- El Nucleolo: partes y funciones - ARN: caracteristicas, tipos y funciones -ARNm: partes caracteristicas y funciones. - El cédigo Genético - Transcripcién y procesamiento de los ARN - Regulacion de la expresién génica - Traduccién del ARNm - Sistema Ubiquitin proteasoma - Los destinos proteicos: REG, nticleo, mitocondrias y peroxisomas VGEMA 2020EL NUCLEOLO Es un sector del nicleo carente de membrana, que puede ser Unico o multiple, visible o invisible, y que esta ‘en relaciénediracta al estado metabélico y funcional de Ja célula, Ya veremos que cuando una célula sintetiza proteinas, el nucieolo es evidente. Ultraestructuralmente consta de cuatro grandes ‘componentes: > Centro Fibrilar: corresponde al ADN que forma Ja cromatina de las constricciones secundarias amass FO de los eromosomas 13, 14,15, 24 y 22. 0 $28, {0 moléculas de ADN (record que cada cro- \ ren mosoma tiene dos juegos en los nilleos de las facia clas somatices. nee » Componente Fibrilar Denso: O pars Fibrosa. Es %|; donde se sinteliza ol ARN 46 S (Yanscripio pr- sonst OE |e los primeros pasos de su procesamiento. Con- tiene a los genes que codifican al ARN 45 S, moléculas de ARNr, factores de transcripcién, ARN Polimerasa |. | > Componente granular: © pars Granulosa, De ubicacién perférica, Aqui se encuentran fas subunidades ribo- ‘somales en cistintos estadios de su procesamiento, Hay también ARN 28 $ procesandose. > Matriz Amorfa nucleolar Es conveniente saber que los genes que ‘ranscriben al ARN 45S se encuentran en el ADN de Jas constricciones secundarias de los .cromosomas 13, 44, 15, 21 y 22. Cada uno de estos grupos de genes ‘se llama Region Organizadora Nucleolar (u Organizador FUNCIONES DEL NUCLEOLO » Sintesis de los ARNt 18 S, 28 Sy 5.8 S. Los produce como Transcripto Primario ARN 45S » Procesamiento de los ARNr 18S, 28Sy 58S. > Ensamblaje de las subunidades ribosomales (60S y 40S), al unirlos correspondientes ARNr con las proteinas ribosomales de cada una de las subunidades.EL ARN Se trata de moléculas monocatenarias compuestas por secuencias de ribonucledtidos unidos por uniones fosfodiéster, que ligan al carbono 3” de la pentosa (ribosa) de un nucleétido con el carbono 5° de la ribosa del nucleétido siguiente, Recordar quela ribosa se diferencia de la desoxiribosa solamente en que esta titima tiene un &tomo menos de oxigeno. La estructura primaria del ARN es similar ala del ADN, excepto por laribosa en lugar de desoxiribosa y uracilo en lugar de Timina. Finalmente, recalcamos que el ARN esté formado por tan solo una cadena, es decir, es un polimero monocatenario de nuclestidos. Finalmente, los ARN, por copias complementarias de la hebra positiva de ADN, se len siempre de 5” aa Todos los ARN son Acidos nucleicos que tienen caracteristicas comunes: » Son polimeros de ribonucleétidos: por lo que tiene ribosa, y las bases nitrogenadas Adenina, Uracilo, Citosina y Guanina ° Sooo » Su sentido biologico es de 6'— 3 (se leen de 62 3) » Son copia complementary antiparalela de la hebra positiva de ADN eas, TIPOS DE ARN Existen distintos tipos de ARN, y todos ellos participan de Y siguna manera en la eiresior'genstica,o sea on la siniasisde == | unaypiaieina. Ejemplos de ARN son: > ARIE: El ARN de transferenia tiene como funcién levar loSaminedeidesshacia el complejo de sintesis. a » ARNr: Los ARN ripasamiales forman a los ribosomas. mes > ARNpn: Los ARN Pequentos-Nucteares (0 ARNsn), partici- < pan en el spicingsyssplicingaltemativo as > ARNpc: Los ARN PequeftossGitoplasmaticns (0 ARNsc) ' Ee Participan en el reeoneeinfento"de"proteines que van al 5 REG, y loverretcomplejodesintesis haciate membrana del REG. se > ARNmi: Los Mista participan er SRBISUEOE ISSR. en ay saeern » ARN Los ARN Paqueftosidesinterteroncia participan en el Bloque de la expresién génica, > ARNinc: Los ARN Larges'Ner@edifeantes participan como reguladores importantes de la expresion génica. Un ‘ejemplo importante es elitthiaiST, encargado de la inaetivaeién de una regién especifica de un cromosoma Xen la mujer, por un proceso llamadetuyantzaeitén. EL ARN MENSAJERO E| ARN mensajero © ARNm e5 un tipo de ARN que tiene en su interior Ia informaciénsdesdiasseouencia rimariadeaminodeidosdestinarproteina. Ya veremos cémo es que se lee. A continuacién, listaremos y describimos las caractertsticas morfolégicas iniciales del ARNm, y 6 medida que vayamos describiendo a la molécula, le iremos ‘agregando caracteristicas, hasta tener el total de los componentes de esta molécula. Dichas caracteristicas son: » Es una molécula monocatenaria, » Es un polimero de ribonuclestidos que se lee de 5' a 3'(es decir que el sentido biolégico es 5'- 3). » En 5’ presenta el capuchén de 7-metil quanosina, molécula agregada que impidedadegradaciondebARNm, y Su reconocamiento:pories:nbosomes, » En presenta laxestepatmpuna Secuencia depoliadeniacion (alrededor de 200 a 250 nucledtidos devdenine, que le da estabilidad) » En su interior contiene Ia informacién de la secuencia primaria de aminodcidos de una proteina,Cola Poli A ¥ APRENDIENDO A LEER AL ARN MENSAJERO EIARNm, tal cual dijimos previamente, trae consigo la informacion para la secuencia primaria de aminogcidos '@e.una sola proteina, y por eso se dice que es Monocistrénico. REC Su forma de leerlo es muy particular, pues esta escrito en cédigo: el famoso Cédigo Genético. El cédigo “genético es el conjunto de normas por las que la informacién codificada en el material genético (secuencias de ADN 0 ARN) se traduce en proteinas (secuencias de aminodcidos) en las células vivas. Es decir, es ol reglamento necesario para leer un ARNm, y de esta manera saber la secuencia primaria de la proteina que se quiere sintetizar. REGLAMENTO DEL CODIGO GENETICO » EIARNm se lee de a tres nucleétidos consecutivos. » Estos 3 nuclestidos consecutivos se llaman ‘SOBON? El ‘ARNm se lee de a un codén por vez. » Existen 64 codones, que surgen de la combinacién de los 4 ribonucledtidos (de adenina, de timina, de uracilo y de citosina) en grupos de a tres, Por eso la formula 43 = 64 (450n los nuclestidos que existen y 8 porque se agrupan de a3), » Cada codén tiene la informacion para un aminodicido espe- ciffca, por eso no es ambiguo, » No todos fos codones codifican para un aminodicid. > Ha © de termina ‘Gn por dos motivos: nexeodificanepara ningin aminoa- cido ymarcamseisfinal de la sintesis proteica. + Los 3 codones mudos son UA@nkiGAyntiv » Existen 165 pero solamente 20 aminodcidos para repartirse. Que haya mas codones que aminodcidos, hace que el cédigo genético sea Degenerado. » Esto significa que varios codones deben compartir al mismo aminodcido, o la que es lo mismo, codones distin- tos codifican al mismo aminoacido, Esto hace que el codigo genético sea Redundant, » Los codones distintos que codifican al mismo aminodcido se llaman cadenes:sinénimo. » Solamente 2:codones:nastienenssinénimos. Son ol AUGrque-codiiicayparametionina y UGG.que codifica para cl aminodcido triptéfano. Esto significa que estos dos aminoacidos solamente pueden ser cadificados por estos dos codones. ‘AliG asimismo se llama codérrderinietaetén, porque el primer AUG que aparece arrancando de 5' del ARNm area el inicio de la sintesis proteica. » Si aparece en el medio otro codén AUG solamente codifica @ metionina de la secuencia, No marca el inicio de tuna nueva sintesis. Esto es porque el ARNm eucariota es Monocistrénico, es decir que tiene la informacién para una proteina solamente. > Una vez encontrado el primer AUG desde 5', se lee de a un codén por vez, sin solapamientos, comas ri silen- cios, hasta llegar al primer codin mudo que aparezea en la secuencia, » El cédigo genético es universal para todas las células eucarioias. No importa la especie, el reglamento y los codones es el mismo para todos, excepto para el ADN mitocondral. > Siempre se lee de a 1 codén por vez, sin superposiciones 0 solapamientos (es decir que un codén no comparte Tucleétidos con el codén anterior y/o siguiente), sin comas (la coma es un nuclestido que no se lee) y sin silencios (son mas de un nuclestido contiguo que no se lee).ENTENDIENDO EL REGLAMENTO Para que podamos entender al cidigo genético, debemos tener en claro una serie de datos, porque son ellos 8 imposible defini al digo: » Como todo eéaligo, se usan palabras, y toda palabra esté formada por letras. » Enel cécigo genético las letras que se pueden usar son A, U, C y G. Solamente cuatro letras. » Las palabras del cédigo genético tienen solamente 3 letras (los codones), ;Cuantas palabras de 3 letras se pueden formar? 64. O sea que deberian existr 64 palabras posibles en el cédigo genético. » Cada pelabra tiene un significado: Un aminodcido. » Tres palabras espectficas (8 codones especificos) no significan nada; son los cadones mudas y sin sentido UAG, UAAy UAC. > Quedan 61 palabras posibles (0 sea, 61 combinaciones posites de los nucledtides, 0 lo que es lo mismo decir 61 codones) > Hay 20 aminoacids y 61 palabras (0 61 codones), por lo que aparecen los sinénimos: palabras que se escri- bben distinto pero que significan fo mismo (codones que codifican al mismo aminodcldo). » Hay dos aminodcidos que se definen con una sola palabra (0 con un solo codén), que son la metionina que se esonbe AUG y el tiptifano que se escribe UGG. Estas palabras no tienen sinénimos (0 lo que es lo mismo, estos codones no tienen sinénimos). » Finalmente, la oracién comienza siempre con la palabra AUG, y se lee palabra por palabra hasta legar a una palabra sin sentido 0 de terminacién, ‘Supongamos la secuencia siguiente de un ARN AAAUAUCGGAAUGGGGUCUAUAAAUCGGUGGUCGAUGUUAUAGUGGGAGAAAAAAAAAAAAAAAA ~ 3) A simple vista es una secuencia de letras en mayliscula. Sin embargo, si analizamos un poco en detalle y entendemos el reglamento del cédigo genético es muy simple. De hecho, lo que acabamos de escnbir es la Secuencia de nucle6tidos de un ARNm. El ¢édigo genética nos dice que primero debemos encontrar al primer AUG ue aparezca desde 8). Acd es donde esté la trampa, porque lo habitual es que se busque de a tres nudleétides y ‘después los siguientes 3. jjERROR}! Para encontrar el primer AUG, buscamos de a 3 nucleétidos (0 de a un codén) ero corriéndonos 1 nucledtido solamente. \Veamos. Los primeros 3 nucleétidos son AAA. El segundo, tercero y cuarto AAU. El tercero, cuarto y quinto AUA. Si seguimos avanzando asi, el décimo primero, décimo segundo y décima tercero son AUG. Y en este momento es cuando empezamos a leer de a 1 codon por vez. Una vez encontrado el Codén de Iniciacién AUG, avanzamos (ahora si) de a tres nucleétidos por vez, 0 sea de un cod6n por vez. ¥ leemas: AUG, GGG, UCU, AUA, AAU, CGG, UGG, UCG, AUG, UA, UAG. Y legamos al primer cod6n STOP, por lo que fermina el mensaje. Si buscamos en una tabla de codones y aminodcidos, veremos que la secuencia inicial de esta proteina va a ser: Metionina - Glicina - Serina - Isoleucina - Asparagina - Arginina - ‘Triptofano - Fenilalanina - Metionina - Leucina - (STOP), Como ves, hay varios datos que podemos sacar de esta secuencia de aminodeidos que hace a esta proteina. \Veamos uno por uno: » Todas las proteinas comienzan con Metionina, porque es lo que couifica AUG. Llamativamente, después se va ‘@ remover como parte de mecanismos posttraduccionales de madificacién proteica, por lo que es raro que al final una proteina empiece con metionina » AUG en el medio de la Secuencia no es codén de iniciacién de otra proteina, sino que es solo Metionina en la ‘secuencia. Esto se da porque el ARNm eucarionte es monocistronico. } UCU y UGG son codones sinénimo, porque cosifican para el mismo aminodcido en la secuencia » EI STOP no codifica para ningin aminodcido.[ANDO LA INFORMACION DEL ARNm ‘Como vimos hasta ahora, un ARNm es un tipo de écido nucleico con una riqueza descriptiva muy importante. vvimos varias caracteristicas, y le vamos a agregar 3 mas, "En la molécula de ARN, el segmento de nucleétidos comprencido entre el codén de iniciacién y el primer 'miudo que aparece se llama Marco Abierto de Lectura u ORF (Open Reading Frame). El segmento de ARN entre el extremo 5” de la moléculay el codén de iniciacion se llama UTR 5’, mientras que el segmento ue hay desde el codén mudo hasta el comienzo de la cola poliA en 2'se llama UTR 3°. UTR significa ied Region (region sin traducir), porque es la parte del ARNm que no tiene informacion para la Secuencia dcidos. Estas regiones UTR son muy importantes para la requlacién de la traduccién, y es donde suelen recuentemente los Micro ARN, y los ARNsi (pequetios de interferencia) Completando la informacién del ARNm, vamos a repetirlas caracteristicas enunciadas, y a ese istado de ‘catactersticas le agregamos 3 items mas: "> Esun polimero lineal de ribonuclestidos no plegaco, » Enel extremo 5’ tiene el capuchon de 7-meill uanosing; > Enel extremo 3" tiene la cola poli » En su interior tiene un mensaje escrito en forma de combinaciones de nucleétidos lamados codones; » El mensaje comienza en el codén de iniciacion (primer AUG desde 5'),y termina en el primer codén mudo que aparezca (UA, UAG 0 UGA). » El mensaje que leva en su interior, que va desde el codén de iniclaci6n hasta el primer codén mudo que apa- rece, se llama Marco Abierto de Lectura u ORF (Open Reading Frame); » Enire el Cap 5'y el codén de iniciacién , los nucledtidos se llama UTR 5° » Entre el codén de finalzacién y la cola poli A se encuentra el UTR 3’. Ambos UTRS tienen funciones de regu- tacion de la sintesis, EL CAPUCHON Y LA COLA POLIA Tanto el capuchén de 7-metil quanosina como la cola de poliadenilacién (poli A) son agregados propios de la maduracion del ARNm. El Capuchén de 7 metil quanosina se lo agrega para darle GSt@OWGEQEPARNIn, es decir, evitar que se IEQUE, porque el ARNm no debe estar plegado, es decir, mosdebesdobiafse porque pueden unirse secuencias ‘omplementarios de la misma molécula, haciendo que no se pueda leer. Otra funcion es la de sefialare el 5’a los bosomas, para que queden alineados durante la traduccién. Por su lado, la cola poli A son miitiples nucledtidos de Adenina agregados al final de 3’. También se tata de tuna parte de la maduracién de los ARNm, y su finalidad es darfe estabilidad a la molécule, regular la traduccion, y son sefialadores de la Vida media de un ARNm: cuanto mas large la cola poli A, mayor vida media tiene el ARNm. ARN DE TRANSFERENCIA Morfolégicamente el ARNt es une molécula de ARN monocatenaria (como todos los ARN) pero plegada. Este plegamiento toma la clasica forma de fhoja de trébol de S hojas. Ya veremos mas adelante que los ARNt tienen como funcién llevar los aminoacidos hacia los ribosomas que estan leyendo al ARNm y Permitir una sintesis proteica, Como vemos en el esquema, presenta lun extremo 5', un extremo 3', 4 asas 0 loops, y 3 ‘segmentos complementarios, A continuacién listamos las caracteristicas sobresalientes de un ARN tipo; > Los segmentos complementarios, como su nom- bre lo dice, son complementarios y antiparale-los entre si. Su funcién es permitir que el ARNt pueda plegarse con la caracteristica forma de hoje de trébol. » En terminan todos los ARNt con la secuencia CCA (citosina - citosina - adenina). A este extremo se lo llama extremo aceptor, pues ahi es donde se une el aminodcido correspondiente segun el anticodén que posea. > Las asas se llaman Asa D, Asa T, Asa Variable y Asa Anticodén. » En El Asa T hay nucledtidos con bases nitrogenadas raras (0 distintas a las 5 que conocemos), Ellas son la Ribotimidina y Seudouridina, y son las bases nitrogenadas conocidas, pero modificadas. » EI Asa anticodén tiene un triplete de nucleétides bien definido, llamado justamente Anticodén, Este anticodén 8s complementario a un codén del ARNm y se va a unir segin complementariedad de bases. RAZONANDO UN POCO Acabamos de decir que los ARNt tienen un anticodén (triplete de nuclestidos) bien definido que se va a unir a un cadén del ARNm. También dijimos que la funcién del ARNtes llevar los aminodcidos a los ribosomas que estén leyendo al ARNm. Pues bien, para entender como es que se da, supongamos el codén AUG, que habiamos dicho ‘ue coditica para metionina. Pues bien, a este codén se le unira el ARNt que contenga el anticodén UAC (que es complementario @ AUG), y este ARNt tendré unido el aminodcido metionina en 3°. LA PARTE COMPLICADA DEL ASUNTO. Si entendimos todo lo que explicamos previamente, deberiamos asumir lo siguiente: Si hay 61 codones con ‘sentido (es decir que codifican para un aminoacido), deberian haber 61 tipos de ARNI, cada uno con el anticodén correspondiente a cada codén existente. Lamento decirles que no es asi. Existen solamente 31 tipos de ARNt distintos, lo que nos lleva a un doble dilema: hay mas ARN que ‘aminoacidos (31 ARNt distintos y 20 aminodcidos en total), pero existen menos ARNt que codones con sentido. La primera parte se soluciona facilmente: existen ARNT sinénimos, que comparten aminoacids. La segunda parte (diferencia de codones y ARNt) es més complicado. Para poder corregir esta diferencia, cexisten lo que se llaman “uniones no complementarias de la 3ra base’ o "balanceo de la Ser posicidn’. Esto significa ue ciertos anticodones, en su primera base, pueden unirse de forma no complementaria con la tercera base del ‘codén. ARNr Y LOS RIBOSOMAS Los ribosomas son eiganoides formados por dos subunidades, lamadas subunidad Menor y Subunided Mayor. Molecularmente son fibonucleoprote!nas, es decir ARN + proteinas, y las ARN que forman a los ribosomas (EASING) = (UREBIEE son los ARN. Ahora bien, existen 4 fipos distintos de ARNr, llamados 288, 185, 58S y 5S, y éstos se ubican espectticamente formanda @ las subunidades. De esta manera » La Subunidad Menor (405) esté formada por el ARNr 18S y 33 proteinas distinas lamadas $1, S2, $3... asi hasta $33(S por Smal). Se llama subuni- dad 408, porque es el eoefciente de centiftugado de esta subunidad. » La subunidad Mayor (60S) esté formada por ARNr 28S, 5.88 y 5S + 46 proteinas distntas lamadas Lt, L2, 13... y asi hasta L46 (L por Large). Se la lama taibién 60S, porque es el coetciente decen- Sto ge unién tritugado de esta subunidac.La subunidad menor, a su vez, presenta 3 sitios 0 regiones, llamados Sitio E, sitio P y sitio A (EPA), y una ‘Gara de union al ARN. En los sitios se iran ubicando los ARNt a medida que se va sintetizando la proteina, No asesperar, es mas simple de lo que se lee, y es absolutamente l6gico. La subunidad mayor, por su lado, presenta una cara de unién al ARNm, y un poro que lo atraviesa fransversalmente llamado poro proteico. Mas adelante veremos que a través de este poro se produce la llamada elongacién de Ia proteina que se esta sintetizando, También presenta 3 sitios 0 regiones, llamados Sitio E, sitio P y sitio A (EPA). ialan LAS RIBOZIMAS Una de las grandes revoluciones ena ciencia se dio cuando se descubrié que las enzimas no son las Unicas moléculas capaces de catalizar y acelerar reacciones (ese fenémeno de catalizar y acelerar reacciones es lo que explica la actividad enzimatica), Se vio que existen en la células ARN con actividad enziméltica, como por ejemplo el ARNr 28s, Cuando un ARN presenta actividad enzimatica, se lo define como Ribozima, La actividad del ARNr 28s es la actividad peplidil transferasa, que ya veremos en la traduccién para que sirve. LA TRANSCRIPCION: PRODUCIENDO ARN Definimos a la Transcripeién como el proceso por medio del cual se sintetiza ARN usando como molde una hebra de un segmento especifico de ADN, LOS GENES: LA RECETA PARA PRODUCIR UN ARN En sentido estricto, un gen es un segmento de ADN con sentido biol6gico, con la informacién para generar un producto funcionante, esto es transcnbir un ARN, y si éste es un ARN mensajero una o varias protelnas. Podriamos simplificario diciendo que un gen es un segmento de ADN que tiene la informacién para producir un ARN, y si es Mensajero, una proteina. Por lo que hay genes para los ARNm, ARN. ARNr, ARN pequerio, ARN micro, y asi para todos los subtinos de ARN que existen en la naturaleza. Un gran cambio en la definicién tradicional es que antes se decia que un gen produce 1 proteina, Hoy en dia se sabe que cada gen produce, en promedio, 6 ARNm distintos, y por ende, 6 prateinas distintas, Esto se consigue gracias a un mecanismo llamado Splicing Alternativo, Los genes se distribuyen entre las moléculas de ADN, y su distribucién no es homogénea. Esto significa que hay moléculas de ADN que tienen gran cantidad de genes (como el ADN que forma al eromosoma 1) y otras moléculas de ADN que son pobres en genes (como por ejemplo el ADN que forma al cromosama), Los cromosomias con abundantes genes se los suele llamar *ricos en genes", mientras que los que presentan escasos genes se los llama “desierto génico” ARMANDO UN GEN Un gen para ARNm eucarionte tipico presenta grandes elementos: » La secuencia codificante: Es la parte del gen que SeWere"eoplaMbara producir un ARNMINMTEdro llamado ‘Franseripte’Primario, por medio de un proceso llamado TREnSCHBEON, Presenta intranesiysexones, El primer nuclesticodelcodificante:setiamartyy es el primernuclestido que sewaaitranseribir (copiar complementa- ‘amentoreWvARN). Es un puntordeublcaciorrerrelgenporque todo se mide e partir de este. Asi, cuando se quiere marcar una secuencia en el ADN que es +57, significa que esté 77 nuclestidos hacia (0 rfo abajo), y una secuencia que esta en -34 significa que esta a 34 nuclestidos de distancia hacia 3: > Secuencia Promotora: Es el fagardorde"se UNE Ias™ARN'BONMEREERS, Sin un promotor no hay transeripcién. En -25 esta la caja TATA caja de Hogness> Secuencias Reguladoras: Son secuencias que regu- Jan la transcripcién. Las hay rio 0 corriente amiba y ae Sass rio 0 corriente abajo, o sea haciasSia(ioxoreorriente ‘erriba)yptracias' (rio o corriente abajo). Ricrarribarse encuentran: a.La caja CART, la cajaxGC y elOctamero: su funcién es aumentania-eticienca:-de:la-iniciacion dela transcripcion b. Enhancers, Potenciadores'o Estimutadores: Se encuentran a distanciardelpromotor, y se leaunen los-factores=de=transcnocién especificos” como por ejemplo el complejo Honmonamtsteroidiea ~ Receptomdeshormonavesteroidea. Su funcién es el controlpositvesdestastranseripeién (stimula la transcripcién), SilencersosRepresores: Se encuentran a dislangiacdekpromotor, y se unerartactores'destranseriperén sespseife9s,Su funcion es el controlmegativerde Ia transcripcién (intibenlatsanscripcién). Elementes dstales INTRONES Y EXONES. ‘Seguramente ya sabés que es un exén y que es un intron. y los ubicés en el transcripto primario:intranesison y exonesio que queda para el ARN maduro, Eueno, como ef transeripto primario pehtransonptortionesintrones'yexones, es légico entender entonces que en el ADN que se copia hay intrones y exones, Los exonessdelsADNese corresponden, respecto a los exonesmeantienenstodaciascopia ‘del ARNm maduro.incluyende tos UTR'S'-UTR 3° ol ORF 0 Marco Abierto de Lectura, Esto se ™ bom aon entiende cuando se acepta que fos exenes es Io que va a quedar en el ARNm maduro, yumi Maduro tiene los UTR--ebORF yslos-agreqados: Zz (Capuchén y-coia) eaten Ahora bien, con respecto a [os inones, antiguamente se creyé que eran ADN basura (junk DNA), porque luego de la transcrpcion eran removides. Sin ‘embargo, hoy dla se sabe que len Varias funciones e informacion en su interior » Muchos intronss-caditicarmprotelnes ou\RtNsno-codifiantes, y se os llama GenesvAnidades (genes dentro de genes). Con respecto alas preteinae, en el genoma humano hay alrededor de 160 genes anidados de pro- teins. Con respecto alos » Presontan Secuencias:requladoras Rio Abajo: que controtan la expresién gérica » Presentan las seouenciassdercort y ermpalme: que regularseh'Splcing, Se ubicamenloscexiremos ce cada : perm= BIOLOGIA CELULAR 6: ARN, TRANSCRIPCION Y TRADUCCION IGEMA LOS ARN CODIFICANTES Y NO CODIFICANTES Los ARN se clasifican en dos grandes grupos: los ARNsGodificantes, representados por el ARNMA, porque ‘cadifica para una proteina; y los Net@odifieantes? que son todos los ARN restantes, que moxeodifiean, pero que tienen funelonesclaves en la célula, Ellos son: ARNt, ARNr, ARNpn, ARNpc, ARNmi, ARNsi y ARNInc. TIPOS DE GENES Ya hemos dicho que existen alrededor de 5.000 genes en el Genoma Humano, y que se encuentran ‘tibuidos de manera heteregenes’en los distintos cromosomas. Ahora bien, existen dos grandes grupos de genes, ‘a saber: __ > Genes:de:Gopiaitiniea: Corresponden a los genes de la gran mayoria de los ARNMn: Son alrededor de 20.000 genes. > Genes tepetides: Son genes que se encuentran repetidoswartaswecestentosteromosomas, como por ejemplo Jos genes de los ARNEYIOS'CS10S"ARNF, Asi, por ejemplo, el gen del ARINASS, que dard lugar a losARNr 2BSESY SS, se encuenira en el ADN centromérico de los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 (que llamat- vamente son todos cromosomas acrocéniricos, como vimos previamente). LOS GENES DE LOS ARNs Los genes de los distintos ARN se parecen bastante, sin embargo hay diferencias fundamentales que tenemos que tener en cuenta a la hora de la transcripcién. Asi, por ejemplo: » Los genes de los ARNm son tal cual describimos a un gen tipico, con sus elementos completos. » Los genes de los ARNT noppresentamiasecuenciastTAvenselpromotor, y no:contienernintrones en su interior » Los genes de losARINC tienen la caracteristica que SEERSEWE"ETOMOIORPSPESCERE, a diferencia del resto que solamentersetranscriberet'codificante, Esto se debe 2 que elipromotor-esta:metido:dentro:del casiticante, REQUISITOS PARA TRANSCRIBIR UN GEN Para producir un ARN, se necesita lo siguiente: > Hebra [+] de ADN: que es donde'estéretgen contenido, y es la que s#USHEOMO MOTE » ARN Polimerasas: son las enzimas encargadas de leer al codificante y a partir de éste -prodUcrUMTARN > Energia: ATPYCTP » Ribonucle6tidos: para poder polimerizarlos y producinasival AN. » Factores de Transcripcion: Son un conjumtoerproteinasespenifieas que actan sobre el proceso de trans- cripcion. Los hay de dos tipos: 4d. Basales.o Generales: Se unen a la ARN'Polimerasa'ya!promotordelGen. . Especificos: Se unen alas seeuerielasReguladerasttelGeM, y dependiendo de si se unen alos Enhancers 0 Silencers, aumentan o-disminuyen la-velocidadde'sintes'sGE m LAS ARN POLIMERASAS {Las enzimas ARN Polimerasas eucariéticas son un conjunto de 3 enzimas encargadas de la transcripcién del gen, esto es la sintesis de los distintos ARN. Dichas. ‘ABN Polina enzimas son » ARN Polimerasa I: Sintetiza al ARN 45S. Ya ve- emos que de este ARN se obtiene a los ARNr 28S, ARNr 48S y ARNr 5.85; se ubica en el nhucleolo porque shi vimos que se sintetizan, Jos ARNr nucleolares, que veremos que vienen del ARn 45S » ARN Polimerasa Il: Encargada de la sintesis de todos los ARNm, gran parte de los ARNpn, los SIARN y los miARN: der mole » ARN Polimerasa ill: Encargada de la sintesis del Testo de los ARNon, todos los ARNpc, ARNr 5 y todos los ARNt. Porn co Se cana Diaccn deatrinn LOS PASOS DE LA TRANSCRIPCION La transcripciin @s, como ya venimos diciendo, el proceso"peP MeLIO'WECISPSPEBIBRETATARN, usando como moldecehseqmentorcodiicantedsUrrGen. Y como ya nomoramos mas ariba, hay un corunto de clenentee Participantes. Hay, sin embargo, un conjunto de datos que son claves para que puedan comprender los pasos de la transcripcién, y como los elementos se unen. Las claves son las siguientes » Lostactoree-de-WenserFESFESpECHTEcs se unenssiomprecorret requiedor. » Los factoressdedtensetipeiémisasaies son varios, y S468 menos uno se unen a la ARN’ PORTTEFESAME! que Ao SSUNS SSTEOMMERS PoPeeesepeMtates llamadas EBRpor Tata Binding Protein) (*FAF (por Transcription Associated Factor). Es clave ese factor de transcripcién basal porque csebinice: que no se une ala ARN Polimerasa, sino que fWtetminsecuenciatAlAaicayes de TSP y a través de la otra subunidad seune al resto de los factores de transcripcion basales, quo a su vez estan uhidos a la ARN Polimerase » Los factores de transcripeién basales que ce unen ala ARN Polimerasa, la fostonlansplarseven=tina ver actvada y rodeada de factores de transcrpcion basales, eemuewan haciate-secuere-THAGeLprOMlor onde ya esta esperando el faciomue-transenpeorrBase que tene las subunidades TBEystak¥ se ured a ésto 3 través de TAF » Unawezunidostodoreh comple, la ARN Polimorasa se-separadetodosiosadoresde tanscripcién baste, se corre hasiaseheomienzmdehodiioante, y comionza a loerio para products un Ait » Todo ARNSClSFESREPISTSSTTRTERER y se llama Transenptofmars. El Transcripto Primario debe madurar © Ser procesado para su maduracin. E! pocasaddemadurecién SIEMPRE sohaveteretridees, pero ace 108 ARNssiemproSeSOMFMEREFOREPTECIeo. Una caraclerstica del transcripto Prmaro es que teneveoge Imentosdebequenesiven y cus tionen que ser removidos. Ye veremos que en algunos cases se ann Intrones'y en otros ARN Espaciader. TRANSCRIPCION DE LOS ARNmSi tenemos en claro todo lo que vimos previamente, A I Bee Nios resta decir los participantes y los pasos del DNA: -—salamente [roseso do transeripién para los ARN, a © Con respecto a los patcpantes, las diferencias son ™ de transeripcisn y la encima ARN Polimerasa. En soda Ta enzima es la ARN Polimerasa I, yrespecto de los de transcripcidn, los especificos no hay que saberlos, DNA: hay que saberlos generales eles son: TFIID (quo.es el ra formado por TEP y TAF), TFA, TF 118, Til, TF ods Tm WH (A, B, F, Ey H). ™ \TFI Sitio de inicio ona _ 1. Los factores de transcripcién generales se unen al RNA polimerasa i - Tegulador y modulan la sintesis; HID CPR TAF 2.TF IID se.une a la secvencia TATA del promotor a través yyy opATFF de su subunidad TBP; Sitio de iicio 3.1 resto de os factores de transcripciin basales se unen TF I1.D.0.a la ARN Polmerasa Ila fosforian y la activan; —_ 4,La ARN Polimerasa I acivada y con tos FT unidos se Te través desu subunidad TAF, ne 5. La ARN Polimerasa Il se separa de todos los factores de oe ‘Sitio de inicio transeripeén y #0 core hacia el inicio dl coaicante, comienza a leer el ADN nucledtido por nucledtide y hn hace una copia complementaria y antiparalela usando ribonuclestidos. Como es antiparaleta, todos los ARN. TAH tienen sentido biolégico 5'— 3. 6, Se produce el Transeripto Primario, el cual debe ser procesado para su maduracién. Describamos un poco mas en detalle, ahora que tenemos a todos los patticipantes. La secuencia paso a paso del inicio de la TranscripciGn es al siguiente (absoluta letra chica): 4, Se.une TF I D a TATA (a través de su subunidad TBP). 2. Sele une TF IB ala subunidad TBP de TF il D 3, Se une TF ILA para estabilzar la unién de TF Il 8 con TBP 4, Se une la ARN Polimerasa II 5. Se unen TF ll Ey TF lH Cuando todo esta unido al ADN, se forma el llamado Complejo de Preiniciacién o PIC. Y en ese momento la ‘TF IIH, con su actividad Helicasa, abre el ADN separando las hebras y comienza la transcripcién, MADURACION DEL TRANSCRIPTO PRIMARIO DEL ARNm E! Transcripto Primario es una molécula gigante e inmadura de ARN, lo que significa que an no es funcional, portal motivo debe madurar. Son varios los cambios que debe sufi el Transcripto Primario para pasar a ser ARNm maduro. A estos cambios también se los conoce como Procesamiento 0 Maduracién de los ARNm, y que tienen ‘como finalidad el producir un ARNm maduro, es decir, un ARNm que esté en condiciones de ir al citoplasma para ‘que sea leido y producirla proteina especifica.\Volviendo ala maduracién de! ARNm, dichos cambios son: 1. Agregado=delveapuchnven's’: Se le adosa orf'6" Una Molecule” eT = MEH CUEROSINES llamada también ‘@apuchém A este proceso se lo conoce como Gapping: Este capuchén impidénianccciénadenias Gu vac enzimas nucieasas-que-degradan a los ARNm, por seq Exon es 0 que Io protege de"ta- degradacién enzimétion Asimismo, le da eStaBdad"SPARN (recorda que significa que noslosdejaplegarse), y Jexsefalasaslos ‘snFINP- ne nbosomaszenseisitosobcul es el extremo 5°, Este Spliceosoma paso se produce cuando se asoman los primeros 20 nuclestidos del ARN que se esta sintetizando, o sea que es Gotianseripeional (se hace al mismo tiempo by eee’ que la transcripcién). 2. Gorteyskmpaime: También llamado SpiicingSe produce 21 eoriedelosinttonespara removerios del Transcripto Primario, y luego se unen IOS"€XORESEBe quedan, Este paso lo hacen las“RNPpn (Ribonucleoproteina pequefia nuclear) 5. Poliadenilacionsens’’: Se agrega cn G™UNE"COI"TS 250 nuclebtidos de Adeninasiiamadarcola-PolleameSu funcién es darlesestabilidacueslarmotéeuta, y permitir que las Sxportinas'saquen=alARNerdel ndicleo acia 91 citosol. La Poliadenilacién la hace la eraimanPolio® Polimerasa,_ 4, Metitactonde"adeninas: A algunas ader 8 (0.1% del total) se les agrega un grapORMewe? 2QUE ES EL ARN HETEROGENEO NUCLEAR O ARNhn Y EL SPLICEOSOMA? Una célula no esta sintatizando un solo tipo de ARNm, sino que sinttiza varios tipos dstintos. El conjunto de los Transeriptos primaries producidos por una célula se llama ARN heterogéneo Nuclear (ARN). y siempre se encuentra en el nicleo asociado a proteinas. r Por su lado, el Spliceosoma es el conjunto formado por el ARN Transcripto Primario en vias de maduracién y las RNPpn asociadas que estén haciendo el corte y empalme. 2COMO SABEN DONDE GORTAR? El corte de los inrones es un proceso muy eficaz y altamente controlado. Las RNEpnecortanrer=puntos altamente definidos y que son aidiilesentresunsintrén yun exén » En ol INTC nS SteRreMes"USISSEXOnESy EFEXTEMOS’ delosintronesesté ta secuencinAGGURAGU. EI unto de corte se produce entre las dos GG. Es decir: ExansAGIGURAGU:nirén, » En el limite entre el extremo 3° de os intrones y el extremo 5° de los exones esta la secuencia CAGG. Nueva mente, el punto de corte es entre las GG. Es decir intrén-CAG/G-exén. DifieaniovSIEmpre Tos LAS RIBONUCLEOPROTEINAS PEQUENAS NUCLEARES Se forman por la unin de 10S ARN ldmlUZeLnLlSs Yb. consbroieinasespecifcas. La U es porque los ‘ARNpn sorrsieosserruraeiio, Son responsables lantordel-corte:yrempalme’o'Splieing, como del Splicing Alternativo, ‘que ya veremios a continuacién de qué se trata,[BIOLOGIA CELULAR 6: ARN, TRANSCRIPCION Y TRADUCCION GEMA eee ALTERNATIVO (@)Seleccion de promotores aternativos wen Una de las cosas més notorias del proyecto aS So ‘Genoma Humano y el Proteoma Humano, es que E 7 — ‘See Visto que hay 35.000 genes y alrededor de 4521000 proteinas. ;Cémo puede ser posible que . é saya més proteinas que genes? (b Seleccion de sitios de poliadeniacion aterativo a respuesta Sedo en 1900, donde se vio poe Se por medio de un proceso pastas comple ae ‘Hemedo Splicingedlieimaiive, SE™pOCesa0I™ae Se — (eeias.dainiasaansciiogsimaio y ve obteria -— iMos=tpos=de=ARNM, Es decir que el Onde Sse te or tesa eet Oe oe wee GeARNm. Es un mecanismo muy frecuente en los _(d) Ayustacion de exones i con manriens my moa —=s See ee ee meee TRANSCRIPCION DEL ARN 45S Recordemos algo dicho previamente. El gen de! ANsd&Ss Wo" preSentererseCuerCIErTATACE-EH promotor. ‘Ahora si, la enzima partcipante es la ARNSPolimeraserty el facior de Transcripcién Basal es SL1 (que tiene las subunidades TAF y TBP), y el factor de Transcripcién Espectico es UBF. PASOS 4, SLA se une al promotor 2. UBF se une al regulador 3, La ARN Polimerasa | se une a SL1, luego el complejo se une a un sector del promotor (que no es TATA porque no este gen no tiene a dicha secuencia) y comienza la transcripcién. PROCESAMIENTO ELARN 45S es el Transcripto Primario de 3 ARNr. el 18S, 28S y 5,88. En efecto, los 3 ARNr se encuentran, dentro del 455, por lo que solamente hay que remover el ARN espaciador que hay entre ellos, por lo que solamente se producen cortes, TRANSCRIPCION DE LOS ARN RIBOSOMALES 5S Existen aproximadamente 2,000 copias de este gen, todas ellasiuerasdelaniclaao, Por 2so se llama a este ARNFERETRISEOI. Y estén dstnbuidos entre os cromesomasnorserocénitioes (recordé que lasgenesimuclookares estan en las Constrieiones:seoundarias de los cronrosomastacrocentricos). La enzima participante es la ARN Polimerasa Il. Los Factores de transcrpcién basales se laman TFll A TFIIB (que tiene las subunidades TAF y TBP) y TFll C.PASOS, 1. TFIIIB se une al promotor a través de TEP. 2. TFIIl A y TFIIIC se unen a la ARN Polimerasa Ill. El complejo se une a TFIIB a través de la subunidad Tf ubicada en el promotor y luego comienza la sintesis del Transcripto Primario, PROCESAMIENTO ‘Ya remarcamos que el Transcripto Primario de todos los ARNr 5S. esté formado por dos exones y un intrén, Entonces, se remueve el inirén y se unen los exones, ARMADO DE LOS RIBOSOMAS Los ribosomas son armados en el nucledlo. Para ello, es necesario primero juntar a todos los componente. Ellos son: » ARNr nucleolares: Son los que provienen del ARN 45S. Son el ARN 285, 185 y 5.85 » ARN extranucleolar: Corresponde al ARN 6S. » Proteinas ribosomales: Son las proteinas que se ubican en cada una de las subunidades. Son sintetizadas en el citosol, y legan al ‘hiicleo traidas por la Importina, como veremos al final de la guia, mn Reciben el nombre segin Ia letra de la subunidad a la que perte- nece ‘a. Subunidad mayor: son las proteinas | (por Large). Tal cual vimos, son 46 y sellaman L1 a L46 'b, Subunidad menor: Son las proteinas S (por Small) Tal cual vimos, son 33 y se llaman Si @ $33 TRANSCRIPCION DE LOS ARN DE TRANSFERENCIA La enzima partcpante es la ARN Polimerasa II. Los Factores de transcripcién basales se llaman Tl 8 (que tiene las subunidades TAF y TBP) y TFIll C. PASOS 1. TFIll B se une al promotor a través de TEP. 2. TFill C se une a la ARN Polimerasa lll. El complejo se une a TFlll B que esté unido al promotor y luego comienza la sintesis del Transcripto Primario formado por dos exones y un intrén, PROCESAMIENTO Ya remarcames que el Transeripto Primario de todos los ARNt esta formado por dos exones y un intrén, Entonces: 1. Corte y pegado: se remusve el intrén y se unen los exones. 2. Modificacién de bases nitrogenadas: para crear las bases raras 3, Reemplazo en 3° de Ia secuencia AAA por Ia ‘Secuencia CCA, @- 8- -© \ AN nenres nensas aenass |] aves in, s y Presa |. corte a Moditicacion |, ‘de bases, 5 \ Roomplazo de AAA porcCAen 3° HENCE-GIFEHBHEE: os uno de los motivos mas comunes. Este motivo se encuentra en centenares de proteinas, ‘tanto eucariotas como procariotas. Consta de dos hnéliess:conectadas por unavcorta:cadenardeaminozcidos, que forman el “giro”. Aparte de ésta regién hélice-giro-hélice, la estructura de las proteinas que contienen éste motivo varia enormemente. Estas proteinas se unen como dimeros simétricos a secuencias de ADN que estén formadas por dos “medios- lugares" muy similares, también organizados simétricamiente > Lossdedossde:Zinc sorstormasestructurales"aeomplejadas con un étomo de zinc que tienen el aspecto de un dedo. Existen diferentes tipos de dedos de zinc, el motivo més simple consiste en unePaN@PENE® y una \éminaibeiaanienidasunidassporeizinesé sto tipo de dedo de zinc se encuentra frecuentemente agrupado ‘con otro dedo de zinc, organizados uno detras del otro de modo que la alfa hélice pueda contactar con elsurco mayor del ADN. Otro ipo de dedos de zinc consiste en dos alfa héices unicas por un atomno de zine ».Bl.ciere.o.cramallera.de Leucinas esti formeds pordos'elahélees, una-de-cadamonémeto, U2 cortiene una leucina cada siete amincécides y se mantienen unidas por interaccioneszentreraminodcidos"nidroto: bicos, genesaimeniedeucinas formando un corto enrollamiento. Las proteinas con éstos motivos se unen a ADN siempre como dimeros, formados por des subunidades iguales (homodimeros) 0 por suounidades diferentes (heterodimeros). |EOS FACTORES DE TRANSCRIPCION ‘odes las enaimasvaRN Polimerssas requicren obligatoriamente a los Factores de Transcripcién para poder #etuer. Los factores de Transcripcién pueden ser: » Generales: Son los factores que mediarrleractivaciorrdeHle"erAINeARN'POHME?asa y su comectaunién:al ‘Promotors un gen; » Especificos: oHistoespertfiens, Son los que seunemaragionss teguiadoras.o.promotoras-especiticas de los genes y regulan el grado.de transenpeisn. |ACETILACION DE HISTONAS | ____Este mecanismo permite modificanehnivelde:compactaciondeiarcromatina, Cuando a las histonas se las eeailaencieminnécidaisins, se selsiniecromatine y pemieaunaainelén. Por el conten, la desacetlacin de fonas promueve la compactacién de la cromatina, y por ende impide que se transcriba, Las enzimas encargadas de acetilar se llaman Histona Acetil Transferasa (HAT), mientras que las que acetilan se llaman Histonas Desacetilasas (HDA), ILACION DE HISTONAS Acitian de forma inversa ala acetilacién. En este caso, entoncas, cuando se metila alas lisinas de las histonas iProduce la compactacién de la cromatina, mientras que la desmetilacién produce relajacién de la cromatina, La encarga de la metilacién es la Histona Metl Transferasa o HMT. |DNA Met Transferase o DMT. cuando esta junto 2 lz Guaning formandoNi REMODELACION DE NUCLEOSOMAS Para remodelar la cromatina, se hacen modificaciones covalentes de las histones y la remodelacisn del Nucleosoma, Es un mecanismopoc conocido atin, y se estudia mas que nada en levaduras (0 Sea, poco importante). CONTROL DE LA DEGRADACION DE LOS ARN MENSAJEROS En los ultimas afios se ha avanzado en el mecanismo de Interferencia de los ARNm. Se trata de mecanismos ‘gue usan ARN de dable cadena (si, como lees, AitNkdesdoble,cadena:onbicalenatios), que actian impidiendo la lectura del los ARNm por parte de los ribosomas, o cortando al ARNm. Como ves, es una serie de mecanismos que actan impidiendo la tradueci6n, y actin a nivel de la degradacién de los ARNm, ‘Se han estudiado extensamente dos tipos deRiNadedmierierencias Los Micro ARN (0 mIARN), y los ARN Pequetios de Interferencia (0 SiARN por Small Interference ARN) LOS MICRO ARN Existen un grupo recientemente descriptos de ARMNeGoulteantes, es decir, ARN que no tienen informacién para fa secuencia de aminodcidos de una proteina. Un tipo especial son los Micro ARN (miARN), sintetizados por la ARN Polimerasa Il, Se considera que las células humanas producen alrededor de 1000 ARNmi distintos, y cada ARNmi puede reconocer a 100 ARNm distintos, a ee El procesamiento de estos miARN involucra en también, el agregado de un capuchén en 5", y la cola poli —|_ oe ‘Aen 3’ (al igual que los ARNm), Para seguir madurando, |" 2. Compleio Rte amano oe == 4. Enniicleo se pliega en horquilla, formando los pri-mi onplementriad a Ane Cone ARN ss) ay ™, 2.En niicleo, la enzima DROSHA |e recorta los extremos, formando el pre miARNaGuees.quien sale del niicleo; tiene un tamario eproximado de Stencarento génico’ 22 nudlestidos;BIOLOGIA CELULAR 6: ARN, TRANSCRIPCION Y TRADUCCION GEMA 3. Ya en citosol, la enzima DICER lo welve monocatenario y lo une a unas protefnas para formar RISC 4, El complejo RISC busca ARNm y_une el miARN monocatenario al UTR 3'del ARNm. En este punto pueden pasar dos cosas: 5. EI mIARN es perfectamente complementario: se induce al corte del ARNm y su degradacién posterior 6. El miARN solo tiene complementariedad parcial: queda unido al ARNm @ impide que actuen los reguladores del UTR 3) ‘Ya habiamos hablado previamente que los miARN presentan varias funciones més, aparte del silenciamiento {Génico, en el que se cuentan. LOS ARN PEQUENOS DE INTERFERENCIA (siARN) ‘Son ARN de doble cadena (ARN bicatenario), de 20a 28 mudeétidos do longtud Eee SNA son SM oe telcasn procesados por un complejo enzimatico llamado DICER en citosol . Luego de una serie de procesos ae aN Nucleasa IE) enla célula como consecuencia delos cuales su ARN de doble cadena se desdobla en una hebra sentido y una hebra antisentido, por accion de la protein Argonauts. Lahebra antisentido se urle ala cadena de ARNm de manera especifica por complementaridad de bases, provocando que el complejo resultante en sea reconocido por los mecanismos calulares y K —— degradado, Cada siRNA es altamente especifico para Bo ei etc Ja secuencia de nucledtidos diana al que degrada. Este fendmeno de interferencia génica se produce de forma natural en el organismo, estando implicado en el desarrollo y en la defensa contra los virus. TRADUCCION DEL ARN MENSAJERO. CONSIDERACIONES PREVIAS Luego de la Transcripcién y Procesamiento del ARN en los distintos subtipos, hemos conseguide casi todo lo necesario para la sintesis de proteinas. Es decir emos btenido urPARN (que es copia casi fie — recordar el cambio de uracilo por timina ~ del ADN), loguiianossAfiesibosomales. LO"primeroes"ersemblerorermartos ribosomes. Recordemos que este mecanismo se produce en el nucteolo, y que las subunidades ribosomeles selen inactvas del nicleo, y se activan en citosol, De esta manera, se evita la unién prematura a un ARNm en el niceo. Previo al comienzo, es fundamental trabajar a mivel de los ARNt. Se les debe agregar en 3° el aminoacido especitico, Este proceso se lama Actvacién de los ARNE‘AminoaciLARNt sintetasa ACTIVACION DE LOS ARNt Ea iN eesti sl arta (eminoscico) AIP. re eee ee fe ‘existen 20 tipos distintos de Aminoacil ARNt Sintetasa, una para cada aminoacido, INTRODUCCION A LA SINTESIS PROTEICA La sintesis proteica 0 Traduccién del ARNm es un eomplefermetabilico que tiene como UNCTSPERIESMaPER formasde-proteinas daxinformacién:questrasehRNmvdelmdcleo. Recordemos que el ARNm es un templado de un ‘segmento de una hebra de ADN. Dicha informacién se encuentra en el AtNmuenformardeccadones, donde cada codénsontresnuciestides. Se puede decir entonces que la informacién que trae el ARNm se encuentra en forma de nhuclaétidos que se agrupan en tripletes pera dar lugar a los codones (y de ahi inferir que el ARNPES tra Sectenci= lineal de costones) En la sintesis proteica, e MBOSOMa Sele Ue'S'VSSRCSEPES. Es decir, so corre por el ARNm desde el extremo 6’ hacia 3. La sintesis proteica comienza cuando un ribosome encuentra en un ARNm el codén de iniciacion AUG. Este codén uniré al ARN! que contenga en su asa anticodén al tiplete UAC (complementari al codén AUG). Dicho ARNt tendré asociado el aminodcide metionina, ETAPAS DE LA SINTESIS PROTEICA Las etapas son 3: Iniciacién, Alargamiento (o Elongacién) y Terminacion. Cada etapa posee factores ‘espeeificos que regulan los fenémenos que suceden en las mismas, INICIACION Se deben dar una serie de pasos secuenciales para que se produzca una correcta sintesis proteica. Los pasos son los siguientes: 4. Unién del primer ARNE (el que lleva el aminodcido metionina y el anticodén UAC) a una subunided menor. Se uubica en el sitio P. Se le une elF3 y forma el Complejo de Preiniciacién 2, Factores de Iniciacién Eucariontes especiticos (EIFs) reconocen el capuchén del ARNm.‘3. Acomodacién de la subunidad menor (que tlene al ARNY.,. en al sitio P) en el 5” del ARNm ‘4. Movimiento del complejo de preiniciacién en busqueda del codén de iniciacién AUG. Este movimiento se hace, como dijimos previamente, de a un nuclesiido por vez. 5. Alineacién del codon AUG con el sitio P de la subunidad menor. Unién codén Anticodén 6. Establecimiento del Marco de Lectura, De ahora en mas se moverd de a tres nuclestides por vez, 0 sea de @ Un codén por vez. 7. Unién de la Subunidad Mayor y formacién ahora del Complejo de Iniciacién. Wavionina Iniciaci6n de la traduccién eucarionte Complejo de subunidod fibosomal pequetia y ARNE “= ARNE Iniclador iniiagorse une al cap ”. subunidad ribosomal pequefia v ee: [ 5 | rr — ee z Scop Codén de inicio boa A oda de inicio Hq i Sh Ls 3 ARNE niciedor se une al codén de inicio 5 3 Subunidad ribosomal ‘antim se desptaza [~ é atende se une para formar | | Stim s* despiass ‘Subunidad ribosomal ‘Complejo de iniciacion S grande 5 3 ee 7 Complejo de iniciacion ‘Ala izquierda, los pasos de la iniciaci6n de a Sintesis proteica. Ala derecha, la elongacién o alargamientoWGI ELONGACION 0 ALARGAMIENTO Comienza cuando ehsitiowes"SeupaderpOFe!2"ARNI, Obviamente, stSegUneO ARNE CSDEIS CT 2 Coton, delim. La metionina del ARNt ubicado en el sitio P se desrende del ARNI y se une por unién peptidica al ‘Aminodcido ubicado en el ARNt del sitioA en el sitio carboxilo de este Ultimo. Este proceso es producido por un ARNr de la subunidad mayor, especificamente el ARNr28S de la subunidad mayor, que tiene actividad peptidll transferasa. ElARNewsecoretresnuctestides( codén) hacia’. Este movimiento se llama TRANSLOGAGION. De esta manera, ePARNECUE"EStaba"er"e! Sito setoorigmalsitiowPdejando libre el sitio A. El ARNt que estaba en el sitio P quiedavainora.en:e:siioxix(y:sinselsaminodcido) y [Uega:se:ciesprende:delARNm. Un nuevo ARNt se une al sitio A libre, comenzands el ciclo, leyéndose al ARNm codén por codén. TERMINACION Cuando el eitiaw es ocupado por uno de los cOdORESEETEMMINEEIOn (lamados tambiénmudososinsentide) se terminanlarsintesis (al novexistinunARINtpararestos:codones). Pucden sor UGASUAMSUAG (cualquiera de estos @terminasiasintesis). En ese momento€lSWe Nes Ocupade por uy factor de TertinaciérreUcarionte, se desprende et polipeptido-del ARNI-oel sitio, y se-separa el niposoma del ARNm. y sus subunidades se separan tambien meee, \BIOLOGIA CELULAR 6: ARN, TRANSCRIPCION Y TRADUCCION \IGEMA CHAPERONAS Y PROTEASOMAS. EL ROL DE LA UBIQUITINA Fre os os on ieee ae De ane a Gesiiiiw deivuiive en ia ceils. Y sta proteinase oliega mal. iPr cei es pone oa 2, See Hays fei de Chaperonas HSP80, HSP7D. vsre. Ets Ha poor de Hea! Shosk Proton Bir el Shock Tarot ieee eae Freva ic torpweura,¥ raeeree eae Blciee co detpcueden as Hee Sienes aia Be acd bechanren,a7uarialasiie ata Beitr demenrclzario s que sree vara Bes wre > WSP7O: Se unen alspolipéptidoscarentewte=peptida el ciniondo 5s POSSESS tae asociacion erénea.con proteinas.citosolicas. Tam- a ee ‘eisai ora » aa ne (aside a pun Tene Se 0 oa Ta capiores citosdiicos de Hormonas.especificas (fF s- teroides, Tiroideas, Vitamina D, Acido Retinoico). Ahora, si una proteina se pliega mal, o es jestable, 0 ya estd envejecida, debe ser degradada ra ello, se necesita al Proteasoma. El proteasoma es Gompiejo=Muilienzimaticomcitasélica> compuesto por jassconsaciividadsdesproteasas que degradan a las inas marcadas con Ubiquitnay-con-gasto:de ATF. No encuentra en el interior de ninguna organela, sino que envettaso| Para poder ser levada e ingresar al proteasoma, la proteina debe ser “sefialada’ por una proteina llamada tine (proteina de 76-aminodeldoseiettongitud). Esic proceso se llama Ubiquitinizaciéne2COMO HACE LA UBIQUITINA PARA SABER QUE DEBE ADOSARSE A UNA PROTEINA?, Se sabe, sobre todo en proteinas de vida corta, que f@ sefial para su degradacién son secuencias de ‘aminodcidos llamados PEST (por Prolina — Acido glutémico ~ Serina y Treonina). 2SOLO SE UBIQUITINIZAN LAS PROTEINAS MAL PLEGADAS? No. El sistema Ubiquitin proteasoma es un sistema muy preciso que permite rapidamente eliminar proteinas, ‘cualquiera fuera su motivo, Ya veremos en ciclo celular que las ciclinas se deben degradar rapidamente, Para hacerlo, son ubiquitinizadas por proteinas especificas, LOS DESTINOS PROTEICOS Planteemnos un dato clave: Ya hablamos planteado en la guia de Sistema de Endomembranas que’ Todas las proteinas comienzan a sintetizarse en citosol.. Esto es asl. El 100% de las proteinas comienzan en poliribosomase ‘Gitessiicos. Sin embargo, existen 5 lugares donde una proteina puede ir. Esos lugares son. » REG, » Nacleo, » Mitocondrias, 4 > Peroxisomas, » Citosol mismo. ‘Ahora, como hace una protein para llegar al lugar especifico donde se ubica habitualmente funcionando? ‘Bueno, para sacamos de encima répidamente la ubicaci6n citosélica, simplemente decimos que la proteina, una vez sintetizaca, las-chaperonas talevarrebligerdebctosoldonde funciona. Ejemplos de proteinas.citosdlicas son las ‘Tiubulinas Altery:BetaplaActina Grolasensimasielagluodiisis. Todas ellas son proteinas citosdicas producidas en polribesemas y llevadas por las chaperonas a su lugar en el citosol. Los primeros 4 destinos (REG, nticleo, mitocondrias y peroxisomas) estan determinados por la presencia en la proteina sintetizada del llamado Péptido Serial. Se define como péptido sefial a una secuencia especifica de aminodcidos en la proteina sintelizada que marca el destino hacia donde va a i. Y cada secuencia o Péptido Sefial 8 reconocida por una molécula especifics, y va a ser la encargada de llevaria a su destino. Veamos un ejemplo. Se sabe que la proteina Fibronectina es una proteina presente en la MEC (Maitiz ExtraCelular) del teido Conectivo, Siempre (como todas las proteinas) comienza a sintetizarse en el citosol, y cuando aparece el péptido sefial, lo reconoce una molécula llamada PRS, que se va a encargar de llevarla a su destino. DESTINO REG ‘Toda proteina cuyo destino sea el REG, presenta un péptido serial formado por los primeros_a aminoacidos de fa secuencia polipeptidica, generalmente hidrofébicos. Es reconocida por la PRS 0 Particula de Reconocimiento dela Sefial, Esta PRS es una macromolécula presente en citosol, y formada por ARNpc y proteinas especfficas, E| mecanismo de accién de la PRS esta bien estudlado, e y su accién secuencial es la siguiente:> Reconoce al péptido serial » Detiene la sintesis: para hacerlo, se une al ARN eimpide que el ribosoma avance » Arrastra al complejo de sintesis (ARNm y riboso- ma) hacia la membrana del REG > Se une al receptor para la PRS, presente en la membrana del REG, » Al lado del receptor se encuentra el translocén, que es un canal proteico con dos funciones: es receptor de los ribosomas (0 sea que los ribosomas quedan unidos ala membrana a tra- és del translocén), y permite el ingreso de la proteina que se esta sintetizando al interior del REG (al lumen del REG) » Una vez que se une a su receptor, y el bosoma queda unido al iranslocén, se separa del ARNm y continua la sintesis » El polipéptido continua elongandose, pero ahora va ingresando al lumen del REG a través del translocén » Finalmente, una vez que la proteina ingresa al lumen del REG, el pépiido sefial es cortado por accién de la pep- tidasa serial DESTINO NUCLEO Toda proteina que va a ira nicieo, como las histonas o las enzimas ADN o ARN Polimerasas, presentan un péptido sefial de 7 ‘aminoacidos al principio de la secuencia que se llama NSL o Sefia de Localzacion Nuclear (es el nico péptido seal con nombre), NSL es reconocida ports Importinas, y actian junto a unas proteinas fjadoras de GTP llamadas Ran. Ya vimos la importancia del graciente de Ran-GTP y Ran - GDP para el ingreso y egreso del niiceo. Las importinas reconocen NL, dejan que termine la sintesis proteica, una Vez terminada ayudan a la proteina a plegarse, y ya Plegada la llevan al complejo de poro, para que ingrese al nicleo. DESTINO MITOCONDRIAS La molécula reconocedora del péptido seftal Mitocondrial es la HSP70c. Una vez que reconoce al péptido sefal, deja que termine fa sintesis, y la lleva hacia la mitocondria, evitando que se pliegue, es decir ta lleva sin plegarse. Una vez que llegan, en la Membrana Mitocondrial Extema se encuentra el complejo TOM (Translocén de la Membrana Externa), que esté formado por un receptor para la HSP70c y un canal translocador o translocén. Cuando la HSP70c se une a su ‘eceptor, se produce un alineamiento de TOM con el complejo TIM {Transiocén de la Membrana Intema) ubicado como su nombre lo ice, en la Membrana Mitocondrial Intema, Este alineamiento permite luna comunicacién transitoria entre citosol y mairiz mitocondrial. y entonces la proteina comienza a ingresar (sin plegarse atin) hacia la atriz, donde es recibida por la HSP70m, que se encarga de cortar al péptido serial, y luego transfiere a la proteina ala HSP60, quien la fiega y la lleva hacia su destinoDESTINO PEROXISOMAS Las proteinas con destino peroxisoma presentan varios péptides sefial en la secuencia polipeptidica. Estos péptidos sefiales se llaman PTS, y hay dos tipos de PTS, llamado PTS-( y PTS-2. Elmas estudiado es el sistema de PTS-1. En ambos casos son reconocides por una proteinas llamiadas Peroxinas: » PTS-1: Peroxina 5 (Pex 5) » PTS-2: Peroxina 7 (Pex 7) El mas estudiado es el de la Peroxina 6. En este caso, la So Peroxina 5 reconoce al péplido sefal, lleva a la proteina sin plegar es a hacia la membrana del peroxisoma, donde interactia con Peroxinas om de la membrana del Peroxisoma (Pex13, Pex14 y Pext7), formando un io oro y permitiendo el ingreso de la proteina al Peroxisoma. ANTIBIOTICOS Y TOXINAS Muchos entbisticos son capaces de interferircon la sintesis protec. Algunos ejemplos son 1) Que actian solamente en células procariontes » Tetraciclina: Bloquea la union del ARNt al sitio A del ribosoma » Estreptomicina: Bloquea la transicién de la fase de Iniciacion a la fase de Elongamiento » Clorantenicol: Bloquea la reaccién en los ribosomas de la peptidll transferasa ia: Bloquea la translocacién del ARN ina: Bloquea sintesis del ARN al unirse ala ARN polimerasa 2) Que actdan en células procariontes y eucariontes » Puromicina: Causa la liberacion prematura del polipéptido naciente al unirse al sitio terminal de crecimiento proteico » Actinomicina D: Se une al ADN y bloquea el movimiento de la ARN polimerasa (bloquea sintesis de ARN) 3) Que actdan solamente en células eucariontes » Cicloheximida: Bloquea la Translocacion ribosomal > Anisomicina: Bloquea la reaccién de la peptidl transferasa » Alfa Amantina: Bloquea la sintesis de ARNm al unirse especificamente a la ARN polimerasa Il ia presen1) ELARN mensajero: S policistrénico en eucariontes rece ee 8) ELARN mensajero 4) Es una hebra bicatenaria de nucleétidos b)EI UTR 5* contiene al codén de iniciacién y a primer exén 's monocistrénico en eucariontes QE! ORF contiene secuencias reguladoras claves 4) Con respecto al cédigo genético )Conpence. 61 cores gee crcantry Sse clcodon AU slo acta apse delncacn (BF Sioreees yo coattento po ¢) UAG, UGA y UAA indican fa imcorporacién de es YB particula de reconocimiento de la sefial Esta formado por ARN pequefio citoplasmiético y proteinas. b) Las proteinas que las forman son las histones ucleolares ©) Reconoce al péptido sefial con destino niicleo )Particpan de la sintesis de proteinas eroxisomales 6) El nucleolo P)Posee ADN de las ‘cromosomas b) Es el sito donde ) Presenta ADN, nucleolares 4) Esta limitado por una membrana lipoproteica stricciones secundarias de jetacéntricos cribe el ARN 5s lene a los organizadores 7) En relacién con el cédigo ‘a) Cada aminodcido es b) 3 aminoacidos co ifcado sélo por un codon in para los codones de de Kozak¥es el codén de la iniciacién de la sintesis proteica PREGUNTAS DE REPASO Er 3ceso de corte y empalme de los ARNm ‘Se remueven algunos exones y se unen los, intrones b) Participan ARNpn ricos en uracilos y proteinas ‘mahi inicio y final de los exones poseen secuencias especificas ‘=8)EI splicing altemativo permite la obtencién de diferentes ARNt 9) En la transerpcién de ARN eucarionte ) Los factores basales permiten la unién de la ARN polimerasa 2 a la secuencia CAAT del promotor b) La ARN polimerasa 2 transcribe los ARNt ©) Los factores de transcripcién especificos se unen jes __2/aSecuencia CG 0 CAAT, pero nunca a TATA 4) La ARN polimerasa 1 transcribe al ARN 45S 10) En relacién al cédigo genético. 2) Cada amincdcido es codificado exclusivamente por un codén, “exb) Existen varios codgg$ de terminacién, ©) Elcédigo genéticgmitocondrial es igual al nuclear. ) ACG es el cn de iniciacién de la sintesis proteica. 11) Con respecto alos ribosomas. ‘@)Estén compuestos por dos subunidades ribonucleoproteicas ) La subunidad menor contiene un ARNr de 5S ©) Las subnunidades ribosomales son ensambladas ‘en el citosot ¢)La subunidad mayor se une 2 la menor dentro del nucleo 12) De la ARN Polimerasa, marque le Incomecta a) Sintetiza ARN sobre ADN molde. ») La doble lectura comrige errores de polimerizacién ©) Lee en direccién 3° 5°. 4) Sintetiza en direccién 5° 3" RESPUESTAS