Practica 1: Identificación de aminoácidos

Nombre de alumnos: Cota Valdez, N.; Flores Montoya, A.; López Armenta, M.; Ortega Ruelas, F.; Ruiz
Lugo, M. Docente: Dra. Castro Ochoa Lelie Denise
Instituto Tecnológico de los Mochis, Materia: Bioquímica del Nitrógeno y Regeneración Genética,
Grupo: T20

Resumen. Un aminoácido es una pequeña molécula orgánica que contiene, al menos, un grupo amino (-
NH2), de naturaleza básica, y un grupo carboxilo (-COOH), de carácter ácido. Todas las reacciones para
identificar aminoácidos y proteínas están basadas en la presencia de grupos químicos, en los enlaces o en
sus propiedades físico-químicas. Esta práctica se realizó con el objetivo de identificar por medio de
reacciones de coloración diferentes tipos de aminoácidos, utilizando Ninhidrina, reactivo de Millon y
HNO3 junto a NaOH al 40%, de los cuales obtuvimos seis resultados positivos.

La síntesis de proteínas incluye 20

Introducción
Un aminoácido es una pequeña molécula
orgánica que contiene, al menos, un grupo
amino (-NH2), de naturaleza básica, y un
grupo carboxilo (-COOH), de carácter
ácido. Aunque los seres vivos sintetizan
para distintos propósitos tipos diversos de
aminoácidos, sin duda los más importantes
son los que forman parte de las proteínas,
todos los cuales pertenecen a la clase de los
-aminoácidos. Éstos se caracterizan por
presentar los grupos ácido y amino unidos
al mismo átomo de carbono (que se
denomina carbono ). Además, a este
carbono  se une, como tercer sustituyente,
un átomo de hidrógeno y, como cuarto
sustituyente, un grupo adicional al cual se
le denomina cadena lateral del aminoácido
que identifica y da propiedades
características a cada uno de los
aminoácidos (De Paz, 2016).
Al ser los cuatro sustituyentes del carbono
 distintos y adoptar una disposición
tetraédrica en torno a él, los -aminoácidos
presentan isomería óptica, de modo que la
imagen especular de un aminoácido no es
idéntica al original. Así, dependiendo de la
disposición espacial de los cuatro
sustituyentes, los aminoácidos pueden ser D
o L. Todos los aminoácidos que aparecen
en las proteínas son L (Odeon, 2015).
instrucciones que corresponden a la orden
de incorporación de uno de entre 20
aminoácidos posibles. Estos 20
aminoácidos (todos ellos  y L) se conocen
como aminoácidos codificados
genéticamente o proteinogénicos. Algunas
proteínas contienen otros aminoácidos,
normalmente en baja proporción, que son
siempre resultado de alteraciones químicas
(a menudo catalizadas por enzimas) que
sufren los aminoácidos codificados
genéticamente después de su incorporación
a la proteína en el ribosoma. Estas
modificaciones se denominan
postraduccionales, pues tienen lugar
después de la “traducción” a proteína de la
información genética contenida en el RNA
mensajero (Odeon, 2015).
Todas las reacciones para identificar
aminoácidos y proteínas están basadas en la
presencia de grupos químicos, en los
enlaces o en sus propiedades físico-
químicas. Las reacciones de reconocimiento
pueden dividirse en dos grupos
independientes:
Reacciones de precipitación y reacciones
coloreadas, en estas últimas encontramos
la reacción de Biuret, de la Ninhidrina, del
Ácido Píerico, la Xantoproteíca, la Millon,
por mencionar algunas. Estas reacciones
permiten identificar a ciertos grupos de
aminoácidos de acuerdo a los grupos reacción, la hidrindantina formada con una
funcionales que contengan (Linder, 2017). segunda molécula de ninhidrina, reaccionan
con el amoníaco formando un complejo de
Esta práctica se realizó con el objetivo de color púrpura.
identificar por medio de reacciones de
coloración diferentes tipos de aminoácidos. En este experimento la muestra que en este
caso es la clara de huevo diluida reacciono
Materiales y Métodos de forma que se observó un color violeta
dando un resultado positivo la muestra
Se tomo con una pipeta 1 ml de clara de
contiene al menos un grupo amino. Al ser
huevo la cual previamente fue diluida con
un color violeta se puede suponer que se
agua destilada en un vaso de precipitado,
trató de un aminoácido cuyo grupo (-NH2)
adicionándola en el tubo de ensayo
es primario.
etiquetado como A1. Después se agregó la
misma cantidad de aminoácidos en su tubo También se realizó esta misma prueba para
de ensayo correspondiente tal como se los siguientes aminoácidos; tirosina,
muestra en la tabla 1. Posterior a esto se arginina, triptófano y cisteína. La tirosina
añadió 1 ml de Ninhidrina a cada muestra y reacciono con el reactivo de la ninhidrina
se sumergió en agua caliente hasta obtener dando como resultado un color azul-violeta,
reacción. ya que en su estructura la tirosina tiene un
grupo carboxilo libre y un grupo amino por
Después de eso, se tomó 1 ml de clara de
otro lado, la arginina no reacciono con la
huevo sin diluir y la se agregó al tubo de
ninhidrina por lo que se puede asegurar que
ensayo B1, posteriormente se tomó la
no se agregó la cantidad suficiente de
misma cantidad de aminoácidos y los
reactivo de ninhidrina ya que, este
cuales se adicionaron a su tubo de ensayo
aminoácido debe de reaccionar de manera
correspondiente como se muestra en la
positiva con la ninhidrina porque tiene el
tabla 2. Una vez hecho esto, se mezcló con
grupo carboxilo libre y amino, en el caso
1 ml de Millon y de igual forma se
del triptófano se observó un color violeta
sumergieron en agua caliente hasta obtener
lo que nos indica que la reacción fue
reacción.
positiva y por último se observó que la
Por último, se adiciono 1 ml de clara de cisteína reacciono de forma positiva dando
huevo sin diluir en el tubo de ensayo C1 y un color violeta cristalino.
se agregó la misma cantidad de
Los resultados obtenidos de esta prueba se
aminoácidos en su tubo de ensayo
muestran en la tabla 1 y en la Ilustración 1
correspondiente tal como se muestra en la
se puede observar los colores que se
tabla 3. Posterior a esto se combinó con 1
obtuvieron tanto para la muestra y para las
ml de HNO3 y se calentó a baño maría hasta
muestras problemas que este caso son los
obtener reacción. Una vez obtenida la
distintos aminoácidos.
reacción se alcalinizaron las muestras con
NAOH al 40% y se observaron los
resultados.
Resultados y discusión
A) REACCIÓN DE NINHIDRINA
Para la prueba de Ninhidrina en una
primera etapa de la reacción, el aminoácido
se oxida, descarboxilándose y liberando
amoníaco, mientras que una de las
moléculas de ninhidrina de reduce a
hidrindantina. En el segundo paso de la
Tabla 1. Resultados obtenidos para la prueba de Ninhidrina

ResultadoB) REACCIÓN DE MILLON

A)
Color
Ninhidrina
A1
Clara de huevo
Violeta Positivo
La reacción de millón es debida a la
diluida presencia del grupo hidroxifenílico
A2 Tirosina Azul-Violeta Positivo (C6H4OH) en la molécula proteica.
A3 Arginina * Cristalino* Negativo*Cualquier compuesto fenólico no sustituido

A4 Triptófano
Violeta-
Positivo
en la posición 3,5 como la tirosina, fenol y
Cristalino timol, dan positiva la reacción. (Vázquez-
Violeta-
A5 Cisteína Positivo Jorge, y otros, 2014)
Cristalino
En una primera instancia se procede a la
nitración del anillo fenólico con el ácido
nítrico del reactivo. La tirosina nitrada
forma complejos con los iones mercurio Hg
(I) y Hg (II) del reactivo produciendo un
precipitado rojo o una solución roja, ambos
resultados positivos. (Universidad Nacional
de la Patagonia San Juan Bosco, s.f.)
Con la información anterior se puede inferir
que ninguna de las soluciones problema
manejadas tendría la reacción esperada con
el reactivo de millón. De las soluciones de
la tabla 2, la glicina, arginina y cisteína se
mantienen transparentes por la falta de un
Ilustración 1. Reacción de la Ninhidrina con diferentes
aminoácidos grupo fenol en su estructura, mientras que
la clara de huevo y el triptófano obtienen
una coloración amarilla como se puede ver
en la ilustración 2.
La explicación de la coloración amarilla
que existe en la clara de huevo y el
triptófano ocurre por la reacción
xantoproteica que ocurre acompañada a la
de Millon, esto debido a que el reactivo de
Millon es también poseedor de ácido
nítrico, es decir que ocurrirá dentro de esta
la identificación de grupos bencénicos
como los tiene el triptófano y la albúmina
(Proteína principal de la clara de huevo).
De acuerdo con (Ruiz Hidalgo, 2010) la
reacción del reactivo de Millon se le tiene
que agregar una solución de NaOH para
reaccionar completamente, es por esto por
lo que la albumina se mostró únicamente
amarillo sin cambiar al rojo esperado, sin
embargo, el precipitado visible se puede
considerar como la reacción de la albumina
con el reactivo de Millon, es decir con los
grupos fenólicos que se encuentran en la triptófano). Las proteínas que tienen en su
proteína, como lo es el aminoácido tirosina. composición estos aminoácidos también
darán la reacción. La positividad se
C) REACCIÓN XANTOPROTEICA
reconoce por la aparición de un color
La reacción xantoproteica es una reacción amarillo o verde debido a la formación de
que reconoce los aminoácidos que poseen nitrocompuestos (Vázquez-Jorge, y otros,
el grupo bencénico (tirosina, fenilalanina, 2014).
Tabla 3. Resultados obtenidos de la Como se observó en la Tabla 3 e
reacción Xantoproteica
Ilustración 3 los aminoácidos que
C) Color
HNO reaccionaron fueron únicamente los
3+ Sin Resu aromáticos como es el caso de la
NAO alcalin ltado
alcalin
izada tirosina y el triptófano que
H al izar
40% reaccionaron con colores amarillos
Clara esto debido a que los aminoácidos se
C1
de Blanq Blanq
- nitran dando este color característico.
huev uizco uizco
o Sin embargo, con la adición de álcali,
Tabla 2. Resultados
Amaril obtenidos para la prueba de Millón.
Tiros Naranj el residuo se vuelve naranja debido a
C2
ina
lo
a +
B) Millon claro Color Resultado la formación de una sal de la forma
Argi Clara
Transpde Transp Amarillo tautomérica del compuesto nitro
C3B1
nina arente - con Positivo
huevo arenteprecipitado (Passen, 2018). Es por eso por lo que
Tript Naranj al alcalinizar la solución que contenía
C4B2
ófano Glicina
a +
RojoTransparente Negativo
Transp tirosina y triptófano resultaron de
B3 Arginina arente Transparente Negativo colores naranja para el caso de la
Ciste Transp
C5 Triptófan con - tirosina y rojo para el triptófano.
B4 ína arente precipi Amarillo Negativo
o
tado Cuando se agregó NaOH al tubo C5
B5 Cisteína Transparente Negativo
perteneciente al aminoácido cisteína
se examinó como una nube la cual se
muestra en la Ilustración 4, debido a
que ésta es uno de los aminoácidos
más hidrofóbicos, pertenece al grupo
de los aminoácidos polares sin carga
y, como otros aminoácidos, puede ser
degradada por hidrólisis alcalina a
elevadas temperaturas (Puig, 2019).
Y por último se pude ver en tabla 3
que la clara de huevo no reaccionó
siendo que es rica en proteínas las
Ilustración 3. Reacción xantoproteica con clara de
cuales están formadas de aminoácidos
huevo y diferentes aminoácidos (sin alcalinizar).
entre ellos el triptófano, la fenilalanina
y la tirosina, esto debido a que la clara
de huevo estaba muy diluida por lo
que estos componentes se encontraban
en muy pequeñas cantidades
impidiendo que se distinga con una
coloración la reacción de estos.

Ilustración 2. Reacción de la Millon con clara de huevo y

diferentes aminoácidos.

Ilustración 4. Reacción xantoproteica con clara de huevo

y diferentes aminoácidos (alcalinizada).
Bibliografía

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https://www.fullquimica.com/2016/02/propiedades-fisicas-y-quimicas-de-los.html

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