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Practica #7
Practica #7
GRUPO 11
TEMA:
CURSO:
DOCENTE:
ALUMNO:
2. OBJETIVOS.......................................................................................................................3
3. MARCO TEÓRICO......................................................................................................4
4.1.2. Procedimiento..................................................................................................9
4.2.2. Procedimiento................................................................................................11
4.4.1. Procedimiento.............................................................................................15
5. CUESTIONARIO........................................................................................................16
6. CONCLUSIONES.......................................................................................................22
7. BIBLIOGRAFÍA.........................................................................................................23
1 INTRODUCCIÓN
Los lípidos son un grupo muy heterogéneo de moléculas orgánicas; e incluyen grasas,
aceites, esteroides, ceras y otros compuestos relacionados más por sus propiedades físicas
que por sus propiedades químicas.
El término lípido se aplica a todo compuesto que tiene la propiedad común de ser
relativamente insoluble en el agua y soluble en solventes no polares, como el éter, el
cloroformo y la acetona.
En su mayor parte, los lípidos consisten de grupos no polares (en general con un alto
contenido de carbono e hidrógeno), lo que permite explicar sus características de
solubilidad en el agua. Por otro lado, hay algunos lípidos que son más complejos, los cuales
contienen grupos no lipídicos, como sulfatos, fosforilos o amino.
Químicamente, los lípidos son biomoléculas que al ser sometidas a hidrólisis producen
ácidos grasos y alcoholes complejos que se pueden combinar con los ácidos grasos,
formando ésteres.
Los dos lípidos principales del organismo, el colesterol y los triglicéridos, son transportados
por la sangre mediante unas partículas conocidas como lipoproteínas. Cada tipo de
lipoproteína está constituida por una combinación de proteína, colesterol, triglicéridos y
fosfolípidos. Las partículas que se evalúan en un perfil lipídico se clasifican en
lipoproteínas de alta densidad (HDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL), etc.
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo General
Entender e interpretar el metabolismo lipídico, así como todos los factores que intervienen
en este proceso, ya sean enzimas, valores normales o alterados, etc.
El exceso de colesterol LDL puede ser depositado en placas ubicadas en las paredes de los
vasos sanguíneos formando una placa, la cual puede crecer y eventualmente bloquear el
flujo de sangre a través de los vasos sanguíneos, lo que lleva a producir infartos en el
corazón o en el cerebro. Además, produce el endurecimiento de las arterias (aterosclerosis).
Para la determinación del perfil lipídico es necesaria una preparación adecuada del paciente
respecto a la alimentación, que se basa, sobre todo, en tres aspectos:
1. Conservar los hábitos alimenticios en los días previos a la extracción, ya que los
cambios de costumbres modifican la proporción de cada lipoproteína.
2. Mantener un ayuno de 12-14 h para evitar los cambios postprandiales en la
proporción de las lipoproteínas. Estos cambios son muy variables en las personas, y
dependen de la cantidad y composición de la ingesta, la absorción y el metabolismo
de los quilomicrones.
3. Se ha de evitar realizar la determinación en los 15 días siguientes de una
enfermedad suave o 3 meses de una grave. También hay que tener en cuenta que el
consumo de determinados medicamentos, como la heparina o los anticonceptivos
orales, puede modificar la proporción de las lipoproteínas.
En la mayoría de los análisis de sangre, se extrae una muestra de sangre a partir de una
vena. A tal efecto, un profesional de la salud:
En los lactantes, la sangre se puede extraer a partir de una punción en el talón. Después de
limpiar el área, el profesional de la salud hará una pequeña punción en el talón del bebé con
una pequeña aguja (o lanceta) para recoger una pequeña muestra de sangre. La extracción
de una muestra de sangre sólo provoca molestias de carácter temporal y lo único que se
siente es un breve pinchazo.
En cuanto a los métodos con determinación del glicerol, el triglicérido es hidrolizado para
remover los ácidos grasos y así determinar el glicerol libre, cuya concentración es
equivalente a la del triglicérido, para ello se utilizan técnicas químicas y enzimáticas
Los triglicéridos presentes en la muestra originan, según las reacciones acopladas descritas
a continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría.
Fundamento:
Consiste en una combinación de tres enzimas que resulta en un producto final coloreado,
con una absorbancia máxima a 505 nm. La relación absorbancia/concentración es lineal
hasta concentraciones de colesterol de 750 mg/100 mL.
1. Una colesterol éster hidrolasa (CEH) hidroliza los ésteres de colesterol a colesterol
más ácidos grasos libres.
2. Una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido
de hidrógeno.
3. El peróxido de hidrógeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-
amino fenazona (4-AP) dan lugar a la formación de una quinona roja. Esta última es
proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.
LO CALCULAMOS MEDIANTE:
Sin embargo, es esencial para el buen funcionamiento del cuerpo, ya que participa en la
formación de varias hormonas. Lo ideal es que sus niveles estén por debajo de 130 mg/dl,
sin embargo, en algunas personas se necesitan cuidados más rigurosos, como
valores por debajo de 100, 70 o 50 mg/dl, dependiendo de los antecedentes de
enfermedades, hábitos de vida o la presencia de otros factores de riesgos
cardiovasculares.
Fundamento
4.1.1.2 Equipos
Baño María: Dispositivo usado en laboratorios que se utiliza para incubar muestras
a una temperatura uniforme y constante durante largos períodos de tiempo.
Espectrofotómetro: Instrumento que sirve para medir, en función de la longitud de
onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos
haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una
muestra.
4.1.1.3 Reactivos
Standard: Solución de glicerol 2,26 mmol/l (equivale a 2 g/l de trioleína).
Buffer: Solución buffer Good conteniendo clorofenol, pH 7,5.
Enzimas: Lipoproteín lipasa, glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato oxidasa (GPO),
peroxidasa (POD), adenosina trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4- AF).
4.1.2 Procedimiento
1. Coger 3 tubos de ensayo y rotular de la siguiente manera: blanco (B), standard de
solución de Triglicéridos (S) y desconocido (tubo con la muestra de suero) (D)
2. Con las micropipetas medir los volúmenes indicados a continuación y pipetear los 3
tubos de ensayo de la siguiente manera:
3. Agregar 2.5 mL de suero del paciente en el tubo D (desconocido, que contendrá la
muestra problema)
4. Agregar 2.5 mL de Standard de Triglicéridos en el tubo S (standard).
5. Finalmente agregamos 2.5 mL del reactivo de trabajo a todos los tubos (B,S,D)
6. Mezclar, incubar 5 minutos a 37ºC y leer a 505 nm
7. Colocar los volúmenes de los tubos (B,S,D) en las cubetas espectrofotométricas.
8. Determinar la absorbancia del estándar de solución Triglicérido (S) a una longitud
de onda de 505 nm en el espectrofotómetro.
9. Determinar la absorbancia del desconocido (tubo con la muestra de suero) (D) a una
longitud de onda de 505 nm en el espectrofotómetro marcando el cero con el
blanco (B) que contiene reactivo de trabajo para la determinación de triglicéridos.
10. Por último, calcularemos la concentración de Triglicéridos en la muestra (suero)
dividiendo la absorbancia del tubo desconocido (tubo con la muestra de suero) (D)
arrojada en el espectrofotómetro entre la absorbancia del contenido del tubo 2
(STD)
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL
El color de reacción final es estable 60 minutos, por la absorbancia debe ser leída dentro de
este lapso.
Corregir las lecturas con el blanco de reactivos y usar las lecturas corregidas para los
cálculos.
Niveles de triglicéridos:
Menos de 150 mg/dL = Normal
150 a 199 mg/dL = Límite elevado
200 a .499 mg/dL = Elevado
4.1.3 Interpretación de resultados:
Según la American Heart Association (AHA) los niveles de triglicéridos son:
De acuerdo a los resultados el paciente tiene 206,8 mg/dL, ubicándose en la tabla brindada
por la American Heart Association (AHA) su nivel de triglicéridos es elevado
(hipertrigliceridemia), pues es >150 mg/dL), por lo tanto, podemos decir que nuestra
paciente tiene mayor riesgo de enfermedad del corazón, ataque al cerebro o diabetes.
4.2.1.2 EQUIPOS:
Baño María
Espectrofotómetro
Centrífuga
4.2.1.3 REACTIVOS:
STANDARD : Solución Colesterol 200 mg%
ENZIMAS :
Colesterol Esterasa (CHE)
Colesterol Oxidasa (CHOD)
Peroxidasa (POD)
aminofenazona (4-AF)
BUFFER:
Solución Buffer pH (6,8) conteniendo Fenol y Colato de Sodio.
REACTIVO DE TRABAJO:
MUESTRA
RECOLECCIÓN
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES
Para el estudio del colesterol en la muestra, ésta es estable por 3 días en refrigerador (2-
10°C)
NO CONGELAR.
4.2.2 Procedimiento
1. Coger 3 tubos de ensayo y rotular de la siguiente manera: blanco (B), standard de
solución colesterol (200 mg/100 mL) (S) y desconocido (tubo con la muestra de
suero) (D)
2. Con las micropipetas medir los volúmenes indicados a continuación y pipetear los 3
tubos de ensayo de la siguiente manera:
3. Agregar 30 µL de Standard de solución colesterol (200 mg/100 mL) en el tubo S
que contendrá al standard de solución colesterol (200 mg/100 mL).
4. Agregar 30 µL de muestra (suero) en el tubo D (desconocido) (tubo que contendrá
la muestra o suero problema).
5. Agregar 3 ml del reactivo de trabajo elaborado para la determinación de colesterol
total tanto en el tubo blanco (B), como en el tubo del standard de solución colesterol
(200 mg/100mL) (S) y en el tubo desconocido que contiene a la muestra de suero
(D).
6. El reactivo de trabajo contiene 3 enzimas que participarán en 3 reacciones, la
primera es la colesterol ester hidrolasa (CEH) que hidroliza los ésteres de colesterol
en colesterol y ácidos grasos libres; la segunda enzima es la colesterol oxidasa
(COD) la cual oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido de hidrógeno; y la
última enzima es la peroxidasa (POD) que junto a la 4-aminofenazona (4-AF) da
lugar a la formación de una quinona roja, la cual brindará una coloración rojiza
tanto en el tubo con el standard de solución colesterol (200 mg/100 mL) (S) y el
desconocido (tubo con la muestra de suero) (D) y será la cantidad de esta quinona
proporcional a la concentración de colesterol en la muestra, por ello el tubo
desconocido conteniendo a la muestra presenta una mayor coloración que el
standard y esto lo vamos a evidenciar posteriormente en los cálculos.
7. Mezclar e incubar durante 5 minutos en Baño María a 37°C.
8. Determinar la absorbancia del standard de solución colesterol (200 mg/100 mL) (S)
a una longitud de onda de 505 nm en el espectrofotómetro.
9. Determinar la absorbancia del desconocido (tubo con la muestra de suero) (D) a una
longitud de onda de 505 nm en el espectrofotómetro marcando el cero con el blanco
(B) que contiene reactivo de trabajo para la determinación del colesterol total.
10. Luego calcularemos el factor mediante la división de la concentración del standard
solución colesterol (200 mg/100 mL) entre la absorbancia del mismo tubo standard
solución colesterol (200 mg/100 mL) arrojada por el espectrofotómetro.
11. Por último, calcularemos la concentración de colesterol total en la muestra (suero)
en mg/100ml multiplicando la absorbancia del tubo desconocido (tubo con la
muestra de suero) (D) arrojada en el espectrofotómetro por el factor obtenido del
punto anterior.
LECTURAS EN EL ESPECTROFOTÓMETRO:
Absorbancia Concentración mg
Según la American Heart Association (AHA) los niveles totales de colesterol en la sangre
representan lo siguiente:
4.3.1.2 EQUIPOS:
Espectrofotómetro
Centrífuga
4.3.1.3 REACTIVOS:
REACTIVO DEXTRÁN: Solución de sulfato de Dextrán desproteinizante
REACTIVO MAGNESIO: Solución de cloruro de magnesio
REACTIVO DE TRABAJO DE COLESTEROL ENZIMÁTICO
BLANCO STD D
Sobrenadante -- -- 150 ul
Según la American Heart Association (AHA) HDL quiere decir lipoproteína de alta
densidad. El HDL es el colesterol “bueno”. Esto significa que, a diferencia de otros niveles
de colesterol, mientras más elevado sea el colesterol HDL, mejor. La concentración de
HDL en el paciente fue de 41.2 mg/dL por lo que según los valores de la American Heart
Association el paciente se encuentra dentro de los niveles deseados de HDL, pero no
optimo por lo que este valor aun es mejorable para lograr disminuir riesgos de ataques al
corazón y al cerebro.
Seguir la fórmula:
Perfil lipídico
Para hacer un diagnóstico correcto es necesario realizar un perfil lipídico completo para
determinar los niveles de lípidos en la sangre, como el colesterol y los triglicéridos, cuya
alteración está relacionada con las enfermedades cardiovasculares. Este perfil lipídico
incluye el nivel de colesterol total, el colesterol transportado por las lipoproteínas LDL
(colesterol “malo”), HDL (colesterol “bueno”) y triglicéridos. El perfil lipídico se hace
después de 10 a 12 horas de ayuno, y los niveles se miden en miligramos por decilitro
(mg/dl) en sangre.
Triglicéridos son un tipo de grasa de la sangre. Cuando comes, el cuerpo convierte las
calorías que no necesita en triglicéridos, que se almacenan en células grasas. Los niveles
elevados de triglicéridos se asocian con varios factores, incluido el sobrepeso, comer
muchos dulces o beber demasiado alcohol, fumar, la vida sedentaria o tener diabetes con
niveles altos de glucosa en la sangre.
Practicar ejercicio: La realización de ejercicio tiene un efecto muy beneficioso sobre los
niveles de colesterol.
Evita el sobrepeso
Reduce la presión arterial.
Mejora los lípidos de la sangre, disminuye los triglicéridos y aumenta el colesterol-
HDL («bueno»).
Reducir el estrés: un alto nivel de estrés se relaciona
con un aumento del colesterol.
1. Hábitos dietarios
Comer grasas saturadas y grasas trans, así como carne roja y lácteos enteros, podría ser uno
de los factores principales para que los niveles de colesterol en la sangre aumenten
significativamente.
Por esto es esencial revisar cuáles son los alimentos que hacen parte de la dieta diaria y, por
supuesto, identificar aquellos que aumentan este lípido en la sangre. Lo recomendable es
incrementar el consumo de omega 3, vitamina E y aminoácidos esenciales.
2. Sobrepeso y obesidad
Las personas que padecen de sobrepeso y obesidad tienen mayores probabilidades de sufrir
de altos niveles de colesterol en la sangre. Esto, debido a que la acumulación de grasa en el
organismo podría disminuir la capacidad para remover este lípido de las arterias.
3. Estrés
Los altos niveles de cortisol, una hormona liberada en momentos de estrés, a largo plazo
pueden aumentar el colesterol en la sangre, así como los triglicéridos, el azúcar y la presión
arterial.
Debido a esto, es importante adoptar técnicas de relajación y ejercicios de respiración.
También, puedes incluir el ejercicio en tu rutina diaria, tener un grupo de apoyo, buscar
ayuda profesional y consumir alimentos saludables que promuevan el bienestar mental y
mejoren el estado de ánimo.
5. Historial familiar
Uno de los factores que no se pueden pasar por alto como causa del colesterol alto es el
historial familiar o los antecedentes genéticos. Una persona cuyos familiares han sufrido de
este trastorno tiene más riesgo de padecerlo en alguna de las etapas de su vida.
Lo anterior es conocido como hipercolesterolemia familiar. La causa de esta condición es
un gen que se hereda a través de uno o ambos padres. Este, evita que el cuerpo se deshaga
del colesterol que se acumula en las arterias.
Por eso, se debe adoptar desde edades tempranas un estilo de vida sano, limitando al
máximo las fuentes externas de colesterol. Además, se debe hacer seguimiento
con chequeos médicos regulares, los cuales permiten determinar qué tan grave puede ser el
problema.
Es el componente básico de las sales biliares que tienen como función principal
ayudar a la digestión de las grasas, sin ellas se produce un síndrome de
malabsorción.
Es precursor de hormonas sexuales como progesterona, testosterona y estrógenos
que permiten el desarrollo de los caracteres sexuales y la fertilidad.
También es participa en la producción de la glucosa, el glucógeno, los cuales son de
suma importancia para la supervivencia de los seres humanos.
Forma parte de la membrana de cada una de las células del organismo permitiendo o
no el paso de sustancias y participando en procesos fisiológicos relacionados con
ella.
Es precursor de hormonas importantes como las corticosteroideas: cortisol y
aldosterona que entre otras cosas regulan el contenido de agua y de sales en el
organismo.
Señalado como colesterol bueno, esta insertado a las HDL (15%), lipoproteínas que
se encuentran en la sangre y atrapan el colesterol circulante para llevarlo al hígado
donde es utilizado en la producción de hormonas y otros compuestos. En otras pala-
bras, las HDL contribuyen a disminuir el colesterol circulante en la sangre y evita
que se acumule en las paredes de las venas y arterias. Más de 50 mg/dL (los valores
más altos son mejores)
6 CONCLUSIONES
Es esencial comprender el metabolismo lipídico, por supuesto incluyendo la
absorción, transporte, almacenamiento, síntesis y funciones, para recién poder
analizar los indicadores que se aprecian en un perfil lipídico.
Los indicadores de un perfil lipídico son de vital importancia en el contexto clínico,
pues sus manifestaciones son muy características, con lo cual pueden ser
reconocidas con claridad, para posteriormente actuar, controlar y llevar los
indicadores de nuevo a sus valores normales.
La determinación del colesterol total tiene una relevancia especial en el perfil
lipídico, pues gracias a él se puede estimar que tanto riesgo de enfermedades
cardiovasculares podría tener el paciente, y en base a eso, actuar para evitarlo.
7 BIBLIOGRAFÍA
1. Fiñana, I. T., & Cejudo, A. G. (s/f). 25. Perfil lipídico. citado 15 de julio de 2023,
de Uco.es website:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/25%20PERFIL
%20LIPIDICO.pdf
5. Freitas RWJF, Araújo MFM, Lima ACS, Pereira DCR, Alencar AMPG, Damasceno
MMC. Análisis del perfil lipídico en una población de estudiantes universitarios.
[Internet]. Scielo: sept.-oct. 2013. [citado 15 de julio de 2023]. Obtenido de:
https://www.scielo.br/j/rlae/a/bm7pVVb8PSq6Xws7kRTsrdj/?format=pdf&lang=es