GYAKORLAT: A DNS KIVÁLASZTÁSA (IZOLÁLÁSA)

A tiszta DNS izolálása nagyon bonyolult folyamat, amely különböző enzimeket és

vegyszereket igényel. Viszont a DNS egyszerűbb konyhatechnológiai módszerrel is kivonható
a sejtből és megfigyelhető. Ezzel a módszerrel, különböző fizikai erő (nyomkodás,
kevergetés), és vegy anyag hatására a molekula darabokra esik szét, majd alkohol hatására
kicsapódik. A DNS molekulaszakaszok így tömegesen egymáshoz kapcsolódnak, fehérjékkel
társulnak s ilyen formában lesznek láthatóak mikroszkóppal. Ez a módszer több lépésből áll:
A zöldségek, gyümölcsök, gabonafélék, húsfélék – minden növényi és állati termék –
tartalmaz különböző mennyiségű DNS-t.
Ebben a kísérletben földieperből fogunk DNS-t izolálni. De ki lehet indulni paradicsomból,
hagymából, borsóból és brokkoliból , almából is.

Anyagok, eszközök:
pár szem fagyasztott földieper, vagy egy negyed paradicsom
éles kés vagy szike
zacskó vagy dörzsmozsár
teáskanál
detergens (mosogatószer, folyékony szappan)
2 db 100 ml-es főzőpohár
tölcsér
szűrőpapír
csepegtető, pipetta
2 edény-meleg- és hidegvizes fürdőhöz
alkohol (70%-os vagy 95% -os) –20C-ra hűtve
üvegbot vagy gémkapocs
nátrium-klorid (konyhasó)
desztillált víz
lencse-tisztítószer (proteáz)
tárgylemez, fedőlemez, mikroszkóp

A kísérlet menete:
1.A SZÖVET APRÍTÁSA, S A DNS KISZABADÍTÁSA: A fagyos földiepert vágjunk apró
darabokra, és pépesítsük zacskóban vagy dörzsmozsárban.
Egy főzőpohárban keverjünk össze 1 kiskanál sót, 3-4 csepp mosogatószert, valamint
desztillált vizet (100 ml-ig) . Adjuk hozzá a pépesített földiepert, s kevergessük, amíg a só el
nem olvad. Hagyjuk állni pár percet.
Ez idő alatt a detergens szétroncsolja a sejt és a sejtmag membránját (oldja a zsírokat), hogy
a DNS kiszabadulhasson a sejtekből. A konyhasó meggátolja a felszabaduló fehérjék
felhalmozódását, így az oldatot fiziológiás oldattá teszi.

2.MELEG FÜRDŐ: A keveréket tartalmazó főzőpoharat tegyük 50 fokos vízzel töltött

edénybe, amelyben 10 percig áll. Ez a hőmérséklet serkenti a DNS felszabadulását, viszont
meggátolja annak az enzimnek a működését, amely szétbontaná a DNS-t.
3.HIDEG FÜRDŐ: A keveréket tartalmazó főzőpoharat tegyük jéggel töltött edénybe,
amelyben 10 percig áll. Erre azért van szükség, hogy a magas hőmérséklet hatására, nehogy
szétessen a DNS.

4.SZŰRÉS: A pépet szűrjük át egy gézdarabon, vagy szűrőpapíron, melynek során

szétválasztjuk a DNS-t a többi sejtalkotótól. Aztután hozzáadunk 4 ml lencse-tisztítószert. Ez
proteázt tartalmaz, amely hatására a DNS leválik a hisztonokról.

5.A DNS KIVÁLASZTÁSA: A szűrlethez óvatosan adjunk hozzá ugyanannyi térfogatú hideg!
alkoholt. Az alkohol úszik a keverék felszínén, s ügyeljünk, hogy a két folyadék ne keveredjen.
A DNS az alkohol hatására kicsapódik. Azt tapasztaljuk, hogy a szűrlet és az alkohol határán
megjelenik egy fehéres, nyúlós állagú anyag, ami alkoholban nem oldódik, kicsapódik, fehér
„felhőként” az oldatban. Ez tartalmazza a fehérjéket és a DNS molekulákat. Ha hidegre
tesszük, akkora DNS könnyebben kiválik.

6.A DNS MAKROSZKÓPOS ÉS MIKROSZKÓPOS MEGFIGYELÉSE: Egy üvegbottal vagy egy

meghajlított végű gémkapoccsal nyúljunk a főzőpohárba, tekerjük fel kicsit, majd emeljük ki
a nyúlós DNS-t. Előbb szabad szemmel, majd mikroszkóppal vizsgáljuk meg. Rajzold le a
látottakat!