Turki J Med Sci

2008; 38 (2): 117-120 © TÜB

ARTIKEL ASLI ‹TAK
E-mail: medsci@tubitak.gov.tr

Cisplatin Menyebabkan Oksidasi pada Jaringan Hati Tikus:

Kemungkinan Efek Perlindungan Antioksidan
Asl ›han AVCI 1
Suplementasi Makanan
Terima ÇET ‹N 2

‹Mge B. ERGÜDER 1
Tujuan: Dalam studi ini, kami bertujuan untuk menyelidiki kemungkinan mekanisme molekuler dari hepatotoksisitas cisplatin dan untuk menentukan apakah
Erdinç DEVR ‹M 1 beberapa makanan antioksidan alami, yaitu anggur hitam kering dan tomat, dapat memberikan perlindungan terhadap hepatotoksisitas cisplatin.

Bülent KILIÇO⁄LU 3
Bahan dan metode: Dua puluh delapan tikus digunakan selama penelitian. Cisplatin diberikan secara intraperitoneal (ip) dalam
Özden ÇANDIR 4 dosis tunggal (10 mg / kg). Suplementasi makanan antioksidan dimulai tiga hari sebelum pengobatan cisplatin. Ada 7 ekor

H. Serdar ÖZTÜRK 1 hewan dalam setiap kelompok (kontrol, cisplatin, cisplatin plus anggur hitam kering dan cisplatin plus sari tomat). Tikus
dikorbankan 72 jam setelah perlakuan. Hati diangkat dan disiapkan untuk pemeriksaan biokimia dan histopatologi. Parameter
‹Lker DURAK 1 oksidan dan antioksidan diukur di jaringan hati kelompok.

1Departemen Biokimia,
Fakultas Kedokteran,
Universitas Ankara,
Ankara - TURKI
2 Departemen Bedah Umum, Rumah Sakit
Pendidikan dan Penelitian Onkologi,
Hasil: Kadar malondialdehida (MDA) dan aktivitas xantin oksidase (XO) lebih tinggi pada kelompok cisplatin dibandingkan dengan nilai
kontrol. Aktivitas katalase (CAT) dan glutathione peroksidase (GSH-Px) lebih tinggi tetapi kadar MDA lebih rendah pada kelompok yang
diberi suplemen anggur dibandingkan dengan kelompok cisplatin. Dalam pemeriksaan histopatologi, kongesti sinusoidal, degenerasi hidropik
dan vakuolar, disorganisasi luas di hepatosit, dan fibrosis yang signifikan di sekitar venula sentral dan area periportal yang meluas diamati di
jaringan hati dari hewan yang diobati dengan cisplatin. Pada tikus yang diobati dengan cisplatin dan diberi makan jus tomat, kemacetan
sinusoidal lebih sedikit dibandingkan dengan kelompok yang diobati dengan cisplatin dan tidak terlihat disorganisasi hepatosit atau
degenerasi hidropik. Pada tikus yang diberi cisplatin dan anggur hitam kering, disorganisasi hepatosit ringan dibandingkan dengan hewan
yang diobati dengan cisplatin. Fibrosis perivenular dan periportal ringan.

Ankara - TURKI
3 Departemen Bedah Umum, Pendidikan

Ankara dan Kesimpulan: Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengobatan cisplatin menyebabkan beban oksidan yang signifikan ke hati melalui aktivasi XO dan
Rumah Sakit Riset, gangguan sistem pertahanan antioksidan, yang mengakibatkan reaksi oksidasi yang dipercepat di jaringan hati. Selain itu, pengobatan cisplatin menghasilkan
Ankara - TURKI efek berbahaya yang signifikan pada hepatosit. Kami mengusulkan bahwa suplementasi dengan beberapa makanan antioksidan dengan kekuatan antioksidan
4 Jurusan Patologi, Fakultas
tinggi dapat memperbaiki toksisitas ini.
Kedokteran,
Universitas Süleyman Demirel, Kata kunci: Cisplatin, hepatotoksisitas, makanan antioksidan, perlindungan
Isparta - TURKI

S ›çan Karaci¤er Dokusunda Sisplatinin Neden Oldu¤u Oksidasyon:

Antioksidan Yiyecek Deste¤inin Olas ›Koruyucu Etkileri

Amaç: Bu çal ›fl mada sisplatinin neden oldu¤u hepatotoksisitenin olas› moleküler mekanizmalar ›n› ve baz ›do¤al antioksidan yiyeceklerin
özellikle siyah kuru üzüm ve domatesin sisplatin hepatotoksisitesine kar fl› koruyucu ›etkisitesine kar fl› koruyucu ›etkisini

Yöntem ve Gereç: Çal ›fl mada 28 adet s› çan kullan ›ld›. Sisplatin intraperitoneal olarak tek doz (10 mg / kg) fl eklinde s ›çanlara verildi.
Antioksidan yiyecek verilmesine sisplatin uygulamas ›ndan üç gün önce ba fl land›. Grup birnya (kontrol, sisplatin, sisplatin + kuru üzüm ve
sisplatin + domates suyu) 7 s ›çandan olu fl maktayd›. S ›çanlar tedaviden 72 saat sonra öldürüldü. Sonra karaci¤erleri ç ›kart› ld ›ve
Diterima: 02 Mei 2007 Diterima:
biyokimyasal ve histopatolojik incelemeler için haz› rland ›. Oksidan ve antioksidan parametreler karaci¤er dokular ›nda çal› fl ›ld›.
14 Februari 2008

Bulgar: Malondialdehit (MDA) düzeyi ve Ksantin oksidaz (XO) aktivitesi sisplatin grubunda kontrol grubuna göre yüksekti.
Katalaz ve glutatyon peroksidaz aktiviteleri üzüm deste¤i yap ›di grupta sisplatin grubuna göre daha yüksekti, fakat MDA
Korespondensi düzeyleri daha dü fl üktü. Histopatolojik incelemede sisplatin verilen grubun hepatositlerinde sinüsoidal konjesyon, hidropik ve
vakuoler dejenerasyon ile yo¤un fl ekilde disorganizasyon görülürken, sisplatine ek olarak domates ve siyah kuru üzüm alan
Asl ›han AVCI
grupta bu.
Ankara Üniversitesi T ›p Fakültesi,
Biyokimya Anabilim Dal › Sonuç: Veriler göstermektedir ki sisplatin tedavisi karaci¤er dokusunda hem ksantin oksidaz aktivitesini artt ›rarak ve antioksidan
Dekanl ›k Binas›, savunma sistemini zay› flatarak oksidasyona yol açm ›fl; hem de hepatositlerde morfolojik aç ›dan önemli düzeyde dejeneratif etkiler olu
06100 S ›hhiye, turmu fl tur. Bunun sonucunda da karaci¤er dokusunda oksidasyon reaksiyonlar ›h› zlanm ›fl t› r. Bizim görü fl ümüz; baz ›yüksek
Ankara - TURKI antioksidan güce sahip yiyeceklerin (domates ve siyah kuru üzüm gibi ..) bu toksisiteyi düzeltebilece¤i yönündedir.

aslihanavci@yahoo.com
Anahtar Sözcükler: Sisplatin, hepatotoksisite, antioksidan yiyecekler, koruma

117
AVCI, A et al. Kemungkinan Efek Perlindungan Antioksidan Terhadap Hepatotoksisitas Cisplatin
pengantar
Cis-diamminedichloroplatinum (cisplatin) adalah obat antikanker
penting yang digunakan untuk mengobati tumor padat. Nefrotoksisitas
cisplatin diakui sebagai faktor pembatas dosis yang paling penting,
tetapi cisplatin dosis tinggi juga menyebabkan hepatotoksisitas (1).
Berbagai upaya telah dilakukan untuk meningkatkan indeks terapeutik
cisplatin dengan menggunakan strategi farmakologis, seperti pemberian
kemoprotektor, hidrasi intensif dan larutan garam hipertonik (2-4).
Sayangnya, beberapa senyawa yang digunakan sebagai kemoprotektor
juga menghambat aktivitas antitumor cisplatin, sementara strategi
terapeutik lainnya tidak sepenuhnya efisien dalam mengurangi
nefrotoksisitas yang membatasi dosis. Telah ditetapkan bahwa
peroksidasi lipid dapat berpartisipasi dalam hepatotoksisitas pada
hewan yang diobati dengan cisplatin meskipun terdapat aktivasi enzim
antioksidan (5). Telah disarankan bahwa enzim antioksidan mewakili
respon protektif terhadap toksisitas cisplatin di hati hewan pembawa
tumor (1). Dosis tinggi cisplatin telah ditemukan untuk menghasilkan
hepatotoksisitas, dengan apoptosis sebagai lesi mayor, dan
metalothionein melindungi dari cedera hati yang diinduksi cisplatin (1).
Tomat dan anggur adalah makanan dengan daya antioksidan tinggi (6-8).
Dalam studi sebelumnya, telah ditetapkan bahwa kedua makanan tersebut
dapat memperkuat kekuatan antioksidan tubuh dan mencegah serangan
oksidatif, sehingga mengurangi beberapa masalah kesehatan akibat stres
oksidan (9,10).
Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki apakah makanan antioksidan
seperti jus tomat dan anggur hitam kering dapat memberikan efek pencegahan
pada hepatotoksisitas yang diinduksi oleh cisplatin.
Bahan dan metode
Dua puluh delapan ekor tikus betina tipe Wistar Albino (umur 20 minggu
dan berat 220 ± 15 g) digunakan dalam penelitian ini. Hewan dipelihara dalam
siklus terang / gelap 12 jam pada suhu kamar (23 ± 2 ° C) dan diizinkan akses
gratis ke makanan dan air. Hewan dibagi secara acak menjadi 4 kelompok
yang terdiri dari 7 ekor tikus. Satu kelompok berfungsi sebagai kontrol dan
kelompok lainnya diobati dengan cisplatin dosis tunggal secara intraperitoneal
(ip) (10 mg / kg berat badan) dengan atau tanpa makanan antioksidan. Anggur
hitam kering ditambahkan ke dalam makanan secara langsung dan jus tomat
ke dalam air minum. Hewan menelan anggur hitam dan tomat kering
118
Turki J Med Sci
jus dalam jumlah perkiraan 25 g / kg / hari dan 150 ml / kg / hari,
masing-masing. Antioksidan makanan
suplementasi dimulai tiga hari sebelum pengobatan cisplatin dan
dilanjutkan selama masa penelitian. Hewan diberi makan diet
laboratorium dan air ad libitum.
Hewan kontrol dan kelompok perlakuan cisplatin dikorbankan
72 jam setelah perlakuan. Hati tikus diangkat dengan operasi
pembedahan, dicuci dengan larutan garam fisiologis dan
dibersihkan dari jaringan lemak. Jaringan dihomogenisasi dan
disiapkan untuk pengujian seperti yang dijelaskan sebelumnya
(11). Bagian atas dari jaringan homogenat digunakan dalam
percobaan. Kadar protein dari supernatan bening dipelajari
dengan metode Lowry (12). Kadar Malondialdehida (MDA) (nmol /
mg protein) dan superoksida dismutase (SOD) (protein U / mg),
katalase (CAT) (IU / mg protein), glutathione peroksidase
(GSH-Px) (mIU / mg protein) dan xantin oksidase (XO) (mIU / mg
protein) diukur dalam fraksi supernatan.
Kadar MDA diukur dengan metode zat reaktif asam
thiobarbituric (TBARS) (13). Aktivitas SOD diukur seperti yang
dijelaskan (14). Satu unit untuk aktivitas SOD diekspresikan
sebagai jumlah protein enzim yang menyebabkan 50%
penghambatan laju reduksi nitroblue tetrazolium (NBT). Aktivitas
CAT ditentukan oleh
mengukur penurunan hidrogen peroksida (H. 2 HAI 2)
absorbansi pada 240 nm seperti yang dijelaskan (15). Aktivitas GSH-Px
diukur dengan mengikuti perubahan absorbansi NADPH pada 340 nm
seperti yang dijelaskan (16). Aktivitas XO ditentukan dengan mengukur
pembentukan asam urat dari xantin pada 293 nm seperti yang dijelaskan
(17). Dalam aktivitas
perhitungan, koefisien kepunahan asam urat, H. 2 HAI 2 dan NADPH
masing-masing digunakan untuk XO, CAT dan GSH-Px.
Biopsi dari setiap hati difiksasi dengan 10% formalin, ditanamkan
dalam parafin dan dipotong pada 5 µm. Bagian diwarnai dengan
hematoksilin-eosin dan trichrome Masson dan diperiksa dengan
mikroskop cahaya menggunakan slide berkode oleh dua peneliti yang
buta terhadap kelompok kontrol dan perlakuan. Kemacetan sinusoidal,
disorganisasi, dan degenerasi hidropik dan vakuolar dievaluasi pada
semua kelompok secara histopatologis.
Statistik
Uji Mann-Whitney U digunakan dalam evaluasi statistik hasil.
Kriteria signifikansi adalah P <0,05.
Jilid: 38 Tidak: 2 Kemungkinan Efek Perlindungan Antioksidan Terhadap Hepatotoksisitas Cisplatin April 2008

Hasil hepatoksisitas yang disebabkan oleh cisplatin tidak jelas. Dosis tinggi
cisplatin telah diketahui menghasilkan hepatotoksisitas (18). Cisplatin
Dilihat dari Tabel 1, kadar MDA dan aktivitas XO pada kelompok
menyebabkan peningkatan aktivitas XO, kemungkinan melalui reaksi
cisplatin lebih tinggi dibandingkan dengan nilai kontrol. Aktivitas CAT dan
konversi xantin dehidrogenase menjadi XO (19). Peningkatan aktivitas
GSH-Px lebih tinggi tetapi kadar MDA lebih rendah pada kelompok yang
enzim XO merupakan faktor risiko penting untuk beban oksidan di
diberi suplemen anggur dibandingkan dengan kelompok cisplatin. Pada
jaringan hati karena merupakan enzim utama yang menghasilkan radikal
kelompok tomat, tidak ada perubahan berarti dalam hal ini.
superoksida toksik in vivo (20). Di satu sisi, peningkatan aktivitas enzim
XO dan di sisi lain, penurunan aktivitas enzim antioksidan, yaitu GSH-Px
Dalam pemeriksaan histopatologi, kongesti sinusoidal, degenerasi
dan CAT, melalui mekanisme yang belum diketahui, menciptakan stres
hidropik dan vakuolar, disorganisasi luas di hepatosit, dan fibrosis
oksidan yang besar, yang menyebabkan peroksidasi sel dan kerusakan
yang signifikan di sekitar venula sentral dan area periportal yang
pada sel. jaringan.
meluas diamati di jaringan hati dari hewan yang diobati dengan cisplat.
Pada tikus yang diobati dengan cisplatin dan diberi makan dengan jus
tomat, kemacetan sinusoidal lebih sedikit dibandingkan dengan
Dalam sebuah studi eksperimental yang dilakukan oleh Y ›lmaz et al.
kelompok yang diobati dengan cisplatin dan tidak terlihat disorganisasi
(21), itu bertujuan untuk menyelidiki efek dari asam caffeic phenethyl ester
hepatosit atau degenerasi hidropik. Fibrosis perivenular dan periportal
(CAPE), agen antioksidan, pada hepatotoksisitas yang diinduksi cisplatin
ringan. Pada tikus hitam yang diberi makan anggur hitam, hasilnya
melalui adenosine deaminase (AD), XO, CAT, aktivitas SOD dan MDA dan
serupa: disorganisasi ringan dibandingkan dengan hewan yang diberi
nitric oxide (NO) tingkat di jaringan hati tikus. Mereka menemukan bahwa
cisplatin. Fibrosis perivenular dan periportal ringan. Hasil histopatologi
tingkat NO dan aktivitas XO meningkat pada kelompok cisplatin dibandingkan
jaringan hati yang diperoleh dari kelompok kontrol berada dalam batas
dengan kelompok kontrol. Tingkat NO ditemukan menurun sedangkan CAT
normal.
meningkat pada kelompok cisplatin + CAPE dibandingkan dengan kelompok
cisplatin. Mereka menyarankan bahwa CAPE secara signifikan mengurangi
hepatotoksisitas tersebut.

Diskusi

Cisplatin adalah agen kemoterapi yang banyak digunakan dalam berbagai Pada penelitian sebelumnya telah dibuktikan bahwa kedua jenis makanan yang

pengobatan kanker. Nefrotoksisitas yang diinduksi oleh obat ini diketahui tetapi digunakan pada penelitian kali ini yaitu anggur hitam dan tomat memiliki kandungan

sangat sedikit informasi yang tersedia tentang hepatotoksisitas yang diinduksi oleh antioksidan yang tinggi (6,8) dan dapat memberikan kontribusi terhadap kekuatan

cisplatin. Mekanisme antioksidan secara in vivo (9,10).

Tabel 1. Parameter oksidan dan antioksidan jaringan hati tikus dalam kelompok (Mean ± SD).

Grup MERUMPUT KUCING GSH-Px MDA XO

(U / mg protein) (U / mg protein) (U / mg protein) (U / mg protein) (U / mg protein)

Tomat-Cisplatin (1) 188.9 ± 25.76 75.1 ± 7.01 7.23 ± 2.84 0,97 ± 0,18 0,36 ± 0,03

Anggur-Cisplatin (2) 162.24 ± 29.07 107,37 ± 11,74 11.68 ± 1.68 0,53 ± 0,07 0,56 ± 0,06

Cisplatin (3) 181,8 ± 18,89 80,4 ± 5,80 5.91 ± 2.21 1,17 ± 0,30 0,33 ± 0,10

Kontrol (4) 159.2 ± 25.84 83.1 ± 3.53 8,90 ± 3,53 0,46 ± 0,17 0,17 ± 0,04

Uji U Mann-Whitney

1-2 ns p <0,01 p <0,05 p <0,05 p <0,05

1-3 ns ns ns ns ns
1-4 ns ns ns p <0,05 p <0,05
2-3 ns ns p <0,01 p <0,05 p <0,01
2-4 ns ns ns ns p <0,05
3-4 ns p <0,01 ns p <0,05 p <0,05

ns: Tidak signifikan.

119
AVCI, A et al. Kemungkinan Efek Perlindungan Antioksidan Terhadap Hepatotoksisitas Cisplatin
Namun, hasil kami menunjukkan bahwa anggur hitam kering dapat
memberikan perlindungan yang signifikan terhadap kerusakan hati
akibat cisplatin tetapi jus tomat tidak banyak. Sangat mungkin bahwa
konstituen antioksidan pada anggur hitam, yaitu resveratrol, secara
signifikan mengurangi kadar MDA hewan dan induksi aktivitas CAT dan
GSHPx memberikan perlindungan terhadap serangan oksidan yang
dibuat oleh cisplatin dan / atau metabolitnya. Namun, hasil kami
menunjukkan bahwa konstituen antioksidan tomat, yaitu likopen, tidak
berkontribusi secara signifikan terhadap aktivitas enzim antioksidan
dalam keadaan ini, dan tidak mencegah serangan oksidan pada jaringan
hati.
Referensi
1. Liu J, Liu Y, Habeebu SS, CD Klaassen. Metallothionein (MT) -null tikus sensitif
terhadap hepatotoksisitas yang diinduksi cisplatin. Toxicol Appl Pharmacol 1998; 149:
24-31.
2. Skinner S. Strategi untuk mencegah nefrotoksisitas obat antikanker. Curr
Opin Oncol 1995; 7: 310-5.
3. Pinzani V, Bressolle F, Haug IJ, Galtier M, Blayac JP, Balmès P.
Cisplatin-induced toksisitas ginjal dan strategi modulasi toksisitas: tinjauan.
Cancer Chemother Pharmacol 1994; 35: 1-9.
4. Anand AJ, Bashey B. Wawasan baru tentang nefrotoksisitas cisplatin. Ann
Pharmacother 1993; 27: 1519-25.
5. Christova TY, Gorneva GA, Taxirov SI, Duridanova DB, Setchenska MS.
Pengaruh cisplatin dan kobalt klorida pada enzim antioksidan di hati tikus
pembawa karsinoma paru Lewis: peran pelindung heme oksigenase.
Surat-surat Toxicol 2003; 138: 235-42.
6. Alcolea JF, Cano A, Acosta M, Arnao MB. Aktivitas antioksidan hidrofilik
dan lipofilik anggur. Nahrung 2002; 46: 353-6.
7. Öztürk HS, Kaçmaz M, Çimen MY, Durak I. Anggur merah dan anggur hitam
memperkuat potensi antioksidan darah. Nutrisi 1999; 15: 954-5.
8. Bertelli AA, Migliori M, Panichi V, Origlia N, Filippi C, Das DK dkk.
Resveratrol, komponen anggur dan anggur, dalam pencegahan penyakit
ginjal. Ann NY Acad Sci 2002; 957: 230-
8.
9. Stahl W, Sies H. Lycopene: karotenoid yang penting secara biologis bagi manusia.
Arch Biochem Biophys 1996; 336: 1-9.
10. Agarwall S, Rao AV. Likopen tomat dan perannya dalam kesehatan manusia dan
penyakit kronis. JAMC 2000; 163: 739-44.
11. Kavutcu M, Canbolat O, Öztürk S, Olcay E, Ulutepe S, Ekinci C dkk. Penurunan
mekanisme pertahanan antioksidan enzimatik dalam jaringan ginjal dari marmot yang
diobati dengan gentamisin, efek vitamin E dan C. Nephron 1996; 72: 269-74.
120
Turki J Med Sci
sangat efektif. Hasil pemeriksaan histopatologi sebagian
mendukung evaluasi ini. Dalam hal ini, hasil laboratorium biokimia
sesuai dengan pengamatan histologis pada kelompok anggur
hitam, tetapi sampai batas tertentu, tidak sesuai dengan
pengamatan histologis pada kelompok tomat, menunjukkan bahwa
tomat dapat memberikan perlindungan melalui cara lain. dari
mekanisme antioksidan yang diketahui.
Berdasarkan hasil ini, kami menyarankan bahwa suplementasi beberapa
makanan antioksidan seperti anggur hitam selama periode terapi dapat
memainkan peran perlindungan terhadap hepatotoksisitas yang diinduksi oleh
cisplatin.
12. Lowry O, Rosenbrough N, Farr L, Randall R. Pengukuran protein dengan
reagen folin phenol. J Biol Chem 1951; 193: 265-75.
13. Dahle LK, Hill EG, Holman RT. Reaksi asam thiobarbituric dan autoksidasi
dari metil ester asam lemak tak jenuh ganda. Arch Biochem Biophys 1962;
98: 253-61.
14. Durak I, Canbolat O, Kavutcu M, Öztürk HS, Yurtarslan ›Z. Aktivitas enzim
total, sitoplasma dan mitokondria superoksida dismutase dalam cairan serum
dan pleura dari pasien dengan kanker paru. J Clin Lab Anal 1996; 10: 17-20.
15. Aebi H. Catalase. Di Bergmeyer HU, editor. Metode Analisis Enzimatis. New
York: Pers Akademik; 1974. hlm 673-7.
16. Paglia DE, Valentine WN. Studi tentang karakterisasi kuantitatif dan
kualitatif eritrosit glutathione peroksidase. J Lab Clin Med 1967; 70:
158-69.
17. Hashimato S. Metode uji spektrofotometri baru xantin oksidase dalam
homogenat jaringan kasar. Anal Biochem 1974; 62: 425-35.
18. Martins NM, Santos NA, Curti C, Bianchi ML, Santos AC. Cisplatin menginduksi
stres oksidatif mitokondria dengan akibat gangguan metabolisme energi,
rigidifikasi membran dan apoptosis di hati tikus. J Appl Toxicol 2007; 29 Jun
[Epub sebelum dicetak].
19. McManaman JL, Bain DL. Analisis struktural dan konformasi dari oksidase
menjadi dehidrogenase konversi xantin oksidoreduktase. J berbagai Chem
2002; 277: 21261-8.
20. Linder N, Rapola J, Raivio KO. Ekspresi seluler protein xantin oksidoreduktase
dalam jaringan manusia normal. Investasi Lab 1999; 79: 967-74.
21. Y ›lmaz HR, Sö¤üt S, Özyurt B, Özu¤urlu F, fi ahin S, I fl› k B. Aktivitas hati
adenosin deaminase, xantin oksidase, katalase, enzim superoksida dismutase dan
kadar malondialdehida dan oksida nitrat setelahnya toksisitas cisplatin pada tikus:
efek perlindungan dari asam caffeic phenethyl ester. Toxicol Ind Health 2005; 21:
67-73.