PRACTICA SOBRE RESPUESTA INMUNOLÓGICA ESPECÍFICA

INTRODUCCIÓN

COPIAS

OBJETIVO GENERAL
Al finalizar la práctica el estudiante tendrá las competencias para establecer un modelo
experimental de alergia. Asimismo, será capaz de obtener lavado bronchoalveolar (BAL) y
realizar la cuantificación diferencial del infiltrado celular en los pulmón de ratones sensibilizados
con alergenos (Ovalbúmina) y ratones controles.

MATERIALES Y METODOS
2 Ratones
PBS 1X
Ovoalbúmina
Jeringas de insulina con aguja calibre 25 -27 G. 1/z a 1pulgada, de bisel
Cloroformo
Agujas de 28g
Unicel
Vaso de precipitado de 1 lt
Guantes
Alcohol al 70%
Gradilla
Masking tape
Portaobjetos
Material de disección
Tubos Falcon de 15 mL

PROCEDIMIENTO

Este procedimiento se realizará en el ratón vivo mediante la punción intraperitoneal.

1. Preparar 300 µl de la ovalbúmina (50 µg) en la jeringa de insulina.

2. Sujetar al ratón con la mano izquierda, como se indica a continuación: tome el ratón de la piel
del cuello con los dedos índice y pulgar, de forma rápida, suave y firme. Luego sujete la cola
entre el dedo menique y la palma de la mano. Levante el animal.
3. Sujetando el ratón con una mano e inmovilizando la pata izquierda del ratón, se inclina al
ratón con una dirección hacia el cráneo para producir un desplazamiento de las vísceras con el
fin de no lesionarlas.

4. Se inserta la aguja en la piel en el cuadrante izquierdo inferior del abdómen, luego se lleva en
dirección del cráneo y se introduce en la cavidad peritoneal, levantando la aguja en contra de Ia
pared abdominal para evitar Ia punción del intestino; la jeringa con aguja debe estar paralela a Ia
columna vertebral.

CUIDADO Una rápida administración del fluído puede causar daños en el tejido y hemorragia
debido a la presión interna.

5. Al término de la inyección, soltar al ratón de forma adecuada y proseguir con el protocol de

inmunización que se muestra a continuación.

6. Al término del protocolo proseguir con la disección del animal:

• Sacrificar el ratón tomándolo de su cola y cuello y tirar hasta separar las vertebras. No
tirar sólo de la cola ya que ésta puede desprenderse del ratón.
• Colocar el ratón boca arriba, sobre la charola de disección y fijarlo a la misma utilizando
alfileres o agujas.
• Limpiar toda Ia superficie del animal con una torunda empapada en alcohol o
esparciendo el alcohol sobre el animal.
• Hacer una incisión longitudinal en el animal, desde el cuello hasta la cola, exponiendo el
corazón, tráquea y pulmones.
• Proseguir a hacer el lavado broncoalveolar, empleando PBS 1X.

AUTOEVALUACION

Que es la respuesta inmune adaptativa

Que es una respuesta alérgica
Que células inmunes están involucradas en la respuesta adaptativa, describa a detalle una de ellas.