19/06/2022

INTERPRETACIÓN DE ESPECTROS
tr í a
o m e
DE MASAS. Métodos GC/MS y LC/MS.

u r s t r o Prof. Dra. Elena E. STASHENKO

C pe as c A
UIS-Bucaramanga, Colombia

I
elena@tucan.uis.edu.co

s
E ma ST s I C
de INJU
1

k o
M e n
s h
CONTENIDOSta
a id a d
l e n s
Introducción: recordando algunos conceptos básicos…

r
E ive al
Ionización en fase gaseosa: ionización electrónica [EI] – GC/MS

n r i e r
Ionización en fase condensada (electronebulización) – LC/MS

U us tand t
Analizadores. Detectores. Calibración.

d
ESPECTRO DE MASAS: análisis general, iones isotópicos, productos

I n a n
Tipos de reacciones de fragmentación:

S
ruptura simple, reordenamientos. Grupos funcionales, isómeros.

de
Patrones de fragmentación y su relación con la estructura química.
Métodos experimentales para establecer el patrón de fragmentación.

2
 19/06/2022

tr
ESPECTROS DE MASAS:
í a
e
Patrones de fragmentación

r s o o m
u
C pe as c t r
C I A
s
E ma ST s I
de INJU
3

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
Interpretación de espectros de masas.

n
La identificación de sustancias en mezclas complejas.

l e r s
Espectros de masas en fase gaseosa. Patrones de

E ive al
fragmentación. Señales de iones moleculares,

r
moléculas protonadas/deprotonadas, iones

n r i e
precursores y productos, iones-aducto, relación

U us tand t
isotópica y el rol de espectros de masas de alta
resolución en el desciframiento de las estructuras

d
moleculares, marcaje isotópico y derivación.

I n a n
Identificación presuntiva y confirmatoria, parámetros

S
cromatográficos, índices de retención y bases de
datos.

de
Ejemplos y aplicaciones.

4
 19/06/2022

Desarrollo de la espectrometría de masas

PERÍODOS: í a
e tr
r s o
Físico (1890-1945)
o m
u t r
Químico (1945-1975)
C pe as c
Ciencia de materiales (1955-1990)
C I A
s
E ma ST s I
Biología y medicina (1990-presente)

de INJU
5

k o
M e n
s h
S t a
a a d
Principales procesos en
l e n s i d
espectrometría de masas

E ive al r
Ionización
n r i e r
U us tand
Separación de iones según m/z
t
I n d
Medición de corrientes iónicas

a
Construcción de espectro de masas n
S
6
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
r s r o
Ionización
u
C pe as
s
c t
s C I A
E ma ST I
de INJU
7

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d
la IONIZACIÓN a n
evento central en laS
de la sustancia es un

de
espectrometría de masas

8
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C
La manera
e
como cse
s A
transfiere la energía a la molécula,
I
s p
generará diferentes
s
tipos a
de
I C
espectrometría de masas
E ma ST
de INJU
9

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
U n t r i d e
s n
sus propiedades físico-químicas determinarán el modo
de su ionización, el tipo u
d t a
de espectrometría
n
I n
de masas y la configuración
a
del equipo
S
para usar

10
de
 19/06/2022

Curriculum vitae del

analito
tr í a
e
Masa molecular

r s o o m Polaridad
u
C pe as c t r Volatilidad
I A
Termoestabilidad
C
s
E ma ST s I
de INJU
11

k o
M e n
s h
S t a
Ionización de moléculas:
a idcondensada a d
l e n r s Fase

E ive al r
Líquido o sólido

n
U us tand t r i e
Fase gaseosa Fase d n
I n líquida
S a
electronebulización

12
de
 19/06/2022

Métodos de ionización
Método de ionización Ventajas Desventajas

a
Algunos compuestos no son estables
Protonación
í
Muchos compuestos pueden adicionar un protón e
ionizarse. En muchas fuentes de ionización, e.g., ESI, cuando se protonan (i.e.,

tr
(Iones positivos) APCI, FAB, CI y MALDI se generan especies protonadas. carbohidratos) o no aceptan protón

e
fácilmente (i.e., hidrocarburos)

r s o
Cationización
o m
Muchos compuestos pueden ionizarse cuando adicionan Espectrometría de masas tándem

r
un catión, como Na+ o K+. En muchas fuentes de generará limitada o muy poca

u t
(Iones positivos) ionización, e.g., ESI, APCI, FAB y MALDI se generan estas información sobre la fragmentación de

C pe as c
especies moleculares cationizadas. las especies moleculares cationizadas

I A
Aplicable para moléculas con carácter acídico. En

C
s s
Deprotonación
I
muchas fuentes de ionización, e.g., ESI, APCI, FAB y

E ma ST
MALDI pueden surgir estas especies moleculares Específico para cada compuesto
(Iones negativos) deprotonadas.

de INJU
13

k o
M e n
s h
S t a
ionización Ventajas
Método de

a id a d
Desventajas

l e
Transferencia de iones n r s
Aplicable solo para sustancias cargadas

E ive al
(ionizadas). En muchas fuentes de ionización, Únicamente para iones preformados o
a la fase gaseosa

r
e.g., ESI, APCI, FAB y MALDI se generan estas moléculas ionizadas

i e
(Iones positivos y negativos) especies moleculares cationizadas.

Pérdida de electrón n
U us tand t rSe observa durante la ionización electrónica, A menudo, se observa mucha fragmentación
que conduce a la formación del ion

d
molecular y múltiples fragmentos que molecular y no siempre se tiene información

n
(Iones positivos) clara sobre la presencia del ion molecular

n
aportan información estructural

Captura de electrón I S aSe observa durante la ionización electrónica, No todas las moléculas son propensas a

de
EI, cuando se forman iones moleculares y adicionar (capturar) electrón, solo aquellas
(Iones negativos)
fragmentos que aportan información que poseen grupos electrono- negativos
estructural

14
 19/06/2022

Configuración: bloques principales del equipo

Formación de iones
Sistema de datos

a
Transmisión de iones

tr í
Detección de iones Medición
Ionización Procesa-
de la

e
Sistema miento
de la Analizador(es)
de entrada corriente

o
muestra de señales

m
iónica

u r s t r o Sistema de vacío

C pe as c I A
Reservorio para gases
Entrada directa (sonda)
Vacío / presión atmosférica
Ionización en fase vapor
Analizadores de transmisión
simultánea de iones

s s C
Cromatografía de gases Ionización en fase condensada (B, BE, TOF, Orbitrap)

E ma ST I
Cromatografía líquida Líquida Analizadores de barrido
Electroforesis capilar Sólida (scan)

de INJU
15

k o
M e n
s h
Espectrometría de masasta
a idS a d
l n
Masas moleculares
e r s
E e
(hasta más de 100.000 kDa)

i v
Composición elemental
i a l e r
n
U estructural s t r n d
(Equipos de alta resolución)
Información
d u n t a
n
I sensibilidadSa
(Grupos funcionales y disposición espacial)
Descomunal

de
(10-18 g o 10-22 M)

16
 19/06/2022

Espectro de masas
Intensidad, %

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C m/z

de INJU
17

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E
Espectrómetro
Formaciónndeiv
e de masas
a l r
U de iones
iones
t r i d e
Transmisión
u s t a n
I n d
Detección de iones en
a
fase
n
gaseosa
S
18
de
 19/06/2022

¡COMPADRE!
En la espectrometría de masas
solo se detectan especies

tr í a
e
cargadas, i.e., IONES:

o
cationes, aniones, catión-

r s o m
radicales, o anión-radicales

r
u
C pe as c t
C I A
s
E ma ST s I
de INJU
19

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e nOXÍGENO:r s
E orbitales
i v e a l r
n
U us tand
Especie t r i
moleculares.
birradical.
e
I n d a n
S
20
de
 19/06/2022

Monóxido de nitrógeno [NO]: una especie radical.

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
21

k o
M e n
s h
t a
Ona S dad Pares iónicos

l e s i no enlazantes

E C ivN er aHl r
U n t r i d e
H du s t a n
I n H a n
S
de
Molécula neutra con número PAR de electrones

22
 19/06/2022

H
H C tría
o m e
u r s t r o H
C e c s I A
s p s a I C
Radical: número IMPAR de electrones
E ma ST
de INJU
23

k o
M e n
s h
H SH ad t a
n a id
l e + r s
HE C ive C iaHl er
n
U us tand t r
HInd Han
S
de
Catión-radical: número IMPAR de electrones

24
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H
H C +tría
o m e
u r s t r o H
C e c s I A
s p s a I C
Catión: número PAR de electrones
E ma ST
de INJU
25

k o
M e n
s h
S t a
d
Especies moleculares que se forman

n a id a
en un espectrómetro de masas

Catión
l e
E ive al . rs
A+
Catión-radical
n
A+

r i e r
U . us tand t
Anión A-
. A-
d
Anión-radical Se registran solo
Radical
I n A
a n
aquellas que llevan
Partícula neutra
S
CARGA
A0

26
de
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Fragmentación

Molécula ionizada Φ1 Φ2 Φ3 Φ4

tr
Φ4
í a Espectro de masas

e
Intensidad (abundancia), %

Φ3

r s o o m
u
C pe as c t r Φ1

A
Φ2

s s I C I
E ma ST m/z

de INJU
27

k o
M e n
s h
S t a
d
Intensidad (abundancia), %

Φ4

a
Espectro de masas

a id
Φ3

l e n r s
Φ1
Φ2

E ive al r
m/z

n
U us tand t r i e
El espectro de masas NO es un producto del azar

n d n
Depende de la estructura de la molécula y

I a
de la energía interna del ion molecular M+.

S
de
Depende de la capacidad del ion molecular de deslocalizar la carga

28
 19/06/2022

Abundance
5500
5000

a
4500

tr í
4000
3500

e
3000

o m
2500

r s o
2000

u t r
1500
Time, min

c
21.00 22.00 23.00 24.00 25.00 26.00 27.00 28.00

C pe as I A
¿A qué corresponden las señales «repetitivas»

s
E ma ST s I C
del fondo (background ) de una corrida GC-MS?

de INJU
29

k o
M e n
s h
Background S t a
a id a d
l e n r s
E ive al
Abundance 32

i e r
1800

n r
1600

U us tand t
1400
1200
1000
800 44 207

d
600

n
281

n
400

I a
200
0

S
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280
m/z

30
de
 19/06/2022

Sangrado de la fase estacionaria

Estructuras moleculares cíclicas de productos principales de la descomposición
del polímero siloxánico de la fase estacionaria

a
m/z 207 m/z 281 m/z 355
R R
R R

tr íR

e
R
R R O R
Si O Si Si
Si

o
O O O Si

m
R O O

s
R R R R
Si Si O R

o
Si

r
Si Si
O

r
R O Si
R R

u
R

t
R O O
R Si
R

C pe as c
R R
Termodinámicamente más estable

A
-CH3

s
O
Si

s
O
Si
O
Si

I C
O

I Si
O
Si
O
Si
O
Si
-C6H5
-CH2CH2CN

E ma ST
n
R
R -CH2CH2CF3

de INJU
31

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
Conozca estos iones: pueden provenir del fondo

n
e ersAire y agua residuales
y no tener nada que ver con sus analitos

40, l44
18, 28, 32,E
73, 147, 207, 281, 355...iv i a l e r
n t r
U usPlastificantest(ftalatos)
Poli(dimetilsiloxanos)
n d
149
d n a
I n
94, 115, 141, 168, 170, 262...
S a
Bomba difusora

32
de
 19/06/2022

Información que se puede obtener del espectro de masas:

a
Determinación de masas moleculares
Elucidación de estructuras moleculares
tr í
o
Química de iones: estudio de procesos y

m e
r s o
reacciones en fase vapor

u c t r
Determinación de constantes físico-químicas: energías

C pe as I A
de ionización y aparición de iones, entalpías de

s s C
reacciones, afinidades protónicas, etc.

E ma ST I
de INJU
33

k o
M e n
s h
S t a
Espectro de masas: forma de presentación gráfica y tabular

a id a d
n
I,% Ion pico de base m/z I,%

e
43

l r s
100 15 33.0

E ive al
Ion molecular 28 56.0

r
80
Ion-producto 60 29 0.65

n r i e
28 30 0.11

U us tand t
60
Ion-producto 43 100
40 15 44 2.2

d
45

n
45 26.0

I n a
20 Ion isotópico 46 0.31

S
47 0.1
10 20 30 40 50 60 70 m/z

de
60 62.0
61 1.48
Masa exacta M+. = 60.0211 (C2H4O2) 62 0.26

34
 19/06/2022

Resolución

tr í a
o m e
u r s t r o
c
CBaja pe aAlta s I A
s
E ma ST s I C
de INJU
35

k o
M e n
MOLÉCULAS: medición de masasa s h
analítica para suS t dexactas, estrategia

a a
identificación

l e n s i d
E iver al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
200 g S200,659 g
36
de
 19/06/2022

MASAS
Nominales
Exactas
tr í a
o Iones isobáricos
m e
s
CO ur C2H4 tro N2
C e c28 s I A
m/z 28
s
m/z
a
pm/z 28,006148s m/z 28,031296
m/z 28
I C
E ma ST
m/z 27,994910

de INJU
37

k o
M e n
Resolución de picos (corrientes iónicas a s h
S t parciales)
d
n
[CO+ + N2+ + C2H4+]
a id CO+
a
Alta C2H4+

l e
E ive al r s
n r i
N2+

e r
U us tand t
I n d a n
Baja
S
de
m/z
19.60 19.80 20.00 20.20
28 27.9949 28.0061 28.0313

38
 19/06/2022

Analizador de masas: figuralmente, es una balanza,

que puede “pesar” iones con diferente precisión

Equipos de alta resolución

tr í a
o
•Masas exactas
m e
u r s t r o
C pec as
Equipos de baja resolución
I A
•Masassnominales s
E ma ST I C
de INJU
39

k o
M e n
s h
S t a
Analizadores
a id a d
de masas

l e n de
r s
alta resolución:

E ive al r
Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass

n
U us tand t r i e
Spectrometer (FT-ICR/MS)
Analizador de tiempo de vuelo (TOF-MS)

I n d a n Trampa de iones-Orbitrap

S
Espectrómetro de masas de doble enfoque

de
(BE, EB, EBE)

40
 19/06/2022

Analizadores de masas de alta resolución

FT-ICR/MS

tr í a
o m e
TOF-MS

u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST
Orbitrap s I C BE

de INJU
41

k o
M e n
s h
t a
Para la interpretación de un espectro de masas:

S
a id a d
¿Son suficientes la resolución y la exactitud alta de la medición

n
de masas?

l e
E ive al r s
n r i e r
U us tand t
I n d a n
S
42
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
43

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
44
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
45

k o
M e n
s h
S t a
d
91
100

a id a
92

e n s
50

l
E ive al r
39
51 63
65
89 93

r
27 38 40 45 66
0
20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80 84 88 92 96 100

i e
(mainlib) Toluene

-H
n
U us C H tand
-C H
CH3

t r .

d n
2 2

n
+

I a
+.
5 5

S
de
M+. m/z 92 (M-H)+. m/z 91 (M-H-C2H2)+. m/z 65

46
 19/06/2022

13C
13C

í a
13C

tr
13C

o
Tolueno: marcado isotópico
m e 92
I%
r s r o 93

Cu c t
C pe C H as
H
12
5 5
I A
13
5 5

C
65 66

s
E ma ST s I m/z

de INJU
47

k o
M e n
s h
S t a
d
91
100

a id a
92

e n s
50

l
E ive al r
39
51 63
65
89 93

r
27 38 40 45 66
0
20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80 84 88 92 96 100

i e
(mainlib) Toluene

-H
n
U us C H tand
-C H
CH3

t r .

d n
2 2

n
+

I a
+.
5 5

S
de
M+. m/z 92 (M-H)+. m/z 91 (M-H-C2H2)+. m/z 65

48
 19/06/2022

No siempre la exactitud alta de medición de

masas es suficiente

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c A
Importantísimo: tener información sobre
iones-fragmento

I
s
E ma ST s I C
de INJU
49

k o
M e n
s h
CÁMARA DE IONIZACIÓN:
S t a
a d
efecto de diferentes parámetros sobre el aspecto del espectro de masas

a id
Temperatura

e n s
Filamento: corriente de emisión de electrones
l r
Energía de electrones bombardeantes
E ive al r
Voltaje de electrodo repeledor (pusher, repeller)

i e
Grado de limpieza de la fuente de iones
n
U us tand t r
I n d a n
S
50
de
 19/06/2022

El efecto de la temperatura de la fuente de iones

sobre el aspecto del espectro de masas 70°C
I,%
M+.

tr í a
o m e
s
m/z

r r o
I,%

u
C pe as c t 340°C

C I A
s
E ma ST s I
M+.
m/z

de INJU
51

k o
M e n
s h
energía
El efecto de la

S t a
de electrones bombardeantes sobre el aspecto

70 eV d
del espectro de masas
I,%

n a i d a
l e
E iver al s
r
M+.

I,% n
U us 10 eV tand
t r i e m/z

d
M+.

I n a n
S
52
de m/z
 19/06/2022

100
100
10 eV
Espectros de masas de baja energía
50

í a
85

e tr
58 72
0

o
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

r s o m
43

r
100
Espectros de masas de alta energía

u t
70 eV

50

C pe as c I A
O

s s I C
85

E ma ST
15 O 100
27
31 58 72
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

de INJU
53

k o
M e n
s h
S t a F3+ F1+

d
I,%

a id a
F2+ M+.

n
F4+

l e
E ive al r s
n r i e r m/z

I,%
U us tand t
En general, entre más fragmentos se forman M+.

d n
en un espectro de masas, mayor información

I n a
se puede obtener sobre la estructura de la molécula

S
de
m/z

54
 19/06/2022

Ionización con electrones

tr í a
Moléculas de la muestrason bombardeadas
o m e
u r scon un hazde electrones de alta energía
t r o
C pe as c (70 eV, 1 eV = 23 kcal)
I A
s
E ma ST s I C
de INJU
55

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us«Impacto»t r i d e
t a n
n d
I de a n
S electrón
56
de
 19/06/2022

Ionización por «impacto» con electrones

Formación del ion molecular

a
Formación de iones multicargados

tr í
Ionización con rearreglo molecular

o e
Reordenamientos y transposiciones
m
u r s t r o
c
C pe Rupturaassimple y reordenamiento
Fragmentación:
I A
s
E ma ST s
Captura
I C
de electrón(es)

de INJU
57

k o
M e n
s h
Clasificación del vacío
S t a
a id a d
Vacío Pa

l e n Bar

r s
Torr

Bajo
E ive al
105-103 1-0.01 752-7.52

r
Medio 100-1
n
U us tand t
0.001-10-5
r i e
0.752-7.5x10-3

Alto 10-1-10-4

I n d 10-6-10-9

a n
7.5x10-4-7.5x10-7

S
10-10- 7.5x10-8-
Muy alto 10-5-10-9

de
10-14 7.5x10-12
1 bar = 105 Pa 1 Torr = 133 Pa

58
 19/06/2022

Relación entre la presión y el recorrido libre medio

Presión, mbar Recorrido libre medio, cm

tr í a
e
Presión atmosférica 3.5 x 10-6
1

r s o mo
ca. 10-4

u
C pe as
10-3
c t r ca. 1
10-5 ca. 102

C I A
s
E ma ST
10-7
s
ca. 104
I
de INJU
59

k o
M e n
s h
El espectrómetro de masas operata
a presión reducida (vacío)aporque: S ad
l e n s i d
E e alr
Se facilita la evaporación de laiv r
Se asegura que el filamento no se queme

U n muestra
t r i d e
Se evita que los iones -una vez
u s
formados-,
t a n
presentes en el sistema
n d
se pierdan por colisiones con gases atmosféricos
I del sistema a n
S
de
Se eliminan moléculas no ionizadas

60
 19/06/2022

16 17
I,% A I,% B
29

tr í a
o m e 41

u r s t r o
c
m/z

C pe as
m/z

I A
Espectros de masas de metano CH4 , tomados a diferentes presiones:

C
s
E ma ST s I
A. 10-5 mm Hg y B. ca. 1 mm Hg.

de INJU
61

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tandde t r
Cámarai e
I n d n
ionización
a
S
62
de
 19/06/2022

Magneto

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
Magneto: altera la trayectoria
de los electrones para

s s I C
aumentar la eficiencia

E ma ST
de ionización de las moléculas

de INJU
63

k o
M e n
s h
S t a Alambre incandescente emite los electrons

d
(I = 35 mA), que se dirigen al ánodo,

a id a
adquiriendo la energía de 70 eV (energía

n
estándar)

l e
E ive al r s
n r i e r
U us tand t
Tungsteno
Renio
I n d FILAMENTO
a n
Iridio toriado
S
de
Electrón con energía de 50 eV atraviesa
Hexaboruro una molécula con la velocidad de 4.2 x
de lantano 106 m/s, ¡en solo 10-16 s!

64
 19/06/2022

El ion monocargado de masa 100 u es

acelerado por el potencial de 1000 V
saliendo de la cámara de ionización:

a
m = 100 x 1.66 x 10-27 kg
Entrada
Filamento
tr í
= 1.66 x 10-25 kg

e
de la muestra

r s o o m Ec = mv2/2 = Ep = V x e =

u t r
(1000 V) x (1.6 x 10-19 C) = 1.6 x 10-16 J

C e c s I A
v2 = (2 x 1.6 x 10-16J)/(1.66 x 10-25kg) =

p a
1.93 x 109 J kg-1
Región desaceleración
E ma ST s I C v = 4.39 x 104 m/s = 1,58 x 105 km/h

de INJU
65

k o
M e n
s h
t a
Contaminación
S
aFugas id a d
l e n r s 

E ive al
 Interferencias
r
U Sangrado t r i
n Plastificantes d e
u s de a
t n
d n
Inla faseSestacionaria
a
e
La contaminación

 Aceite de la bomba
d
afecta muchísimo
la sensibilidad

66
 19/06/2022

RESPUESTA DEL DETECTOR

Fases estacionarias
• Aumento de la Tº

a
de bajo sangrado
R

í
R R
R Si O R

• Oxígeno/ H20/ fugas

tr
Si O R
O Si

(-MS)
O Si R
R R
R Si O
Si O

• Daños
R O Si

e
R O Si R
R R
R
R R

Térmico

o
R R Si

m
Si O O

s
O O

Químico
R Si Si R

r o
R Si Si R O

r
O R R

Oxidativo

u
R R

t
R
R
Si O R

c
R
O Si

• Contaminación

C pe as
RR
R Si O R
R R Si O

A
O Si
Si R O Si R

I
RR
O O Si O
R
O Si
R Si Si R R
R
O R

s C
R R

s
R R

I
Si R R
R R
O O

E ma ST
Si O R Si O R

R Si Si R O Si O Si
R
R
O R R
Si O Si O
R R
R O Si R O Si
R R
R R

de INJU
67

k o
M e n
s h ESTOS IONES:
S t aCONOZCA

a a d
pueden provenir del fondo

l e n s i
y
d
no tener nada que ver

E iver al
con sus analitos

n r i e r
U us tand t
I n d a n
S
¿A qué corresponden las señales

de
«repetitivas» del fondo
(background ) de una corrida GC-
MS?
68
 19/06/2022

Limpieza

tr í a Al2O3

o m e Solventes

u r s t r o
Metanol
CH2Cl2

C pe as c I AHexano

s s I C
Sonicación

E ma ST Secado

de INJU
69

k o
M e n
s h
S t a
a a d
Cámara de le n s i d
ionizaciónE e r l
n i v r i a e r
U us tand
limpia y seca,
t
d
se vuelva a instalar

n n
en el equipo de masas

I S a
70
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
Proceso de Ionización
C pe as c
por “impacto” de electrones
I A
s
E ma ST s I C
de INJU
71

k o
M e n
s h
e- e- e-

S t a
e- e-

a
e-

a d
l e n s i d
E
Ionización
e r l
i v a +. r
e-

M
n
U us tand t r i M e
I n d a n
Ion molecular:
Catión-radical

S
72
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
73

k o
M e n
s h
CH CH CH X
S t a
Energía (o potencial, IP) de ionización:

d
3 2 2

a id a
Grupo X IP, eV
-H

e n
11,07

l r s
EM ive al
-ONO2 11,07

r
-Cl 10,82

i e
+.

n
UPI us tand t r
-CH3 10,63
-Br 10,18

d an
-OH 10,17

M° In
-CHO 9,86

S
-COCH3 9,34

de
-I 9,26
-NH2 8,78

74
 19/06/2022

La energía de ionización (o potencial de ionización, IP) Energías

(potenciales)
depende de la estructura molecular, e.g., del número de de ionización (M+.)
y de aparición
electrones  en hidrocarburos aromáticos polinucleares

a
(iones-fragmento)

tr í de moléculas

e
Benceno, IP = 9,38 eV orgánicas

r s o o m
6-13 eV

u
C pe as c t r
C I A
s
E ma ST s I
Pentaceno, IP = 6,55 eV

de INJU
75

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d
EFICIENCIA DE IONIZACIÓN
a n
S
de 10.000-100.000 moléculas se ionizará apenas una

76
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
77

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
78
de
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
79

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
i e
Benceno, IP = 9,38 eV

n
U us tand t r
I n d a n
S
de
Pentaceno, IP = 6,55 eV
80
 19/06/2022

CÁMARA DE IONIZACIÓN: efecto de diferentes parámetros sobre el aspecto del espectro de masas
Temperatura
Filamento: corriente de emisión de electrones

a
Energía de electrones bombardeantes

tr í
Voltaje de electrodo repeledor (pusher, repeller)
Grado de limpieza de la fuente de iones

o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
81

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
ESPECTROE ivDE e MASAS: a l r
U den t r i d e
criterios u s calidad
t a n
I n d a n
S
82
de
 19/06/2022

Criterios de calidad para un espectro de masas

tr í
1. Presentar una relación isotópica correctaa
o m e
2. No debe exhibir un background excesivo

r s o
3. Debe ser consistente con la estructura de
u t r
c
la sustancia propuesta
C pe as I A
s
E ma ST s I C
de INJU
83

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d
Un espectro de masas debe

a n Un espectro de masas no debe

S
presentar una relación isotópica exhibir un background (señales del

de
correcta fondo, ruido) excesivo

84
 19/06/2022

I% 122 CH2CH2OH COOH

105

?ía
77
51

e t r ?

r s o o m
u
C pe de debe c t r m/z
Un espectro de masas
a s I A
ser consistente con la estructura
s
E ma ST s I C
la sustancia propuesta

de INJU
85

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
86
de
 19/06/2022

t r í a
o m e
ESPECTROS DE MASAS:

u r s t r o Principales reglas
c
C pe as y aproximaciones I A
s s para suIC
E ma ST
interpretación

de INJU
87

k o
M e n
s h
S
TEORÍAS “CUALITATIVAS”t a
a id a d
e n s
 Localización de la carga positiva
l r
E ive al
y del electrón desapareado

n i
 Evaluación de la estabilidad
r e r
U us tand t
de iones y partículas neutras

n d
Ionización disociativa:
I a n
S
de
Ruptura simple
Reordenamiento(s) (transposiciones)
88
 19/06/2022

A+ + R.
M +. Catión

r
tA í
+ a
. N
o m e +

u r s t r o
Catión-radical

C pe as c I A
Por regla general, los cationes son más estables que los catión-radicales y pueden

s s C
predominar en espectros de masas de alto voltaje (70 eV), siendo productos, en la

E ma ST I
mayoría de los casos, de ruptura simple. Sin embargo, catión-radicales, productos de
reordenamiento, pueden surgir durante los procesos de disociación, energeticamente
más ventajosos, y predominar en los espectros de masas de bajo voltaje.

de INJU
89

k o
M e n
s h
t a
87

S
100

a id a d HO

n
45

e
115

l s
50 55

r
43
41

E ive al
29 69

r
58 71 97
39 143

i
83

e
15 31 53 73

n r
0

t d
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170

U
(mainlib) 4-Nonanol, 4-methyl-

Iones m/z
u s
Intensidad
7% ta
n
[M –CH ] 143
I n
3
d +

a n
[M –C H ] 115
S 52%
+

e
3 7
[M –C H ] 87
d 100%
+
5 11
90
 19/06/2022

Preferiblemente, se elimina el radical más pesado

í a
-C2H5. OH -C3H7.
129 (78%) C2H5 C

e
C3H7
tr 115 (87%)

r s o o
C4H9

m
u
C pe as c t r -C4H9.

C I A
s s I
101 (100%)

E ma ST
de INJU
91

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l n
Regla de Stevenson-Audier
e r s
E ive al r
Audier H.E. – Org. Mass Spectrom., 1969, v. 2, p. 283

n
U us tand t r i e
La regla de Stevenson-Audier se aplica de una manera
“cualitativa”, a las moléculas sencillas, cuando se conoce,

I
ruptura.
n d a n
cuál de los enlaces químicos en la molécula padece la

S
92
de
 19/06/2022

tr í a Regla de

o m e Stevenson-

u r s t r o
Audier

C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
93

k o
M e n
Regla de Stevenson-Audier a s h
S t d
AB
n a id a A. + B.

e s
Energía de disociación D(A-B)

PIAB
l
E ive al r E°(A+)
PIA. PIB.

n r i e r
A+ + B.

U us tand t
AB+.
E°(B+)
A. + B+

I n d
E°(A+) = PIA. + D(A-B)- PIAB
a n
S
E°(B+) = PIB. + D(A-B)- PIAB

de
∆E° = E°(A+) - E°(B+) = PIA. - PIB.
94
 19/06/2022

Regla de Stevenson-Audier
A+ + B. PI . < PIB.
M+.
A

A. + B+
tr í a
e
PIB. < PIA.

r s o . + oB m
u A
t
CM peA c + Bas.
. r + PIA < PIB
+

C I A
s
E ma ST s I
+ PIB < PIA

de INJU
95

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
Potenciales de ionización de algunas

n
moléculas sencillas y radicales
Moléculas
l e
E ive al
PI, eV
r s Radicales PI, eV

n i
CH3.
r e r
U us tand
H2O 12.6 9.8
HCN
C2H2
13.9
11.4 tC2H5.
C3H7.
8.4
8.1
CH2=CHCH3 9.7

I n d a
C6H5.n
CH2=CHCH2. 8.1

S
CH3OH 10.8 9.3
C6H5CH2.

de
C2H5OH 10.5 7.4
CO 14.0 ter-C4H9. 6.9

96
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
97

k o
M e n
s h
S t a
d
Cuatro factores que determinan el modo

n a id a
de fragmentación (patrón de fragmentación)
1.
l e
E ive al r s
La energía del enlace que se rompe
2.

i e r
La estabilidad de productos que se forman

n r
U us tand t
(tanto iones, como especies neutras)

d
3. La energía interna de los iones que se

I
fragmentan
n a n
4.
S
El intervalo de tiempo que transcurre entre

de
la formación y la detección de los iones

98
 19/06/2022

Principales factores, que determinan

el proceso de fragmentación
de iones moleculares, es la suma
tr í a
e
de entalpías (calores) de formación

r s o
de fragmentos cargados y partículas
o m
u
C pe as . IA
que debe ser t r
neutras (radicales, moléculas),
c mínima
s
E ma ST s I C
de INJU
99

k o
M e n
s h
t a
105
100

S d
O

a id a
O

n
50
77
122

l e s
150

r
51

27 39 45

E ive al
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160

r
(mainlib) Benzoic acid, ethyl ester

producto Ruptura simple

i e
E

Efn
U us tand t r C6H5COOC2H5+.
m/z 150

d
Ruptura de un

I n a n enlace sencillo C6H5CO+

S
m/z 105
reactivo

de
C6 H 5 + m/z 77
coordinada

100
 19/06/2022

105
100

50 O
77
122
150
51

a
27 39 45
0

í
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160

tr
(mainlib) Benzoic acid, ethyl ester

estado de transición
E Reordenamiento

e
Formación de
Er

o
enlace nuevo

r s r
Ef
o
producto
m C6H5COOC2H5+.

u t
m/z 150

C pe as c
-CH2=CH2

A
Ruptura de enlace sencillo

s s
reactivo

I C I C6H5COOH+. m/z 122

E ma ST coordinada

de INJU
101

k o
M e n
s h
S t a
d
Formación de

a id a
E E enlace nuevo
Er

n
producto

e
producto

l s
Ef Ef

E ive al r Ruptura de enlace sencillo Ruptura de enlace sencillo

n r i e r reactivo reactivo

U us tand t coordinada coordinada

d
Ruptura simple Reordenamiento

I n a n
E H (productos)
S
– H (reactivo)
de
f f f

102
 19/06/2022

Fragmentación del etilbenceno: Calor (entalpia) de formación de iones y radicales

tr í a
o
+
C6H5CHCH3 + H.
m e
s
𝜮∆Hf = 1068 kJmol-1

r r o
∆Hf = 850 kJmol-1 ∆Hf = 218 kJmol-1

u
C pe as c t C6H5CH2+ + CH3.

A
𝜮∆Hf = 1032 kJmol-1

I
∆Hf = 890 kJmol-1 ∆Hf = 142 kJmol-1

s s I C C6H5+ + CH2CH3. 𝜮∆Hf = 1247 kJmol-1

E ma ST ∆Hf = 1140 kJmol-1 ∆Hf = 107 kJmol-1

de INJU
103

k o
M e n
s h
t a
Calor o entalpía de formación [∆Hf 298(g) kJmol-1] de algunos radicales y especies neutras

S
Radical

a d
∆Hf 298(g) Radical/Especie ∆Hf 298(g) Partícula ∆Hf 298(g) Partícula ∆Hf 298(g)

a id
n
H. 218 CN. 435 H2 0 H2C=O -117

l e s
CH3. 142 79 :CH2 392 CH3CHO -166

r
F.

E ive al
C2H5. 107 Cl. 122 C2H4 52 NH3 -46

r
C3H7. 87 Br. 112 CH3CH=CH2 20 CH2=C=O -61
CH2=CH.
CH2=CHCH2.
C6H5.
250
170
300
n
U us tand
I.
SH.
t r i 107
142
135
e (CH3)2C=CH2
CH4
C2H6
-17
-75
-85
SO2
CH3COOH -455
CO
-297

-110

d
HCN

n n
C6H5CH2. 188 HF -271 C3H8 -104 CO2 -394
OH.
OCH3.
39
-4 I HCl

S a -92
-36
C6H6
H2O
83
-245

de
HBr
CH3CO. -23 HI 26 CH3OH -200
NH2. 172 H2S -21 C2H5OH -235

104
 19/06/2022

Calor o entalpía de formación [∆Hf 298(g) kJmol-1] de algunos iones

ION m/z ∆Hf 298(g) ION m/z ∆Hf 298(g)

a
H+ 1 1530 C6H5+ 77 1140
CH3+ 15 1090 C6H5CH2+ 91

tr í 890

e
C2H5+ 29 920 C6H5CHCH3+ 105 850
C3H7+

r s o 43

o
870 CH4+.
m
17 1150

u
(CH3)2CH+

C pe as c t r
43 800 C2H6+. 30 1040

I A
(CH3)3C+ 57 690 CH3CO+ 43 630

s s C
CH2=CH+ 27 1110 C2H5CO+ 57 600

E ma ST
CH2=CHCH2+ 41
I
950 C6H5CO+ 105 730

de INJU
105

k o
M e n
s h
Preferiblemente, tsea
S pesado”
elimina
el radical a a d
l e n “más
s i d
E ive al r
r
OH

i e
-C2H5. -C3H7.

n
U us tand
129 (78%)
t r C2H5 C C3H7 115 (87%)

d
C4H9

I n a n -C4H9.

S
de
101 (100%)

106
 19/06/2022

Durante la fragmentación, se forman principalmente productos

más estables, e.g.,+ los iones bencílico
+
y alílico, cationes terciarios,
iones oxonio (=O-) e iminio (-NH=); estructuras que pueden deslocalizar
efectivamente la carga positiva y estabilizarse.

tr í a
o m e
La ruptura directa de un enlace doble [-C=C-] o un enlace vinílico [-C=C--

s
R] es muy poco probable.

u r t r o
c
La pérdida de algunas moléculas neutras estables, e.g., H2O, CO, CO2, metanol,

C pe as A
etanol, ácido acético, etc., es muy común,

I
s C
a menudo, la acompaña el reordenamiento molecular.

s
E ma ST I
de INJU
107

k o
M e n
s h
S t a
d
91
100

a id a
92

n
50

l e
E ive al r s
27
39
38 40 45
51 63
65
66 89 93

r
0
20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76 80 84 88 92 96 100

n
U us taC Hnd t
CH3

r i -H.
e -C2H2

d n
+ +

n
+.

I a
5 5

S
de
M+. m/z 92 (M-H)+. m/z 91 ion tropilio (M-H-C2H2)+. m/z 65

108
 19/06/2022

t r í a
o m e
¿Qué hacer con los espectros de masas?

u r s t r o
C pec as I A
s
E ma ST s I C
de INJU
109

k o
M e n
s h
¿Qué se mira primero
S t a
a id
en un espectro de a d
masas?
l e n r s
E ive al
1. DISTRIBUCIÓN DE SEÑALES (IONES) en el espectro:

r
m/z de fragmentos y sus intensidades (I%).
2.

3.
n
U us tand t r i e
Presencia del ion molecular (o su ausencia);
paridad de la masa del ion molecular y su intensidad.
Diferencia “lógica” de masas (∆m) entre el ion

n d n
molecular y el ion-fragmento más cercano (m/z), i.e.,

I a
la penúltima señal.
4.
S
Detección del ion pico de base y de iones

de
característicos, que permiten elucidar la presencia
de ciertos grupos funcionales en la molécula.

110
 19/06/2022

ASPECTO GENERAL DE UN ESPECTRO DE MASAS

57
100

71

tr í a
43
85
50

e
Hidrocarburo lineal
99

o
113

m
127
141 155
29 169 183 197

s
TETRATETRACONTANO
211 225 239 253 267
281 295 309 323 337 351 365 379 393 406 420 435 449 478
0

r o
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480

r
(mainlib) Tetratriacontane

u t
229
100

C pe as c I A
s s C
50

E ma ST I
N

88
101
115
201
Compuesto poliaromático
BENZO(A)ACRIDINA
63 75 91 150 175
51 55 69 126 163
0
50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240

de INJU
(mainlib) Benzo(a)acridine

111

k o
M e n
s h
S t a
ASPECTO GENERAL DE UN ESPECTRO DE MASAS

a id a d
n
123

p-Dodeciloxibenzaldehído
100

l e r s
41 O

E ive al r
57

n r i e
55

U us tand
M+.

t
50

29

71 O
290

d
27

n
65 77 83

n
97 105
51 79

I
135

a
18 147 163 175 261
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300

S
(mainlib) p-Dodecyloxybenzaldehyde

112
de
 19/06/2022

¿Qué se mira primero en un MS?

1. Distribución de señales (iones) en el espectro:

a
m/z de fragmentos y sus intensidades (I%).
2.

tr í
PRESENCIA DEL ION MOLECULAR (o su

e
ausencia); paridad de la masa del ion molecular y su

o m
intensidad.

u r s t r o
3. Diferencia “lógica” de masas (∆m) entre el ion
molecular y el ion-fragmento más cercano (m/z), i.e.,

C pe as c 4.
A
la penúltima señal.

I
Detección del ion pico de base y de iones

s
E ma ST s I C
característicos, que permiten elucidar la presencia
de ciertos grupos funcionales en la molécula.

de INJU
113

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
ION MOLECULAR
l e n r s
E ive al r
INTENSIDAD n
U us tand t r i e
baja, mediana, alta, no se registra
PARIDAD DE MASA
MASA EXACTA
I n d a n
Regla del nitrógeno
Composición elemental (mexp, Δ ppm),
Relación isotópica
S C, S, Si, Cl, Br,…

114
de
 19/06/2022

IONES MOLECULARES, M+. Intensidad relativa, %

A B C

tr í a
o m e
r s r o
A- Ion molecular pico de base
E

u
D

t
B- Ion molecular de

c
intensidad alta (>60-99%)

C pe as A
C- Ion molecular de

I
intensidad media (25-
60%)

s s I C
D- Ion molecular de intensdad

E ma ST
baja (<20%)
E- No se registra el M+.

de INJU
115

k o
M e n
s hM
t a
Intensidad del ION MOLECULAR
S
+.

100
TNT

a id a d 210

e n s
O O

l r
N N
O O

E ive al r
50

i e
N

n
O O

r
89

U us tand t
30 63
134 149 180 193
39 76
43 51 164
28 69 92 96 105 120 227
15 152 197
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240
(mainlib) Trinitrotoluene
46

d
100
42
RDX

I n a n
O O

30
N N

S
O N N O

50
75

de
N

56 120 N
128
O O
71

44 73 81
98 102 148
32 48 68 85 112 132 205
91 95 158 167 174 194 221
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230

116
 19/06/2022

Intensidad del ION MOLECULAR M+.

180
100
Ketamina

Cl
O

tr í a
50
NH

e
152 209
138

o
102 115
146

m
166
42 75 125 174
30 51 89 132

s
55 63 68 111 194
15 35 82 93 161 200 220 236
0

r o
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250

r
(mainlib) Ketamine
323

u t
LSD
100

C pe as c
O
221

I A
N
HN

C
50

s s
N

I
181 207

E ma ST
72

154
196 RDA
167 192
44 128 280
58 265
76 89 100 110 117 139 175 235 249 295 306
52 63
0
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330

de INJU
(mainlib) D-Lysergic acid N,N-diethylamide

117

k o
M e n
s h
t a
Iones moleculares multicargados
S
100

a id a
57

d
l e n s
43

r
71

E ive al
50
85

n r i e r 97

U us tand t
127 155 183
211 239
0
10 60 110 160 210 260 310 360 410 460 510 560 610
(mainlib) Tetratetracontane
252
100
Iones dicargados

I n d a n
S
50

de
126
113 224
0
30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260
(mainlib) Benzo[a]pyrene

118
 19/06/2022

Intensidad del ION MOLECULAR M+.

Benzo[ghi]perylene
276
100

tr í a
50

e
138

s o m
124 252
27 39 43 50 55 62 74 83 91 97 105 111 117 146 158 170 185 197 209 220 226 233

r o
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290

r
(mainlib) Benzo[ghi]perylene

u t
100 77
105
342

C pe as c A
O

I
HN

s s C
50

E ma ST I
O

N
51
162
O

28 190
18 39 123 151 209 236 311
0

de INJU
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350

119

k o
M e n
s h
S t a
Intensidad del ION MOLECULAR M +.

a id a d
n
100 121
91

l e
E ive al r s
150 121
O

150

r
NH

i e
50

n r
O

U us tand t
I
91

65 77

d
105 247 278
42 51 134 163 175 189 198 208 217 232 258 267 288 298 315 346 377 394 425

n
0
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440

n
(mainlib) 25I-NBOMe

I a
Name: 25I-NBOMe

S
Formula: C18H22INO3

de
MW: 427 Exact Mass: 427.064442 CAS#: 1043868-97-8 NIST#: 386267 ID#: 103565 DB: mainlib
Other DBs: None
Contributor: Darrick Lee, Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, no synonyms.
Estimated non-polar retention index (n-alkane scale):
Value: 2835 iu

120
 19/06/2022

Metilona
100
58
+
CH3CH=NH-CH3
m/z 58

tr í a O

o e
O

m
50

r s o
HN
O

u
C pe as c t r
A
M+. 207

I
56 63
39 42 91 121 149
50 53 74 77 134 162 176
0

s s C
30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210

E ma ST I
La METILONA, conocida por 3,4-metilendioxi-N-metilcatinona (MDMC, bk-MDMA, M1), es un psicotrópico de la familia de
las feniletilaminas, anfetaminas y catinonas con propiedades empatógenas, psicodélicas y estimulantes. Es una β-cetona
análoga del 3,4-metilendioxi-N-metilanfetamina (MDMA, Éxtasis)

de INJU
121

k o
M e n
s h
S t a
d
8-Cloroteofilina

n a id a
l e
E ive al r s
n r i e r
U us tand t
d
Ion isotópico más

n
Isótopo [M + 1] (%) [M + 2] (%)

n
abundante (%)

I a
12C = 100 12C 1,1 -

S
32S = 100 34S 0,8 (33S) 4,4 (34S)

de
35Cl = 100 37Cl - 32
79Br = 100 81Br - 98

122
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
123

k o
M e n
s h
S
La regla del nitrógenot a
a id a d
Átomos
l e n r s Masa Co(Valencia)
E ive al r
Nitrógeno
n
U us tand
C, O, S, Si, Ge, Pb …

t
H, F, Cl, Br, I, As, Sb …
r i Par
Impar
Par
e Par
Impar
Impar

I n d a n
S
N N

de
N N
N N

78 79 80 81
124
 19/06/2022

94
100
No hay nitrógeno OH

50
- CO

a
66

í
39

tr
55 63
27 42 47 50 74 79

e
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

o
(mainlib) Phenol

s o m
93

r
1 átomo de nitrógeno
100

u t r
NH2

C pe as c
- HCN

A
50

I
66

s s I C
39 92

E ma ST
28 52 63 78
74
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
(mainlib) Aniline

de INJU
125

k o
M e n
s h
S t a
d
No hay nitrógeno 91

a
100

a id
92

50

l e n r s
E ive al r
39
51 63
65

i
93

e
27 40 45 66 89

n r
0

U us tand t
20 30 40 50 60 70 80 90 100

100 1 átomo de nitrógeno 93

50

I n d a n
N 66

S
39
51 78

de
27
1 15
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
(mainlib) Pyridine, 2-methyl-

126
 19/06/2022

100 1 Átomo de nitrógeno 93

-HCN
50
N 66
- CH3

a
39

í
51 78

tr
27
1 15
0

e
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
(mainlib) Pyridine, 2-methyl-

s o m
2 Átomos de nitrógeno 94

r o
100

u
C pe as c t r
A
50 67 N

I
N

s s C
40
-HCN 53
-HCN

I
26

E ma ST
15
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

de INJU
127

k o
M e n
s h
S t a
d
80
100

a id a
2 Átomos de nitrógeno

n
N

l e r s
50 26 53
C2H2+.

E ive al
-HCN N -HCN

r
52
25 28 81

i
38 40 54

e
0

n r
10 20 30 40 50 60 70 80 90

U us tand t
81
100
3 Átomos de nitrógeno -HCN
54

d
28

n
N N

n
-HCN

I a
50
HCN+. 27

S
53 N

26 38 40 52 55 82

de
13 29
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90

128
 19/06/2022

Indicar cationes y catión-radicales

30
100

CH2=NH2+ m/z 30
NH2

í a
50

tr
28
44
15 27
42

e
29 40
18 31
0

o
10 14 18 22 26 30 34 38 42 46 50 54 58

m
(ma inlib ) Ethylamine

r s o
43 43

r
100 73
30

u t
O NH

C pe as c
30 -CH3

I A
50 58
15

s C
28 31

s I
42
32 45

E ma ST
14 27 29 74
54 59
0
10 20 30 40 50 60 70 80

de INJU
129

k o
M e n
s h
S t a
d
-C2H4

n a id a
l e
E ive al r s -CH3

i
n str registrados e r
¿Cuáles deU n d
en el espectro deu masas de lata
los iones-fragmento

I n d a n 1,2-
dimetilpiperidina
S
son cationes?

de
¿Cuáles son catión-radicales?

130
 19/06/2022

La regla del nitrógeno

Masa Catión-radical Catión

tr í a
o
Par 1. No tiene nitrógeno

m e Tiene número impar

s o
2. Tiene número par de átomos de nitrógeno

u r t r de átomos de nitrógeno

C pe as c
Impar

I A
Tiene número impar
de átomos de nitrógeno
1. No tiene nitrógeno
2. Tiene número par

s
E ma ST s I C de átomos de nitrógeno

de INJU
131

k o
M e n
s h
S t a
d
IONES MOLECULARES, M+. - Paridad de masa, m/z
100

Fentanilo
n a id a 245

l e
E ive al r s 189 (+ H)

r
146
N
245

n
U us tand t r i e
50
O N
189

42
29
57
77
105 91

d
91
96 132
202

n
118

n
65 70 158
82

I a
15 172 216 279
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350
(mainlib) Fentanyl

S
No se registra el ion M+. en m/z 336 (-%)

de
Ion-producto, pico de base, [M – CH2C6H5]+ en m/z 245 (100%)
Presencia anillos aromáticos, m/z 77 (25%), m/z 91 (21%)

132
 19/06/2022

IONES MOLECULARES, M+. - Paridad de masa, m/z

Anfetamina 65
44
100 91

a
NH2

tr í
e
50

r s o o m 44

u t r
91
65

c
42 45 51 63 92 120
53 60 66 77 79 89 103 115 134

C pe as
56 74 86 130
0

A
40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140
(mainlib) Amphetamine

s s I C I
No se registra el ion M+. en m/z 135 (-%)

E ma ST
Ion-producto, pico de base, [CH3-CH2=NH2]+ en m/z 44 (100%)
Presencia anillos aromáticos, m/z 65 (5%), m/z 77 (2%), m/z 91 (21%)

de INJU
133

k o
M e n
s h
t a
IONES MOLECULARES, M+. - Paridad de masa, m/z
S
a id a d
n
100
Levamisol 148

e s
204

l
104

E ive al r
r
73

i e
N S

n
101

r
50

U us tand t
N
101 [C6H5]+
[M –C6H5]+ 34S
+H 121
77 127
104
89

d
45 51
56 63

n
91 117
28 39 176

n
54 59
69 131 144 157
15 108 169 189

I a
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220
(mainlib) Levamisole

S
Intensidad del ion molecular M+. alta, m/z 204 (90%)

de
Masa del ion molecular par (dos átomos de nitrógeno)
Presencia del átomo de azufre [M + 2]+.

134
 19/06/2022

8-Cloroteofilina

tr í a
o m e
u r s t r o
Ion isotópico más
Isótopo [M + 1] (%) [M + 2] (%)

c
abundante (%)

C pe as A
12C = 100 12C 1,1 -

C I
32S = 100 34S 0,8 (33S) 4,4 (34S)

s
E ma ST
35Cl

79Br
= 100
= 100 s I
37Cl

81Br
-
-
32
98

de INJU
135

k o
M e n
s h
S t a Iones multicargados M+.
100

a id a d 128

l e n r s
E ive al
50

M+2 -C2H2

n r i e r 51 64 75 102

U us tand t
39
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140
(mainlib) Naphthalene

127

M+.
d
100

n n
Br
206

I
50

S a M+2 -Br

de
63
77 103
50
39 87
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220

136
 19/06/2022

Feniletilaminas
121
Abundance

90
CH2

80 OCH3

í a
70

tr
60

e
150

o m
50

r s o
25C-NBOMe

r
40 91

u c t
30

C pe as 20

I A M+.

s s I C
10 185, 187 (M–OCH3)+

E ma ST
65
304 335
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 m/z

de INJU
137

k o
M e n
s h
S t aFeniletilaminas
a id a d
121
Abundance

n
CH2
90

l e s
OCH3

r
80

E ive al r
70

n r i e
60

U us tand t
150

50

40 91 25B-NBOMe

n d n
30

I a
20

S
M+.
10 (M–OCH3)+

de
65 229, 231
348 379
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380
m/z

138
 19/06/2022

Abundance 121
Feniletilaminas
90
CH2
80
OCH3

í a
70
150

tr
60

e
50

r s o
40

o
91

m 25I-NBOMe

u t r
30

C pe as c A
20
M+.

I
10

C
(M–OCH3)+

s s
277

I
396 427

E ma ST
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420
m/z

de INJU
139

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
140
de
 19/06/2022

63.59 64.99
25C-NBOMe 25B-NBOMe
Feniletilaminas

tr í a
o m e
u r s t r o
c
X = Cl, Br, I
C pe as A
66.81

s s I C I 25I-NBOMe

E ma ST
63.00 63.50 64.00 64.50 65.00 65.50 66.00 66.50 67.00 Time

de INJU
141

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
25C_NBOMe_StepScan #1306 RT:6.00 AV: 1 NL: 2.10E8
T: FTMS + p ESI Full ms2 1000.0000@hcd10.00 [80.0000-1000.0000] 336.13657

n
C 18 H23 O3 NCl

100 1.39340 ppm

l e s
95

r
90

E ive al
85

80

r
75

i e
70

n r
65

LC-Orbitrap-MS

U us tand t
60
Relative Abundance

55

50

45

40 338.13333

d
C 18 H23 O3 N 37Cl

n
35
0.54301 ppm

n
30

I a
25

20

S
15

10

de
5

0
326 328 330 332 334 336 338 340 342 344 346 348 350
m/z

142
 19/06/2022

LC-Orbitrap-MS
C:\Xcalibur\...\25B_NBOMe_StepScan 01/06/17 11:16:53

RT: 0.00 - 12.00 SM: 7B

11.21 NL: 2.42E9
100
11.03 TIC F: FTMS + p ESI Full

Full scan
ms [80.0000-1000.0000]
80
MS
Relative Abundance

11.51 25B_NBOMe_StepScan
60
9.98 10.33 10.53

40

a
9.61

í
20 9.27
6.07 6.53 8.40 8.50
5.80 6.75 7.13 7.41 7.80 8.12
0.44 0.79 1.01 1.31 1.78 2.16 2.37 2.75 3.17 3.58 3.72 3.92 4.40 4.79 5.01

tr
0
6.12 NL: 4.50E7
100
Base Peak m/z=
380.08368-380.08748 F:
80

EIC
FTMS + p ESI Full ms

e
[80.0000-1000.0000] MS
60
25B_NBOMe_StepScan

40

o
20

m
5.86 6.53 6.75 7.01 7.49 7.92 8.38 8.70 8.98 9.19 9.38 9.65
0

s
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5 11.0 11.5 12.0

r o
Time (min)

r
25B_NBOMe_StepScan # 1334 RT: 6.11 AV: 1 NL: 1.50E8

u t
T: FTMS + p ESI Full ms [80.0000-1000.0000]
380.08585
100
382.08350

c
90

C pe as
80

I A
70

60
Relative Abundance

50

s s I C
40

25B-NBOMe

E ma ST
30
110.02031
20
154.99026
10
98.51241 121.06411 182.98524 219.17433
144.98219 236.16190 264.23209 282.90976 299.91235 328.91568 365.06091 485.03235
0
100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540
m/z

de INJU
143

k o
M e n
s h
S t a
d
FTMS + p ESI Full ms2 1000.0000@hcd10.00 [80.0000-1000.0000]
LC-Orbitrap-MS

a id a
25B_NBOMe_StepScan
#1331 RT:6.10 AV: 1 NL:1.24E8
T: 380.08560

n
C 18 H23 O3 NBr 382.08350
0.01912 mmu

e
100

s
C 18 H23 O3 N 81Br

l
95 -0.04000 mmu

r
90

E ive al
85

r
80
75

i e
70

n r
65

U us tand t
60
Relative Abundance

55
50
45

d
40

n
35

I n
30

a
25
381.08878 383.08652

S
20
15
10

de
5
0
375 376 377 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 392
m/z

144
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
145

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
146
de
 19/06/2022

C:\Xcalibur\...\25B_NBOMe_StepScan 01/06/17 11:16:53

LC-Orbitrap-MS
RT:0.00 - 12.00 SM:7B
11.21
100 11.03

11.51

Full scan
9.98 10.33
50
9.61
9.27
0.44 0.79 1.01 1.31 1.78 2.16 2.37 2.98 3.17 3.72 3.92 4.40 5.01 5.80 6.07 6.53 7.13 7.41 7.80 8.12 8.40 8.50
0
6.12
100
Relative Abundance

í a
EIC
50

tr
5.86 6.53 6.75 7.01 7.49 7.92 8.38 8.70 8.98 9.19 9.38 9.81
0
6.08
100

e
50 EIC, HCD 30 eV

o m
0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5 11.0 11.5

s
Time (min)
12.0

r r o
25B_NBOMe_StepScan

u t
F:

c
121.06493

C pe as
100

A
90

I
80
70
Relative Abundance

C
60

s s I
50

E ma ST
40
30
20 91.05466

10 109.06504
0
100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540

de INJU
m/z

147

k o
M e n
s h
S t a
IONES-FRAGMENTO
a id a d
l e n r s
E ive asimple
Productos de ruptura
l r
Productosn
U us tand t r i
de reordenamiento e
I n d
IONES-PRODUCTO a n
S
148
de
 19/06/2022

Formación de un catión y un radical:

M+ . A+ a
+rí R
t
.
o m e
u r s t r o
Formación de un catión-radical y una molécula:

C M e
+ c
. .
B s + RIA
+
s p s a I C
E ma ST
de INJU
149

k o
M e n
s h
¿Qué se mira primero
S t a
en un espectro a id de a d
masas?
l e n r s
E ive al
1. Distribución de señales (iones) en el espectro:

r
m/z de fragmentos y sus intensidades (I%).

n
U us tand
2.

3. t r i e
Presencia del ion molecular (o su ausencia);
paridad de la masa del ion molecular y su intensidad.
Diferencia “lógica” de masas (∆m) entre el ion

I n d n
molecular y el ion-fragmento más cercano (m/z), i.e.,

a
la penúltima señal.
4.
S
Detección del ion pico de base y de iones

de
característicos, que permiten elucidar la presencia
de ciertos grupos funcionales en la molécula.

150
 19/06/2022

IONES ISOBÁRICOS
tr í a
o m e
u r s
CH2CN, CH2CHCH2
CH3OH, O2
t r o
m/z 41
m/z 32

C pe as c
CH3C(H)O, CO2
A
m/z 44
I
s s C
CH2=O, CH=NH2 m/z 30

E ma ST I
de INJU
151

k o
M e n
s h
S
PÉRDIDA DE UN FRAGMENTO t a NEUTRO
a a d
n i d
I,%

[M – 1]+
l e
E ive al m r
- H2O
- CO r s
100
m = 5-14

n i e
75
m = 21-25
r
[M – 15] +
- CH3.
[M – 18] +
U u¡!st tand
- Cl. 50

d
- H2S

I n a n
25
[M – 20] + - CH3OH

S
de
0

m/z

152
 19/06/2022

IONES-FRAGMENTO
Iones “pesados” en la región de masas altas, se forman a través de la
pérdida de una molécula neutra pequeña: CO, HCN, H2O, CH3OH, etc.,

tr í a
sin un notorio cambio en la estructura de la molécula inicial

e
I,%

o m
100

s
-43

u r t r o
75
-33

C pe as c A
50

I
-18

s s C
25

I
-15

E ma ST
0
m/z

de INJU
153

k o
M e n
s h
t a
S neutro
Pérdida de unafragmento a d
e n s i d
[M – 1] l r
E +

i v e -H2O
a l(-18)
r
m = 5-14

n
-CO
t r i (-28)
d e m = 21-25

[M – 18] U
[M – 15] +

s n
-CH3. (-15)

d u
+ -Cl.

n t
¡!a
(-35, 37)

I n a
-H2S (-34)

S
[M – 20] +
-CH3OH (-32)

154
de
 19/06/2022

tr í a
e
-CO -CO

r s o o m
u c t r
C pe 2-Cumaranona a s I A
s
E ma ST s I C
de INJU
155

k o
M e n
s h
S t a
IONES-FRAGMENTO
a id a d
l e n r s
altas, seE e
Iones “pesados” en la región de masas
i v
formana través
i a l
de la pérdida de
e r
n
una molécula
t r
U H O,uCHsOH, etc.,tand
neutra pequeña:

d
CO, HCN,
n n
2 3

I inicial
sin un notorio cambio
la molécula a
en la estructura
S
de

156
de
 19/06/2022

¿Qué se mira primero

en un espectro de masas?
a
Distribución de señales (iones) en el espectro:

í
1.

tr
m/z de fragmentos y sus intensidades (I%).

e
2. Presencia del ion molecular (o su ausencia);

o m
paridad de la masa del ion molecular y su intensidad.

u r s 3.

t r o
Diferencia “lógica” de masas (∆m) entre el ion

c
molecular y el ion-fragmento más cercano (m/z), i.e.,

C pe as A
la penúltima señal.

s
4.

s I C I
Detección del ion pico de base y de iones

E ma ST
característicos, que permiten elucidar la presencia
de ciertos grupos funcionales en la molécula.

de INJU
157

k o
M e n
s h
S t a
PICOS DE ALTA INTENSIDAD EN EL ESPECTRO

a id a d
n
Alquenos, nitrilos y dinitrilos, tioésteres, ciclohexilos, …

e
m/z 41
l
E ive al r s
m/z 43
r
Alcanos, acetatos, metil cetonas, …

m/z 77 CH n
U
+
t r i d e
6 5

u s t a n
m/z 91 CH
I
7 7
n
+
d a n
S
de
m/z 105 C H CO 6 5
+

158
 19/06/2022

Espectro de masas
1. Ion molecular (paridad de masa, intensidad, aspecto
general del espectro de masas)

a
2. Masas exactas: composición elemental

tr í
3. Relación isotópica: composición elemental

o e
4. Patrón de fragmentación (esquema): reacciones típicas

m
s
de disociación (rupturas α-, β-, alílica, bencílica,

u r t r o
transposiciones de McLafferty, RDA, etc.). Relacionar con

C pe as c
la estructura.

I A
5. Iones típicos (m/z 51, 77, 91, 105, 149, etc.); pérdida de

C
s s I
fragmentos característicos (CO, H2O, C2H2, C2H4, CH3OH,

E ma ST
C7H7, etc.). Relacionar con la estructura.

de INJU
159

k o
M e n
s h
S t a
PICOS DE ALTA INTENSIDAD
a id+ d
EN EL ESPECTRO
a
m/z 77le n Cr6s
H5
E e
m/z 91 ni C7H7r+ial
v r
U t d e
m/z 105 duC6H5CO tas + n
I n a n
S
160
de
 19/06/2022

Fragmentos típicos: m/z 105

77
Benzamida
100
105

O
121

a
51

í
H2N
50

tr
50

e
44
74 78
39
16

o
26 49 53 61 65 103
12 40 43 92

m
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

r s r o
105
100
Cloruro de benzoilo

u
C pe as c t 77 O

I A
50 Cl

s s I C
51

E ma ST
74 140
38 52 78
25 28 43 56 61 84 87 90 97 103 111
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150

de INJU
(mainlib) Benzoyl chloride

161

k o
M e n
h
Fragmentos típicos: m/zs105
S t a
100

a id a d 105
N,N-Dimetil-4-oxo-4-fenil-butiramida

n
44

l e s
77 O

r
O

E ive al
50
15 72 100

r
51
161 N
42

i
28

e
46 55 133

n
U us tand t r
57 115 205
39 74
12 63 67 83 89 120 128 143 149 177 188
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220

91
100 105
3-Fenilpropionato de fenilo

n d n
133

I a
O

S
94
50
O

de
77
65
39 51 79 226
27 55 63 115 150 165 183
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240

162
 19/06/2022

Ion benzoilo C6H5CO+ en m/z 105

Benzoato de estradilo

tr í a
o m e
u r s t r o Benzobarbital

C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
163

k o
M e n
s h
S t a
Catión bencílico (ion tropilio) C7H7+ en m/z 91

a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
164
de
 19/06/2022

Formación de iones ACILO

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
165

k o
M e n
s h
100

S t a
Iones acilo CH3CO+
43

a id a d
50

l e n r s
. O M+.

E ive al
-CH3 58

r
15 42
27

i e
29 39 44
16 31 57 59

n r
0

U us tand t
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
(mainlib) Acetone

43
100

I n d a n
S
50

-C2H5
. O M+.

de
72
29
27 57
15 39 42 44 71 73
0
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80

166
 19/06/2022

43
100

2-pentanona
O

50

í a
86

tr
41
27 39 58 71
42 44
15 29 31 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69 72 85 87

e
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

o
(mainlib) 2-Pentanone

r s o m
100 43

2-heptanona

u
C pe as c t r 58 O

I A
50

s s I C
57

E ma ST
41
100
27 29 39 85
42 71
59
15 26 30 37 40 44 49 51 53 55 62 65 67 69 83 86
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

de INJU
(mainlib) 2-Hexanone
167

k o
M e n
s h
S t a Etil butyl cetona (heptan-3-ona, 3-heptanona)
100

a id a d 57

n
m/z 57

l e s
29

50

E ive al r
r
27 O
85 m/z 85

i e
41

n r
72

U us tand t
39 43 114
15 18 31 55 69
45 49 62 65 73 77 81 87 91 98
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
(mainlib) 3-Heptanone

I n d a n
Formación de iones acilo:

S
[M – C4H9]+ CH3CH2CO+ m/z 57 (100%)

de
[M – C2H5]+ CH3(CH2)2CO+ m/z 85 (29%)
C2H5CO+  C2H5+ m/z 29 (75%)

168
 19/06/2022

M+.

tr í a R = CH3

o m e
u r s t r o
C pe as c I A M+.

s
E ma ST s I C R = C2H5

de INJU
169

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
R = n-C3H7

E ive al
122

r
M+.

n
U us tand t r i e
d
R = iso-C3H7

I n a n
S M+.

de
122

170
 19/06/2022

R = n-C4H9

í a
122

tr
M+.

o m e
u r s t r o
R = iso-C4H9

C pe as c I A
s
E ma ST s I C M+.

de INJU
171

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
R = n-C5H11

E ive al
122
M+.

n r i e r
U us tand t R = iso-C5H11

I n d a n
S
de
122 M+.

172
 19/06/2022

tr í a
La intensidad del ion molecular M+. en la serie homóloga de benzoatos

o m e
de alquilo disminuye con el aumento de tamaño del radical R.

s o
Los siguientes son iones comunes en todos los espectros de masas

u r t r
de benzoatos de alquilo, a saber:

C pe as c
[M – OR]+., m/z 105 (100%); [(M – OR) – CO]+., m/z 77 (25-60%);

I A
{[(M – OR) – CO] – C2H2}+., m/z 51 (10 - 27%)

s
E ma ST s I C
Con el aumento del tamaño R (>C3), aparecen “nuevos” iones, productos de
doble transposición de hidrógeno C6H5C(OH)(OH)+ en m/z 123, y el ion [R-H]+.

de INJU
173

k o
M e n
s h
S t a m/z (I, %)

d
R=

a id a
[(M-OR) – {[(M – OR) – C6H5C(OH) McLafferty
M+. {M – OR)+ [R – H]+

n
CO]+ CO] – C2H2}+ (OH)+ [C6H5COOH]+

l e s
CH3 136 (45) 105 (100) 77 (70) 51 (25) - - -

C2H5

E ive al
150 (24)
r
105 (100) 77 (48) 51 (12) - - 122 (28)

n-C3H7

n
164 (2)

r i
105 (100)

e
77 (50)
r 51 (26) 123 (40) - 122 (27)

U us tand t
iso-C3H7 164 (7) 105 (100) 77 (28) 51 (13) 123 (29) - 122 (24)

d
n-C4H9

n
178 (1) 105 (100) 77 (48) 51 (25) 123 (70) 56 (24 ) 122 (23)

iso-C4H9
n-C5H11 I n
178 (0)

S a
105 (100) 77 (29) 51 (8) 123 (50) 56 (25 ) 122 (-)

de
192 (2) 105 (100) 77 (45) 51 (8) 123 (95) 70 (50) 122 (25)

iso-C5H11 192 (1) 105 (97) 77 (50) 51 (12) 123 (25) 70 (100 ) 122 (5)

174
 19/06/2022

LC/MS: Sinopsis

tr
Técnica de acoplamiento
í a
o m e
MS: transferencia de iones

u r s t
y medición de las corrientes iónicas
r o
c
Ionización a presión atmosférica
C pe Ionización: a s I A
s C
ESI, APCI, APPI
s
E ma ST I
de INJU
175

k o
M e n
s h
ta d
LC/MS:SSinopsis
n a i d a
e s
ESI -Ionización:
l
E iver al
Moléculas del analito deben estar en forma

n r i e r
ionizada antes de su electronebulización,

t d
en la interface ESI: Esto se logra con el cambio

U s n
del pH del eluyente en la columna de HPLC.

u t a
n d
ESI -Ionización:
I a n
S
Es una ionización SUAVE; cuando se producen

de
los iones, la energía transferida a ellos, es mínima.
[M + H]+, [M – H]-, [M + Na]+
176
 19/06/2022

LC/MS: Sinopsis
Ionización:

í a
Campos eléctricos fuertes

tr
Presión atmosférica

o
Detectores:
m e
u r s t r o Electromultiplicadores

c
Dínodos
C pe as Fotodiodos
I A
s
E ma ST s I C
Plato multicanal
Sistema de vacío

de INJU
177

k o
M e n
s h
LC/MS:S t a
Sinopsis
a id a d
l e n r s
¿Cómo escoger correctamente
E ive al
la interface de LC-MS?
r
n
U us tand t r i e
Investigar detalladamente el CV del analito:
Peso molecular

n d n
Grupos funcionales presentes
I a
S
pKa

de
Labilidad térmica

178
 19/06/2022

Interfaces:
Electrospray - ESI
Ionización química a presión atmosférica - APCI
Fotoionización a presión atmosférica - APPI

Parámetros ESI
tr í a
APCI APPI

o m e Moléculas que Moléculas pequeñas y

s
Macromoléculas y
NO forman fácilmente medianas de amplio

r o
moléculas pequeñas,
Analitos

r
iones en solución: rango de polaridad,
polares y termo-estables,

u t
cetonas, aldehídos, incluso termolábiles,
fácilmente ionizables

c
ésteres, éteres, etc. e hidrocarburos

C pe as A
HPLC en fase reversa: HPLC en fase reversa
HPLC en fase reversa:

I
Descarga corona: HPLC en fase normal
HPLC Formación de iones
Formación de iones (ionización con

s C
en solución

s
en fase gaseosa “dopantes”)

E ma ST I
Formación de iones en Formación de iones Ionización con fotones
solución, desolvatación y en fase gaseosa; (UV), también,
Ionización su transferencia en fase ionización química por en la presencia
gaseosa moléculas del solvente de “dopantes”

de INJU
179

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
Ionización suave Iones multicargados
Analitos de masa alta

de
Presión atmosférica
Solventes volátiles, analitos iónicos LC-MS acoplamiento

180
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
181

k o
M e n
s h
LC/MS: S ta d
Sinopsis
n a i d a
e s
Ionización SUAVE: formación de iones cuasi-
l
E iver al
moleculares e iones-aductos

i
Separación de iones:
n r e r
U us tand t
Cuadrupolo (Q)
Trampa de iones (IT)

I n d a n
Tiempo de vuelo (TOF, ToF)
Sector magnético (B)

S
Configuraciones tándem:

de
(QQQ, Q-TOF, IT-TOF, TOF-TOF, BE, EB, etc.)

182
 19/06/2022

LC-MS-TOF
LC-MS-TOF

tr í a
e
Cromatógrafo LC Interfaz Analizador MS

r s o o m
u
C pe as c t r
C I A
s
E ma ST s
Formación de iones
I Transmisión de iones Detección de iones

de INJU
183

k o
M e n
s h
t
LC/MS: Sinopsis
S a
ESI -n a id a d
l e
E ive al s
ANALITOS:
r1. De polaridad moderada a alta

n i e r
2. Peso molecular de hasta 100.000 Da o más

r
U us tand t
3. Se pueden ionizar en solución, a menudo
con la formación de varias cargas por molécula

I n d a n
La ionización por electronebulización favorece

S
a los analitos que se encuentran en forma ionizada,

de
en el efluyente de HPLC, antes de entrar
a la interfaz.

184
 19/06/2022

LC-MS: Sinopsis
Ionización:
I.
í a
Desolvatación de moléculas del analito

tr
e
II. Carga (ionización) de moléculas

o m
del analito; iones se forman en solución

u r s ESI: o
t r
C pec as I A
1. Producción de gotas cargadas

s
E ma ST s I C
2. Desolvatación de las gotas: iones
3. Transferencia de iones en fase gaseosa

de INJU
185

k o
M e n
s h
LC/MS:S ta d
Sinopsis
n a i d a
l e
E iver al s
ANALITOS aptos para la ESI:

r
1. Moleculas que contienen heteroátomos (O, N, S, halógenos)

n r i e
2. Compuestos que pueden adquirir su carga por medio de efectos

U us tand t
inductivos (compuestos azo-, ftalatos, opioides, etc.)
3. Compuestos capaces de mantener varias cargas (proteínas,

d n
péptidos, etc.), bajo condiciones correctas del pH.

I n a
4. Compuestos fácilmente ionizables (ácidos, bases, etc.): cambio

S
de pH  estado ionizado en una solución.

de
5. Compuestos que poseen un momento dipolar alto, que pueden
formar aductos iónicos con Na, K o MeCN en solución

186
 19/06/2022

LC-MS: Sinopsis
í a
Formación de un aerosol estable depende de:

e tr
ESI en modo positivo

r s o m
(bases, cationes en la solución)
o
u t r
c aniones
ESI en
C pe(ácidos,
modo negativo

a s I A
en la solución)
s
E ma ST s I C
de INJU
187

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
LCle
n r s
MS
E ive al
Ion

n r i e r source

U us tand t
region

I n d a n
S
de
ESI-MS
188
 19/06/2022

reduction
+ + + ++ + + +
+ + ++ +
+ + + -+ + + +
+ + + ++ +
+
- - + - + + + + + + + + +++ + +
+ + + ++ +
+

a
+
+ + + +

í
+ + + +
+
+ ++ + +

tr
+
+
+
oxidation Taylor cone + ++ + + + +
+
+ +

e
+ + + +
electrons

+ +
+

o
+ + ++ +
+ + +

r s r o m
u t
electrons

c
TDC

C pe as - +

I A TOTAL DROPLET CURRENT

s s C
High Voltage

E ma ST
Power Supply
I A spray of small positively charged droplets.

de INJU
189

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
Entrada de iones al capilar

S
190
de
 19/06/2022

LC/MS: Sinopsis
Separación HPLC:
1.
2.
í a
Analito soluble en la fase móvil

tr
Amplio rango de polaridades, incluyendo compuestos

o
iónicos

m e
r s o
3. No hay límite de peso molecular

u
C pe as c t r
4. Las muestras para HPLC deben prepararse en un

A
sistema, que posee el mismo o menor contenido del

s s I I
solvente orgánico que la fase móvil.

C
E ma ST
Volumen de inyección: 1 – 50 µL;
1 – 10 µg del analito por 1 g del material de empaque.

de INJU
191

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
192
de
 19/06/2022

LC-ESI-MS: Solvente IDEAL

a
Punto de ebullición bajo

tr í
e
Constante dieléctrica pequeña

r s o o m
Tensión superficial baja
u t r
C peciónico a(ion-pairing s ) IA
Habilidad baja para “apareamiento”

s
E ma ST s I C
de INJU
193

k o
M e n
s h
S t a
Solvente a id a d
Solubilidad delle
n r s
VolatilidadE e l
analito Importantísimo:

Habilidad de donarn
i v pH
i a
un protón pKrdel analito e r
U s t n d
u a
a

Acetonitrilo/agua nd
Metanol/agua
n t
I S a
de
Aditivos

194
 19/06/2022

Solventes para LC-ESI-MS

Tensión Momento Constante
Solvente Viscosidad
superficial dipolar dieléctrica
Metanol 22.55

tr í
2.87
a 32.70 0.59

e
Etanol 22.32 1.66 24.55 1.10

r s o o
Butanol
m
22.98 1.75 17.51 2.98

u
C pe as c t r Acetonitrilo 19.10 3.44 37.50 0.38

I A
DMSO 43.80 4.10 46.68 2.24

s s I C
Agua 72.80 1.87 80.10 1.00

E ma ST Hexano 17.91 0.08 1.88 0.31

de INJU
195

k o
M e n
s h
S t a
Electrospray a id d
Solvents
a
l e n r s
Many solvents can be used in ESI and are chosen:

E ive al r
(1) based on the solubility of the compound of interest

n
U us tand t r i e
(2) the volatility of the solvent, and
(3) the solvent’s ability to donate a proton.

d n
Typically, protic primary solvents such as methanol, 50/50

I n a
methanol/water, or 50/50 acetonitrile/H2O are used,

S
while aprotic co-solvents, such as 10% DMSO in water, as well as isopropyl

de
alcohol are used to improve solubility for some compounds.

196
 19/06/2022

t r í a
o m e ION
u r s t r o
c
C pe as SUPPRESSION I A
s
E ma ST s I C
Tomado de: http://www.uow.edu.au
supresión de iones
¿dónde? en electrospray

de INJU
197

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
U n t r i d e
In the presence ofu s t a n
nd San
a second electrolyte
species, theIintensity

de
of the analyte can be suppressed
198
 19/06/2022

Capillary tip Counter electrode

tr í a
o
Electrochemical reaction

m e
s o
E = 106V/m

u r t r
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
199

k o
M e n
s h
t a
+ S d
+ ++
a a
+ + + +++

n d
+ + ++

i
+ +
+

+l+e ++
+

s
+ + +

r
+
+ ++
+ + + +

E ive al
+
+ + + ++

r
+++ +
+
n r i e
+ ++

U us tand t
+

Solvent Droplet fision at

d
Rayleigh limit

n
evaporation

I n S a
Formation of desolvated
[M + nH] n+

de
ions by further droplet fission
and/or ion evaporation

200
 19/06/2022

EVAPORATION ESI-MS
Ion

a
evaporation

í
Fission

tr
+ + + +
+ + +
+ +
+ + +

e
+
+ + + + + + + +
+

o
+

m
+

s
+ +

r o
+ + + +

r
+

u t
+ + + + +

c
+ + + + +

C pe as
++ + ++

C I A
s s
Field-assisted

I
1. The Coulomb fission mechanism

E ma ST
ion desorption
2. Ion evaporation

de INJU
201

k o
M e n
s h
S t a
La solución del analito atravieza un capilar a cual

a id a d
se aplica potencial alto (2-5 kV)

l e n
Droplet formation
r s
E
Droplet
i
shrinkage
v e a l r
n
U us tand
Gaseous ion formation
t r i e
n d
Mecanismos propuestos:
I a n
ION EVAPORATION
e S MODEL (IEM)

202
d
CHARGE RESIDUE MODEL (CRM)
 19/06/2022

ESI-MSría
e t
r s o
R-NH2 +
o
H+
m
→ R-NH+

u t r
3

c
R-COOH + OH– → R-COO– + H2O
C pe as I A
s
E ma ST s I C
de INJU
203

k o
M e n
s h
S
Iones-aducto en ESI-MS t a
a id a d
l e n
[M + H]+

r s
M+1

E ive al
[M + Na]+ M + 23
[M + K]+

n
M + 39

r i e r
U us tand t
[M + nH]+n (M + n)/n
[M + nNa]+n (M + nx23)/n
[M + xNa + yK + d n
I n zH]
a
+(x + y + z)

[M + 23x + 39y + 1z]/(xS

de
+ y + z)
204
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
CSODIO e c s
OMNIPRESENTE I A
s p s a I C
E ma ST
de INJU
205

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n s
Material de vidrio del laboratorio
r
E ive al r
n
U us tand
Analistas: manos
t r i e
I n d a n
Muestras biológicas: orina,
plasma, sangre
S
206
de
 19/06/2022

Análisis de clorpirifos mediante UHPLC-ESI+-Orbitrap-HRMS

Modo de adquisición PRM
200000000

180000000
RT: 8.17
160000000 AA: 1646548717
+ H+

a
140000000

í
120000000

tr
100000000

80000000 [M+H]+: 349.93356

e
60000000
C9H11Cl3NO3PS
Δppm = 0.34
40000000

o
Relative Abundance

m
20000000

s
0

r o
200000000

r
180000000

u t
160000000

c
+ Na+
140000000

C pe as
120000000

A
100000000

I
80000000

60000000
[M+Na]+: 371.91550

s s C
C9H11Cl3NO3PS

I
40000000

Δppm = 1.09

E ma ST
20000000 RT: 8.20
AA: 21951260
0
6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0
Time (min)

Corriente iónica extraída obtenida por UHPLC-ESI+-Orbitrap-HRMS de la sustancia de referencia certificada de clorpirifos.

de INJU
207

k o
M e n
s h
S t a Espectro de masas de clorpirifos (Full MS)

a id a d
n
349.93344
C 9 H 12 O 3 N Cl 3 P S
-0.33977 ppm

e s
100

l r
95

90

E ive al
85

r
80

75

i e
70

n r
65

U us tand t
60
Relative Abundance

55

50

45

d
40

n
35

n
30

I a
25

20

S
15
87.08056 321.90201
10 C 5 H 11 O 197.92729 C 7 H 8 O 3 N Cl 3 P S
1.34642 ppm 124.98151 153.01270 C 4 H 3 O 2 N Cl 2 P 293.87064 -0.78248 ppm 373.91205

de
5 C 3 H 4 O 3 37 Cl C 5 H 8 O 3 37Cl -0.02486 ppm C 9 H O 3 Cl 3 S C 9 H 11 O 3 N Cl 2 37 Cl Na P S
96.95074 0.86595 ppm -0.01913 ppm 329.15918 -1.35404 ppm
224.12811 259.15390 273.09674 -0.04507 ppm
0
80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380
m/z

Espectro de masas de la sustancia de referencia certificada de clorpirifos, C9H11Cl3NO3PS,

[M+H]+: 349.93356, obtenida por UHPLC-ESI+-Orbitrap-HRMS, HCD = 0 V.

208
 19/06/2022

Distribución isotópica de clorpirifos: [M + Na]+

371.91510 373.91202
C 9 H 11 O 3 N Cl 3 Na P S C 9 H 11 O 3 N Cl 2 37Cl Na P S
-1.08797 ppm -1.43565 ppm
100

a
95

í
90

tr
85
80
75
+ Na+

e
70
65
[M+Na]+: 371.91550

o
60
Relative Abundance

m
C9H11Cl3NO3PS

s
55

o
50

r
Δppm = 1.09

r
45

u t
40
375.90884
35 C 9 H 11 O 3 N Cl 37Cl 2 Na P S

c
-2.02319 ppm
30

C pe as
25

A
20

I
15
377.90579
10 C 9 H 11 O 3 N 37Cl 3 Na P S

s s C
371.10117 375.36624 -2.28150 ppm
5 376.91180 380.23111

I
0

E ma ST
370.5 371.0 371.5 372.0 372.5 373.0 373.5 374.0 374.5 375.0 375.5 376.0 376.5 377.0 377.5 378.0 378.5 379.0 379.5 380.0 380.5
m/z

Distribución isotópica de la sustancia de referencia certificada de clorpirifos, C9H11Cl3NO3PS,

[M+Na]+: 371.91550, obtenida por UHPLC-ESI+-Q-Orbitrap-HRMS.

de INJU
209

k o
M e n
s h
S t a
d
10 eV 20 eV

n a id a
l e
E ive al r s
n r i e r
U us tand t 30 eV 40 eV

I n d a n
S
210
de
 19/06/2022

Espectro de masas de clorpirifos, [M+Na]+, (HCD = 10, 20 e V)

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s s C
+ Na+

E ma ST I
de INJU
211

k o
M e n
s h
1. Ionización
S t a
d
pKa del analito

a id a
pH de la solución
2. Nebulización
l e n r s
E ive LC-ESI-MS:
Tensión superficial y viscosidad
3. Desolvatación
i a l e r
n t r d
Temperatura del gas secante

U s n
Flujo del gas secante
¿Qué es importante?
4. Desorción de iones u a
Capacidad calorífica, ∆Hvap

n d n t
I a
Energía de solvatación
5. Reacciones en fase
S
gaseosa

de
Afinidad protónica
Intercambio de cargas (Charge Exchange)

212
 19/06/2022

EXTRACCIÓN Y ANÁLISIS

GC/MS
tr í a
LC/MS
o m e
u r s t r o
Extracción con
solvente orgánico
Extracción con
solvente/H2O

C pe as c I A
pH básico Modo positivo

s
E ma ST s I C
pH neutro Modo negativo

de INJU
213

k o
M e n
s h
% iones

S t a
d
100

a id a
Iones 100%

l e n r s
Análisis ESI, pKa + 3

E ive al - r
n r i e
50% 50%
H+

U us tand t A AH
50

-
OH

d
In Sa
Extracción, pKa -3
Moléculas 100% n Ácidos, AH

de
0 pKa = 5
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 pH

214
 19/06/2022

% iones
100

Extracción, pKa + 3
Iones, 100% Moléculas,100%

a
Análisis ESI, pKa - 3

tr í
e
50 50% 50%

r s o o BOH B + m H+

u
C pe as c t r OH
-

C I ABases, BOH
s
E ma ST
0
1 2 s 3 4
I 5 6 7
pKa = 9
8 9 10 12 13
pH

de INJU
215

k o
M e n
s h
t a
Anfetamina. ESI(+)-HRMS-Orbitrap
S
a id a d
n
Full scan

l e r s
+ H+

E ive al
[M+H]+:136.11208

r
C9H13N

i e
Δppm = 1.2

n
U us tand t r + Na+

d
[M+Na]+: 158.09402 HCD, 10 eV

I n a n
S
Molécula protonada (M + H)+. ESI en modo de

de
iones positivos. HCD, 10 eV. Iones-fragmento
C7H7+ y [(M+H) – NH3]+
216
 19/06/2022

Obtención de extractos para el análisis por GC/MS

Extracción a pH neutro Extracción a pH neutro

Las muestras se disolvieron en metanol y se

tr í a
A cada muestra, se le agregó una solución

e
agitaron hasta su disolución completa. La solución de NaOH, se realizó vórtice y se extrajo con CH2CL2

o
se filtró y se inyectó una alícuota al cromatógrafo de (3 x 1 mL); se secó con Na2SO4.

s m
gases (GC/MS) Una alícuota del extracto se inyectó al GC/MS.

u r t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
217

k o
M e n
s h
S t a Muestra 1
Abundance

a id a d
TIC: [BSB2]992438-05-AM-BAS.D\data.ms
A Abundance TIC: [BSB1]992438-05-AM-NEU.D\data.ms
B

n
3000000 2600000
2800000

e s
2400000

l
2600000

r
2200000
2400000

E ive al
2000000
2200000
2000000 1800000

r
1800000 1600000

i e
1600000 1400000

n r
1400000

U us tand
1200000

t
1200000 1000000
1000000
800000
800000
600000
600000
400000

d
400000

n
200000 200000

n
0

I
0

a
10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 Time--> 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 Time-->

S
Perfiles cromatográficos (GC/MS, TIC- full scan, EI, 70 eV) de la pastilla

de
extraída con solvente a diferentes pH, a saber:
A. pH básico; B. pH neutro.

218
 19/06/2022

Abundance
Pastilla 1
3000000

2800000
pH básico pH neutro
2600000

2400000

í a
2200000

tr
2000000

e
1800000

o
1600000

s o m
1400000

u r t r
1200000

c
1000000

C pe as A
800000

I
600000

s s I C
400000

E ma ST
200000

10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 Time-->

de INJU
219

k o
M e n
s h
S t a Pastilla 1

d
Abundance

pH básico pH neutro
a
3000000

a id
2800000

e n
2600000

l r s
2400000

E ive al
2200000

r
2000000

n r i e
1800000

U us tand t
1600000

1400000

d
1200000

n n
1000000

I a
800000

S
600000

de
400000

200000

10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 Time-->

220
 19/06/2022

Muestra 2
Abundance TIC: [BSB1]992438-27-AM-BAS.D\data.ms TIC: [BSB1]992438-27-AM-NEU.D\data.ms

3000000
2800000
A Abundance
3000000 B
2800000
2600000
2600000
2400000

a
2400000

í
2200000
2200000

tr
2000000
2000000
1800000
1800000
1600000

e
1600000
1400000 1400000

o
1200000 1200000

m
1000000

s
1000000

r o
800000 800000

r
600000 600000

u t
400000 400000
200000

c
200000

C pe as
0 0
10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 Time--> 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 Time-->

C I A
s s
Perfiles cromatográficos (GC/MS, TIC- full scan, EI, 70 eV) de la pastilla

E ma ST I
extraída con solvente a diferentes pH, a saber:
A. pH básico; B. pH neutro.

de INJU
221

k o
M e n
s h
S t a Pastilla 2

d
Abundance

a
pH básico pH neutro
a id
3000000

n
2800000

e s
2600000

l r
2400000

E ive al
2200000

r
2000000

n r i e
1800000

U us tand t
1600000

1400000

1200000

d n
1000000

I n a
800000

S
600000

400000

de
200000

10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 Time-->

222
 19/06/2022

Abundance Pastilla 2
pH básico pH neutro
3000000

2800000

2600000

2400000

í a
2200000

tr
2000000

e
1800000

o
1600000

s m
1400000

r r o
1200000

u t
1000000

C pe as c A
800000

I
600000

s s C
400000

E ma ST I
200000

10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 Time-->

de INJU
223

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n
LC- d
ESI - a n
r-TOF-MS +
S
de
HPLC – LC-1200 Agilent Technologies (Palo Alto, CA, USA)
MS – TOF 6210, Time-of-Flight (Palo Alto, CA, USA)

224
 19/06/2022

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
225

k o
M e n
s h
% iones

-
S t a
d
H+ Iones 100%
A AH
100

n
OH
a id
-
a Análisis ESI, pKa + 3

l e
E ive al r s
n
50%

r i 50%
e r
U us tand t
50

I
Extracción, [pKa -3]
n d a n
S
Moléculas 100% Ácidos, AH

de
0
pKa = 5
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 pH

226
 19/06/2022

% iones
100
Extracción, pKa + 3
Iones, 100% Moléculas,100%

a
Análisis ESI, pKa - 3

í
Bases, BOH

e tr
50% 50%

o
50

r s r o m
u t
H+
BOH B+
C pe as c OH
-

I A
s
E ma ST
0
1 2 s3 4
I5C 6 7
pKa = 9
8 9 10 12 13 pH

de INJU
227

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al
Alcaloides harmala
r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
228
de
 19/06/2022

Banisteriopsis caapi
Malpighiaceae Family
DISTRIBUTION:

í a
Amazon regions of Brazil, Bolivia, Colombia,

tr
Ecuador, Perú; Orinoco region in Venezuela,

e
Pacific Coast of Ecuador and Colombia

r s o o
USES:
m
u
C pe as c t r Ayahuasca or yagé beverages, religious
ceremonies of Amazonic tribes.

I A
Church of Saint Daime (Brazil).

C
s
E ma ST s I
EFFECTS:
visual allucinogen, entheogen

de INJU
229

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
Harmine

l e n r s
Harmol

E ive al r
n
U us tand
Harmine N-oxide t r i e
Harmaline

I n d a n HARMALA alkaloids

S
(β-Carbolines), identifiedin Peganum

de
harmala, Banisterioptis caapi and
Tetrahydroharmine Banisterioptis inebrians

230
 19/06/2022

AYAHUASCA beverages are prepared with B.caapi ,

together with many other plants:

Ilex guayusa (Aquifoliaceae)

Erythroxylum coca (Erythroxylaceae)

a
Ocimum micranthum (Labiatae)
Caesalpinia echinata (Leguminosae)

tr í
e
Diplopterys cabrerana (Malpighiaceae)

o
Diplopterys involuta (Malpighiaceae)

r s r o m
Ficus insipida (Moraceae)

u t
Virola sp. (Myristicaceae)

C pe as c
Piper sp. (Piperaceae)

I A
Psychotria sp. (Rubiaceae)

s s C
Paullinia yoco (Sapindaceae)

E ma ST I
Brugmansia sp. (Solanaceae)
Nicotiana sp. (Solanaceae)

de INJU
231

k o
M e n
s h
S t a
d
Ion current of MH+ ions. LC-ESI+-TOF-MS.

a id a
VARIABLES: Capillary and Fragmentor Voltages

n
l e
E ive al r s Harmine

n i e r
Detector Response x 10 6

U us tand t r
I n d a n
S
de
Fragmentor voltaje, V

232
 19/06/2022

1 - Harmalol 4 A
2 - Harmol
3 - Tetrahydroharmine
4 - Harmine
5 - Harmaline 5

a
3

í
1 2

e tr
o m
a
B
s
a - N,N-Dimethyl tryptamine

r r o
b - Tetrahydroharmine

u t
c - Harmaline b

C pe as c
d - Harmine c

I A
d

s
E ma ST s
A. MSPD extract from yaje
(ayahuasca) STEMS (lianas) I C B. LLE urine extract obtained
after yaje consumption
Cristian OLIVEROS,
Elena Stashenko, 2018

de INJU
233

k o
M e n
s h
t a
Elemental composition of harmala alkaloids and N,N-dimethyl-tryptamine

S d
determined by LC-ESI+-TOF-MS in urine analysis after yagé consumption.

a id a
Molecular Mass

n
Compounds
formula, MH+ Calculated Experimental Δ ppm

l e r s
N,N-Dimethyltryptamine C12H17N2 189,1386 189,1378 4,20

E ive al
Harmine C13H13N2O 213,1022 213,1019 1,58

r
Harmaline C13H15N2O 215,1179 215,1173 2,52

n
U us tand r i e
Tetrahydroharmine C13H17N2O 217,1335 217,1330 2,41

x10 6
4.4

t N,N-Dimethyltryptamine

d
4

n n
3.6

I a
3.2
Tetrahydroharmine

S
2.8

2.4
Harmine
TIC

de
2

1.6 Harmaline
1.2
Cristian OLIVEROS,
9.5 10 10.5 11 11.5 12 12.5 13 13.5 14 14.5 15 15.5 16 16.5 17 17.5 18 18.5 19 19.5
Counts vs. Acquisition Time (min) Elena Stashenko, 2018

234
 19/06/2022

optimización
HPLC separación ESI Formación de iones Detección

a
Contaminación

í
Fase móvil: Flujo del gas pKa

tr
de la interfaz
Solventes nebulizador de analitos

e
y del capilar

o m
Voltaje entre Voltaje del

s
Temperatura

r o
Gradiente capilar y fragmentador

r
del gas secante

u t
contraelectódo [y de octapolos]

pH
C pe as c Temperatura

I A
de la interfaz
Flujo
del gas secante
Velocidad de
adquisición

Aditivos
s
E ma ST s I C
[Diseño
de la interfaz]
Voltajes del capilar y
del fragmentador
Electrónica: pusher

de INJU
235

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n r i e
MS-r-TOF - 6210 AT

U us tand
LC-1200 AT B: ACN, Methanol Dual ESI

Capillary voltage
t 1000, 2000, 3000, 4000 V

d
Fragmentor voltage 100, 150, 200, 250 V

I n n
Solvent Borganic phase

a
AcetonitrileACN, MethanolMeOH

S
Solvent Awater, pHformic acid 2.5, 3.5, 4.5
LC PEAK AREA (RESPONSE),

de
RESPONSES peak simmetry and tailing factor, S/N

236
 19/06/2022

Alkaloid analysis by LC-ESI+-MS-r-TOF:

VARIABLES

Fragmentor voltages: 100, 150, 200,

and 250 V LC-MS-TOF

tr í a
o
eV = mv2/2

m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
237

k o
M e n
s h
S t a ELECTRONEBULIZACIÓN: algunos

a id a d parámetros operacionales para

n
optimizar la respuesta

l e
E ive al r s
r
LC-MS-TOF
HPLC Column: – C18 Kinetex (RP, Phenomenex, CA, USA) MS-TOF

i e
Mobile phase: – A – Water; B – Acetonitrile or Methanol

n
U us tand t r
Capillary voltage: 1, 2, 3, and 4 kV
Fragmentor voltage: 100, 150, 200, 250 V
m/z 100-950
Vcap Vfrag
d
3,4x10-7 Torr

I n a n
S
238
de
 19/06/2022

Alkaloid analysis by LC-ESI+-MS-TOF:

VARIABLES

tr í a
o m e
u r s t r o
C pe as c I A
s
E ma ST s I C
de INJU
239

k o
M e n
s h
t a
18 6

S
[M+H]+ n=3 [M+H]+ n=3

d
16 ACN ACN
5
14
1 ppm MeOH 1 ppm MeOH

a id a
12 4
Response (x106)

Response (x106)

10

n
3
8

e s
6 2

l r
4
1

E ive al
2
0 0

r
1 2 3 4 1 2 3 4
Capillary voltage, kV Capillary voltage, kV

n
U us tand t r i e
COCAINE. Vfragmentor = 150 V. Solvent A: pH = 2,5 SCOPOLAMINE. Vfragmentor = 150 V. Solvent A: pH = 2,5

14 30
n=3 ACN n=3 ACN
12 [M+H]+ 25 [M+H]+
1 ppm 1 ppm

d
10 MeOH MeOH

n
20
Response (x106)

n
Response (x106)

I a
15
6
10

S
4

2 5

de
0 0
1 2 3 4 1 2 3 4

Capillary voltage, kV Capillary voltage, kV

HARMINE. Vfragmentor = 150 V. Solvent A: pH = 2,5 MONOCROTALINE. Vfrag.= 150 V. Solvent A: pH = 3,5

240
 19/06/2022

Cocaine (100 µg/L): Tailing factor pH 2.5

1.8 pH 3.5
1.6
pH 4.5
Tailing factor

1.4
1.2
1
0.8

a
0.6

í
0.4

tr
0.2
0
100 150 200 250

e
Vcap = 1000 V Fragmentor, V

r s o o
Cocaine (100 µg/L): S/N
m pH 2.5

u t r
pH 3.5

c
25000

C pe as
pH 4.5

A
20000

I
S/N

15000

s C
10000

s I
5000

E ma ST
0
100 150 200 250

Vcap = 1000 V Fragmentor, V

de INJU
241

k o
M e n
s h
S t a
a id a d
l e n r s
E ive al r
n
U us tand t r i e
I n d a n
S
de