La esterilizacin implica la destruccin de todos los microorganismos, incluyendo los esporos.

La desinfeccin supone la destruccin de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfeccin no mata necesariamente a los esporos. Ambos trminos no son sinnimos. ESTERILIZACION Los mtodos utilizados corrientemente en los laboratorios microbiolgicos son:

Calor al rojo (flameado). Calor seco (aire caliente). Vapor a presin (esterilizacin al autoclave). Vapor fluente (tyndallizacin). Filtracin.

La incineracin es tambin un mtodo de esterilizacin, pero se aplica fuera del laboratorio para la eliminacin final de los desechos producidos en l y se considera por separado. CALOR AL ROJO Los instrumentos tales como las asas y alambres de siembra y varillas secas se esterilizan calentndolas en la llama de un mechero bunsen hasta que se ponen al rojo. Los microincineradores se recomiendan para esterilizar asas de inoculacin contaminadas con material muy infeccioso (espulos tuberculosos) para evitar el riesgo de chisporrotear partculas contaminadas sobre las zonas de alrededor. CALOR SECO Se aplica en un horno calentado elctricamente que se controla mediante termostatos y que est provisto de un gran ventilador circulante que asegura la uniformidad de la temperatura en todas las partes del contenido. Los equipos modernos disponen de controles electrnicos que pueden llevar la temperatura al nivel requerido, mantenerla en ese punto durante un tiempo establecido previamente y desconectar seguidamente la corriente. En algunos modelos se incorpora una cerradura solenoide para impedir que la estufa sea abierta antes de que se complete el ciclo. Este dispositivo salvaguarda y protege al personal de quemaduras accidentales. El material que puede esterilizarse por este mtodo incluye placas de petri, matraces y pipetas de vidrio y objetos de metal. Pueden adquiriese de diversos proveedores cajas y cilindros metlicos que almacenan convenientemente el material de vidrio durante la esterilizacin y lo conservan estril hasta su utilizacin. CARGA El aire no es un buen conductor del calor, por lo que las estufas deben cargarse sin apretar el contenido, de forma que queden abundantes espacios para permitir que circule el aire caliente. TIEMPOS Y TEMPERATURAS DE CARGA Cuando se calculan los tiempos de funcionamiento para el equipo de esterilizacin por aire caliente, deben considerarse tres perodos:

El perodo de ascenso de la temperatura, que es el tiempo necesario para que toda la carga alcance la temperatura de esterilizacin; puede llevar alrededor de 1 hora. Los perodos de mantenimiento a las diferentes temperaturas de esterilizacin recomendadas por el Medical Rescarch Councill que son 160C durante 45 minutos, 170C durante 18 minutos, 180C durante 7 1/2 minutos y 190C durante 1 1/2 minutos. El perodo de enfriamiento, que se realiza gradualmente para prevenir la rotura del material de vidrio como consecuencia de un descenso demasiado rpido de la temperatura. Este perodo puede llevar 2 horas.

CONTROL DE LOS ESTERILIZADORES DE AIRE CALIENTE Los ensayos para los hornos de funcionamiento elctrico provistos de ventilador se describen en la Norma Britnica 34212. El equipo de esterilizacin por aire caliente, debe calibrarse con termopares cuando el aparato se instala y comprobarse con termopares posteriormente cuando se considere necesario. El control de rutina ordinario puede efectuarse sencillamente con la ayuda de tubos de Browne. Los tubos de Browne de Tipo 3 (punto verde) se utilizan para estufas provistas de ventilador. VAPOR A PRESION Se realiza Mediante la esterilizacin en autoclave. Las bacterias se matan ms fcilmente por el calor hmedo (vapor saturado) que por el calor seco. El vapor mata las bacterias por desnaturalizacin de sus protenas. Una condicin de seguridad convenida para la esterilizacin es utilizar vapor a 121C durante 15 minutos. Esta temperatura es adecuada para medios de cultivo, soluciones acuosas, tratamiento de cultivos y muestras desechadas, etc. El aire tiene una influencia importante en la eficacia de la esterilizacin al vapor de agua, porque su presencia modifica la relacin presin/temperatura. Por ejemplo: la temperatura del vapor saturado a 1,054 kg/cm es 121C, siempre que se haya extrado todo el aire de la vasija, Si slo se ha eliminado la mitad del aire, la temperatura de la mezcla aire-vapor que resulta es de solamente 112C a la misma presin. Adems, la existencia de bolsas de aire impedir la penetracin del vapor. Debe eliminarse primero todo el aire que rodea y penetra en la carga a antes de que pueda comenzar la esterilizacin por vapor. CARGA DEL AUTOCLAVE

Una buena esterilizacin por autoclave depende de la eliminacin de todo el aire de la cmara y de la carga, y los materiales que van a esterilizarse deben colocarse sin apretar. Los artculos limpios pueden ponerse en cestillos de alambre, pero el material contaminado (cultivos desechados) deben estar en recipientes de fondo

slido en una altura no mayor de 8 cm. Deben dejarse grandes espacios de aire alrededor de cada recipiente y ninguno debe estar cerrado. TIPOS DE AUTOCLAVE Unicamente deben usarse autoclaves diseados para trabajo de laboratorio y que puedan recibir carga mixta. Los autoclaves de carga porosa y los esterilizadores de lquidos embotellados son raramente satisfactorios para el trabajo de laboratorio. Existen dos variedades de autoclave de laboratorio:

El tipo de olla a presin. Los modelos de desplazamiento de la gravedad con descarga automtica de aire y vapor condensado.

OLLA A PRESION Se utilizan todava en muchas partes del mundo. El tipo ms comn es un aparato para agua hirviendo a presin. Tiene una cmara vertical de metal provista de una tapa metlica fuerte que se aprieta y cierra hermticamente mediante un aro de goma. Se disponen en la tapa una espita para la salida del aire y del vapor, un indicador de presin y una vlvula de seguridad. El agua del fondo del autoclave se calienta mediante mecheros de gas exteriores, un calentador elctrico de inmersin o un serpentn de vapor. INSTRUCCIONES PARA EL FUNCIONAMIENTO Debe haber agua suficiente dentro de la cmara. Se carga el autoclave y se aprieta la tapa manteniendo la espita de descarga abierta. Se ajusta seguidamente la vlvula de seguridad a la temperatura requerida y se conecta la fuente de calor. Cuando el agua hierva, fluir vapor por la espita de descarga, arrastrando con l el aire existente en la cmara. Se deja que salgan libremente el aire y el vapor hasta que se haya eliminado todo el aire. Puede comprobarse que se ha eliminado fijando un extremo de un trozo de tubo de goma a la espita de descarga e introduciendo el otro extremo en un cubo u otro recipiente similar que contenga agua. El vapor se condensa en el agua y las burbujas de aire salen a la superficie; cuando se ha eliminado todo el aire de la cmara, cesa el burbujeo en el cubo. Cuando se ha alcanzado esta fase, se cierra la espita de descarga de aire vapor y se quita el tubo de goma. La presin del vapor se eleva en la cmara hasta que la presin deseada, generalmente 1,054 kg/cm2, se alcanza y fluye vapor por la vlvula de seguridad. Cuando la carga ha alcanzado la temperatura requerida, se mantiene la presin durante 15 minutos. Al trmino del perodo de esterilizacin, se apaga el calentador y se deja que el autoclave se enfre. Se abre la espita de descarga de aire vapor muy lentamente una vez que el indicador de presin ha llegado a cero (presin atmosfrica). Si la espita se abre demasiado pronto, cuando el autoclave est todava bajo presin, cualquier lquido que haya en su interior (medios de cultivo lquidos, etc.), hervir de forma explosiva e incluso pueden explosionar las botellas que contengan lquidos. Se deja que el contenido se enfre. Segn la naturaleza de los materiales que se estn esterilizando, el perodo de enfriamiento necesario puede ser de varias horas para que los grandes frascos de agar se enfren hasta 80C y puedan cogerse con la mano sin riesgo. AUTOCLAVES CON ELIMINACION DEL AIRE POR DESPLAZAMIENTO DE LA GRAVEDAD Estos autoclaves estn por lo general dispuestos horizontalmente y son de forma rectangular, permitiendo que la cmara se cargue ms fcilmente. Puede utilizarse un sistema de bandejas y carretilla. El dibujo situado ms abajo presenta en forma esquemtica un tipo de autoclave de desplazamiento de gravedad, revestido de una camisa. Autoclaves similares pueden construirse sin camisa. La puerta debe tener un mecanismo de seguridad que impida pueda ser abierta mientras la cmara est bajo presin.

La camisa que rodea al autoclave est compuesta de una pared externa que encierra un espacio estrecho alrededor de la cmara, que se llena con vapor a presin para mantener la pared de la cmara templada. El vapor penetra en la camisa desde la fuente principal que se halla a alta presin, a travs de una vlvula que reduce la presin hasta el nivel de funcionamiento. La presin de funcionamiento se mide en un indicador de presin independiente fijado a la camisa. Esta camisa tiene un drenaje independiente para eliminar el aire y la condensacin. El vapor penetra en la cmara de la misma fuente que suministra el vapor a la camisa. Se introduce de forma tal que es desviado hacia arriba y llena la cmara desde la parte superior hacia la inferior, impulsando as al aire y al condensado a fluir en el fondo de la cmara por el desplazamiento de la gravedad. El desage est provisto de filtros para impedir que se obture por residuos. El desage lleva generalmente un termmetro para registrar la temperatura del vapor que fluye. La temperatura registrada por el termmetro del desage es generalmente inferior a la de la cmara. La diferencia debe determinarse mediante ensayos con termopares. Tambin cuenta con una vlvula sensible al vapor. La vlvula automtica de vapor o sensible al vapor est diseada para asegurar que nicamente se retiene dentro de la cmara vapor saturado y que el aire y el lquido condensado, se eliminan automticamente. Recibe el nombre de near-to-steam sensible al vapor porque se abre si la temperatura desciende unos 2C por debajo de la del vapor saturado y se cierra alrededor de los 2C por encima de la temperatura del vapor saturado. El sifn funciona por expansin y contraccin de un fuelle metlico que abre y cierra una vlvula. El desage descarga en un embudo, de tal forma que hay una separacin entre el desage y el embudo. Esta disposicin asegura que no retroceder agua contaminada desde la tubera a la cmara. INSTRUCCIONES PARA EL FUNCIONAMIENTO Si el autoclave est provisto de camisa, esta camisa debe llevarse a la temperatura de funcionamiento en primer lugar. Se carga la cmara, se cierra la puerta y se abre la vlvula de vapor, dejando que la corriente de vapor entre la parte superior de la cmara. El aire y el agua de condensacin fluyen a travs del desage del fondo. Cuando el termmetro del desage llegue a la temperatura requerida, debe dejarse un tiempo adicional para que la carga alcance dicha temperatura. Este tiempo debe determinarse inicialmente y peridicamente para cada autoclave, como ya se indicar ms adelante. Salvo que se haga esto, es poco probable que la carga se esterilice. Se prosigue el ciclo del autoclave para el tiempo de mantenimiento. Cuando se ha completado, se cierran las vlvulas de vapor y se deja que el autoclave se enfre hasta que el indicador de temperatura seala 80C. No debe abrirse el autoclave hasta este momento. Al principi s entreabrir o abrir muy ligeramente y se mantendr en esa posicin durante varios minutos para permitir que salga el vapor y se enfre posteriormente la carga. PRUEBAS DE EFICACIA DEL AUTOCLAVE Los esterilizadores de vapor deben comprobarse cuando se adquieren y despus a intervalos regulares, mediante termopares. La medida de las temperaturas se realiza mediante termopares, colocados en el interior del autoclave. Son alambres de cobre-constantan recubiertos de PTFE y pueden colocarse en la carga. Son suficientemente delgados para no impedir el cierre de la puerta. Los extremos posteriores se conectan aun registro digital o grfico (Comark). Generalmente son suficientes cuatro canales para comprobar los autoclaves de laboratorio. Deben comprobarse los autoclaves en las condiciones de peor carga. En la mayora de los laboratorios podra ser un recipiente lleno de frascos de 5 mi de tapn a rosca. Se colocar en el centro del autoclave y, si se dispone de espacio, se colocan otros recipientes cargados alrededor de l. Un termopar debe ponerse dentro de una botella en el centro de la carga. Otros termopares se distribuyen en otros puntos del autoclave. Se inicia el ciclo de esterilizacin y se mide el tiempo. Se anota el tiempo requerido para que la temperatura del desage de la cmara alcance 121C y despus el que se necesita para que el termopar de la carga registre dicha temperatura. En este momento comienza el tiempo de esterilizacin. Despus de que transcurran no menos de 15 minutos puede desconectarse el vapor, comenzando el tiempo de enfriamiento. Hay as cuatro perodos:

Calentamiento, hasta que el termmetro de desage de la cmara alcanza 121C. Penetracin del vapor en la carga, hasta que el centro de la carga alcance 121C. Esterilizacin, durante el que la carga se mantiene a 12 C, generalmente 15 minutos.

Tiempo de enfriamiento, hasta que la temperatura de la carga descienda a 80C, momento en que puede retirarse.

Como no es practicable utilizar un termopar para cada carga salvo que se ponga un sensor dentro de la cmara, es importante anotar estos tiempos para el funcionamiento normal. El perodo de exposicin despus de que la temperatura en el desage alcance 121C es por tanto de 2+3 minutos. Deben mortificarse de acuerdo con esto los autoclaves de ciclo automtico, que dependen de la temperatura en el desage. En algunos autoclaves la puerta no puede abrirse hasta que la temperatura en el desage descienda a 80C. Esto no implica que la temperatura en la carga haya descendido tambin al mismo nivel. En los grandes frascos hermticamente cerrados, puede estar todava por encima de 100C, momento. En el que su contenido estar a presin elevada. Un enfriamiento brusco puede determinar que el frasco explosione. Por tanto, el autoclave no debe abrirse hasta que la temperatura de la carga haya bajado a 80C o ms. Puede ser necesario un tiempo muy largo y en algunos autoclaves hay cerraduras que permiten que la puerta se abra tan slo fraccionalmente, para que la carga se enfre ms antes de que quede libre finalmente. En otros, se utilizan dispositivos de enfriamiento complicados con rfagas de aire y pulverizaciones de agua fra. TYNDALLIZACION Este proceso, designado as despus de que el cientfico Tyndall utilizara un vaporizador de Koch (o de Arnold), que es una caja metlica en el fondo de la cual el agua hierve mediante un mechero de gas, una resistencia elctrica o un serpentn de vapor. El material que va a tratarse permanece en una bandeja perforada, inmediatamente por encima del nivel del agua. La tapa es cnica, de manera que el agua de condensacin resbala por los laterales en vez de gotear sobre el contenido. Un pequeo orificio en la parte superior de la tapa permite que salgan el aire y el vapor. Se utiliza este mtodo para esterilizar medios de cultivo que puede alterarse por exposicin a temperaturas ms elevadas, por ejemplo medios que contienen carbohidratos fcilmente hidrolizables o gelatina. Estos medios se vaporizan durante 30-45 minutos al da durante tres das consecutivos. La primera vez se matan las bacterias vegetativas; cualquier esporo que sobreviva germinar en el medio nutritivo durante la noche, dando lugar a formas vegetativas que sern muertas durante la segunda y tercera vaporizaciones. FILTRACION Las bacterias pueden eliminarse de los lquidos hacindolos pasar a travs de filtros con poros muy pequeos que impiden el paso de las bacterias pero, en general, no de los mycoplasmas ni virus. Se emplea este mtodo parra esterilizar el suero para su uso en el laboratorio, las soluciones de antibiticos y los medios de cultivo especiales que se alteran por el calor. Se utiliza tambin para separar los productos solubles del crecimiento bacteriano (toxinas) de los medios de cultivo lquidos. TIPOS DE FILTROS Los siguientes tipos de filtros tienen un inters histrico principalmente:

Bujas de barro de loza tales como los tipos de Berkefeld y Mandier, que estn hechas de Kieseighur y el filtro de Chamberland de porcelana no vidriada. Filtros de asbesto (filtros Seitz). Filtros de vidrio incrustado, que se construyen con vidrio finamente pulverizado, fundido lo suficiente para hacer que los grnulos de vidrio se adhieran entre si.

Las desventajas de las bujas de barro de loza y de los Filtros de asbesto son las de que son muy absorbentes y tienen una velocidad de filtracin comparativamente baja. Los filtros de vidrio incrustado tienen la ventaja de su poca absorcin, pero la velocidad de filtracin es comparativamente lenta. FILTROS DE MEMBRANA

Estos filtros se fabrican de steres de celulosa (acetato de celulosa, nitrato de celulosa, colodin, etc.). Tienen muchas ventajas sobre los primeros tipos de filtros bacteriolgicos, ya que son mucho menos absorbentes y tienen una velocidad de filtracin elevada. Se fabrican con una gran variedad de tamao de poro y algunas membranas pueden emplearse para separar partculas de virus, mediante el uso de diferentes gradaciones de tamao de poro. Los filtros bacterianos tienen un tamao de poro menor de 0,75 umas. Las membranas pueden esterilizarse al autoclave. Para su empleo, la membrana se monta sobre una plataforma soporte, generalmente de acero inoxidable, que queda encerrada hermticamente entre los embudos superior e inferior. La filtracin se obtiene aplicando presin positiva al lado de entrada o negativa en la salida. Existen pequeas unidades filtrantes para filtrar pequeos volmenes de lquido (1-5 mi), come, los filtros Hemmings (Beaumaris, Colab). El lquido se impulsa a travs de un filtro pequeo mediante una jeringa. Filtros de membrana y portafiltros adecuados a distintos fines pueden obtenerse de BBL, Gelman, Millipore y Oxoid, publicando cada una de estas firmas tiles manuales o folletos a cerca de sus productos. DESINFECCION Pueden utilizarse una gran variedad de sustancias qumicas y todas ellas reciben el nombre comn de desinfectantes o biocidas. El primero de estos trminos es el que se va a usar en este libro. Algunos de ellos son reactivos ordinarios, otros son formulaciones especiales, registradas con nombres comerciales. Los microbilogos y gerentes de laboratorio se ven con frecuencia presionados por los vendedores para que adquieran sus productos, para los que hacen extravagantes propagandas. Generalmente hay diferencias marcadas entre la actividad de algunos desinfectantes cuando se ensayan en condiciones ptimas por la tcnica de Rideal-Walker u otras menos acreditadas y cuando se utilizan en la prctica. Los efectos del tiempo, temperatura, pH y la naturaleza qumica y fsica del artculo que se va a desinfectar y la materia orgnica presente, no son a menudo totalmente consideradas. 2.1 TIPOS DE DESINFECTANTES Y USOS EN EL LABORATORIO Existe un espectro aproximado de sensibilidad de los microorganismos a los desinfectantes. Los ms sensibles son las bacterias vegetativas, los hongos y los virus que contienen lpidos. Las mycobacterias y los virus que no contienen lpidos son menos sensibles y los esporos son por lo general resistente. En la eleccin de los desinfectantes, deben tenerse en cuenta algunas consideraciones a cerca de su toxicidad y de los efectos perjudiciales que pueden tener sobre la piel, ojos y vas respiratorias. Unicamente se tratan aqu aquellos desinfectantes que tienen aplicacin en el laboratorio. Los desinfectantes utilizados ms corrientemente en los trabajos de laboratorio son los fenoles lquidos y los hipocloritos. Los aldehdos tienen una aplicacin limitada y el alcohol y las mezclas de alcoholes son menos populares, aunque merecen mayor atencin. Los compuestos yodforos y de amonio cuaternario son ms populares en los EE.UU que en Gran Bretaa, mientras que los compuestos mercuriales son los menos utilizados. Las propiedades de estos desinfectantes se resumen en una tabla ms abajo. Otras sustancias tales como el xido de etileno y la propiolactona se usan comercialmente en la preparacin de material de equipo estril para hospitales y laboratorios, pero no se emplean en la descontaminacin de desechos de laboratorio y en otras actividades mencionadas antes. Se excluyen por ello de esta exposicin. 2.1.1 FENOLES LIQUIDOS Estos compuestos son eficaces contra las bacterias vegetativas (incluso Mycobacterias) y hongos. Son inactivas contra esporos y virus que no contienen lpidos. La mayora de los compuestos fenlicos son activos en presencia de cantidades considerables de protena, aunque se inactivan en parte por la goma, madera y plsticos. No son compatibles con los detergentes catinicos. Los usos en el laboratorio incluyen las vasijas de desechos y la desinfeccin de superficies. Los fenoles lquidos deben emplearse a la concentracin ms alta que recomiendan los fabricantes para situaciones sucias, es decir, cuando puedan encontrar grandes cantidades de materia orgnica. Generalmente esta concentracin es la de 2-5%. Las soluciones deben prepararse diariamente y los fenlicos diluidos no deben guardarse ms de 24 horas para utilizarlos en el laboratorio, aunque muchos fenoles lquidos diluidos pueden ser eficaces durante ms de siete das. Deben protegerse la piel y los ojos.

2.1.2 HIPOCLORITOS La actividad se debe al cloro, el que es muy eficaz contra las bacterias vegetativas (incluso mycobacterias) esporos y hongos. Los hipocloritos son inactivados considerablemente por las protenas y en cierto grado por los materiales naturales no proteicos y por los plsticos y no son compatibles con los detergentes cannicos. Se emplean en vasijas de desecho y desinfeccin de superficies, aunque es necesario tener cuidado porque corroen los metales. No deben emplearse en partes metlicas de centrfugas y otros aparatos que se debilitan con su uso. Con fines generales y para las vasijas para pipe-tas y de desechos se recomienda una concentracin de cloro de 2.500 ppm en lugar de 1.000 ppms, aunque para sangre derramada y vasijas de desechos que pueden contener gran cantidad de protena se recomienda una concentracin de 10.000 ppms. Los hipocloritos que se venden para uso industrial y aplicaciones de laboratorio en Gran Bretaa contienen 100.000 ppm de cloro disponible y deben diluirse para su empleo al 1:40 1:10. Algunos hipocloritos domsticos (los que se usan en la limpieza de biberones) contienen 10.000 ppm y deben diluirse para su empleo al 1:4. Las lejas de uso domstico de Gran Bretaa y EE.UU. contienen 50.000 ppm de cloro disponible y son apropiadas las diluciones de 1:20 y 1:5. Los productos preparados slidos, incluyendo los que contienen hipocloritos, usados en la desinfeccin domstica y los isocianuros clorados, utilizados en piscinas, pueden tener aplicaciones en el laboratorio. Los hipocloritos se deterioran rpidamente con el uso, aunque los pro-ductos tal como se suministran son estables. Las soluciones diluidas deben sustituirse despus de 24 horas. La sustancia colorante que se aade a algunos hipocloritos comerciales trata de identificarlos: no es un indicador de la actividad. Los hipocloritos pueden producir irritacin de la piel, ojos y pulmones. 2.1.3 ALDHEIDOS El formaldehdo (gas) y el glutaraldehido (lquido) son buenos desinfectantes. Son activos frente a bacterias vegetativas (incluso mycobacterias), esporos y hongos. Son activas en presencia de protena y no se inactivan mucho por los materiales naturales o artificiales ni por los detergentes. El formaldehdo no es muy activo a temperaturas inferiores a 20C y requiere una humedad relativa de al menos 70%. No se suministra como gas, sino como un polmero slido, para formar aldehdo y como un lquido, formalina o formol comercial, que contiene 37-40 % de formaldehdo. Ambas formas se calientan para liberar el gas, que se utiliza para desinfectar espacios cerrados como cabinas de seguridad y habitaciones. La formalina diluda al 1:10 para dar una solucin que contiene 4 % de formaldehido, se emplea en la desinfeccin de superficies y en algunos casos, de cultivos. Se hallan actualmente en el comercio compuestos slidos que liberan formaldehdo y dichos productos pueden tener aplicaciones en el laboratorio, aunque todava no se han valorado para este fin. El formaldehdo se usa principalmente para la descontaminacin de cabinas de seguridad y en habitaciones. El glutaraldehdo necesita generalmente un activador, tal como el bicarbonato de sodio, que se suministra con el lquido a granel. La mayora de los activadores contienen un colorante, para que el usuario pueda tener seguridad de que el desinfectante ha sido activado. La eficacia y la estabilidad tras la activacin batan con el producto y debe consultarse la literatura suministrada por los fabricantes. Kelsey et al, hallaron que la actividad esporocida de una marca disminua a la mitad en siete das y Coates sugiri que si se utilizaba glutaraldehdo activado de esa edad, debera doblarse el tiempo de exposicin. Pueden emplearse en vasijas para desechos (aunque es caro) y son particularmente tiles para la desinfeccin de las superficies metlicas, puesto que no son corrosivos. Los aldelhdos son txicos. El formaldehdo es particularmente molesto porque afecta a los ojos y produce dificultades respiratorias. Se requieren precauciones especiales. El glutaldehdo es menos nocivo, pero debe evitarse el contacto con la piel y los ojos. 2.1.4 ALCOHOL Y MEZCLAS DE ALCOHOLES El etanol y el propanol, a concentraciones de alrededor de 70-80 % en agua, son eficaces, aunque lentamente, contra las bacterias vegetativas. No son activos frente a esporos y hongos. No se inactivan de manera especial por la protena y otros materiales ni por los detergentes.

La efectividad se favorece por la adicin de formaldehdo, por ejemplo una mezcla de formalina al 10 % en alcohol de 70 %2 o hipoclorito en solucin que tenga 2.000 ppm de cloro disponible. Los alcoholes y las mezclas de alcoholes son tiles para desinfectar superficies y exceptuando las mezclas de alcohol-hipoclorito, para equilibrar los portatubos de las centrfugas. Son relativamente inofensivas para la piel, pero pueden producir irritacin de los ojos. 2.1.5 COMPUESTOS DE AMONIO CUATERNARIO Son detergentes cati6nicos eficaces contra bacterias vegetativas y algunos hongos, aunque no contra las mycobacterias o esporos. Son inactivos por la protena y por una diversidad de materiales naturales y plsticos, por los detergentes no inicos y por el jabn. Su utilizacin en el laboratorio es por tanto limitada, aunque tienen la clara ventaja de ser estables y de no corroer los metales. Se emplean generalmente a diluciones de 1-2% para la limpieza de superficie, pero son muy comunes en los laboratorios de higiene de los alimentos como consecuencia de su naturaleza detergente. Los compuestos de amonio cuaternario no son txicos y son inofensivos para la piel y los ojos. 2.1.6 IODOFOROS Como 105 compuestos de cloro, estos yoduros son efectivos contra bacterias vegetativas (incluidas mycobacterias), esporos, hongos y ambos tipos de virus conteniendo o no lpidos. Son inactivos rpidamente por la protena y, en cierto grado, por sustancias naturales y plsticas y no son compatibles con los detergentes aninicos. Para su empleo en vasijas de desecho y para desinfeccin de superficies deben usarse diludos para obtener 75-150 ppm de iodo, pero para la desinfeccin de las manos o como esporocida diluidos en alcohol de 50% para dar una concentracin de 1600 ppm. En los preparados comerciales a la venta, los yodforos suelen contener un detergente y llevar un indicador: son activos en tanto aparecen de color pardo o amarillo. Tien la piel y las superficies, pero el colorante puede eliminarse con solucin de tiosulfato sdico. Los yodforos son relativamente inofensivos para la piel, pero puede apreciarse cierta irritacin en los ojos. 2.1.7 COMPUESTOS MERCURIALES La actividad contra las bacterias vegetativas es mala y son inefectivos contra los esporos. Tienen cierta accin sobre los virus a concentraciones de 1:500 a 1:1.000 y un uso limitado, como soluciones saturadas en el manejo inocuo de preparaciones microscpicas de mycobacterias. Su limitada utilidad y su naturaleza muy venenosa convierten a los mercuriales en inadecuados para su uso general en el laboratorio. PRECAUCIONES CON EL USO DE DESINFECTANTES Como se indicaba anteriormente, los desinfectantes tienen efectos indeseables sobre la piel, ojos y vas respiratorias. Deben utilizar guantes de un solo uso y lentes protectores, gafas o un visor quienes estn manejando desinfectantes fuertes, por ejemplo, cuando preparan diluciones para su empleo. DILUCION CORRECTA Un recipiente de desecho de 1 litro debe contener 750 mi de desinfectante diluido, dejando espacio para que ascienda el nivel sin que se derrame ni que gotee cuando se traslade. Debe hacerse una seal en cada vasija en la capacidad de 750 mi, preferiblemente con pintura (el lpiz graso y los rotuladores son menos permanentes). El volumen correcto de desinfectante nuevo que debe aadirse al agua para hacer este volumen, adecuado para situaciones sacias, se calcular teniendo en cuenta las recomendaciones del fabricante. Este volumen se marcar seguidamente en una pequea probeta graduada, por ejemplo de hierro esmaltado o s Fija un dispensador de plstico que la vierta desde un recipiente a granel. Se echa el desinfectante en la vasija y se aade agua hasta la seal de 750 ml.

 USO RAZONABLE Los supervisores de laboratorio deben asegurarse de que no se ponen en las vasijas de desecho cosas inapropiadas. Hay un lmite razonable entre la cantidad de papel o de tohallitas de papel que dichas vasijas pueden contener y los artculos que flotan no son adecuados para las vasijas de desecho, a menos que stas puedan cerrarse e invertirse de vez en cuando para mojar todo el contenido. Nunca deben aadirse grandes volmenes de lquido a los desinfectantes diluidos. Lquidos tales como los sobrenadantes de la centrifugacin, deben verterse en vasijas de desecho, que contienen el volumen usual de desinfectante puro, a travs de un embudo adaptado en la parte superior de la boca. Esta disposicin impide se derramen gotas y se formen aerosoles. Al final del da puede aadirse agua hasta la seal de 750 rnl y dejar la mezcla durante toda la noche. No debe agregarse a los desinfectantes artculos que contengan grandes cantidades de protena, sino que deben desinfectarse en el autoclave o incinerarse. VACIADO REGULAR Ningn material debe dejarse en el desinfectante de la vasija de desecho durante ms de 24 horas, ya que en caso contrario se desarrollarn las bacterias supervivientes. Por tanto, todas las vasijas deben vaciarse una vez al da, aunque es una cuestin particular s se Yacan al final del da o a la maana siguiente. Deben vaciarse incluso las vasijas que hayan recibido poco o ningn material al llegar ese momento. VASIJAS DE DESECHO SECAS En lugar de vasijas conteniendo desinfectante, en algunos laboratorios se disponen recipientes rgidos de cartn o recipientes metlicos corno los utilizados en los hospitales para desechar las jeringas y agujas de un solo uso, por ejemplo, Cin Bins (Labco). Estos recipientes pueden recibir pipetas pasteur, portaobjetos, etc. pueden ser esterilizados al autoclave o incinerados. PIPETEROS Las vasijas para las pipetas recuperables deben estar hechas de polipropieno o de goma. Son de mayor seguridad que el vidrio. Las vasijas deben ser suficientemente altas para permitir que las pipetas se sumerjan totalmente sin que se derrame el desinfectante. Debe aadirse al desinfectante un detergente compatible para facilitar la limpieza de las pipetas en la fase final. Las vasijas altas no son convenientes para personas de baja estatura, que tienden a porteras en el suelo. Esto es peligroso. Las vasijas de goma de base rectangular (Camlab) pueden inclinarse dentro de una caja o de un bastidor, lo que es mucho ms conveniente y de mayor seguridad. BOLSAS DE PLASTICO PARA MATERIALES COMBUSTIBLES Estas bolsas se hallan en todos los hospitales y tienen colores codificados. Los laboratorios clnicos deben seguir el cdigo local. En otro caso, deben introducir uno, por ejemplo, las bolsas rojas pueden designarse para este fin y no para otros. METODOS DE TRATAMIENTO Y ELIMINACIN Existen tres mtodos prcticos para el tratamiento de los materiales de laboratorio desechados y de los desechos contaminados:

La esterilizacin por autoclave. La incineracin. La desinfeccin qumica.

La eleccin se realiza atendiendo a la naturaleza de los materiales; si es desechable o recuperable y, en este ltimo caso, si se ve afectado por el calor. Con ciertas excepciones, ninguno de estos mtodos excluye a los dems. Puede verse en la ms abajo que la incineracin sola nicamente puede aconsejarse si el incinerador se halla bajo el control del personal del laboratorio. La desinfeccin sola es aconsejable nicamente para las pipetas graduadas recuperables. MATERIAL INFECTADO DESECHABLES RECUPERABLES DESINFECTAR AUTOCLAVE DESINFECTAR AUTOCLAVE INCINERAR LAVAR BASURERO Prctica normal. Incinerador bajo control del laboratorio. ORGANIZACION DEL TRATAMIENTO Los diseos de una cocina para tratar los materiales de laboratorio desechados deben incluir autoclaves, un trituradora, una unidad de eliminacin de basura conectada por tubera de plomo al alcantarillado pblico, fregaderos hondos, mquinas para lavar material de vidrio, estufas de desecacin, estufas de esterilizacin y grandes bancadas. Estas habitaciones deben tener disposicin adecuada para evitar cualquier posible mezcla de materiales contaminados y descontaminados. Los arquitectos deben trabajar por tanto, sobre un diagrama de flujo o un plano de vas crticas, proporcionado por un microbilogo profesional. Un plano de este tipo se presenta ms abajo. El material contaminado llega en sus recipientes de color codificado a una bancada o una zona designada y utilizada nicamente para este fin. Se separan seguidamente de acuerdo con su color y se envan al incinerador o se cargan en el autoclave. No hay ningn cruce en esta zona. Tras la esterilizacin en el autoclave, los contenedores se llevan a la bancada de separacin, en donde el contenido se separa en:

Desechos para incineracin, que se ponen en bolsas de color codificado. Desechos para la basura, que se ponen asimismo en bolsas de color codificado. Desechos adecuados para la esclusa o unidad de eliminacin de desperdicios. Material recuperable que pasa a la seccin o habitacin siguiente para su lavado y esterilizacin.

Esta seccin o habitacin debe tener un autoclave independiente. No deben esterilizarse en el mismo autoclave el material de desecho contaminado y el que va a volver a utilizarse o recuperarse. Solo si el incinerador est bajo control del laboratorio.