Lisa Ta

29 Februari 2012.
Biologi 240
Mikrobiologi Umum
MW 3:45-5:00

Laporan Noda Gram

Perkenalan

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui bentuk dan pewarnaan Gram
bakteri di bawah mikroskop. Alasan pewarnaan bakteri adalah karena sebagian
besar bakteri transparan dan tidak dapat dilihat melalui mikroskop. Pewarnaan
Gram adalah jenis pewarnaan diferensial yang memungkinkan ahli biologi (mikro)
untuk mengidentifikasi perbedaan antara organisme dan/atau perbedaan dalam
organisme yang sama. Bakteri pewarnaan Gram membutuhkan penggunaan
teknik aseptik untuk memastikan sterilitas percobaan. Pewarnaan Gram
bertujuan untuk menunjukkan apakah bakteri tersebut Gram positif (berwarna
ungu), Gram negatif (berwarna merah muda). berwarna), atau keduanya.

Bahan dan metode

Teknik aseptik digunakan selama percobaan. Setetes air deionisasi ditempatkan

pada slide mikroskop dan bakteri dari nomor 20 yang tidak diketahui juga
ditempatkan pada slide. Kemudian slide harus dikeringkan dengan udara
sebelum difiksasi dengan panas, sehingga pewarnaan Gram dapat dimulai.
Langkah pertama dalam pewarnaan Gram adalah menempatkan pewarna primer,
Crystal Violet atau Methylene Blue, pada slide tempat bakteri difiksasi dengan
panas. Pewarna harus tetap berada di slide selama sekitar satu menit sebelum
dibilas dengan air deionisasi dan dikeringkan. Kemudian Mordan Iodine (yang
merupakan pewarnaan pewarnaan Gram) ditempatkan pada slide selama satu
setengah menit. Setelah satu setengah menit berlalu, slide dibilas dengan air
deionisasi dan dikeringkan. Langkah selanjutnya adalah menggunakan Etanol
95% untuk membersihkan pewarna dari bakteri Gram-negatif. Untuk
membedakan kapan harus berhenti menggunakan etanol, tetes pertama larutan
tidak berwarna yang meluncur dari kaca obyek adalah indikatornya. Sekali lagi
slide dibilas dengan air deionisasi dan dikeringkan. Terakhir, pewarna saffarin
ditempatkan pada slide untuk mengimbangi Gram bakteri negatif selama satu
menit, dibilas dengan air deionisasi, dan dikeringkan.

Metode juga dapat dirujuk ke halaman manual lab 159-163.

Mikroskop E1 digunakan untuk melihat angka 20 yang tidak diketahui untuk

menentukan apakah bakteri itu Gram-positif atau Gram-negatif dan cocci atau
bacillus.

Hasil

Melalui proses percobaan, bilangan 20 yang tidak diketahui yang berada pada
media miring Nutrient Agar yang ditentukan berbentuk kokus (bola) tampak
Gram-negatif.

Diskusi

Yang menentukan bakteri Gram positif dan Gram negatif adalah karena
perbedaan komposisi dinding sel. Karena dinding sel sel Gram-negatif memiliki
kandungan lipid yang lebih tinggi dan lapisan peptidoglikan yang lebih tipis,
alkohol yang digunakan dalam langkah penghilangan warna membuat sel-sel
Gram-negatif tidak mampu mempertahankan kompleks metilen biru-iodin. Di sisi
lain, sel Gram-positif memiliki peptidoglikan yang lebih tebal yang menjebak
kompleks metilen biru-iodin, membuatnya kurang rentan terhadap dekolorisasi.

Teknik pewarnaan Gram digunakan pada nomor 20 yang tidak diketahui. Yang
tidak diketahui tampaknya Gram negatif dan berbentuk kokus. Karena ini tidak
diketahui, nilai literatur tidak diketahui. Kemungkinan perbedaan dalam literatur
dan nilai eksperimen dapat disebabkan oleh kelebihan pewarna yodium primer
dan mordan yang dikeluarkan seluruhnya oleh Etanol 95%, atau bahwa pewarna
yodium mordan tidak dibiarkan cukup lama.

Referensi

Bauman, RW “Microbiology with Diseases by Body System”, 2 nd ed. Pendidikan

Pearson, Inc. SF 2009. hal.107-109.

Leboffe, MJ, Pierce, BE “Teori dan Aplikasi Laboratorium Mikrobiologi”, ed.

Singkat. Moron Publishing Co. CO.2008. hal. 159-163.