Lisa Ta

29 februarie 2012.
Biologie 240
Microbiologie generală
MW 3:45-5:00

Raport de colorare Gram

Introducere

Scopul acestui experiment este de a determina forma și pata Gram a bacteriilor

sub microscop. Motivul colorării bacteriilor se datorează faptului că majoritatea
bacteriilor sunt transparente și nu pot fi văzute prin microscop. Pata Gram este un
tip de pată diferențială care permite unui (micro)biolog să identifice diferențele
dintre organisme și / sau diferențele din cadrul aceluiași organism. Bacteriile
colorate Gram necesită utilizarea unei tehnici aseptice pentru a asigura
sterilitatea experimentului. Scopul petei Gram este de a arăta dacă bacteriile sunt
Gram pozitive (de culoare violet), Gram negative (de culoare roz) sau ambele.

Materiale și metode

Tehnica aseptică a fost utilizată pe tot parcursul experimentului. O picătură de

apă deionizată a fost plasată pe o lamă de microscop și bacteriile din numărul
necunoscut 20 au fost, de asemenea, plasate pe lamelă. Apoi, diapozitivul a
trebuit să fie uscat la aer înainte de fixarea căldurii, astfel încât colorarea Gram
să poată începe. Primul pas în colorarea Gram a fost plasarea petei primare,
Crystal Violet sau Methylene Blue, pe lama unde bacteriile au fost fixate termic.
Vopseaua a trebuit să rămână pe tobogan timp de aproximativ un minut înainte
de clătire cu apă deionizată și uscată. Apoi, iodul Mordant (care este colorantul
Gram) a fost plasat pe diapozitiv pentru încă un minut și jumătate. După ce
minutul și jumătate a trecut, diapozitivul a fost clătit cu apă deionizată și șters.
Următorul pas a fost utilizarea etanolului 95% pentru a spăla coloranții din
bacteriile gram-negative. Pentru a distinge când să opriți utilizarea etanolului,
prima picătură de soluție necolorată care alunecă de pe diapozitiv a fost
indicatorul. Din nou, diapozitivul a fost clătit cu apă deionizată și șters. În cele din
urmă, colorantul de saffarină a fost plasat pe diapozitiv pentru a contracara
bacteriile Gramnegative timp de un minut, clătit cu apă deionizată și șters.

Metodele ar putea fi, de asemenea, referite la manualul de laborator paginile 159-

163.

Microscopul E1 a fost folosit pentru a vizualiza numărul necunoscut 20 pentru a

determina dacă bacteriile erau gram-pozitive sau gram-negative și cocci sau
bacili.

Rezultatele

Prin procesul experimentului, numărul necunoscut 20, care se afla pe un mediu

înclinat Agar nutritiv, care a fost determinat a fi în formă de cocci (sferă), părea să
fie gram-negativ.

Discuție

Ceea ce determină bacteriile gram-pozitive și gram-negative se datorează

diferenței în compoziția peretelui celular. Deoarece pereții celulari ai celulelor
gram-negative au un conținut mai mare de lipide și un strat mai subțire de
peptidoglican, alcoolul utilizat în etapa de decolorare a făcut ca celulele gram-
negative să fie incapabile să rețină complexul albastru-iod metilen. Pe de altă
parte, celulele gram-pozitive au un peptidoglican mai gros care captează
complexul albastru-iod metilen, făcându-l mai puțin vulnerabil la decolorare.

Tehnica colorației Gram a fost folosită pe numărul necunoscut 20. Necunoscutul

părea să fie Gram negativ și în formă de cocci. Deoarece aceasta este o
necunoscută, valoarea literaturii este necunoscută. Posibilitățile de diferență în
literatură și valoarea experimentală s-ar putea datora excesului de coloranți de
iod primar și mordant care au fost eliminați în întregime de etanolul 95% sau că
colorantul de iod mordant nu a fost lăsat suficient de mult timp.
Referință

Bauman, R.W. "Microbiologia cu boli prin sistemul corpului", ediția a 2-a. Pearson
Educație, Inc. S.F. 2009. p.107-109.

Leboffe, M.J., Pierce, B.E. "Teoria și aplicarea laboratorului de microbiologie", Ed.

scurtă Moron Publishing Co. CO. 2008. p. 159-163.