CÁTEDRA DE BIOTECNOLOGÍA

ESQUEMA GLOBAL DE UN BIOPROCESO

2015 Desarrollo completo de un bioproceso para la fabricación de un nuevo
producto obtenido por ADN recombinante.

BIOREACTORES El desarrollo de un proceso de

producción a gran escala, en forma
exitosa, es el resultado de acelerar
e intensificar un concepto original,
generalmente un procedimiento de
Ing. Omar Brizuela laboratorio o a pequeña escala.

1 2 3

VISTA GENERALIZADA DE UN BIOPROCESO

MATERIAS PRIMAS

Ventajas Desventajas
La actividad de desarrollo se concentra PROCESOS AGUAS ARRIBA

Moléculas complejas tales como

proteínas y anticuerpos no se pueden
Puede contaminarse fácilmente con en tres áreas principales:
microorganismos no deseados. Preparación Esterilización
Formulación
producir por medios químicos. del Inoculo del Equipamiento del Medio y
Esterilización

Las bioconversiones producen mejor

El producto deseado estará presente en • Desarrollo de los organismos.
una mezcla compleja que requerirá
rendimiento. BIOREACTOR - FERMENTADOR
purificación.
Los sistemas biológicos operan a
Necesidad de proveer, manejar y
• Desarrollo del medio de cultivo.
menor temperatura, pH cercano a Fenómenos de Transporte Instrumentación
Cinética de Reacción
descartar grandes volúmenes de agua. y Propiedades del Fluido y Control
neutralidad, etc.

Mayor especificidad de las reacciones

Los bioprocesos son, generalmente,
extremadamente lentos comparados
• Ingeniería de la fermentación y PROCESOS AGUAS ABAJO
catalíticas.
con los procesos químicos. recuperación de productos.
Puede obtenerse la producción 4 5
Separación
Recuperación y Recuperación de Residuos
Purificación Reuso y Tratamiento
exclusiva de un compuesto isomérico.

FLOW SHEET DE UN BIOPROCESO TIPICO

P R E P A R A T IO N
Bioreactor
O F B IO M A S S FOAM CONTROL pH CONTROL
In n o c u lu m S ta g e s A n tifo a m A d d itio n A c id -A lk a li A d d it io n

PRODUCT RECOVERY

Un bioreactor es un recipiente o sistema que

C E L L S E P A R A T IO N
mantiene un ambiente biológicamente activo.
B IO R E A C T O R In tra c e llu la r
p ro d u ct

1 ). C E L L D IS T R U P T IO N
E x tra c e llu la r
Este proceso puede ser aeróbico o
p ro d u ct
2 ). P R O D U C T E X T R A C T IO N

F re e C e lls ,
Im m o b liz e d C e lls PRODUCT
EL FERMENTADOR anaeróbico.
or
E n z y m e B io re a c to r
C O N C E N T R A T IO N
PROCESS
Los bioreactores son comúnmente
PRODUCT
S E P A R A T IO N cilíndricos, variando en tamaño desde
S T E R IL IZ A T IO N
P U R IF IC A T IO N algunos mililitros hasta metros cúbicos y son
D R Y IN G
usualmente fabricados en acero inoxidable.
R A W M A T E R IA S A ir F IN A L P R O D U C T
N u trie n ts a n d R e a c ta n ts
in A q u e o u s S o lu tio n
(m a y c o n ta in in s o lu b le 8 9
o rg a n ic a n d /o r in o rg a n ic
m a te ria ls )
 Bioreactor Bioreactor: objetivos

En los reactores biológicos (contrariamente a los
Mantener las células uniformemente distribuidas en
Relación
reactores químicos), su cinética no está todo el volumen de cultivo. entre la
determinada exclusivamente por la velocidad de
Mantener constante y homogénea la temperatura. célula y
reacción y las variables que la determinan. su

Minimizar los gradientes de concentración de entorno.

La cinética biológica también depende de nutrientes.
características intrínsecas del organismo o
Mantener el cultivo puro.
cultivo tales como crecimiento y tasa de división

Mantener un ambiente aséptico.
celular y el tipo de operación que se lleve a cabo.
Por eso, lo primero que se define en el diseño de
Maximizar el rendimiento y la producción.
un bioreactor es el propósito de utilización; es
Minimizar el gasto y los costos de producción.
decir, qué tipo de cultivo se va a utilizar, el modo
Reducir al máximo el tiempo. Esquema general de la relación entre reacciones catabólicas y anabólicas en
microorganismos y la energía química involucrada en asimilación, síntesis y
10 11 12
de operar y/o el proceso de cultivo. mantenimiento.

BIOREACTOR
Bioreactores

En cuanto al bioreactor:
bioreactor: ESCALA
MACRO

Para cada proceso biotecnológico,

debe diseñarse el sistema de
contención más apropiado para brindar
ESCALA
el mejor medio ambiente, optimizado MICRO
para el crecimiento celular y actividad
metabólica.
LABORATORIO INDUSTRIA
13 14 15

BIOREACTOR TÍPICO
MEDIO AMBIENTE POBLACIÓN CELULAR
Nutrientes o
El medio ambiente puede considerarse  Multicomponente sustratos  Multicomponente
en tres aspectos:  Reacciones en
Solución  Heterogeneidad
 Equilibrio Ácido-Base Productos
• BIOLÓGICO
 pH, T, .... variables
 Multireacción
 Cambio de
• QUÍMICO propiedades Calor
reológicas  Controles internos
(viscosidad, etc.)
Interacciones
• FÍSICO  Multifase (G-L, L-L, G-
L-L)
Mecánicas  Adaptabilidad

 No uniformidad
espacial  Variación Genética
16 17 18
 Equipos accesorios
• Válvulas de seguridad
• Manómetros
• Válvulas de control
• Cañerías
• Control de temperatura
• Control de pH
• Control de espumas
• Puntos de muestreo
TIPOS DE MICROORGANISMOS
CULTIVADOS EN BIOREACTORES
MODELOS REPRESENTATIVOS
A.C.B. = Aproximación a Crecimiento
Balanceado: significa “composición química
constante”. Aquí se ignora la naturaleza
multicomponente de las células.
Aproximación a Célula Promedio: significa lo mismo
que un componente en solución. Se puede hacer si la
heterogeneidad célula-célula no produce efectos
cinéticos importantes.
ESQUEMA DE UN SISTEMA FERMENTATIVO
DE LABORATORIO
19
EJEMPLOS DE SISTEMAS
ESPECIFICACIONES BIOQUÍMICAS

CÉLULAS VIABLES vs. ENZIMAS

SISTEMAS AERÓBICOS vs. ANAERÓBICOS

CONDICIONES ASÉPTICAS vs. NO ASÉPTICAS

CULTIVOS DE UNA ESPECIE O MIXTOS

CÉLULAS SIMPLES vs. AGREGADOS
MULTICELULARES

MEDIO CON UN SUSTRATO vs. MEDIO
MULTISUSTRATO
22
TIPOS DE FERMENTADOR
• Crecimiento en suspensión
Los organismos están sumergidos y dispersados en el
medio nutritivo y su movimiento sigue al del medio.
• Crecimiento con soporte (o inmovilizados)
Los organismos crecen como una monocapa o película
sobre una superficie en contacto con un medio nutritivo.
En la práctica, sin embargo, los sistemas en suspensión
poseen una película de organismos en la superficie del
contenedor y en sistemas con soporte, encontramos
organismos dispersos en el medio nutritivo
25
CONSIDERACIONES PARA EL DISEÑO DE
BIOPROCESOS

Conocer precios de los productos (pueden variar desde
U$S 1 a 100.000.000 por tonelada).

Para el diseño hay que conocer la escala de producción (si
va a ser 500 g o 105 ton/año).

No hay proceso de diseño estándar que cubra todos los
factores de todos los procesos.

Hay que definir la configuración del reactor (tipo de
reactor).

Modo de operación (batch, discontinuo alimentado,
continuo, con reciclo, etc.).

El tamaño del reactor.

Las condiciones de proceso dentro del reactor y cómo
controlarlas.
DEBIDO A LOS COSTOS, EL DISEÑO FINAL RESULTA EN
UNA SOLUCIÓN DE COMPROMISO ENTRE DEMANDAS
20 CONFLICTIVAS. 21
EJEMPLOS DE SISTEMAS
MODOS DE OPERACIÓN

CÉLULAS LIBRES vs. CÉLULAS INMOVILIZADAS

ENZIMAS DISUELTAS vs. ENZIMAS INMOVILIZADAS

SUSTRATOS SOLUBLES vs. SUSTRATOS
INSOLUBLES

SUSTRATOS MONOMÉRICOS vs. SUSTRATOS
POLIMÉRICOS

OPERACIÓN BATCH vs. CONTINUA

TANQUE AGITADO vs. FLUJO PISTÓN

SIMPLE ETAPA vs. MULTIETAPA

OPERACIÓN NORMAL vs. OPERACIÓN CON
RECICLO
23 24
TECNOLOGIA DE BIOPROCESOS
FERMENTACION
26 27
 AIREACIÓN DEL REACTOR Transferencia de Oxígeno Transferencia de Oxígeno

En los reactores invariablemente hay

Interfase
como mínimo tres fases (gas-líquido- Medio de
Cultivo
sólido).
Célula
Burbuja
La transferencia de masa efectiva entre de aire
Oxígeno
las fases es crucial.
Por ejemplo, para fermentaciones Film de líquido
Film de gas
aeróbicas, el suministro de oxígeno es
crítico. ETAPA CONTROLANTE: paso a través del film de
líquido sobre la burbuja de aire.
29

TRANSFERENCIA DE OXÍGENO

Tamaño
La velocidad a la que las células consumen oxígeno determina la El aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es de
velocidad a la que se requiere transferir. Caudal de Gas
distribuido por una corona que posee pequeños orificios Burbuja
Factores más importantes en la demanda de oxígeno: espaciados regularmente.
“kL” Coeficiente “a” Área Rotura de las
Viscosi-
- Especie celular utilizada El chorro de aire que sale de cada orificio es "golpeado" de Transferencia Interfacial G/L Burbujas
dad del
Fluido de Materia por unidad de
- Fase de crecimiento del cultivo por las paletas de la turbina inferior generándose de este volumen
- Naturaleza de la fuente de carbono en el medio. modo miles de pequeñas burbujas de aire, desde las Hold-up
Resisten-
En los cultivos discontinuos, la velocidad de consumo de oxígeno cuales difunde el 02 hacia el seno del líquido. cia a la
Difusión dCO Tamaño de las
= kL.a(C* − CL)
varía con el tiempo, debido a que la concentración de células aumenta El sistema de agitación se completa con cuatro o seis Burbujas
en la
durante el cultivo y a los cambios fisiológicos en las diferentes fases Fase
de crecimiento. deflectores que tienen por finalidad cortar o romper el dt
Líquida
movimiento circular que imprimen las turbinas al líquido, Velocidad de transferencia de O2 del aire al líquido
La concentración de oxígeno disuelto en bioreactores se mide
generalmente con un electrodo de oxígeno disuelto. generando de este modo mayor turbulencia y mejor (kL.a) = f [(diseño del tanque) (grado de agitación) (viscosidad
Los electrodos de uso común son: galvánicos y polarográficos. mezclado. 32
del medio) (flujo de aire) (presencia de antiespumantes)]
33

TRANSFERENCIA DE OXÍGENO
Velocidad de Consumo de Oxígeno

Presencia de
La demanda de Oxígeno depende de:

Solutos Veloc.
Máxima - Tipo de microorganismo
Concentración Concentración pO2
Temperatura Máxima de de Oxígeno Fijada
Vel. Esp. - Fase de crecimiento
de
Oxígeno (Saturación) Disuelto consumo
de O2
Condiciones - Naturaleza de la fuente de Carbono
Presión Aerobias
parcial
Totales La Demanda de Oxígeno equivale a la Velocidad
Composición
de Consumo:
del Gas
DO = (do) . Ccel
dCO donde: (do) es la demanda específica de oxígeno
= kL.a(C* − CL) Concentración de
(variable).
dt 34
Concentración de
Oxígeno Crítica
Oxígeno Disuelto

35 36
Variable según el tipo
de célula
CONCENTRACIÓN DE CÉLULAS MÁXIMA CALCULO DE (kla)crítico AIREACION Y AGITACION

La agitación es necesaria para:

La máxima transferencia de oxígeno ocurre cuando
(C* - CL) es alta y esto se da cuando CL = 0.
Luego Ccel será Ccelmax:
( k L.a .C * )
Ccel, max =
do
Si la concentración de células Máxima es menor que la
concentración de células Requerida para trabajar,
deberemos mejorar “kL.a” (llamado “coeficiente
volumétrico de transferencia de materia”).
37
do.C 1- incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las
( k a ) crít = * cel burbujas de aire al medio líquido; los microorganismos no pueden
(C − C crit )
L
utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en
disolución.
2- aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes
desde el medio a las células. Debido al movimiento se evita que
las células creen áreas estancadas con bajos niveles de oxígeno y
Sería el mínimo (kL.a) requerido para nutrientes.
mantener la concentración de oxígeno 3- impedir la formación de agregados celulares.
4- aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de
disuelto por arriba de la concentración de las células al medio.
oxígeno crítica (CL>Ccrít). 5- aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor
entre el medio y las superficies de refrigeración del fermentador.
39

Tipos de Flujo en Bioreactores aireados en

función de la velocidad del agitador (Ni) y Difusores
del caudal de gas (Fg)

Porosos.
AIRE

De orificios.

De boquilla.

40 41 42
41

Dispositivos para el suministro de Aire TRANSFERENCIA DE CALOR

INTERIOR DE UN BIOREACTOR
MOSTRANDO AGITADORES Y ROMPEDOR DE ESPUMA

Puede ocurrir que un Bioreactor necesite:

Calentamiento (generalmente por vapor).

Enfriamiento (agua de refrigeració

refrigeración).

43 44 45
45
 Rendimiento para la Generación de Calor

El calor que se debe extraer de un Bioreactor El calor generado por la respiración es:
se debe principalmente al metabolismo celular.
∆Hr = ∆Hs [kcal/g sustrato] – Yc/s [g cel/g sustrato] . ∆Hc [kcal/g celulas] ∆Hr
Calor
Calor generado
También podemos decir que:
liberado al en la
Para el cálculo de ∆Hc se considera que una célula tiene una
quemar el respiración ∆Hs = ∆Hr + ∆Hc - Los hidrocarburos producen más calor que las
sustrato ∆Hr fórmula molecular como: C5H7NO2
∆Hs La combustión de este “compuesto” nos da que ∆Hc sustancias parcialmente oxidadas (pues Calor ≈ 1/ Y∆)
(equivale al
Calor de - Las sustancias más reducidas implican mayor
poder es aproximadamente 5,3 kcal/g células.
formación de
calorífico)
células ∆Hc refrigeración del reactor (tienen mayor cantidad de H).
No se
46 47 48
detecta

COMPARACIÓN DE RENDIMIENTOS PARA

LA GENERACIÓN DE CALOR
GENERACIÓN DE CALOR GENERACIÓN DE CALOR

SUSTRATO RENDIMIENTO (Y∆)
En cultivos aeróbicos el calor liberado se relaciona
En cultivos anaeróbicos el calor liberado (∆Hr) se
directamente con el oxígeno consumido lo que calcula con las cantidades de materiales
Glucosa y similares 0,42 facilita el cálculo de ∆Hr. involucradas y sus calores de combustión.
(molasas, almidón,
celulosa) ∆Hr 100 (moles de O2 consumidos por litro) [kcal/g cel] ∆Hr = (reactantes) – (productos) [kcal/g cel]
Metanol 0,12 Ccel
Incluye a las
Etanol 0,18 Gramos de
cel/Litro Células generadas

Isopropanol 0,074
Metano 0,061 Se asume: EE, que no hay pérdidas, no hay cambio de
Recordar que: ∆Hr = Q y que: Q = U.A. ∆T calor sensible, no hay agitación, no hay evaporación.

49 50 51

CARGA TÉ
TÉRMICA TRANSFERENCIA DE CALOR
Control de temperatura Serpentín Interno: Desventajas
Area de Transferencia de Calor:
1. Baja en (a) camisa externa y (b) serpentin externo para reactores
Velocidad de Producción de pequeños
2. Alta en (c) serpentín interno y (d) serpentín interno compacto para
Interferencia en el mezclado.
Calor: grandes reactores
1
Q = V ⋅ µ ⋅ Cx ⋅
3. Facilmente ajustable en (e) un intercambiador externo.

Ykcal Difícil de limpiar.

Se ensucia facilmente
Dificultades en la limpieza.
por el crecimiento de
Q: veloc. de producción, kcal/L⋅s células sobre la
superficie.
V: volumen de líquido en el reactor, L
µ: veloc. específica de crecimiento, s-1 No hay problemas para

Posibilidad de crecimiento celular en la
Cx: concentración de biomasa (g/L)
limpiar. superficie.
•Se imponen esfuerzos
cortantes sobre las
Ykcal: rendimiento en gramos de células.
celulas formadas por kcal liberada, • Disminución de
g cel/kcal oxígeno disuelto.
54
54
 MODOS DE OPERACION DE Modos de operación de los
Equipos de transmisión de calor PROCESOS FERMENTATIVOS fermentadores

Intercambiadores de doble tubo (operació
(operación • Operació
Operación por lotes (batch
(batch):
): puede ser
en contracorriente y corrientes paralelas). considerada como un sistema cerrado. A tiempo cero,

DISCONTINUO (BATCH)
la solució
solución de nutrientes esterilizada se inocula con
microorganismos y permite que se lleve acabo la

Intercambiadores de carcasa y tubos.
CONTINUO (CSTR y FLUJO EN PISTÓN) incubació
incubación en condiciones optimas de fermentació
fermentación.
La composición del medio de cultivo, la concentración

DISCONTINUO ALIMENTADO (FED BATCH) de biomasa y la concentración de metabolitos cambia
generalmente en forma continua como resultado del
metabolismo de las células

55 56 57
55

Ventajas de las técnicas de cultivo por

lotes (batch) Desventajas del proceso por lotes Reactores Batch y Flujo Pistón
Puede ser que se requieran los productos en pequeñas  La principal es la alta proporción de tiempo improductivo en la dCc 1 dCc µ max.CS
cantidades, en un momento determinado. operación del fermentador, dificultad de diseño y la operación de rc = = µ .Cc µ= . =
procesos que no están en estado estacionario y la variabilidad entre dt Cc dt kS + CS
Cuando la demanda del mercado sea intermitente. lotes. Luego la Ec. de Monod queda:

Cuando se requiere una gran cantidad de producto en el  Los fermentadores deben ser vaciados, limpiados, esterilizados y
dCc µ max .CS.Cc
medio para optimizar los procesos de purificación. recargados antes de cada fermentación, operaciones todas esenciales
=
kS + CS
pero no productivas.
Cuando algunos productos metabólicos se producen dt
 En procesos por lotes, estas operaciones pueden tomar tanto tiempo
solamente en la fase estacionaria del ciclo de crecimiento. como la fermentación misma. Integrando: C c
(k s + C s ). dC c t

Cuando la inestabilidad de algunas cepas productoras  En un proceso continuo, por el contrario, una corrida puede durar ∫ µ = ∫ dt = t − t0
requiere su recambio frecuente. semanas o meses, es decir que el tiempo no productivo es, en Cc 0 max .C s .C c t0
proporción, pequeño.
Cuando los procesos continuos pueden presentar dificultades Se puede integrar si conocemos la relación entre Cs y Cc
técnicas. 58 59 60

Reactores Batch y Flujo Pistón

Reactores Batch y Flujo Pistón Reactores Batch y Flujo Pistón
con Enzimas
Suponiendo que el mecanismo de reacción pueda ser
Para eso planteamos el Rendimiento de Crecimiento Y el tiempo de cultivo se puede calcular como:
representado por la Ec. de Michaelis Menten:
∆Cc Cc −Cc0
Yc / s = =
gr células generadas
Cs − Cs
1  Yc / s  −
dCs r max .Cs
=
0
= − KM +
r max t
− ∆Cs (Cs0 −Cs) gr sustrato consumido tb = ln 1 + (C s − C s ) 
µ max  Cc dt KM + Cs
0 ln( C s / C s )
0 ln( C s / C s )
0

0 
Integrando: Graficando esta ecuación
Luego para Batch o Flujo Pistón:
obtenemos una línea recta con
KM + Cs
dCs µ max [(Cc0 + Yc / s(Cs0 − Cs)].Cs
Hay que recordar que, en el caso de reactores batch, al Cs t
∫ −( ) dCs = ∫0r max dt pendiente rmax y el valor de –KM.

− rs = − =
Cs 0
tiempo de cultivo o de reacción enzimática habrá que Cs
.
dt Yc / s ks + Cs sumarle el tiempo de los períodos improductivos como el
Cs
+ (Cs − Cs) = r max t
0
de recolección, de limpieza y de esterilización. KM ln 0
Sería la velocidad de desaparición de sustrato para Cs
generación de biomasa.
Si conocemos KM y rmax podemos ver la variación de Cs con
Si la alimentación es estéril Cc = 0. 61 62 el tiempo en un reactor batch. Esta ecuación puede usarse
para FP reemplazando t por el tiempo de residencia . τ
 Bioreactor Continuamente Agitado
Fermentació
Fermentación continua (CSTR) Modos de operación

Quimiostato
• Este se utiliza como un quimiostato o
• Se establece un sistema abierto. La solución
Se mantiene por un tiempo indefinido
como un turbidostato.
turbidostato.
Existe un flujo continuo de reactivos frescos hacia
nutritiva se añade continuamente al bioreactor y el reactor y el producto fluye continuamente hacia
• En el quimiostato en estado de equilibrio, fuera.
una cantidad equivalente de solución utilizada de
el crecimiento de las cé
células se controla
Se compone de:
los nutrientes, con los microorganismos, se saca
Un reactor con un volumen de cultivo constante
ajustando la concentració
concentración de un sustrato.
simultáneamente del sistema.
Entrada de nutrientes constante
Cualquier sustrato que se requiera (CHO, N,

Salida de producto y biomasa
sales, O2) puede ser utilizado como sustrato
limitante.
limitante. El quimiostato mantiene el crecimiento bacteriano en la
fase de crecimiento exponencial y permite elegir la
Sustrato limitante:
limitante: nutriente cuya concentració
concentración está
está por
64 65
densidad de células a la que se quiere trabajar. 66
debajo del lílímite de eficiencia de las permeasas.
permeasas.

FERMENTADOR DE MEZCLA FERMENTADOR DE MEZCLA

COMPLETA (CSTR) Modos de operación COMPLETA (CSTR)
En el turbidostato el crecimiento de las cé células se
mantiene constante utilizando la turbidez causada Control por lazo cerrado
Válvula
por las cé
células para controlar la concentració
concentración de
Modo biomasa y la velocidad de alimentació
alimentación de la Modo
Alimentación
Quimiostato solució
solución de nutrientes se ajusta de forma apropiada.
Producto y
biomasa
Turbidostato
Bomba
Generalmente el o los sustratos se agregan en (también
exceso.
podría ser Turbidímetro
Permite cultivos continuos trabajando a altos Nutristato)
caudales de alimentació
alimentación.

67 68 69

Bioreactor Continuamente Agitado Bioreactor Continuamente Agitado

(CSTR) (CSTR)

Pasos: Balance de materia para microorganismos: Si: Cc − 0 1 1

Cargar con inóculo de cultivo
dC c Cambio de la Cc = 0
0 τm =
µ .C c
= =
µ D

Agregar medio de cultivo fresco F .C c 0 − F .C c + V .r c = V . conc. de cel. en el
reactor con el

Regular flujos (entrada/salida)
dt tiempo
dC c F Velocidad de Dilución o
=0 Siendo: D =

Mantener el volumen constante En E.E.: rc: vel. crec. cel.
dt en el reactor V Velocidad Espacial
Una vez que el sistema alcanza el equilibrio, el Del B.M.: V Cc − Cc0 Tiempo de
número de células y la concentración de nutrientes = = τm residencia Como: dC c
= crecimient o − salida = µ .C c − D.C c
en la cámara permanecen constantes, y entonces se F rc dt
dice que el sistema está en estado estacionario, con
las células creciendo exponencialmente. A menor Tiempo de Residencia mayor Eficiencia. y en E.E.: dC c = 0 µ.Cc = D.Cc
dt
luego: µ = D
70 71
Significa que la veloc. esp. de crecimiento 72
está bajo control del operador.
 Bioreactor Continuamente Agitado
Bioreactor Continuamente Agitado Cálculo de los Parámetros de la (CSTR) con Enzimas
(CSTR) Ecuación de Monod Balance de Masa de Sustrato:
F, Cs0
Si: 1 µ .C s Usando un reactor CSTR
D = µ = =
max
Entrada – Salida – Consumo = Acumulación
τm ks + C s variando la velocidad de
alimentación y midiendo la
concentración de células en E.E. F, Cs
k s. D dC s
Siendo: Cs = [g/L] Sustrato Residual en se pueden obtener graficando la V
FC s 0 − FC s − rsV = V
µ max − D el Equilibrio ecuación modificada: dt
1 Ks 1 1
¡¡¡ No hay células en el = . + dC s
Si: Cs = Cs 0 significa que: Cc = 0 reactor !!! µ µ max Cs µ max En estado estacionario:
dt
=0

µ max.Cs Veloc. de Dilución Crítica De esa manera se obtienen µmax

Dcrítica = rmax C S
0
luego: Ec.Michaelis-Menten: r =
y Ks.
ks + Cs 0
Si ks es alto (baja afinidad) se llega
más rápido a la Dcrítica
Notar que: µ = D K M + CS
La concentración de células en el equilibrio es: rmax C s
FC s 0 − FC s − V =0
Cc = Yc / s(Cs − Cs) 0
73

KM + C s

Reactor Continuamente Agitado REACTOR CSTR TÍPICO DE LABORATORIO

PRODUCTIVIDAD DE UN CSTR
(CSTR) con Enzimas

Del Balance de Materia sale: La productividad de un Cx [g/L]
Asumimos que la enzima fermentador se expresa como la
F 1 r maxCs que sale con el producto es rmax
=D= = reemplazada
cantidad de un producto C
τ x = rX
V τ (Cs0 − Cs)(KM + Cs) continuamente por lo que
rmax se mantiene constante.
producido por unidad de tiempo y
de volumen (pendiente de las
Si se conocen los parámetros se puede calcular la rectas). Las rectas son llamadas Cx,opt
Velocidad de Dilución requerida para alcanzar una de “productividad constante”.
determinada conversión de sustrato. La productividad en A es igual A

Esta ecuación se puede reacomodar para dar una que en B. La concentración de

salida en A es baja pero el tiempo Dcrít [h]
relación lineal: r max CSτ de residencia es corto. Lo τm,opt
CS = − KM +
CS 0 − CS opuesto ocurre en B.
El punto óptimo es C.
Los parámetros de Michaelis-Menten se pueden
obtener utilizando varios caudales y graficando CS vs.
(CS τ )/(CS0-CS) 76 77 78

COMPARACIÓN DE BIOREACTORES DISCONTINUO ALIMENTADO DISCONTINUO ALIMENTADO

Grafica del tiempo de
residencia para un CSTR
y un Batch
Grafica del tiempo de residencia para
dos reactores en serie: a) un CSTR y
un FP; b) dos CSTR.

Sirve para evitar la inhibición por sustrato Alimentación Incrementada
o por producto y aumentar la producción. Alimentación Constante
Exponencialmente

Se añade sustrato, casi siempre la fuente de
carbono, aunque puede utilizarse cualquier V V
componente que tenga efecto crítico en el Comienzo
control de la fermentación. Es decir, en
procesos en los que el crecimiento celular y/o
la formación de producto son sensibles a la
concentración del sustrato limitante.

Las formas de agregado del sustrato pueden

variar: Llenado

¿Habría que usar uno o dos reactores? Si Cx final - Alimentación Constante

CSTR más productivo
cuando 1/rx es mínimo.
Si Cx final es alta es
mejor el batch.
es mayor que Cx,opt es mejor un reactor que dos. t
Si Cx final es mucho mayor que Cx,opt conviene un t
- Alimentación Exponencial
CSTR y un FP. Aumento Exponencial del
En la segunda vemos que un CSTR operado a Aumento Lineal del Volumen.
Volumen.
Cx,opt seguido de otro CSTR es mejor que un solo
79 80 µ=D : cuasi estacionario 81
CSTR. Cosecha Conc. Sustrato = Constante
 DISCONTINUO ALIMENTADO DISCONTINUO ALIMENTADO DISCONTINUO ALIMENTADO

Alimentación Constante: puede ser del En este caso:
V = Vi + F .t La cantidad de células en el cultivo aumenta
sustrato limitante o de medio formulado. linealmente con el tiempo.
dC c Cuando el tiempo es suficientemente largo el cultivo
= C c( µ − D ) Cuando se utiliza el sistema para generar biomasa
dt alcanza un estado cuasi-estacionario en el cual la
(ej. levadura de cerveza) es útil poder predecir la
velocidad de dilución (D) se iguala con µ sin que sean
Células dCc F concentración de células en el reactor en función
= − .Cc + rc necesariamente constantes por lo que la velocidad
dt V del tiempo:

dCp F
específica de crecimiento será controlada por D.
Con el tiempo habrá mayor V y menor D:
Cc = Cc + (Yc / sCs F ).t
0 0
Producto = − C p + rp
dt V F Asumiendo que la alimentación no contiene producto
D= podemos calcular la concentración de producto como:
Sustrato
V i + F .t
dCs F
= (Cs 0 − Cs) + rs 82 lo que implica que µ también disminuirá. 83 Cp ~ YP/S . Cs0 84

dt V

Ejemplo de uso del Sistema

DISCONTINUO ALIMENTADO DISCONTINUO ALIMENTADO
Discontinuo Alimentado

Alimentación Exponencial: como debe ser Cs=cte, la
Ventajas del agregado de un nutriente a nivel bajo pero que se
velocidad de acumulación debe ser cero (pues el cultivo Para la producción de Penicilina G (metabolito
está reponiendo constantemente:
crece exponencialmente):
dCs F secundario):
= (Cs0 − Cs) + rs = 0
Mantiene las condiciones del cultivo dentro de los límites de
dt V capacidad de aireación del fermentador;
Con alimentación exponencial

Generación de biomasa: se alimenta con

Elimina los efectos represores de los componentes del medio
Despejando F: rs.V se alcanzarán concentraciones
glucosa en exceso para producir la biomasa.
F =− de EE como en el quimiostato. (fuente de C ó N y fosfatos) que puedan ser utilizados
Cs 0 − Cs rápidamente;

Producción de penicilina: agregado controlado

Evita los efectos tóxicos de un componente esencial del medio
Como rs varía con el tiempo, F también es función del tiempo. La
(ej.: ácido fenilacético en la producción de penicilina); de glucosa y de ácido fenil acético (precursor
variación de volumen es: dV
= F (t ) V ( 0 ) = Vi
Alarga la fase estacionaria para mayor producción; que es tóxico en altas concentraciones para el
dt
Permite el agregado de compuestos reguladores hongo productor).
La acumulación de biomasa y producto se describe con las
(principalmente inductores) en un determinado momento de
mismas ecuaciones que en el caso lineal, utilizando el
volumen dado para el caso exponencial.
85 una fermentación. 86 87

Ingeniería de Bioreactores Configuración de bioreactores Tipos de cultivos en bioreactores

Cultivos en suspensió
suspensión

Configuració
Configuración
Tipo de cultivo

Cultivos con cé
células inmovilizadas
- Cultivos en monocapas

Tamañ
Tamaño
Tipo de cé
células y sus requerimientos
- Cultivos sobre membranas (fibra hueca)

Condiciones del proceso - Cultivos sobre carriers
- Cultivo sobre sustrato só
sólido

Modo de operació
operación
- Cultivos en film

88 89 90
 Bioreactor Típico para Cultivo Aeróbico
Tipos de células Biorreactores: Configuración

Tanque agitado.

Salvajes, mutantes ó recombinantes

Columna de burbujeo

Reactores con agitació
agitación por onda u ola

Microbianas (procariotas
(procariotas / eucariotas)
eucariotas)

Air lift.
lift.

Animales (inferiores / superiores)
Reactores de lecho fijo

Reactores de lecho fluidizado

Vegetales
Fibra hueca.

Reactores no convencionales

91 92 93

Mantenimiento del medio Configuración de un tanque

agitado mecánicamente
homogéneo: agitación Arreglos de Baffle
(a)Baffles soldados a la
pared (para líquidos

Mecá
Mecánica de baja viscosidad).
(b) Baffles separados de

Magné
Magnética la pared (para líquidos
de viscosidad

Neumá moderada).
Neumática
(c) Baffles separados de
la pared y puestos en
ángulo (para líquidos
94 95
de alta viscosidad). 96

DISEÑOS DE IMPULSORES Rangos de Viscosidad para Diferentes

Impulsores Tipos de flujo

Circular.

Axial.

Radial.
Depende de:

Diseñ
Diseño de la paleta.

Propiedades el fluido.

Tamañ
Tamaño y proporciones del recipiente,
bafles y agitador.

97 98 99
97 98
 Modelo de Flujo producido por un impulsor Modelo de Flujo producido por un impulsor axial
radial o de paletas en un tanque con baffles. en un tanque con baffles.
(a)Flujo Circular en
un tanque sin
baffles visto en
planta.
(b)Formación del
vórtice durante el
flujo circular.

(a) Vista lateral (b) Vista en planta. (a) Vista lateral (b) Vista en planta.
100 101 102

OTRAS CONFIGURACIONES DE REACTORES

AGITADOS POR AIRE (Airlift)
Reactor “air lift”

La agitación es generada por El aire que ingresa al bioreactor debe estar estéril.
el aire proporcionado En los reactores de tipo "air lift" es el mismo aire

Usos: inyectado al cultivo lo que promueve la agitación.
Cultivo de cé
células animales, Básicamente consiste en dos cilindros concéntricos
vegetales, procesos con y por la base de uno de ellos, por ejemplo el interior,
catalizadores inmovilizados, se inyecta aire. De este modo se genera una
producció
producción de proteí
proteínas
circulación de líquido ascendente en el
unicelulares a partir de
compartimiento interno y descendente en el externo,
metanol y tratamiento de
aguas residuales. lo que favorece el mezclado.

103 104 105

105

Columnas De Burbujeo Columnas De Burbujeo

Estructura sencilla.

El flujo depende de:

Agitació
Agitación por inyecció
inyección de aire.
 Caudal de aire.
Bajo esfuerzo cortante.

Adecuado rendimiento de transferencia de
 Diseñ
Diseño del difusor. materia y calor.

Bajo costo.
 Diá
Diámetro de la columna.

Usos:

 Propiedades del lí
líquido.
Producció
Producción de levaduras de panificació
panificación, cerveza,
106
vinagre, tratamiento de aguas residuales. 107 108
 REACTOR DE LECHO FLUIDIZADO
Bioreactores de agitación mecánica y
neumática: comparación Reactores de lecho
Agitació
Agitación mecá
mecánica Agitació
Agitación neumá
neumática
(tanque agitado) (air lift,
lift, columna de burbujeo)

Fluidizado
Mecánicamente complejos Mecánicamente simple

Empaquetado (con y sin reciclo)
Altas fuerzas de cortes Bajas fuerzas de corte

Distribución uniforme de la
Turbulencia: irregular distribución turbulencia
Empaquetado con lluvia por spray

Difíciles de limpiar Fácil limpieza

Versátiles Limitada flexibilidad

109 110 111

REACTOR DE LECHO FIJO CON GOTEO

Fermentaciones conducidas
Reactor de lecho fijo con reciclo de medio
con recombinantes

Mantenimiento de la estabilidad de la cepa ó
linea celular durante el proceso( preparació
preparación
del inó
inóculo, diseñ
diseño del medio de cultivo y
condiciones de operació
operación)

Control de los valores de las fuerza de corte
cuando las proteí
proteínas son segregadas al medio
de cultivo.

Observació
Observación de normas de bioseguridad y
BPM.

112 113 114

BIOREACTORES DE PERFUSIÓN
BIOREACTORES DE PERFUSIÓN REACTOR DE OLAS BIOREACTORES DE PERFUSIÓN

Generalmente se usan para

cultivo de células animales. Se pueden obtener de varias compañías, por ejemplo: FiberCell,

Características básicas: ZellWerk (USA), Biovest, ATMI, PBS/Refine, AmProtein, Xcellerex,
alimentación constante,
retención de células y, en Applikon y Wave Biotech.
algunos casos, la remoción Algunos sistemas usan filtración para retener las células mientras que
de células muertas.
otros usan el sistema clásico de ligar las células a fibras capilares o

Retención de células: por
membranas o filtros o por membranas. Estos últimos sistemas tienen ventajas sobre la filtración
centrífugas que pueden debido a que se pueden manejar mayores concentraciones de células,
retirar material
selectivamente. producen pocos o ningunos efectos de estrés sobre las células, bajas

Pueden aumentar la velocidades de apoptosis y baja contaminación por productos de
productividad entre 2 y 5 degradación celular.
veces por lo que puede Más aún, con los sistemas de FiberCell y ZellWerk, las fibras huecas
reducirse notablemente el
tamaño del reactor (hasta pueden remover y concentrar selectivamente el producto deseado.
100 veces en algunos Refine Technology ofrece sistemas de filtración que pueden agregarse
casos).
Los reactores de perfusión se pueden comparar a los reactores a bioreactores batch que de esta manera pueden ser transformados a
Ventajas: maximizan la densidad celular, mantienen la viabilidad de las discontinuos alimentados en productividad, requerimientos de capital, perfusión.
células, aumentan la productividad por célula y la duración del cultivo. velocidad de manufactura y otros factores interesantes. 116
Apoptosis o muerte celular programada es una forma de muerte celular que se 117

Ya hay varias firmas en el mercado con diferentes modelos. desencadena por señales celulares controladas genéticamente.
 Parametros Medidos o REMOCIÓN DE ESPUMA EN BIOREACTORES
Controlados en Bioreactores
FÍSICOS QUÍMICOS BIOLÓGICOS
Temperatura pH Concentración de
Presión O2 disuelto biomasa Rompedor de Espuma

Peso del reactor CO2 disuelto Concentración de

Nivel de líquido Potencial redox enzimas
Nivel de espuma Composición del gas Composición de la
de salida biomasa (tales como
Velocidad de ADN, ARN, proteína,
agitación Conductividad ATP/ADP/AMP,
Consumo de Composición del Niveles de
potencia medio (sustrato, NAD/NADH).
Caudal de gas producto, Viabilidad
Caudal de medio concentración de Morfología
iones, etc.)
Viscosidad del
118 medio 119

Hold-up

Bioreactores de Laboratorio
ESTERILIZACION
La esterilización es el proceso de conseguir la
ESTERILIZACIÓN esterilidad, para la que no existen grados: un objeto,
DE superficie o sustancia es, o no es, estéril.

MEDIOS DE CULTIVO Si es estéril no contiene organismos viables o

células presentes y, si se le protege contra la
INDUSTRIALES contaminación, la condición estéril permanecerá
indefinidamente.
La desinfección implica que el material ha sido
tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de
organismos patógenos, pero no implica que todos
121 122 123
los organismos viables hayan sido inactivados.

ESTERILIZACION
La esterilización se utiliza para: La esterilización se lleva a cabo:
La razó
razón fundamental para efectuar la
esterilizació
esterilización es para evitar la competencia por • Eliminando los organismos viables como en la
1. Asegurar que un proceso se lleva a cabo
filtración
los nutrientes en medios de cultivo y permitir así
así solamente con el organismo deseado
que el cultivo de microorganismos especí
específicos • Matándolos de una de las siguientes formas:
2. Permitir la utilización segura de los
que se utilizan en un proceso de fermentació
fermentación 1. Calentando en presencia o ausencia de agua
productos
produzca los rendimientos esperados en 2. Irradiando con radiaciones ultravioleta,
biomasa y/o metabolitos especí
específicos. 3. Evitar la contaminación ambiental gamma o X
4. Impedir el deterioro de un producto 3. Tratando con productos químicos en solución
125 o en forma gaseosa 126
124
Inyección directa de vapor
Si se utilizan inyecciones directas de
vapor se debe tener en cuenta que entre
el 10 y el 20% del volumen final se
deberán a condensación.
Mientras la eficiencia térmica de este
proceso es alta, la fuerte formación de
espuma durante el burbujeo puede limitar
la transferencia del calor.
127
Esterilización por filtración
• Filtros profundos: capa relativamente
gruesa de fibra de vidrio, algodón, lana
mineral, celulosa moldeados como
planchas, tapones o cilindros.
• Filtros de pantalla: membranas hechas
de ésteres de celulosa u otros polímeros.
130
Esterilización del fermentador y el
medio conjuntamente.
El calentamiento se consigue mediante:
• Inyección de vapor en el medio, por lo que el
medio se prepara ligeramente más
concentrado para compensar la dilución por el
vapor condensado.
• El medio se calienta haciendo pasar vapor
por la camisa de termostatización.
• También puede hacerse por calentamiento
eléctrico (poco usado).
133
Calentamiento indirecto Esterilización por flujo continuo
Pasando vapor de agua a través de una En el diseño del equipo deben
espiral de intercambio de calor o de una considerarse las tres etapas del ciclo,
camisa. El calor en este procedimiento es para conseguir:
menos eficiente que por inyección directa y, 1. Un rápido calentamiento
en ambos casos, permanecen los
problemas de enfriamiento, generalmente 2. Un tiempo de mantenimiento a la
temperatura de esterilización
conseguido mediante espirales.
También puede hacerse con una 3. Un rápido enfriamiento.
resistencia eléctrica. 128 129
ESTERILIZACION por CALOR ESTERILIZACION por CALOR
Mortalidad térmica de microorganismos K = constante de velocidad de destrucció
destrucción, que depende de la
temperatura segú
según la clá
clásica ecuació
ecuación de Arrhenius:
Arrhenius:
dónde
A = constante
E = energí
energía de activació
activación
R = Constante general de los gases
T = Temperatura en grados Kelvin
N/N0 :es la fracción de organismos viables que sobreviven después Si se grafica el In k en funció
función de 1/T se obtendrá
obtendrá una lílínea recta,
del tratamiento por calor durante el tiempo t y siendo la inclinació
inclinación igual a -E/R y la intersecció
intersección de la recta con la
K = constante de velocidad de destrucción o esterilización. ordenada, el valor de la constante de Arrhenius.
Arrhenius.
131 132
Esterilización por separado del
fermentador y el medio
ESTERILIZACION por CALOR
Esterilizadores Batch
Este sistema ofrece ventajas ya que
reduce el tiempo en el que el
recipiente de fermentación es
improductivo: un fermentador vacío
se esteriliza con relativa rapidez.
134 135
 ESTERILIZACION por CALOR ESTERILIZACION por CALOR ESTERILIZACION por CALOR
Batch
Continua
Esterilización Continua

136 137 138

136 137 138

Esterilización del Aire

Se realiza por Filtración. La filtració
filtración se utiliza para:

Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos de pomadas.
La filtración puede usarse para esterilizar líquidos termosensibles o
gases.

Soluciones termolá
termolábiles:
biles: lílíquidos bioló
biológicos (sueros de
animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y
Un filtro es un dispositivo con poros demasiados pequeños para
antibió
antibióticos).
que pasen los microorganismos, pero suficientemente grandes
Esterilizar soluciones oftá
oftálmicas, soluciones
para permitir el paso de un liquido o un gas. intravenosas, drogas diagnó
diagnósticas, radiofá
radiofármacos,
rmacos,
medios para cultivos celulares, etc.
El rango del tamaño de las partículas implicadas en la esterilización
Aire.
es muy amplio. Algunas de las células bacterianas de mayor
tamaño miden mas de 10 µm de diámetro, mientras que las más
pequeñas en la escala de tamaños tienen un diámetro menor de
0,3 µm.
139 140 141

Tipos de filtros Filtros de Membrana

Sus poros van de 0,04 a 8 µm siendo el má
más comú
común de 0,2
µ m.
Uno de los tipos más antiguos es el filtro de
profundidad. Los tipos má
más utilizados son:
- Tipo millipore
Estos filtros están elaborados por un - Filtros nucleopore
material fibroso (papel, asbesto o fibra de
vidrio) dispuesto al azar, de manera que
dentro de la estructura del filtro se crean
vías tortuosas donde pueden quedar
A veces llamados Filtros de Superficie.
retenidos la mayoría de los contaminantes Son los mámás utilizados para esterilizació
esterilización.
presentes.
Dado que son bastantes porosos, los filtros
se utilizan en:
de profundidad se emplean a menudo como
La esterilizació
esterilización de lílíquidos
prefiltros para eliminar de una solución las
partículas de gran tamaño que pudieran
En el aná
análisis microbioló
microbiológico de aguas ya que
dificultar el proceso final de esterilización concentran los microorganismos existentes en grandes
por filtración. volú
volúmenes de agua.
142 143 144
 Filtro Nuclepore o de nucleació
nucleación
Filtro de membrana o Millipore
Estos filtros se han obtenido bombardeando
pelí
películas muy finas de policarbonato con
Se componen de polípolímeros con una elevada resistencia, acetato de neutrones y fracturando la pelí
película con un
celulosa, nitrato de celulosa, diseñ
diseñados para presentar numerosos producto quí
químico.
poros diminutos. Tambié
También se fabrican en Teflon.
Teflon.
La radiació
radiación produce microlesiones
localizadas en la pelí
película y la acció
acción quí
química
incrementa el tamañ tamaño de los dañ daños
Ajustando las condiciones de polimerizació
polimerización durante su fabricació
fabricación, microscó
microscópicos producidos hasta formar
se puede controlar con precisió
precisión el tamañ
tamaño de los poros de las agujeritos (poros).
membranas (y, por tanto, el tamañ
tama ño de molé
molé culas que pueden pasar
a travé
través de ellos). Los tamañ
tamaños de los microporos se controlan
con precisió
precisión con el tipo solució
solución quí
química
empleada y el tiempo de tratamiento.
Los filtros de membrana se diferencia de los filtros de profundidad
profundidad
en que funcionan como un tamiz, reteniendo muchas de las Un organismo puede separarse del liquido y
concentrarse en un único plano en la
partí
partículas en la superficie del filtro. superficie del filtro; esto puede observarse
con el microscopio.
145 146 147
147

Filtración

Los microorganismos quedan retenidos en parte por el
pequeñ
pequeño tamañ
tamaño de los poros del filtro y en parte por
adsorció
adsorción a las paredes del poro durante su paso a
travé
través del filtro debido a la carga elé
eléctrica del filtro y de
los microorganismos.

Debido al pequeñ
pequeño tamañ
tamaño de los virus, nunca es posible
tener certeza de que, por los mémétodos de filtració
filtración que
Filtro de dejan libre de bacterias una solució
solución, se van a eliminar
microfibras de Filtros de Millipore tambié
también los virus.
vidrio. membrana de
PVDF membrane.
membrane.
nitrocelulosa

148 149 150

FILTRACIÓN DE AIRE
ESTERILIZACION DEL AIRE Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air)

Está
Está compuesto por pliegues de acetato de celulosa que retienen las
Requerimientos: partí
partículas (incluidos los microorganismos) del aire que sale de una
campana de flujo laminar.
El sistema debe ser de diseñ
diseño sencillo

Remoció
Remoción de hasta el 99.97% de partí
partículas mayores de 0.3 micrones de
Su operació
operación debe ser barata diá
diámetro

Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar.
laminar.
Debe ser estable y resistente a varias
esterilizaciones con vapor CONTROL

Retenció
Retención Mí
Mínima de un 99.97% de partípartículas generadas mediante
Debe acondicionar el aire, ajustando la ensayo DOP(di-
DOP(di-octil-
octil-ftalato) en caliente con un diá
diámetro de 0.3 micrones.
temperatura y humedad.
SE USAN para lograr ambientes con número de partículas
controlado:
FLUJOS LAMINARES
151 152 AREAS DE TRABAJO 153
151
 Cabinas de Flujo Laminar
Vertical ESTERILIZACION ESTERILIZACION
El tamaño de los microorganismos Los mecanismos de retenció
retención de partí
partículas
Salida de aire varia entre 1 y 10 µm. finas por filtros de aire son:
Los organismos pequeños son
adsorbidos por el polvo del aire y a) Impacto
pueden eliminarse junto con las
partículas de polvo mayores. Se b) Intercepció
Intercepción
Protege la ha demostrado que el tamaño
c) Difusió
Difusión
medio de las partículas de polvo
muestra, el es de 0,6 µm. d) Sedimentació
Sedimentación, y
operador y el
Entrada El numero de organismos
e) Atracció
Atracción electromagné
electromagnética
medio ambiente presentes en el aire es
de aire fundamental para poder diseñar un
sistema de esterilización, los
valores encontrados varían entre
103 y 104 partículas/m3
154 155 156

EFECTO TAMIZ ESTERILIZACION

Además del Efecto Tamiz se pueden distinguir:
Ademá

 partí
partículas que chocan con las fibras (impacto inercial).

 otras que aunque no choquen directamente, será

serán colectadas por
el cilindro (intercepció
(intercepción)

 y finalmente la partí
partículas que sin chocar contra la fibra debido a
su movimiento irregular lleguen a estar en contacto con ella y las
las
retenga (difusió
(difusión).

157 158 159

EFECTO DE LOS DISTINTOS FILTROS HEPA

MECANISMOS

Purificación del Producto

160 161 162

161
 OPERACIONES DE PURIFICACIÓN

El diseño y la operación eficiente de los procesos

- Destilación - Adsorción
de purificación, son elementos vitales para
obtener los productos deseados para uso - Centrifugación - Tamices moleculares
comercial. - Filtración - Electroforesis
Deberían reflejar la necesidad de no perder más - Cromatografía de afinidad
- Ultrafiltración
que lo absolutamente necesario del producto
final. - Extracción con solventes - Liofilización
Este procesamiento final involucrará,
principalmente, la separación inicial de la mezcla
de cultivo hacia una fase líquida y una sólida, con El procesamiento involucrará más de una operación.
la subsecuente concentración y purificación del
producto deseado. 163 164