhibicién de una inhibicién trae un efecto estimulatorio. INDUCTOR: Si la proteina represora generada por el gen represor se encuentra con un inductor su efecto inhibidor queda totalmente bloqueado, de tal manera que el gen estructural y el gen promotor quedardn totalmente desinhibidos caumentando la formacién de una enzima, = a, ae N ae een RESPUESTAS TEMPORALES-SENAL REGULADORA: Los sistemas biolégicos median tres tipos de respuestas temporales a una sefial reguladora: © Respuesta de tipo A * Respuesta de tipo B. Respuesta de tipo C Respuesta de tivo La presencia de una seftal estimulante provoce el aumento de una respuesta quimica siempre que dicha sefial/estimulo se mantenga presente. Una vez que cesa el estimulo la actividad enzimética cae y esto puede ser mantenico en el tiempo.ratagem reasons @D Respuesta de tipo B: La presencia de una sefial 0 estimulo genera una rdpida respuesta temporal. Posterior a ello viene un tiempo de latencia/recuperacién/refractariedad por més que se mantengo la sefial. Pasado ese tiempo de recuperacién la persistencia de la sefial vuelve a desencadenar una respuesta que nuevamente se volveré a agotar en el tiempo hasta pasar el periodo de recuperacién. Respuesta C: La presencia de sefial o estimulo desencadena una respuesta unica amesetada que se mantiene en el tiempo independientemente de la persistencia de la sefial. El proceso de alteracién de la expresién génica implica ta modulacién de la transcripcién, debido a cambios en lo intereccién con las proteins reguladoras de union especifica con varias regiones del ADN. NIVELES DE REGULACION DE LA EXPRESION GENICA:La cromatina puede dividirse en dos clases segtin su patrén de tincién: * Eucromatina: se tifie suavemente y se corresponde con regiones del genoma disponibles para la transcriocién. * Héterocromatina: se tifie intensamente y se corresponden con regiones del genoma densamente compactados e inaccesibles pora el aparato transcripcional. La compactacién de la cromatina afecta la capacidad de unién de las enzimas y factores transcripcionales de genes especificos. Hay proteinas que reconocen secuencias especificas del DNA y una vez unidas, transmiten la sefial de descondensacién de cerca de 10.000 pares de bases correspondientes a un bucle de la cromatina. ACETILACION-DESACETILACION; Las ACETILACIONES y DESACETILACIONES DE HISTONAS son modificaciones covalentes frecuentes en estos fenémenos de descompactacién cromatinica. Un ejemplo tipico ocurre en la acetilacién de coactivadores involucrados en las transcripciones genéticas moduladas por las hormonas tiroideas. * Las acetilaciones se producen en los residuos de lisina de los extremos amino-terminales de las histonas, reduciendo su carga positive y su afinidad de unién al ADN cargado negativamente. * La desacetilacién de las histonas, mediada por desacetilasas, provoca el efecto contrario (recompactacién de la cromatina). METILACION: La metilacién de residuos de citosina en el ADN, especialmente en sitios promotores, dificulta la transcripcién. Por ejemplo, los genes de globina estén més metilados en células no productoras de hemoglobina que en los eritroblastos.lnstagrams Perdidaenuba @ Las metilaciones del ADN se producen en secuencias especificas reconocidas que generalmente se agrupan en ‘islotes" ricos en CG, con frecuencia dentro o cerca de regiones reguladoras de la transcripcién. CH CH; CH3 CH3 5' — TCCGTTAACCCGGGCGTICGTIT — 3’ 3’ — AGGCAATTGGGCCCGCAAGCAAA — 5’ CHs CHs CH; CH: MODIFICACION DEL NUMERO Y ESTRUCTURA DE LOS GENES: La eliminacién total o parcial de genes impide la formacién de ARNm y de lo proteina correspondiente. Por ejemplo, en los gldbulos rojos una vez sintetizadas las proteinas estructurales y funcionales, la eliminacién produce en la etopa de eritroblasto ortocromatico una célula incapaz de sintetizar toda otra proteina de novo presentando un 90% del contenido proteico total como hemoglobina. Por otra parte, la presencia de genes en téndem implica la presencia de multiples copias del gen que aumentan la capacidad de produccién de la proteina requerida en grandes cantidades. — Es el caso de los genes codificantes de histonas y ARNr SS. AMPLIFICACION GENICA: La regulacion génica se puede controlar en funcién de la disponibilidad del ADN incrementando el numero de copias del gen accesible. Este mecanismo de regulacidn es conocido como AMPLIFICACION GENICA. Una forma de amplificacién es la repeticién sucesiva de la replicacién de una secuencia especifica del ADN. REGULACIONES CiS-TRANS: Las regulaciones pueden ser de tipo CIS o TRANS. REGULACION CIS: Cuando el elemento regulador transcripcional es parte de la cadena polinucleotidica donde se localiza el gen regular, se denomina regulador CIS. Se trata de secuencias especiales del ADN (promotores y Enhancers) En esta categoria estan incluidos: © Promotores. * Secuencias regulatorias potenciadoras (enhancers). * Proteinas activadoras o inhibidoras: acttian mediante su unién a secuencias especificas de reconocimiento al ADN.lnstagrams Perdidaenuba @ La diferencia entre potenciador y promotor es que el promotor debe ubicarse corriente arriba y cerca del sitio de inicio de la transcripcién, mientras que el potenciador puede ubicarse corriente arriba o corriente abajo, en cualquier lugar del gen. PROMOTOR: Secuencia que define el sitio de iniciacién de la transcripcién del ADN. Estan localizados preferentemente corriente arriba (hacia el extremo S) del inicio transcripcional. Sin embargo, algunos pueden ubicarse corriente abajo (hacia el extremo 3) o bien ser de tipo intragénicos. Los promotores més frecuentes son de tipo CCAAT y TATA, denominados CAJAS por su alta conservacién evolutiva. = La caja TATA (abreviatura de timina-adenina-timino-adenina] esta localizada 20-30 pares de bases (pb) corriente arriba (hacia el extremo §) det sitio de inicio de la transcripcién. Presente en procariontes. Numerosas proteinas identificadas como TF IIA, B, C, etc (factores regulatorios de la ARN polimerasa II) interactiian con la caja TATA. — El promotor CCAAT reside 130 pb corriente arriba (hacia el extremo §}) del inicio transcripcional. La proteina denominada C/EBP (CCAAT-Box/Enhancer/binding/protein) se une a esta secuencio. = Otra secuencia regulatoria incluye a la caja GC. El numero y tipo de elementos regulatorios varia segun cada ARNM. ENHANCERS: Secuencias potenciadoras o aumentadoras. Son secuencias del ADN que pueden localizarse corriente arriba o abajo del gen a regular, situadas a miles de pares de bases con respecto al promotor y ADN sobre el cual ejercen los acciones activadoras. En general, una secuencia regulatoric potenciadora o enhacer regula la frecuencia con la que se realiza el proceso transcripcional.lnstagrams Perdidaenuba @ La molécula de ADN se dobla en asa para permitir la aproximacién de estas Zonas alejadas de la doble hélice y ubica a la proteina activadora unida al “enhancer”. REGULACION TRANS: Cuando los elementos regulatorios son de naturaleza y origen diferente a lo secuencia genética a controlar, ta regulacién es de tipo TRANS. Aqui se incluyen: * Factores de transcripcién generales/basales * Factores de transcripcién histoespecificos * Proteinas regulatorias con capacidad de unién al ADD Para un mismo gen pueden existir varias secuencias regulatorias. También existen reguladores de accidn opuesta (silenciadores 0 amortiguadores de la transcripcién). EQUE ES UN FACTOR DE TRANSCRIPCION? Los factores de transcripcién son proteinas que participan en la regulacién de la transcripcién del adn pero no forman parte de la ARN polimeraso. Pueden actuar reconaciendo y uniéndose a secuencias concretas de ADN o uniéndose directamente a lo ARN polimeraso. Estos pueden ser: © Basales: son los componentes del complejo de transcripcién basal y son necesarios para la transcripcién de cualquier ARN. * Histoespecificos: se unen a regiones especificas promotoras/reguladoras de los genes y regulan el grado de transcripcién desde el complejo de transcripcién basal. Ambos tipos de proteina se unen a secuencias en el surco mayor del ADN. PROTEINAS REGULATORIAS CON CAPACIDAD DE UNION AL ADN: Se consideran 3 modelos de interaccién proteina-ADN. Estos so! © Hélice-Giro-Hélice:esta clase de proteinos a menudo contiene una regién rica en aminodcidos basicos localizada en el extremo amino terminal que le permite su unién a secuencias del ADN reconocides especificamente. * Dedo de guante (Zine-Finger): su nombre deriva de la forma que adoptan segmentos de unos 30 aminodcidos de estas proteinas reguladoras. En el mismo observamos cémo un atomo de Zn enlaza las cadenas laterales de dos histidinas y dos cisteinas. Generatmente son varios “dedos de Zinc” los que se unen al sector correspondiente del ADN. Ejemplos de este tipo de proteinas reguladoras son: receptores nucleares de hormonas esteroides. © Cierre de leucina: proteina dimérica. Cada mitad de la cremallera de leucina es una corta alfa hélice con un residuo de leucina cada siete porciones, que se encuentra en contacto con las leucinas de la otra hélice cada dos giros.lnstagrams Perdidaenuba @ Las otras dos alfa hélices de cada cadena tienen cargas positivas e interaccionan con el ADN. Las interacciones entre las leucinas son hidrofébicas y se separan con facilidad. La especificidad involucrada en el control de la transcripcién requiere que las proteinas reguladoras se unan con alta afinidad ala regién correcta del ADN. ‘Helix - Tur - Helix fs 7 MEMBRANA NUCLEAS La regulacién de la exoresién génica se realiza por: * Membrana nuclear: en eucariotas la membrana nuclear separa fisicamente la transcripcién génica de la traduccién. Ya que los ribosomas sélo existen en el citoplasma. Si el ARNm no sale a citoplasma no hay sintesis proteica. * Procesamiento del ARNm: 1) El proceso de corte y empatme (splicing) buede producir diferentes ARNm del mismo pre-ARNm. 2) Lo adicién del CAP en el extremo S'y de la cola poli estabilizar al ARNm. 3) Regulacién de la estabilidad o degradacién del ARN en el citoptasma: a mayor estabilidad, mayor sintesis proteicay ala viceversa 4) Los pequefios ARNs regulan la estabilidad del ARNm y lo traduccién 0 no a proteinas segtin las necesidades fisiolégicas de las células. al extremo 3° CANCER: Grupo de enfermedades en las que las células crecen de manera anormal y forman un tumor maligno. Las células malignas son capaces de invadir los tejidos circundantes y metastatizar (viajar a otros lugares del organismo donde establecen zonas secundarias de crecimiento),lnstagrams Perdidaenuba @ Este patrén de crecimiento aberrante es el resultado de mutaciones en genes que regulan la proliferacién, diferenciacién y supervivencia de las células. Debido a estos cambios genéticos, las células malignas ya no responden a sefiales que regulan el crecimiento de las células normales y es asi que inician su crecimiento indiferenciado. Las mutaciones que provocan céncer se presentan en cierta clase de genes, incluyendo: * Los que regulan la proliferacién y diferenciacién celular. ¢ Aquellos que inhiben el crecimiento. * Los que dirigen la célula hacia la apoptosis (muerte programada). * Aquellos que reparan el ADN dafiado, Las mutaciones que provocan cancer a su vez pueden ser: Con ganancia de funcién — protoancogenes que dan origen alos oncogenes. Estos son los relacionados con la transduccién de sefiales y la progresion del ciclo celular. Estas mutaciones con ganancia de funcidn pueden afectar a: factores de crecimiento y sus receptores, RAS. (proteina de unién al GTP), factores de transcripcién, ciclinas y proteinas que las regulan y microARN (que regula a las proteinas que inhiben el crecimiento). * Con pérdida de la actividad de una proteina > genes supresores de tumores, Estas mutaciones incluyen al: 1) PS8: vigila el dafio al ADN y detiene la progresién del ciclo celular hasta que el dafio se haya reparado. 2) Proteinas del gen retinoblastoma (Rb): el cual regula el combio de fase de Gla. 3) Reguladores del RAS. 4) MicroARN: que regula sefiales que promueven el crecimiento. Los genes que contribuyen a la oncogénesis pueden ser de dos tipos: Protooncogenes: Gen celular que normalmente codifica una proteina reguladora y que por un simple cambio de bases (mutacién) puede convertirse en.un oncogen. ~ Normaimente los alelos de un proteoncogen especifican a sintesis de constituyentes que, a manera de sefiales, desde el exterior activan genes relacionados con el crecimiento celular dentro del nticleo. Ejemplo: proteino traductora de sefiales unida a la membrana Las células normales humanas contienen secuencias de ADN semejantes a las de los oncogenes virales, lo que sugiere que los virus incorporan genes celulares en sus genomas durante su paso a través de las células. — Un oncogen es un gen que produce céncer y se refiere a cualquiera de varios genes mutantes que hacen que una célula, hasta hace poco fisiologicamente normal, tenga una proliferacién rapida e incontrolada,lnstagrams Perdidaenuba @ — Los protooncogenes se activan a oncagenes por diversos mecanismos: « Insercién de un promotor: el promotor, como nombramos anteriormente, es una secuencia de nucledtidos que define el sitio de inicio de la transcripcién del ADN. Los promotores se insertan corriente arriba del sitio de inicio de la transcripcién del ADN, hacia el extremo S' Algunos retrovirus pueden insertar parte de su genoma viral en una célula huésped. La secuencia de nucledtidos que integra al genoma huésped y que se encuentra en cada extremo de un elemento viral se denomina RTL o repeticidn terminal larga. Esta esta implicada en el proceso de integracién. La RTL pueden actuar como promotores de pratooncogenes, el cual se transforma inmediatamente en un oncogen. El resultado es que estas secuencias RTL se transcriben parcialmente formando un ARNM, el cual por transcripcién reversa formard el ADN complementario que daré origen al ADN bicatenario modificado. myc 5 virus protooncogen RTL ARNm * Insercién de un amplificador: La insercién de un amplificador puede ser corriente arriba 0 abojo del sitio de inicio de la transcripcién del ADN. Muchas veces algunos virus pueden insertarse actuando como amplificadores, de tal manera que el amplificador viral puede estimular la transcripcién del oncogen a partir del promotor del mismo. myc ta insercién del we amplificador puede ‘protooncogen) ser corriente arriba 0 4; corriente abajo. ——|-- t RTL ~ AMPLIFICADOR VIRAL ARNm El amplificador viral puede estimular la transcripcion: del oncogen a partir de! promotor del mismo. « Translocacién cromosémica: la translocacién es un tipo de anomatia cromosémica en la que un cromosoma se rompe y una parte de él vuelve a unirse a un cromosoma diferente.lnstagrams Perdidaenuba @ Este tipo de anomalias cromosémicas se suelen abservar en cénceres de la sangre, como leucemias 0 linfomas. En ellos se producen proteinas aberrantes como consecuencia de esta translocacién de material genético. Un ejemplo de translocacién es el cromosoma filadelfia: El intercambio de ADN entre cromosomas ocasiona la formacién de un nuevo gen (oncogén) llamado BCR-ABL. Este gen produce la proteina BCR-ABL, la cual es un tipo de tirosina quinosa. Esta proteina causa que las células de la leucemia mieloide crénica (LC) crezcan y se dividan sin control. Esta translocacién, entre cromosomas 9 y 22 da como resultado un cromosoma 22 mds corto de lo normal. Este nuevo cromosoma anormal se denomina cromosoma filadelfio, este favorece el crecimiento indiferenciado y de alguna manera anérquico de las células de la progenie leucocitaria generando la leucemia mieloide crénica. Este cromosoma se encuentra en las células leucémicas de casi todos los pacientes con LCM. Cromosoma 9 alterado — una ea ete — semis romosere 4 — cpm = ay i- > a eon se — a a a J cancergov Mutacién en un punto: Tenemos distintos tipos de mutaciones: puntuales, deleciones e inserciones. Pueden ser generadas por radiaciones, carcinégenos quimicos, etc. Una delecién es un tipo de mutacién genética en la cual se pierde material genético, de un solo par de nuclestidos de ADN hasta todo un fragmento del cromosomo. Rearreglos genéticos ocasionados por la transposicién o translocacién de un protooncogen llevan a la amplificacién de un protooncogen que permite la produccién de mayor cantidad de proteinas. « Amplificacién génica. ONCOGENESIS: Modelo experimental de oncogénesis:vetagon reraseonta En ambos casos la aparicién del cdncer puede estar determinado por la aparicién de protooncogenes o bien por la disminucién de la actividad de genes supresores de tumores, o bien por ambas circunstancias. = En el primer caso vernos como una mucosa colénica, ante una disminucién de la actividad de genes supresores de tumores sufre modificaciones al comienzo sutiles. Luego aparece un adenoma temprano, posteriormente un adenoma tardio y finatmente céncer de colon. = En el segundo caso la infeccién por HPV va realizando modificaciones en la mucosa del cuello uterino transformando a la misma en lesiones escamosas intraepiteliales llamadas SIL. Al comienzo de bojo grado, LGSIL, y luego de alto grado, HGSIL. Las HGSIL son la antesala en la oparicién del céncer de cuello uterino vinculado a la infeccién por HPV. mee occ. 1s3 Norma Moenat Early Le Cancer Colon, Change Aéecine Adenoma, Ns > Pememane_ —b Tore pre Ove wv wlecen Lesién escamosa intraepitelial de bajo + (UGSIL) y alto grado (HGSIL) wd Normat ascus Lost. nos, MODIFICACIONES CELULARES POR CANCER: Las modificaciones celulares generadas por el cdncer tienen su accién tanto sobre el nticleo como sobre el citoplasma. = Anivel del nticleo se produce la modificacién de proteinas asociadas al ADN, modificaciones del ARNt y patrén enzimatico diferenciado. = Anivel del citoplasma se produce la sintesis y secrecién de antigenos oncofetales, otros antigenos asociados a tumor, produccién de isoenzimas, etc Todas estas modificaciones traen como consecuencia: * Aparicién nuevos antigenos Pérdida de antigenos, importantes para el reconocimiento celular. Modificacién de glicoproteinas. Modificacién de la adhesividad e inhibicién de contacto. Modificacién del transporte. Alteraciones de la permeabilidad.lnstagrams Perdidaenuba @ * Modificacién de la fagocitosis Enzimas superficiales modificadas. RETROVIRUS DE ARN: El retrovirus de ARN se ha asociado con el desarrollo de cancer en los seres humanos, =e Unfoma No Hodgkin HTVL-1: produce una proteina llamada proteina TAX que acttia como un coactivador transcripcional. TAX activa a los protooncogenes celulares c-cis y c-fos, con lo cual altera los controles normales de la proliferacién celular y lleva a la malignidad. Por ende, tax se comporta como un oncogen viral sin una contraparte en el genoma de la célula hospedadora El resultado es la produccién de un linfoma de células T. VIH: En caso dela infeccién por el virus de inmunodeficiencia humana, VIH. Lleva al desarrollo de la enfermedad neoplasica a través de varios mecanismos. = La infeccién por VIH causa inmunodepresién. Como consecuencia, una pérdida de la supervivencia tumoral mediada por el sistema inmunolégico. = Los pacientes infectados con VIH generalmente tienen la capacidad de producir un factor de transcripcién denominado proteina TAT. Esta proteina TAT activa la tronscripcién de los genes de las interleuquinas 6 (IL4) y 10 ((L10) en las células T infectados. Por otro lado, tanto la interleucina 6 como lo interleuquina 10 actuan como factores de crecimiento que propician la proliferacién de células T, y por tanto el incremento en la produccién de las mismas que lleva al desarrollo de un linfoma conocido come linfoma Ne Hodgkin, que es una enfermedad de los ganglios linfaticos. VHC: retrovirus, virus de la hepatitis C. Es capaz de producen hepato-carcinoma en sujetos infectados.Instagram: Perdidaenuiba @ APOPTOSIS: Muerte celular programada que lleva a lo destruccién de las células dafiadas que no se pueden reparor. Consta de tres fases. * Fase de inicio: desencadenada por sefiales externas o liberacién mitocondrial del citocromo C1. Fase de integracién de la seal. Fase de ejecucién. La apoptosis esté regulada por un grupo de proteinas de la familia BCL-2, la cual consta tanto de factores pro como antiapoptéticos. — Las célulos cancerosas han desorrollado mecanismos para evadir a apoptosis. MARCADORES TUMORALES: Las células tumorates pueden producir y tiberar ala circulacién sanguinea sustancios quimicas caracteristicas, denominadas marcadores tumorales que dependen de su fenotipo maligno. Los marcadores tumorales pueden ser clasificados en: PRODUCIDOS ASOCIADOS AL POR EL TUMOR PROCESO MALIGNO ‘SUSTANCIAS PRODUCTOS ENZIMAS 0 ange | | | Eee | ee El marcador tumoral circulante ideal deberia: * Encontrarse en relacién directo con la presencia del proceso maligno. © Correlacionorse con ta maso tumoral. * Permitir ofirmar el tipo, la localizacién y el estadio del turmo. © Posibilitar un pronéstico. 4COMO DETECTO UN TUMOR? = Marcadores tumorales.lnstagrams Perdidaenuba @ + Utilizando métodos fisicos de diagnéstico pueden detectarse tumares que alcanzaron 1cm (109 células) mientras que con la utilizacién de métodos inmunolégicos ‘in vitro” pueden comprobarse la existencia de 106 células. ALFA-FETO-PROTEINA Es una glucoproteina de PM 70000 que se sintetizo en el higado fetal y pasa al suero materno a través del liquido amnidtico. Su elevacién aparece en: * Hepatocarcinoma: secundario a patologias como la cirrosis hepética, « Tumores de células germinales. ANTIGENO CARCINO-EMBRIONARIO (CEA) Glucoproteina de PM 180000. Durante el desarrollo embrionario es sintetizada en el tracto gastrointestinal y en el péncreas. De alli pasa ala circulacién. Su secrecién aumento en: * Carcinomas de colon, recto, estémage, pancreas, higado, mama, ovario. y bronquio. * Este también puede aparecer aumentado en enfermedades benignas como: Colitus ulcerosa, hepatitis, procesos inflamatorios, cirrosis y grandes fumadores. No es un marcador util para el screening ni para el diagnéstico, ya que sélo 40 al 0% de los pacientes con tumores productores de CEA presenton valores elevados. = Screening: prueba de cribado o rastreo (en inglés, screening) que se le realiza a la embarazada para detectar posibles alteraciones genéticas del feto. Es una prueba no invasiva, porque no se penetra en el itero, que se reclizo a partir de uno muestra de sangre de la madre. CA18-3 Marcador asociado al céncer de mama. Se utiliza clinicamente para: Control evolutivo para determinar la aparicién de metastasis del intervalo libre de la enfermedad. * Monitoreo de la terapia para evaluar la respuesta. CA125 Marcador asociado al céncer de ovario y puede detectarse en el 80% de los casos. Valores superiores a 35 ul/ml excluyen la necesidad de laparoscopia para confirmar el diagnéstico. CA19-9lnstagrams Perdidaenuba @ Se asocia al carcinoma del tracto gastrointestinal, pancreas, estémago, colon y recto, Su determinacién es util, tanto para diagnéstico como para seguimiento.Instagram: Perdidaenudd @ Biogui. 11-14 Técnicas de Biologia Molecular y laboratorio clinico Introduccién: La manipulacién de una secuencia de ADN y lo construccién de molécules quiméricas (por ingenieria genética) brindan los medios adecuados para estudiar cémo funciona un segmento especifico de ADN. Lo comprensién de esta tecnologia es importante para: 1. Establecer las bases moleculares de enfermedades genéticas 2. La produccién de proteinas humanas en abundancia con fines terapéuticos (insulin, hormona de crecimiento, eritropoyetina) 3. La obtencién de proteinas para vacunas (hepatitis B) y para pruebas diagnésticas (HIV/SIDA) 4, El diagnéstico de enfermedades existentes y prediccién de riesgos para desarrollar otros padecimiento 5. Lamedicina forense 6. El desarrollo de terapias génicas para tratar enfermedades. EComo se estudia el ADN? La tecnologia del ADN recombinante comprende el aislamiento y manipulacién del ADN para elaborar moléculas quiméricas o hibridas Para aislar secuencias especificas de ADN, que uno quiere estudiar o reproducir, es necesario realizar cortes en las cadenas del dcido nucleico. Por ese motivo utilizamos enzimas de restriccién, que son enzimas que cortan las cadenas de ADN en sitios especificos. Son endonucleasas que cortan el ADN en secuencias especificas dentro de la molécula, que generalmente corresponden a secuencias palindrémicas. Ejemplo: CGATCGGCTAGC (se leen igual en ambas direcciones). Deben su nombre ya que en su presencia algunas bacterias restringen el crecimiento de ciertos virus bacterianos, liamados bacteridfagos. Cada una de las enzimas corta una secuencia especifica de doble cadena de ADN de 4 a7 pares de bases. Estas enzimas cortan el ADN de cualquier fuente en piezas cortas y en secuencias especificas, en contraste con muchos métodos que lo hacen al azar. Reciben su nombre a partir de la bacteria de la cual se aislan: Eco Ill, E. coli - Hind |: Haemophilus influenzae. Los cortes que introducen estas enzimas pueden ser: ¢ Romos: cortamos en dos mitades exactamente iguales. © Cohesivos: dos pedazes irregulares que después se unirén por enzimas especificas. Plasmido circular de ADN. Un plasmido es una pequefia molécula de ADN circular que a menudo se encuentra en bacterias y otras células. Los plasmidos son separados del cromosoma bacteriano y se replican independientemente de ella. vetagoo erddzents Dvetagon Terddeenss D La endonucleasa de restriccién introduce 2 cortes en este plasmido circular de ADN, dejando los extremos cohesivos. En la brecha restante insertaremos la parte de ADN que nosotros queremos replicar y que va a ser obtenida del ADN humano. Luego tenemos el ADN humano con una secuencia especifica de bases que nosotros queremos copiar y pegar dentro del plasmido bacteriano. Exactamente igual que antes, las endonucleasas de restriccién cortaran el seamento que nosotros queremos modificar y, posteriormente, ADN ligasas se encargoran del pegado y del sellado de las nueva bases incorporadas al plasmido bacteriano El producto final es un hibrido que se conoce con el nombre del ADN recombinante. es el plésmido que ha recibido material genético extra proveniente del ADN humano. Técnicas de transferencia de bandas La visualizacién de un fragmento especifico de ADN o de ARN, de entre muchos miles de moléculas contaminantes requiere de la convergencia de varias técnicas, las cuales se conocen en su conjunto como técnicas de transferencia de bandas. Estas técnicos son: Southern-Blot (ADN), Northern Blot (ARN), Western Blot (proteinas). Estas técnicas son utiles en la determinacién de cudntos copias de un gen se encuentran en.un tejido determinado, o si existen grandes alteraciones en un gen. En una transferencia de bandas el ADN, aislado de una linea celular o de un tejido, es digerido por una o més enzimas de restriccién. Esta mezcla se coloca en un gel de agarosa 0 de poliacrilamida y se expone a una corriente eléctrica directa. El ADN, que tiene carga negativa, migraré hacia el dnodo. Los fragmentos més pequefios se mueven més répido. Después de un tiempo apropiado, el ADN se desnaturaliza por la exposicién a una solucién alcalina ligera y seré transferido a un papel de nitrocelulosa y nylon, en una réplica exacta del patrén sobre el gel, por la técnica de bandas disefiada por Southern. ELADN se une al papel, por medio del calor, y el papel después se expone a la sonda de ADN marcado, con lo cual se hibridan los fragmentos complementarios sobre el papel filtro. En el caso del Western, se adiciona un anticuerpo especifico marcado. Después del lavado, el papel se expone a una placa de rayos X, la cual se procesa para revelar las bandas especificas correspondientes a los fragmentos de ADN que reconocieron las secuencias en la sonda del ADN. Esto es lo que se llama autorradiografia. Reaccién en cadena de la polimerasa (PCR) Es un método enzimético para el copiado repetido y, de esto manera, amplificado de las dos cadenas de ADN que forman una secuencia génica particular (fotocopias del ADN) Lo especificidad del método se basa en el uso de dos oligonucledtidos iniciadores que se hibridan con secuencias complementarias en cadenas opuestas del ADN y flanquean la secuencia blanco. vetagoo erddzents Dvetogon Tertderna D * Secuencias tan cortas de ADN como de 50 a 100 pb y ton largas como de 10 kb, se pueden amplificar. * Veinte ciclos proporcionan una amplificacién de 106 y 30 ciclos de 109. El método permite que el ADN de una sola célula, de un foliculo piloso o de esperma, se amplifique y anolice. De alli, su aplicacién en medicina forense. Lo PCR tombién se utiliza para: Detectar agentes infecciosos, en especial, virus latentes Hacer diagnésticos genéticos prenatales Detectar polimorfismos alélicos Establecer el tipo especifico de tejido para trasplante Estudiar la evolucién biolégica Reno Técnica_de la PCR: La muestra de ADN se calienta para separar las dos cadenas (se desnaturalizan), permitiendo que los iniciadores se unan al ADN, y cada una de las cadenas pueda ser copiada mediante la ADN polimerasa, comenzando en el sitio del iniciador. La técnica tiene 3 etapas 1. Desnaturalizacién: dura aproximadamente 1 minuto. Las dos hebras de ADN son separadas aproximadamente a 94°C. Recocido o templado: introduccién de los iniciadores para cada una de las cadenas. Extensién: tras 45 segundos de adaptacién, a los 2 minutos y a 72°C ya comienzan o reolizor la extensién de ambas cadenas. Adicionan solamente desoxinucleotidos trifosfatados. 2 3. De esta manera vamos a tener una amplificacién exponencial Para el ciclo n°35, tendremos aproximadamente 68 billones de copias. Tecnologia del ADN recombinante La tecnologia del ADN recombinante se utiliza, ademés, en el andlisis molecular de las enfermedades. Esto permite el estudio de: a. Variaciones génicas normales. Las variaciones normales y heredables en la secuencia del ADN en regiones no codificantes se denominan polimorfismos y ocurren ‘aproximadamente en 1 de cada 500 nucledtidos. Su estudio es de interés en medicina forense 0 bien, para el estudio de genes especificos. b. Variaciones génicas que causan enfermedades. Mutaciones puntuales pueden generar proteinas alteradas. Ej: anemia de células falciformes; una mutacién genera cadenas de hemoglobina anémalas que precigitan en la sangre generando trombosis. © Una sustitucién de T por A en el sexto codén del gen de la alobina se traduce en el cambio de A por U en el ARNm correspondiente. El codén alterado especifica valina por glutamico y esto causa uno alteracién estructural de la molécula. © La mutacién génica genera una cadena beta anémaia en la cual vamos a encontrar valina por glutémico. En el momento de desoxigenarse, la hemoglobina anémalac. vetogon Tertderna D (hemoglobina S) se forma un precipitado de hemoglobina que tiende a acumularse en los vasos sanguineos generando trombosis que puede llevar a la muerte. © La supresién de un fragmento critico de ADN, el rearreglo del ADN dentro de un gen © la insercién de un fragmento de ADN en una regién de codificacién o requladora pueden cambiar la expresin génica y traducirse en enfermedad. Este es el caso que ocurre con la B-talasemia (anemia del mediterraneo) en la cual existe la supresion de un fragmento critico del cromesoma 1, el gen de la globino, que codifica la sintesis de las cadenas beta de la hemoglobina. Consecuentemente, se sintetizan hemoglobinas que adolecen de cadenas beta, por ejemplo, la hemoglobina 2 0 fetal Diagnéstico prenatal Si se conoce la lesién genética y se dispone de una sonda especifica, es posible el diagnéstico prenatal. El ADN de células obtenidas de 10 ml de liquido amniético (0 por biopsia de vellosidades coriénicas) puede anolizarse por Southern Blot Animales transgénicos. Se basa en lo introduccién de un nuevo ADN en células germinales por su inyeccién en el nucleo del huevo. Un porcentaje de genes inyectados en un dvulo fertilizado de ratén se incorpora al genoma y se encontraré tanto en células sométicas como germinales. Estas modificaciones pasordn a la descendencio. Terapia génica. Las enfermedades causadas por la deficiencia de un producto génico estén sujetas a una terapia de reemplazo. La estrategia es clonar un gen en un vector que seré facilmente capturado e incorporado al genoma de una célula huésped. © Las células precursoras de la médula dsea son ideales para este propésito ya que se supone que volverén a establecerse en lo médula y alli se replicarén. Ej: terapia génica de la B-talasemia,vetogon Tertderna D Bioquimica 14 Bases bioquimicas de la endocrinologia METABOLISMO TIROSINA: - Sintesis de catecolaminas: 0 Sa Thstne 07a eovenne nsaos Yoo mn Yoon a i ondrasina ‘ona ‘Sintesis de serotonino NHy* 1 cHCHCoO- O) I ” “Tiptétano % tetrahidrobiopterina nein “On , meg Sthidroxitriptfano HORMONAS TIROIDEAS: vetagon rena OD recom | roars ers a ee 7 ch dg sh OPT aw HO. E Lt cH,Coo- N 4 Acido S-hidroxiineolacético 0, Ma Co" Schidroxitripiamina (serotonina)vetogon Tertderna D - Tipo de hormona: amina, deriva de un aminoacido especifico + L-Tirosina. Esto determina que sean hidrosolubles. = Sitios de praduccién: Tiroides y tejido extra tiroideo (el 80% de la T3 se produce en tejidos extratiroideos). - Actuan sobre receptores intracelulares e intranucleares, a diferencia del resto de las hormonas hidrosolubles. = Alser hidrosalubles no pueden atravesar la bicapa lipidica de forma directa; requieren de proteinas transportadoras para poder salir de la célula y llegar al torrente sanguineo. - Requieren para transportarse en medios acuosos proteinas de transporte: TBG (especifica), prealbumina, albtimino. - Vida media: {a T4 tiene una vida media de 7 dias; ta T3 tiene una vida media de 24 horas. Esta diferencia est determinada por la afinidad que tienen las hormonas tiroideas por las proteinas de transporte, de manera tal que T4 tiene més afinidad por estas proteinas y esto le confiere la diferencia en su vide media Metabolismo hormonal tiroideo El foliculo es la unidad funcional de lo glandule tiroides y esté formado por una capa de células epiteliales que rodean un nticleo no celular de material proteindceo (coloide). Biosintesis de hormonas tiroideas 1. Captacién y concentracién de yoduros inorgdnicos: en el polo basal (de la célula folicular un transportador de yoduro llamado NIS facilita a entrada de yoduros, Para que ocurra esta etapa es muy importante la concentracién de yodo. Estimulado por ta TSH. 2. Oxidacién de los yoduros, realizado por la peroxidase tiroidea en la luz foliculor. 3. Yodacién de la L-tirosina: yodo incorporado a residuos tirosile de la tiroglobulina, para formar 3 monoyodotirosina (MIT) o bien diyodotirosina (DIT), realizado por la peroxidasa tiroidea. 4. Acoplamiento de los yodotirosilos: peroxidasa tiroidea cataliza la formacién de: = Tetrayodotironina o tiroxina (T4) Tirosinas con DIT + DIT. = Triyodotironina (T3) tirosinas con MIT + DIT. 5. Captacidn de coloide por la TSH: La TSH, a través de la activacién de una adenilciclaso, se va a formar AMP ciclico y es AMP ciclico va a favorecer la captacién de coloide dentro de la célula. La captacién del coloide va a permitir que proteasas, presentes en dentro de la gléndula tiroides, realicen la liberacién de las hormonas T3 y T4 a la sangre. Asi, aumenta con ropidez la liberacién T3 y T4; ademés, aumenta el transporte de yoduros, la sintesis de tiroglobulina y la sintesis de peroxidasa tiroidea. 6. Liberacién de hormonas tiroideas a la sangre: la tiroglobulina depositada en el coloide folicular contiene una reserva muy importante de hormone tiroidea. Para su liberacién, se produce la endocitosis del coloide, con digestién enzimética de tiroglobulina y difusidn de 3 y T4 hacia el LEC. — La produccién de T4 cuantitativamente es mucho més grande que la litveracién de T3.vetogon Tertderna D — Elorigen de T3 es 80% de caracter extratiroideo. ~ En los tejidos periféricos, a T4 puede ser transformada en 13 por medio de enzimas desyodinasos. + T3 es metabélicamente activa y tiene una mayor penetracién los receptores nucleares. + Fuente de yoduros esté permanentemente abastecida, ya que tanto el MIT como DIT pueden desyodinarse y, de esa manera, utilizarse como una fuente accesoria para la reserva de yoduros dentro de lo célula tiroideo. Capilar Tiroidocito Coloide I- il i Oxidaci6n liberacion TG 46 v = it —_ I TG ee y Organificacién Liberaci6n Sintesis de TG de hormonas . AIG Desyodacion @ Acoplamiento Metabolismo del yodo: - La fuente natural del yodo la constituyen los alimentos (pescados, mariscos, leche, frutas, verduras, sal yodada) y el agua. - Elyodo es la principal materia prima para producir hormonas tiroideas. - Se comprende que el contenido en yodo de la T4 representa el 65% y el de la T3 el 58% del peso molecular. = Se requiere alrededor de 100 j19/dia de yodo inorgénico para una sintesis adecuada de hormona tiroidea. Ts ¥.. e Te <7 pe —$« Dr Te Pec) lnstagrary Perdidaenubavetogon Tertderna D Estructura de las hormonas. jeas T4 13 RT3 Produccién diaria: | 80 ug 30 ug 30 ug Suero: 5/12 uo/dl 80-180 30 no/dl Origen tiroideo: 100% 15% <10% Distintos factores (nutricionales y medicacién) hacen que los tejidos sinteticen T 3 reversa (rT 3), que es inactiva, en vez de T3. Asi, regulan el estimulo que reciben por parte de la T4 libre presente en el LEC de acuerdo con sus necesidades. Factores que disminuyen la conversién de T4 a T3: - Fisiolégicos: periodos fetal y neonatal temprano, ayuno prolongado. - Patolégicos: desnutricién, enfermedades sistémicas, insuficiencia renal y hepatica, internaciones protongadas. = Farmacolégicos: ontitiroideos (propiltiouracilo), glucocorticoides, sustancias iodadas (amiodarono), betabloqueantes. Transporte plasmético de hormonas tiroideas: vetagen rertdsena DInstagram: Perdidaenudd @ La unién de las hormonas tiroideas a proteinas de transporte evita su pérdida por el filtrado glomerular, con lo que se produce una prolongacién de la vida media de las hormonas tiroideas que alcanza a siete dias para la TA y 24 horas para lo T3. Proteinas de transporte: TBG TBPA, Alobumina Vida media. S dias 2 dias 20 dias Afinidad por T4 Elevado Moderada Bajo Afinidad por T3 20 veces menor que _| Muy baja, Bajo por T4 % de T4 unida 70% 8-12% 10-15% % de T3 ubuda 60% 46% 15-20% Lo T4 circulante se encuentra unido en un 9296% a proteinas plasméticas (TBG, TBPA y albumin). Esta T4 unida a proteinas no difunde hacia los tejidos, y constituye un reservorio en equilibrio con la T4 libre (que pasa a los tejidos y se activa por via metabélico), Factores que modifican la concentracién de TBG: Aumento de TBG Descenso de TBG Desplazamiento de la union deT4 a TBG Embarazo/ periodo Andrégenos Antiepilépticos Neonatal Estrégenos Glucocorticoides en dosis | AINES elevada Hepatitis aguda y crénica__| Insuficiencia hepatica y Diuréticos activa renal Metabolismo periférico de las hormonas tiroideas Desyodaso tipo I: - Sitio: Sy 5, ~ Tejidos: tiroides > higado > rifén. - Sustroto:RT3 > 74 >T3. - Funcién: sintesis tiroidea de T3, eliminar RT3 = Inhibicién por PTU: sensible. Desyodasa tipo 2: - Sitio: §. Inhibicién por T4 alta: no - Tejidos: hipéfisis, cerebro, placenta. eatagran Perdidaenuba @vetogon Tertderna D Sustroto: RT3 > T4>T3. - Funcién: sintesis local de T3 en tejidos. - Inhibicién por PTU: resistente. Inhibicién por T4 alta: si Desyodasa tipo 3: = Sitio: §. - Tejidos: cerebro > placenta > higado > piel. - Sustroto: T3 > T4, - Funcién: inactivacién de T4 y de T3. - Inhibicién por PTU: resistente. Inhibicién por T4 alta: no. Acciones metabdlicas de las hormonas tiroideas: = Absorcién intestinal de glucosa. - Captacién de glucosa por insulina - Glucogendlisis y gluconeogénesis. - Degradacién de la insulina. - Protedlisis (en alta concentracién). - Lipédtisis. - Catabolismo del colestero.L La hormona tiroidea aumenta: calorigénesis (por aumento en la sintesis de termagenino) y el consumo de 02, concentracién intraeritrocitaria de 23 DPG, frecuencia cardiaca, presién arterial diferencia, ritmo evacuatorio > up regulation receptores BI adrenérgicos + accién directa sobre miosinas. Regulacién hormonal tiroidea El gje tiroideo es considerado un ee cldsico: esté conformade por una gléndula periférica, en este caso la tiroides, y que estd bajo la regulacién del hipotélamo e hipdfisis. HIPOTALAMO: ‘+ Factor estimulador: TRH. Se produce en el niicleo paraventricular del hipotdlamo. * Factor inhibidor: SS + somatostatina), Se produce en el nucleo paraventricular del hipotdlamo. —+ La TRH estimula a las células de la hipéfisis, tirotropas, encargadas de producir TSH. — La $S tiene un efecto inverso, inhibiendo la actividad de la célula tirotropa. HIPOFISIS: Produccién de TSH. Liberada la TSH esta estimula a las células foliculares de la glandula tiroides para la produccién de las hormonas tiroideas.vetogon Tertderna D GLANDULA PERIFERICA: Mayoritariamente la hormona que se produce es 74, recordando que la TS tiene un origen 80% extratiroides. - Los niveles intracelulares de T3, provenientes en mayor medida dela 5’desyodinacién de la T4 circulante, constituyen el freno principal para la secrecién de TSH. = T3es considerada la hormona activa, tiene un mayor % de hormona libre, yes la responsable de generar el feedback negativo + este seré un feedback negative largo que tendrd impacto tanto sobre la hipéfisis como en el hipotdlamo regulando el funcionamiento del eje tiroideo. - Esta regulacién que se ejerce mediante receptores (TRb2) es exquisitamente sensible @ las concentraciones circulantes de 74 libre. Cy 7 ™ B Disminucién de la secrecién de TSH: Somatostotina, dopaming; Interleukinas; Glucocorticoides en altas dosis. Aumento dela respuesta a TRH Estrégenos. Acciones bioldgicas de la TSH - Transporte de yoduros. = Sintesis de tiroglobulina y peroxidasa tiroidea. - Endocitosis del coloide y de la liberacién de hormones tiroideas. Relacidn entre niveles séricos de TSH y T4 libre eee CT relnstagrams Perdidaenuba @ Semana 15 \ Metaboli¢mo de hormonas estevoideas ESTEROIDES: Lipidos que tienen en comtin el nticleo ciclopentanoperhidrofenantreno. Su principal referente es a molécula de colesterol. Molécula de colesterot: - Tiene 27 carbonos, con un oxidrilo en el carbono 3, una doble ligadura entre los carbonos 5 y 6, sustituyentes laterales en los carbonos 10 y 18, y una cadena lateral en el carbono 17, - Funciones: ~ Funcién estructurat componente de membranas y lipoproteinas plasmaticas. — Funcién metabdlica: precursor de las sintesis de dcidos y sales biliares, hormonas esteroides y vitamina D3, - Alimentos con més 200 mg% de colesterol: visceras, embutidos, fiambres, yema de huevo, manteca y quesos de alta maduracidn. Todos estos alimentos estén proscritos en los pacientes que padecen hipercolesterolemia. Eje hipotélamo hipofisario gléndulas suprarenales: - Hipotélamo:produce un factor liberador de corticotropina (CRF). - Hipdfisis:estimulado por CRF parala sintesis y liberacién de adrenocorticotropina (ACTH). - Gléndula periférica: ACTH actua sobre las gléndulas suprarenoles estimulando la produccién y liberacién de corticoides. Estos corticoides ejercen un feedback corto sobre la hipéfisis y un feedback largo sobre el hipotdlamo. Elestrés es un estimulo para la liberacién de CRF a nivel del hipotdlamo, el cual actuaré sobre la adenohipéfisis estimulando |a liberacién de un precursor — propiomelanocortina (POMC). POMC precursara de ACTH y beta-lipoproteina, las cuales se pueden clivar dando lugar a la alfa-melanocito estimulante y ACTH, la beta-melanocito estimulante y la beta-endorfina, HAN comets ut cs) 0.0K paisa CS) IN OE Acciones fisiol6gicas de ta ACTH Aumento en la secrecién de glucocorticoides por la corteza suprarrenal. Estas hormonas: - Aumentan el catabolismo proteico muscular. lnstagrany Perdidaenuiba @lnstagrams Perdidaenuba @ Inducen las enzimas claves de la gluconeagénesis, sobre todo la piruvoto carboxilasa y la fosfoenolpiruvato carboxicinasa — aumento en la glucemia, por ejemplo en situaciones de ayuno intermedio 0 prolongado. Inducen a la enzima metiitransferasa de la médula adrenal, con un aumento de la liberacién de la adrenalina y asi tenemos los efectos alfa 1, alfa 2, beta 1y beta 2 adrenérgicos: -+ Alfa I: vasoconstricci6n y contraccién de musculo liso genitourinario. = Alfa 2: inhibicién de la secreci6n de insulino. — Beta 1: aumento de las propiedades de la fibra miocérdica y glucogendlisis. = Beta 2: broncodilatacién y vasodilatacién. = Beto 3: efecto predominantemente lipalitico. Superfomilic de receptores esteroides Las hormonas esteroides son hormonas liposolubles, pueden difundir a través de las membranas biolgicas sin necesitar mecanismos de segundos mensojeros. Atravesada la membrana plasmatica, [a hormona esteroide puede tener su receptor tanto a nivel citoplasmatico como a nivel del nucleo. Receptores citoplasmaticos: si el receptor se encuentra en el citoplasma, el complejo hormona-receptor viaja hacia el nticleo y se une ala regién del ADN conocido como elemento sensible a la hormona. Esta regién del ADN esta en franco contacto con el gen promotor, que es el que inicia la transcripcién del ARNm que posteriormente llevard a las proteinas codificadas por dicho gen. Este mecanismo de receptor citoplasmatico es utilizado tanto por los gluco, como por los mineralocorticoides. Receptores intranucleares: es el caso de hormonas como esteroides sexuales y la vitamina D3. El receptor para la hormona se encuentra situado directamente en el nucleo, por lo tanto la hormona atraviesa ta membrana lasmatica, llega a través del citoplasma, atraviesa la membrana nucleoplasmética, y una vez que esté en el nticleo se une al receptor, en un sitio conocido como elemento sensible a la hormona (ESH), Igual que antes el ESH active al gen promotor, el cual produce un ARNm, que después en el citoplasma codificard la sintesis de las distintas proteinas, inducidas por estas hormonas, yo sean sexuales 0 vitamina D3. Transporte colesterol a la mitocondria, proceso mediado primeramente gor la proteina StaR (proteina estrogénica regulatoria agudo). Hidroxilacién: requiere de la utilizacién del citocromo P450, presencia de oxigeno y NADP reducido proveniente de [a via de las pentosas. Todo esto ocurre dentro de la mitocondria de la célula suprarenal. El colesterol sufriré dos hidroxilaciones a nivel mitocondriat: lnstagrany Perdidaenuiba @lnstagrams Perdidaenuba @ = En carbonos 20 y 22, por accién de citocromo P450. Se forma el 20,22 dihidroxicolesterol Oxidacidn: compuesto 2022 dihidroxicolesterol sufre una oxidacién por accién de una liasa denominada 20,22 desmolasa. Asi, sufre el acortamiento oxidativo de 6 carbonos, de manera tal que se formaré una nueva molécula: —+ Pregnenotona, mitad colesterol y mitad progesterona. Los mecanismos generales de formacién de hormonas corticoadrenales implican procesos de hidroxilacién, deshidrogenacién, isomerizacion y acortamiento oxidativo de la cadena lateral. Pregnenolona difunde del interior de la mitocondria al citoplasma para continuar con su metabolismo. Una vez que la pregnenolona esté en el citoplasma, pasa entonces al REL, donde por accién de una delta 4 isomerasa, cambio la posicién de la doble ligadura, que originalmente estaba entre los carbonos 5 y 6,0 las posiciones 4 y 6. Por otro lado, gracias a una 3 beta ol-deshidrogenasa, el oxidrilo del carbono 3, primariamente del colesterol, se transforma en una cetona. = Se forma una molécula de 21 carbonos denominada progesterona. Hidroxilacién: ~ La progesterona se hidroxilard en el carbono 17 primeramente, para formar 17-alfa-hidroxi-progesterona. + T7-alfa-hidroxi-progesterona, por accién de una 21 hidroxilasa, siempre a nivel del REL, se va a transformar en 11-desoxicortisol. 11- desoxicortisol estd libre para ser transportado a la mitocondrio y formar un metabolito activo en estas acciones, que estén relacionadas con el tema de la estimulacién del vomito. ELI desoxicortisol ingresa nuevamente a la mitocondria y por uno T1-beta hidroxilasa se transforma en cortisol. Este cortisol puede transformarse por una deshidrogenasa en cortisona, siempre a nivel mitocondrial. La presencia de oxigeno en el carbono 17 de la molécula, determina que un compuesto tenga accién preponderantemente olucocorticoide. Esta accidn se exalto, si ademas existe oxigeno en el carbono 11, como sucede, por ejemplo, con la molécula de cortisol. Biosintesis de mineralocorticoides Progesterona puede hidroxilarse en el carbono 21, siempre a nivel del REL, para formar la 11-desoxicorticosterona, Este producto va a ingresar al interior de la mitocondria y por accién de una T1-beta hidroxilasa, va a formar el segundo de los glucocorticoides, que es la corticosterona. La corticosterona, dentro de la mitocondria, por una 18 hidroxilasa y una 18-hidroxi-deshidrogenasa, forma la aldosterona, La aldosterona tiene una accién metabdlica predominantemente sobre el metabolismo hidrosalino, en el sentido de producir la retencién de sodio y agua, y la excrecién de potasio. En el caso de la aldosterona, la ausencia de oxigeno en el carbono 17 determina que un compuesto tenga accidn preponderantemente mineralocorticoide. Esta accidn se exalta si ademés existe oxigeno en el carbono 18. lnstagrany Perdidaenuiba @Instagram: Perdidaenuiba @ Transporte de hormonas estercides Los glucocorticoides pueden circular: «Libres (fraccién activa) Unidos a albimine * Unidos a transcortina (alfa-2-globulino) Aldosterona: * No tiene uno proteina especifica de transporte @ Tiene una unién débil a la albtimina Catabolismo de hormonas esteroides En el higado los glucocorticoides son catabolizados, a través de reducciones sucesivas en los corbonos 4, 3 y 20, que se realizan a nivel del microsoma hepatico, se forman los tetra y hexahidro derivados urinarios, conocidos genéricamente con el nombre: 17-hidroxi-corticosteroides urinarios. Biosintesis de andrégenos: via delta § = Biosintesis de androgenos: via delta 5. - Sustancia precursora: pregnenolona, Tiene una doble ligadura, igual que el colesterol, entre los carbonos 5 y 6. - Lasintesis se realiza o nivel del REL, donde la pregnenotona, en primer lugar, se hidroxila en el carbono 17 para formar la 17 alfa hidroxi-pregnenolona. - Lal? alfa-hidroxi,pregnenolona luego, por medio de una 20 hidroxilasa y una 1720 liasa, se transforma en dehidroepiandrosterona o DHEA, que es el principal andrégeno de origen suprorrenal. - DHEA puede eliminarse a través de la orina, 0 bien continuar su metabolizacién por medio de una 17 deshidrogenasa, de una 3 beta hidroxiesteroide deshidrogenaso, complementada con lo accién de una delta 4 isomerasa, y convertirse entonces en androstenediol, el cual por medio de una deshidrogenasa, terminaré dando |a testosterona. Biosintesis de andrégenos: via delta 4 - La biosintesis de andrégenos a nivel de las génadas se realiza por la via delta 4. = Sustancia precursora: progesterona, que tiene una doble ligacura entre los carbonos 4y 5 - La progesterona por una 17 alfa hidroxilasa se transforma en 17 alfa hidroxiprogesterona, - 17 alfa hidroxi-progesterona, por una 20 hidroxilasa y uno 1720 liasa forma lo androstenediona. pp Bissintsis de anargencs: Instagram: Perdideenubs @lnstagrams Perdidaenuba @ - Androstenediona por una 17 deshidrogenasa completaré la sintesis de la misma testosterona - Todo este proceso se realiza a nivel del REL en las génadas. Estructura quimica de la testosterono La testosterona es una hormona esteroide de 19 carbonos. Es el principal andrégeno cuya sintesis se realiza fundamentalmente en el testiculo, en la gldndula suprarrenal, en la placenta, y en muy pequerias cantidades a nivel del ovario. La testosterona puede convertirse en S-alfa-dihidrotestosterona y en estrégenos. La conversién en 5-alfa-dihidrotestosterona ocurre en el higado, foliculos pilosos de la piel y organos accesorios de la reproduccién. La 5-a-dihidrotestosterona es el metabolito activo de la testosterona. Posee el doble de actividad biolégica que la misma testosterona, tiene 19 carbonos, y la enzima que lo forma se denomina 5-a-reductasa y depende de NADP reducido. Acciones metabélicas de los andrégenos Anivel de las génadas: - Participan en el mantenimiento de ta funcién testicular. - Participan en el desarrollo de los érganos accesorios. Metabolismo: - Estimulan el anabolismo proteico. - Estimulan el metabolismo del hueso. - Estimulan la sintesis de eritropoyetino. Catabolismo de los andrégenos Los 17-cetosteroides urinarios: productos finales del catabolism de los andrégenos. La excrecién diaria urinaria de 17 cetosteroides es de 10 mg enla mujer y de 1 mg en el hombre. Son compuestos de 19 carbonos con grupo cetona en posicién 17 y tienen un doble origen: —+ E70 % provienen de la suprarrenal. = El 30 % del testiculo. Los 17-cetosteroides de origen suprarrenal provienen principalmente de la dehidroepiandrosterona (DHEA), que se convierte en el higado en androsterona y etiocolanolona. Los dos ultimos y la DHEA se excretan conjugados, principalmente con sulfato, pero también con acide glucurénico @ través de la orino. Un 10 % del cortisol metabolizado en el higado lo hace a 17-cetosteroides, que tienen la particularidad de estar oxigenados en posicién 11 (se llaman N1-oxi-17-cetosteroides}, ya que provienen del cortisol, que es un esteroide M-hidroxilado. Clinico: El aumento en los niveles de 17-cetosteroides urinarios puede deberse a: tumor suprarrenal, hiperplasia suprarrenal congénita (muy rara), Sindrome de Cushing, cdncer ovdrico o testicular, poliquistosis ovdrica o estrés El principal estrdgeno es el 17 beta estradiol. lnstagrany Perdidaenuiba @vetagon reraseonta En su estructura quimica tiene algunas particularidades: - Enel carbono 3 se encuentra un oxhidrilo, exactamente igual que en el colesterol = Ligaduras alternas que tiene el nticleo A del ciclopentanoperhidrofenantreno - Tiene un oxhidrilo en el carbono 17 - Posee solamente 18 carbonos: - Los andrégenos tienen 19C - Los progestégenos tienen 21C - El colesterol tiene 27C Biosintesis de estrégenos Existen dos caminos para llegar al estradiol: * Apartir de la androstenediona, por una aromatasa, se transforma en estrona, y la estrona por 17 beta hidroxiesteroide deshidragenasa en estradiol * Laandrosteneciona, también por uno 17 beta hidroxiesteroide deshidrogenaso, puede tronsformarse en testosterona, la. cual, por aromatase, termina dando 17 beta estradiol Acciones metabslicas de los estrégenos * Responsables del desarrollo de los caracteres sexuales secundarios femeninos * Favorece en el anabolismo del hueso, y por ende el crecimiento seo Son antagonistas de la accién de la insulina Tanto al higada como la placenta paseen una 16 alfa hidroxilasa, que convierte el estradiol en estriol, que se elimina por orina y puede ser de utilidad para el diagnéstico y seguimiento del embarazo. El producto final del catobolismo de los estrégenos es el estriol, que posee un oxhidrilo en el carbono 3, ligaduras alternas en el anillo A del ciclopentanoperhidrofenantreno, y oxhidrilos en los carbonos 16 y 17. En total, tiene 18 carbonos y 3 oxhidrilos SINDROME DE CUSHING: vetagan rerasaenss @Dlnstagrams Perdidaenuba @ | etrficas ‘Aumento de glucocorticoides ‘Aumerto del catabolismo proteco fe seroes : Hic — —, ven HUEIOS Gastritis, L Ukeras pépticas | iss | Lf ean] mince rojo- vinoses {owconcoctnesis| | Patologicas LT— —{ wirencwcenen ucoue | Deeded moncter Es el conjunto de signos (lo que uno ve) y sintomas (lo que cuenta el paciente) que resultan de un aumento de la funcidn de la corteza suprarrenal. Las posibles causas involucran: Una causa iatrogénica, que tiene que ver con el uso prolongado de corticosteroides (lo mas comun]. Hiperplasia adrenal secundario a un aumento de ACTH, ya sea por macro 0 microadenomas, 0 bien ectépico, como el cancer de pulmén, donde células autonémicas praducen sustancias ACTH-similes. Neoplasias adrenales, malignas o benignas, que pueden provocar la hiperplasia e hiperfuncién de la gléndulo. En el sindrome de Cushing tenemos hipersecrecién de glucocorticoides, mineralocorticoides y hormonas sexuales. Dela hipersecrecién de glucocorticoides, se produce un aumento del catabolismo proteico: Anivel de la piel, la destruccién de fibras elésticas lleva a lo aparicién de estrias atréficas rojo-venosas, ya que los corticoides son vasodilatadores. Anivel del masculo, la moyor movilizacién de aminodcidos, favorece la gluconeogénesis, que produce hiperglucemia secundaria y diabetes al mismo tiemgo. En los huesos, la persistencia del catabolismo proteico hace que la matriz dsea se cataboliza, y eso favorece la osteoporosis y la aparicién de fracturas patolégicas Aumenta el intercambio de sodio y potasio a nivel del SNC, produciéndose episodios de hiperexcitabilidad psicomotriz, que lleva a episodios de psicosis Anivel estomacal, los glucocorticoides aumentan la secrecién de dcido clorhidrico, lo que trae aparejado gastritis y Ulceras pépticas lnstagrany Perdidaenuiba @lnstagrams Perdidaenuba @ SINDROME DE CUSHING Aumento de | aumento de Mineralocorticoides [| esteroides sexuales [ I Retencién de Amenorrea, sodio y agua hirsutismo. Edemas, hipertensién arterial Aumento mineralocorticoides: * La hipersecrecién de aldosterona produce una retencién de sodio y agua que lleva a los edemas y la hipertensién arterial Aumento de esteroides sexuales: @ Lleva a producir amenorrea e hirsutismo. SINDROME DE CUSHING I HIPERGLUCEMIA ‘Aumente de ta DIABETES secrecién de insulina SECUNDARIA LPosENEsss Facies de luna lena Obesided centripeta iba de bifalo El sindrome de Cushing produce hiperglucemio, que lleva ala diabetes secundaria y de una manera produce un aumento de la secrecién de insulino, que llevara a a lipogénesis y a las caracteristicas claves del paciente Cushing = facies de luna lleno, obesidad centripeta y giba de bufalo. lnstagrany Perdidaenuiba @lnstagrams Perdidaenuba @ SINDROME DE CUSHING r CONFIRMACION DIFERENCIACION LOCALIZACION Dossjede cornet | | a, oosajedeacts | [Hipofsera titre Plasmatca fxde ae _} | Bae, | |suprarrenal | erica |ACTH alta s] | TACHRMN Moentione. coma L| race LL Nats, gate LU Race Eetooico & ACTH bale Adrenal bas de supresién El sindrome de Cushing tiene: - DIAGNOSTICO DE CONFIRMACION: se hace por medio del dosoje de cortisol libre urinario (CLU). Generalmente entre las 22 y 23 horas, que es cuando normalmente es esperable los valores mds bajos de los glucocorticoides. - DIAGNOSTICO DE DIFERENCIACION: — Se hace por medio de dosaje de ACTH plasmatico: - Siel paciente presenta ACTH alta = el origen es hipotalémico-hipofisario © ectépico. - Siel paciente tiene ACTH boja el origen es adrenal. — Se hace por medio de pruebas de supresién (pruebas endocrinolégicas). Se evala la respuesta de la gléndula adrenal. - DIAGNOSTICO DE LOCALIZACION: Lo realizamos para saber dénde especificamente estd el tumor, es un diagnéstico anatémico. = Si es de origen hipofisario suele reolizarse una radiografia de créneo-tomografia o resonancia magnética (regién selar) -» Demuestran (a presencia de adenomas hipofisarios. = Si es de origen suprarenal suele realizarse una ecograffa o tomografia — Si es de origen ectépico suele realizarse una radiogratia de térax, ya que habiamos dicho que el cancer de pulmén es una de las causos més frecuentes de ACTH ectépica, MANIFESTACIONES CLINICAS DEL SINDROME DE CUSHING: ‘Obesidad central: Hay una distribucién centripeta dela grasa abdominal en este sindrome. Giba de biifalo. Estrias rojo vinosas. Hipertensién arterial Diabetes secundaria, Osteoporosis. Debilidad muscular Gastritis. ee ceree lnstagrany Perdidaenuiba @vetagon reraseonta © Psicosis. MANIFESTACIONES DE LABORATORIO: Hemograma: leucocitosis con neutrofilio, linfopenia y eosinopenia. Eritrosedimentacién: acelerada (aumento de la susceptibilidad a infecciones). Glucemia, elevada, diabetes secundaria. Gases en sangre: alcalosis metabdlica lonograma plasmatico: hipokalemia e hipocloremia. Aumento de la secrecién de cortisol libre plasmatico y urinario, y de 17 hidroxicorticosteroides urinarios. Hipercalciuria. SINDROME DE ADDISON; DISMINUCION DE LA SECRECION DE GLUCOCORTICOIDES: Como consecuencia de lo disminucion de la secrecion de glucocorticoides el paciente presentaré: * Hipoglucemia. * Hipotension arteriat: astenio-adinamio. * Aumento dela pigmentacién cuténea: pérdida de vello-amenorrea-acidosis metabdlica hipopotasémico. DEFICIT CORTICOESTEROIDES: El déficit de corticosteroides lleva a un aumento de la liberacién de CRF, lo cual daré lugar a un aumento de la liberacién de la secrecién de la proopiomelanocortina (POMC) y un aumento de la secrecién de ACTH beta-lipotropina. Dentro de la ACTH también tendremos un aumento de la sintesis de Alfa-MSH actuando sobre melanocitos favoreciendo la higerpigmentacién cutdneo. VITAMINA D: «Pertenece al grupo de las liposolubles Es.una prohormona esteroide. © Interviene en la absorcidn del calcio y fésforo en el intestine, y por ende en el depésito de los mismos en huesos y dientes. « Vitamina estable, no es destruida durante la accién y puede ser conservada durante un largo periodo. Se deteriora u oxida al entrar en contacto con la luz y el oxigeno. vetagan rerasaenss @Dlnstagrams Perdidaenuba @ Requerimientos — Se recomienda una ingesta diaria de 200 a 400 ul de vitamina D en lactantes, niNos y adultos. = No se justifica aumentar el aporte en el embarazo y lactancia, Estructura quimica; Existen 2 vitameros principales: - Vitamina D2:ergocalciferol. Origen -> vegetal. Precursor + ergosterol - Vitamina D3:colecalciferol. Origen + animal Precursor — 7-dehidrocolesterol. Ambas son secoesteroides, derivados del ciclopentanoperhidrofenantreno: los anillos de carbono son abiertos por fotdlisis de la \uz UY, sin procesos enzimaticos. \- . IN A Ergocaleifero!, (vitamina D;) Ho" Forma de apor = Sintesis de vitamina D3 depende de la pigmentacién de la piel y grado de exposicién ala (uz solar. Colecaleifero! (vitarina 0,) HO — La luz solar es una fuente importante de vitamina D dado que los rayos UV dan inicio a la sintesis de la misma en la piel. Ante el estimulo de la luz solar el 7-dehidrocolesterol (precursor) se convierte por fotdlisis no enzimatica en colecalciferol (pro-vitamina D3) y el ergosterol en ergocalciferol ro-vitamina-D2). U colecalciferol, a través de la sangre y transportado por un alfa-2-globulina Wegaré al higado donde se hidroxila en el carbone 25 formando el 25 OH colecalciferol. Este compuesto a través de la sangre llegaré al rifién y sein los niveles de calcemia se transformaré er: = Calcemia baja + da lugar a un metabolito activo de la vitamina D, 1,28 di OH CC. Se produce por una hidroxilacion en el carbono | ante hipocalcemia por una 1 alfa-hidroxilasa mitocondrial. - Calcemia alta- normo/hipercalcemia + 25-OH-Colecalciferol se hidroxila en el C24 por una hidroxilasa mitocondrial (24 hidroxilasa) formando el 24,25 di OH CC. Compuesto menos activo que la vitamina D3, Una vez que ambos han cumplido su via bicldgica pueden transformarse en un metabolito inactivo a nivel del rifién que es el 1,24,25 tri OH CC. lnstagrany Perdidaenuiba @‘Tdehidrocolesterol PIEL HIGADO 25 OF éteceferol eZ \ 24,25 di OH CC 1,251 0H CC \ RINON 7 1,24,25 tri OCC 1-Alfa-Hidroxilaso renal: Reguladores primarios: (de més a menor importante). @ Hipocalcemio. PTH aumentado, * Hipofosfatemio. * Calcitriol bajo. Reguladores secundarios: Estrogenos. Andrdgenos. Progesterona. Insulina, STH. Prolactina. Hormona tiroidea. ACCIONES FISIOLOGICAS VITAMINA D3: ‘Aumento de reabsorcion intestinal de calcio y secundariamente de fésforo. « Aumento de la reabsorcidn tubular renal de calcio y secundariamente de fésforo. . Aumento dela actividad osteoclastica, con aumento de la liberacién de calcio. — ACCION HIPERCALCEMIANTE. = La vitamina D, por ser una vitaina tiposoluble, atraviesa libremente las membranas biolégicas. Recordar que su receptor se encuentra dentro del nucleo, formando parte de la superfamilia de receptores de hormonas esteroideas. La union del ligando con el receptor se realiza en un punto del ADN conocido como ELEMENTO SENSIBLE A LA HORMONA. La unién del complejo al elemento sensible a la hormono activa el gen estructural para que de esa manera se desencadene el proceso de transcripcién del ADN con la formacién de un ARN M que luego codifica, en el citoplasma a nivel de los ribosomas, la lnstagrany Perdidaenuiba @lnstagrams Perdidaenuba @ sintesis de las distintas proteinas acttian como mediadares de las acciones de las vitamina D. = La vitamina D se deposita en el higado, cerebro, piel y huesos. Ademés, puede almacenarse en el tejido adiposo [por ser proteina liposoluble) + pacientes obesos pueden tener deficiencia de vitamina D3. = Las dos vitaminas, D2 y D3, son de igual potencia y dan origen al calcitriol D8y calcitriol D3. HIPOVITAMINOSIS, Deficiencia de la vitamina D en nifios + raquitismo. Deficiencia vitamina D en adultos + osteomalacia. Tipicamente, aparece retraso de crecimiento y deformidades dseas como craéneotabes, rosario raquitico y genu valgum. HIPERVITAMINOSIS: Ocurre cuando se administran cantidades exageradas de vitamina D. Aparece hipercalemia, con pérdida de apetito, néuseas y vomitos, constipacién, ‘aumento de la diuresis y sed, acortamiento del Q-T (ECG). HORMONA TPH Acciones: Aumento dela reabsorcién intestinal de calcio y secundariamente de fésforo. ¢ Aumenta la formacién de 1,25 dihidroxicolecalciferol renal. ¢ Aumento de la reabsorcién renal de calcio y magnesio. * Aumento de la excrecién de fosfatos (hipofosfatemia e higerfosfaturic) y bicarbonate. Aumento de la reabsorcién éseo. ESTRES: El estrés involucra todas aquellas reacciones del organismo ante situaciones que tiencan a perturtar el equilibrio fisioldgico normal u homeostasis. Puede desencadenarse: * Exceso actividad loboral. « Situacién emocional. = Punto de vista médico: « Infeccion. © Cirugio. * Quemadura severo. ¢ Traumatismo. «Enfermedad sorpresivo. lnstagrany Perdidaenuiba @