Lisa Ta

29 de febrero de 2012.
Biología 240
Microbiología general
MW 3:45-5:00

Informe sobre la tinción de Gram

Introducción

El objetivo de este experimento es determinar la forma y la tinción de Gram de

las bacterias al microscopio. La razón de teñir las bacterias se debe a que la
mayoría de ellas son transparentes y no pueden verse a través del microscopio.
La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial que permite a un
(micro)biólogo identificar las diferencias entre organismos y/o las diferencias
dentro de un mismo organismo. La tinción de Gram de bacterias requiere el uso
de una técnica aséptica para garantizar la esterilidad del experimento. El
propósito de la tinción de Gram es mostrar si las bacterias son Gram positivas
(de color púrpura), Gram negativas (de color rosa), o ambas.

Materiales y métodos

Se utilizó una técnica aséptica durante todo el experimento. Se colocó una gota
de agua desionizada en un portaobjetos de microscopio y también se colocaron
bacterias del número desconocido 20 en el portaobjetos. A continuación, el
portaobjetos debía secarse al aire antes de fijarlo con calor, para que pudiera
comenzar la tinción de Gram. El primer paso en la tinción de Gram consistía en
colocar la tinción primaria, violeta cristal o azul de metileno, en el portaobjetos
donde se habían fijado las bacterias con calor. El colorante debía permanecer en
el portaobjetos durante aproximadamente un minuto antes de aclararlo con agua
desionizada y secarlo con un paño. A continuación, el yodo mordiente (que es el
colorante de la tinción de Gram) se colocó en el portaobjetos durante otro minuto
y medio. Una vez transcurrido el minuto y medio, se enjuagó el portaobjetos con
agua desionizada y se secó con un paño. El siguiente paso fue utilizar etanol al
95% para lavar los colorantes de las bacterias Gram negativas. Para distinguir
cuándo dejar de usar etanol, la primera gota de solución no coloreada que
resbala del portaobjetos era el indicador. De nuevo se enjuagó el portaobjetos
con agua desionizada y se secó con un paño. Por último, se colocó el colorante
saffarin en el portaobjetos para contrateñir las bacterias Gramnegativas durante
un minuto, se enjuagó con agua desionizada y se secó con un paño.

Los métodos también pueden consultarse en las páginas 159-163 del manual de
laboratorio.

Se utilizó el microscopio E1 para observar la incógnita número 20 y determinar si

las bacterias eran Gram-positivas o Gram-negativas y cocos o bacilos.

Resultados

A lo largo del experimento, la incógnita número 20, que se encontraba en un

medio de Agar Nutriente y que se determinó que tenía forma de cocos (esfera),
parecía ser Gram negativa.

Debate

Lo que determina las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas se debe a la

diferencia en la composición de la pared celular. Dado que las paredes celulares
de las células Gram negativas tienen un mayor contenido de lípidos y una capa
más fina de peptidoglicano, el alcohol utilizado en el paso de decoloración hizo
que las células Gram negativas fueran incapaces de retener el complejo azul de
metileno-yodo. Por otro lado, las células Gram positivas tienen un peptidoglicano
más grueso que atrapa el complejo azul de metileno-yodo, lo que las hace
menos vulnerables a la decoloración.

Se utilizó la técnica de tinción de Gram en la incógnita número 20. El

desconocido parecía ser Gram negativo y con forma de cocos. Dado que se trata
de una incógnita, el valor bibliográfico es desconocido. La diferencia entre los
valores de la bibliografía y los experimentales puede deberse a que el etanol al
95% haya eliminado por completo el exceso de colorantes primarios y de yodo
mordiente, o a que el colorante de yodo mordiente no se haya dejado actuar el
tiempo suficiente.

Referencia

Bauman, R.W. "Microbiology with Diseases by Body System",2ª ed. Pearson

Education, Inc. S.F. 2009. p.107-109.

Leboffe, M.J., Pierce, B.E. "Microbiology Laboratory Theory and Application", ed.
Breve. Moron Publishing Co. CO. 2008. p. 159-163.