北 京 大 学 学 报 !

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!论著!

高脂饲料诱导肥胖胰岛素抵抗大鼠模型的建立
张晓圆"郭成成"玉应香"谢!岚"常翠青 !
! 北京大学第三医院运动医学研究所" 北京!"%%"&"$

! 摘!要" 目的!通过普通饲料和高脂饲料喂养大鼠"探讨建立肥胖胰岛素抵抗大鼠模型的适宜条件和时间+ 方
法!将 )0 只 + 周龄雄性 W^大鼠随机分为普通饲料对照组和高脂饲料组! 脂肪供能比为 )0J$ " 喂养 ) 周后剔除高
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! 关键词" 胰岛素抵抗#肥胖症#膳食" 高脂#模型" 动物
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!!胰岛素抵抗是肥胖及其相关疾病! 如糖尿病( 水"每 笼 # 只" 饲 养 环 境 为 无 特 定 病 原 体 ! 4

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心血管疾病等慢性病$ 的重要发病基础"表现为外 :=
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黑暗循环"饲养
低"使胰岛素维持血糖稳态的能力下降+ 目前的胰 周期为 "# 周+
岛素抵抗 动 物 模 型 研 究 有 遗 传 型( 基 因 型 和 诱 导 $$
(!大鼠的筛选
)"*
型 "胰岛素抵抗除了与遗传背景有关外"饮食不 采用两种方法分别判定肥胖! 7
F94
3?
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合理与运动缺乏与之密切相关+ 能量摄入过量(活 胖抵抗! 7
F94
3?
`89
434
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动消耗过少等造成的肥胖是产生胰岛素抵抗的最主 饲料喂养后体质量高于对照组体质量均值的 "%J
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是环境和行为因素! 如饮食(运动$ "而不是基因改 从大到小排序处于上 # 1
/ 的大鼠为 Lb"处于下 " 1
/
)#*
变 "因此"建立与成人肥胖胰岛素抵抗相似的动 的大鼠为 L')"/* + 根据上述判定方法"剔除 L'大鼠"
物模型"对研究相关疾病的病理生理(治疗等具有重 筛选出 Lb大鼠+ 在 Lb大鼠中根据体质量大小按随
要作用+ 机方法选取 "0 只与对照组一起继续喂养至 "# 周+
高脂饮食诱导的肥胖胰岛素抵抗大鼠动物模型 $$
0!体质量和进食量
在复制人类相关疾病的自然进程(代谢特点方面有 每周在固定时间用分度值为 %$
" <的秤称量大
)/*
显著优势 "且较为经济"但目前报道的肥胖胰岛 鼠体质量和进食量各 " 次"经观察发现撒食量很少"
素抵抗大鼠模型条件不同"所需时间更是长短不一" 因此计算每天每只大鼠进食量! <$ l! 给食量 _剩
)) _""*
# ]#) 周不等 + 本研究旨在探讨建立肥胖胰岛 食量$ 1
#! 每笼两只$ +
素抵抗大鼠模型的适宜条件和时间+ $$
1 !口服葡萄糖耐量试验 ! 7
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$!实验动物 通过灌胃给予 0%J! 质量分数$ 葡萄糖溶液 # <1
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5$ 和灌 胃 后
洁级"体质量 "0% ]",% <
"共 )0 只! 购自北京维通利 "0(/%(+% 及 "#% A3
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华有限公司$ "实验动物生产许可证号 W6.S! 京$ ! *66M-
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" ^R$ 上测定血糖
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%%"%"实验动物使用许可证号 WY.S! 京$#%"+- !<
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"UOM$ + 根 据 梯 形 公 式 计 算 曲 线 下 面 积
%%)"+ 本研究通过北京大学生物医学伦理委员会审 !=
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% nUOM"0 A35 I##$
0 nUOM/% A35 I
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% nUOM+% A35 I/%$% nUOM"#% A35+ 高脂饲料组的
普通饲料采用普通大鼠生长繁殖饲料! 北京科 *M6高于对照组 *M6均值的大鼠视为胰岛素抵抗
澳协力饲料有限公司$ "总能量为 /$
)& HG
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<#高脂 大鼠"据此计算成模率+
饲料采用脂肪供能比为 )0J的高脂饲料! ^"#)0"" $$
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5 时由内眦
适应性喂养 " 周后"按体质量大小排序采用区 取血"# 0%% 8
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5 离心 "0 A3
5 分离血清"采用大鼠
组化随机分组的方法将大鼠分为普通对照组!( 只$ 胰岛素试剂盒! \3
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3:7
89" Re'\T
-"/S$ 检测血清胰
和高脂饲料组!/, 只$ + 高脂饲料组给予高脂饲料 岛素浓度+
喂养"自由采食#对照组根据高脂饲料组的进食量高 $$
T!组织病理检查
值定量给予普通大鼠生长繁殖饲料+ 大鼠自由饮 "# 周末"腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后"股动脉
张晓圆"等!高脂饲料诱导肥胖胰岛素抵抗大鼠模型的建立 ' 00&'

放血处死大鼠+ 开腹依次取出肝脏(睾周脂肪和胰 组 ",$

(J! #l_/$
00+" )l%$
%%"$ + 剔除 L'大鼠
腺"取同一部位的部分组织放入 "%J! 体积分数$ 甲 后"Lb大鼠在 )((("# 周末的体质量分别高于对照
醛溶液固定"后续进行石蜡包埋(切片(ZR染色观 组 #"$
,J(/%$
)J和 /+$
&J! )h%$
%%""图 "$ +
察+ 采用 T
A=<
9Q8
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积(胰岛面积"计数每个样本 "% 个 "% 倍视野内的胰
岛数目+ 脂肪细胞炎性浸润程度评分标准为%% 分 l
无"" 分 l轻微异常"# 分 l轻度异常"/ 分 l中度异
常") 分 l重度异常+ 肝细胞脂肪变性程度根据非
酒精性 脂 肪 性 肝 病 活 动 度 评 分 ! 57
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肝细胞脂肪变性#P""0J ]/%J肝细胞脂肪变性#
P#"/"J ]0%J肝细胞脂肪变性#P/"0"J ],0J肝
细胞脂肪变性#P)" g,0J肝细胞脂肪变性 )")* + 所
有病理切片由同一位经验丰富的病理科医师在不知
实验设计和动物分组情况下进行评分+ %)h%$ %0" %%)h%$%"" LbG 7A:=89
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9&4指数(内脏脂肪百分比和脏器重量及指数 ?
=5G9$
"# 周末"腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后测量大鼠 图 $%大鼠体质量变化
身长! 鼻尖到尾根部$ "称取终末体质量+ 股动脉放 2#
345
6$%6@=
5<9
435 F7
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3<@?7
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血处死后"取肾脏周围及睾周脂肪组织(肝脏和肾脏 &$
&!Lb与 L'
称重+ 按以下公式计算内脏脂肪百分比(O9
9& 4指 高脂饲料喂养 ) 周"按方法!"$ 筛选出 L'大鼠
数(肝脏指数和肾脏指数% 内脏脂肪百分比 l! 肾 ( 只) 体质量!/&)$
+ i"($/$ <* "Lb大鼠 #& 只) 体
周 I睾周$ 脂 肪 组 织 ! <$ 1
终 体 质 量 ! <$ n"%%J" ) i/#$
质量!)+/$ &$ <
* "Lb大鼠体质量高于对照组
/ /
O9
9& 4指数 l槡体质量! <
$ n"% 1
体长! G
A$ "肝脏指 #"$,J ! #l0$
0(%" ) h%$%%" $ " 高 于 L' 大 鼠
数 l肝重! <
$1体质量! <
$ n"%%J"肾脏指数 l肾重 ",$
)J ! #l0$
##%" ) h%$%%" $ " 肥 胖 成 模 率 为
!<
$1体质量! <
$ n"%%J+ ,($
)J+ 按方法!#$ 筛选出 "# 只 L'大鼠) 体质量
$$
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( i#%$% $ <* " Lb 大 鼠 #0 只 ) 体 质 量
用 WQWW #"$
% 软件对数据进行统计学分析"符 !),%$
% i/%$+ $ <* " Lb大 鼠 体 质 量 高 于 对 照 组
合正态分布的数据以均数 i标准差表示"两组间比 #/$
)J ! #l+$/(+" ) h%$%%" $ " 高 于 L' 大 鼠
较采用独立样本 #检验"三组间比较采用单因素方 "+$
)J! #l+$
"//" )h%$
%%"$ "肥胖成模率 +,$
+J+
差分析"并采用 OW^法进行两两比较#不符合正态 最终选择方法!"$ ! 高于对照组体质量均值 "%J$
分布的指标以中位数! )#0 "),0 $ 表示"两组间比较采 筛选出 Lb大鼠"剔除 L'大鼠! 图 "$ +
用独立样本 \=
55-
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?59
`/秩和检验")h%$
%0 为 &$
'!糖耐量变化
差异有统计学意义+ 高脂饲料喂养 ) 周后糖耐量出现异常"表现为
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5 血 糖 高 于 对 照 组 #,$
0J ! #l
&%结果
_/$
()&" )h%$
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/J! #l
&$
$!进食量和体质量变化 _#$
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( <1
只 ,&$
/J+ 高脂喂养 ( 周后"Lb组 +% A3
5("#% A3
5血
!",$
( ]##$
0 <1
;$ "随体质量增长进食量无明显变 糖分别高于对照组 /0$
+J! #l+$
//%" )h%$
%%"$ 和
化"对照组根据高脂饲料组进食量高值定量给食"两 /+$
)J! #l+$&&+" )h%$%%" $ " *M6高 于 对 照 组
组平均能量摄入分别为高脂饲料组 &/$
%+ HG
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;和 #"$
,J! #l+$
##0" )h%$%%"$ "全部大鼠均出现胰
对照组 ,($
0/ HG
=B1
;! 占高脂饲料组的 ()$
)J$ + 岛素抵 抗+ 高 脂 喂 养 "# 周 后" Lb组 +% A3
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高脂喂养前"高脂饲料组的体质量为!#"&$
%i A3
5 血糖分别高于对照组 #)$(J ! #l)$%((" )l
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($ "对照组的体质量为!#",$
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#$ <
#高脂饮 %$
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食 / 周后" 高 脂 饲 料 组 的 体 质 量 均 值 高 于 对 照 组 对照组 "+$
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异无统计学意 义""#% A3
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高脂饲料喂养 "# 周后"Lb大鼠的血清胰岛素 )h%$%%" $ # 肝 脏 重 量 比 对 照 组 高 "%J ! #l
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5$ 和口服葡萄糖后 )(+" )l%$
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5 血清胰岛素水平分别高于对照组 别#肝脏 指 数 ! #l)$0+0" )l%$%%" $ 和 肾 脏 指 数
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高于对照组大鼠的血清胰岛素! 图 /(表 "$ +
&$
0!组织病理结果
显微镜下显示"与对照组大鼠相比"Lb大鼠的
脂肪细胞体积明显变大(形态大小不一"( 只 Lb大
鼠中有 , 只 大 鼠 脂 肪 细 胞 内 可 见 泡 沫 细 胞 浸 润#
+%J的 肝 细 胞 出 现 大 小 泡 混 合 性 脂 肪 变 性" 并 有
0%J的大鼠!) 1
( 只$ 出现少量单核淋巴细胞浸润及
点灶状肝细胞坏死#胰腺可见胰岛数目增多(大小不 %)h%$
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张晓圆"等!高脂饲料诱导肥胖胰岛素抵抗大鼠模型的建立 ' 0+"'

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) J" 淘 汰 "%% $% J 出 现 肥 胖 胰 岛 素 抵 抗" "# 周 时 &/ $
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,& $
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$!建立肥胖胰岛素抵抗大鼠模型的条件和方法 型的高脂饲料配方经过了 #0 年的发展变化"已形成
本研究使用脂肪供能比为 )0J的高脂饲料喂 更合理的脂肪含量!)%J ]0%J脂肪供能比$ "在此
养 + 周龄 W^大鼠"建立肥胖胰岛素抵抗模型+ W^ 基础上添加蔗糖对糖代谢可产生更加严重的代谢紊
大鼠是常用于诱导肥胖胰岛素抵抗的大鼠"使用高 乱 )",* #)0J ! ^"#)0" $ 脂 肪 供 能 比 的 高 脂 饲 料 比
脂饲料喂养很容易在短时间内区分出肥胖易感和肥 +%J! ^"#)&#$ 脂肪供能比的高脂饲料含有更高的
)," "#" "0*
胖抵抗大鼠 + 刚离乳大鼠在高脂饮食下的 蔗糖! 高于 ")0J$ "更适合于建立肥胖和胰岛素抵
)"+*
体质量增长较快 "而中年或老年大鼠的体质量增 抗模型 )"(* "且饲料不至于过于松软"适口性更好+
长较慢"很难出现体质量差异 )"%* + 用于诱导肥胖模 关于 Lb和 L'大鼠的判断方法"目前常用的有

' 0+#'
普通饲料对照法和高脂饲料喂养后体质量排队剔除
法"前者按照高脂饲料喂养组大鼠体质量均值高于
对照组 "%J为 Lb"否则为 L'
喂养后将体质量从大到小排序"处于上 # 1
/ 的大鼠
为 Lb"处于下 " 1
/ 的大鼠为 L'
两种方法判定 Lb大鼠"结果显示"方法!"$ 的成模
率为 ,($
)J"方法!#$ 为 +,$
+J"筛选出的 Lb大鼠
体质量均值分别显著高于对照组 #"$
,J和 #/$
)J+
两种方法筛选出的 Lb大鼠体质量结果差异不大"均
已经超过对照组均值 #%J"所以本研究选用成模率
高的方法!"$"进一步观察肥胖胰岛素抵抗的情况+
本研究发现"高脂饲料喂养 ) 周后 ,&$
Lb大鼠出现糖耐量降低"( ]"# 周时糖耐量受损情
/J ]"%%$
况更加明显!&/$ %J的 Lb大鼠$ + "# 周
末胰岛素释放实验结果显示"各点胰岛素浓度均显
著升高""#% A3
5 时胰岛素浓度达到对照组的 +$
/ 岛素抵抗的关键 )#/* + 同时"肥胖会使脂肪组织巨噬
倍"并可见内脏脂肪升高"肝脏脂肪变性和炎性细胞
浸润"胰岛增大"发生病理性改变+ 同时"股动脉取
血在全自动生化分析仪上采用酶法检测空腹血浆葡
萄糖水平显著升高! 数据未列出$ + 以往研究显示"
高脂饲料喂养大鼠 # 周时首先出现胰岛素水平升
)&*
高 ") ]( 周时糖耐量降低"伴随肥胖和胰岛素敏
感指数降低"胰岛素钳夹实验表明葡萄糖灌注率显
)"%*
著降低 "但空腹血糖一般无明显降低
时间延长至 /# 周或 "% 个月"空腹血糖仅有轻度的
)"&*
升高"且个体差异较大
生首先表现为胰岛素水平升高"继而高胰岛素血症
更加显著"并出现糖耐量受损"依次出现 "#% A3
5(+%
A3
5 血糖值升高"最终可加重为空腹血糖受损+
本研究 "# 周时 "%%$
%J的 Lb大鼠各时间点的
血清胰岛素水平均高于对照组大鼠"说明 "# 周时存
在高胰岛素血症"而 LUXX结果只有 &/$
/J出现肥
胖胰岛素抵抗表现+ )(( 和 "# 周时对照组和 Lb组
的 *M6结果有下降趋势"可能是因为 LUXX测试时
使用血糖仪和试纸快速测血糖的方法存在系统误
差+ 因此"建议将测试方法标准化"如每次测试前校
准血糖仪(前后尽量由同一人操作等"确保数据准确
一致+ 本研究中胰岛素释放曲线出现了双峰和 "#%
A3
5 时分泌延迟升高"组织病理检查发现胰岛有代
偿性增生(体积增大"表明可能出现了胰岛素的代偿
性过度释放+
有研究显示"建立肥胖模型需要 , ]& 个月
本研究通过定量给对照组饲料(剔除 L'大鼠") 周
时建立 Lb大鼠模型+ 当 Lb大鼠的 LUXX显示明
显的糖耐量下降(胰岛素释放实验显示各时间点胰
北 京 大 学 学 报 ! 医 学 版 $
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XY! ZR*OXZW6T
RN6RW$ !V7
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岛素水平显著升高(个体的 *M6-
LUXX高于对照组
*M6-
LUXX均值者"即可判定肥胖胰岛素抵抗模型
)"#*
#后者是高脂饲料 建立+ 这 一 过 程 并 不 需 要 过 长 的 造 模 周 期") 周
(%J左右出现肥胖胰岛素抵抗"( ]"# 周可建立稳
)"/*
+ 本研究选用这 定的胰岛素抵抗模型+
本研究还发现"高脂饲料喂养的 L'大鼠 ) 周
末也有 /,$
0J出现糖耐量降低"表明高脂饲料本身
即可诱发胰岛素抵抗+ 而 Lb大鼠更容易产生胰岛
素抵抗"肥胖是独立于高脂饲料的一个胰岛素抵抗
的显著诱发因素 )"0* + 肥胖是一种低度慢性炎症状
态 )#"* "脂肪组织分泌促炎细胞因子"如肿瘤坏死因
/J 的 子 $! ?
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+ 等"最终诱发慢性炎症 )##* " 因此" 脂肪细
白介素-
胞(肝细胞内出现了肥胖引起的 炎 性 浸 润+ XNP$
对胰岛素信号传导有负调节作用"是联系肥胖和胰
细胞类型从 \# 型激活为 \" 型"导致促炎细胞因子
以及活性氧水平升高"诱导胰岛素抵抗 )#)* +
'$
&!应注意的问题
值得注意的是"因高脂饲料造模时间长"且高脂
饲料易导致进食量减少(肠胀气等问题"进而可能引
起动物抵抗力下降(易患病+ 因此"使用高脂饲料建
立肥胖胰岛素抵抗模型对饲养环境(动物质量(饲料
)0*
+ 将造模 质量及喂养等条件要求较高"应引起足够的重视+
本研究在造模期间"先后 / 批大鼠以高脂饮食
+ 因此"胰岛素抵抗的发 喂养 # ]/ 周时"个别大鼠开始出现轻微气喘"随后
陆续出现多只大鼠发病"气喘症状逐渐加重+ 发病
后大鼠进食量下降(体质量减轻"解剖发现肺部出现
散在出血点或纤维样实变"组织病理显示支气管周
围(肺泡腔内有淋巴细胞和中性粒细胞弥漫浸润"支
气管腔内积脓+ 多数大鼠发病 # ]) 周后症状逐渐
好转至消失"体质量和进食量恢复正常"但也有个别
大鼠死亡"出现类似症状时应尽快隔离病鼠避免传
染+ 究其原因"应注意在真实的 WQP级环境饲养"
确保饲养条件合格的基础上严控各项条件+
同样"饲料卫生安全问题应引起重视+ 本研究
第一批动物采用国内著名饲料公司生产的高脂饲
料"因镉超标 "% 倍以上"导致 ,% 多只大鼠先后死
亡+ 为避免这种问题"购买饲料时应索要饲料质量
和卫生检测报告+ 此外"高脂饲料易氧化变质"应在
低温条件下保存"并按需每日给食"保证饲料新鲜+
)#%*
+ 因肥胖大鼠后期体质量较大"尽量单笼饲养或每笼
两只"以保证足够的活动空间+
'$
'!局限性和展望
本研究因 ) 周和 ( 周时取血量较少"没有测定
张晓圆"等!高脂饲料诱导肥胖胰岛素抵抗大鼠模型的建立 ' 0+/'

胰岛素"为了更充分地判定胰岛素抵抗情况"应测定 7[3 54>B358 943

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要喂养更长时间观察+ 目前有关建立肥胖胰岛素抵 )"#* Z= 8383N" X@3 F= >B?O$Z3 < @- [=
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加系统和全面的研究确立一套建模的标准程序和方 )K * $卫生研究" #%"%" /&!#$ % "+# _"+)$
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参考文献
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