CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLGICO INDUSTRIAL Y SERVICIOS NO.

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Determinacin de Glucosa
Practica 1

Autores:

Mendoza Garca Elizabeth Martnez Herrera Brenda Martnez Villeda Jessica Matadamas Lpez Mercedes Mendez Len Ana Belen Montaez Nieves Jovana Yunuen Martnez Vega Alan David 6 B Turno Vespertino Valoracin del Metabolismo QBP Raquel Rodrguez Salas 28 de febrero de 2011

Grado y Grupo: Materia: Titular: Fecha de Entrega:

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Tabla de contenido
Introduccin ............................................................................................................................................. 2 Objetivos .................................................................................................................................................. 3 General .................................................................................................................................................... 3 Especficos .............................................................................................................................................. 3 Marco Terico.......................................................................................................................................... 4 Material, Equipo y Reactivos ................................................................................................................ 6 Material ................................................................................................................................................ 6 Equipo .................................................................................................................................................. 6 Reactivo ............................................................................................................................................... 6 Metodologa ............................................................................................................................................. 7 Preparacin de Curva de Calibracin del reactivo vs estndar .................................................. 7 Diagrama de flujo ........................................................................................................................... 7 Resultados Obtenidos ................................................................................................................... 8 Interpretacin de Resultados ....................................................................................................... 8 Determinacin de glucosa en una muestra sangunea ................................................................ 9 Diagrama de flujo ......................................................................................................................... 10 Resultados Obtenidos ..................................................................................................................11 Interpretacin de Resultados ......................................................................................................11 Conclusiones..........................................................................................................................................11 Bibliografa..............................................................................................................................................11

Practica 1

Metabolismo y Deteccin de glucosa en sangre

Introduccin
Los alimentos que consumimos da a da tienen que tener un proceso de transformacin previo a la asimilacin y aprovechamiento en nuestro organismo; dependiendo del tipo de alimento que consumamos, este tendr diferentes formas de ser transformado hasta su mnima expresin molecular, para ser as, metabolizado finalmente en las clulas que as requieran este compuesto. Para la obtencin de energa, los seres vivos utilizamos los carbohidratos, de los cuales, la glucosa es por excelencia el azcar a metabolizar y convertir a piruvato (sal del cido pirvico), para poder as, entrar en el ciclo de los cidos tricarboxilos y realizar la fosforilacin oxidativa, permitiendo entonces la respiracin celular y la obtencin de compuestos como el ATP (Adenosin Tri Fosfato) que provee a la clula de energa debido a los enlaces que posee entre sus elementos. Este cambio y rompimiento de unidades de azucares ms grandes, como el disacrido lactosa (compuesta por glucosa y galactosa) y el polisacrido almidn (largas cadenas de glucosa enlazadas entre s), se produce en los mamiferos en el pancreas, gracias a las enzimas que permiten tales procesos, estas enzimas son estimuladas por la hormona llamada insulina. Esta es producida por las clulas de Langerhans localizadas en los islotes del pncreas, y es la encargada de llevar las unidades de glucosa al aparato de Golgi y que ah sea sintetizado y metabolizado posteriormente en la mitocondria a travs del Ciclo de los cidos tricarboxilos o ciclo de Krebs. Como es evidente entonces, del buen funcionamiento tanto de esta hormona, como del rgano que la produce, es vital para que la glucosa que ingerimos y que se encuentra en el torrente sanguneo, se pueda aprovechar en el organismo y no causar enfermedades tales como la Diabetes Mellitus y el Sndrome metablico entre otras. Cabe destacar tambin que la cantidad de glucosa localizada en la sangre comprende un rango establecido como normal en condiciones de salud del individuo, ms esta puede incrementarse o disminuir en algunas condiciones o padecimientos. En el laboratorio clnico, el anlisis cuantitativo de la glucosa existente en la sangre perifrica, est comprendido dentro de las actividades consideradas como usuales o ms demandas por parte de la poblacin debido al incremento sustancial de enfermedades crnico-degenerativas relacionadas con disfunciones metablicas de este glcido. En el presente reporte de practica de laboratorio, se pondrn de manifiesto el fundamento, metodologa e interpretacin de resultados de la prueba de deteccin de glucosa en el tejido sanguneo, as como las posibles causas de que este presente valores fuera de los valores aceptados como normales para un ser humano.

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Objetivos General
El alumno obtendr los conocimientos, habilidades y destrezas necesarias para la prueba de deteccin de glucosa en sangre, as como la interpretacin de la misma.

Especficos
El alumno reforzar u obtendr los conocimientos segn sea el caso de los siguientes aspectos relacionados con la deteccin de glucosa en sangre: Toma de muestra de tejido sanguneo Determinacin de la cantidad de glucosa existente en el suero de un paciente Elaboracin de una curva de calibracin de concentracin en base a un estndar. Determinacin de la concentracin de glucosa en base a una muestra diluida. Interpretacin y emisin de Diagnstico de la prueba elaborada.

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Metabolismo y Deteccin de glucosa en sangre

Marco Terico
Las enzimas amilasa y disacaridasas, liberadas por las glandulas salivales, intestino delgado y pancreas escinden el almidn, que es el polisacrido ms importante de los hidratos de carbono que se ingieren, y los disacridos (maltosa, lactosa y sacarosa), a hexosas (glucosa, fructosa y galactosa) a pentosas. Los monosacridos son absorbidos por el intestino delgado por simple difusin (gradiente de concentracin) y por transporte activo (sodiodependiente), pasando la mayor cantidad a la sangre portal para su transporte al higado. Las enfermedades gastrointestinales que reducen la superficie de absorcin o las enzimas descritas, disminuyen la absorcin de hexosas. La tiroxina acelera la absorcin de las hexosas de tal manera que las alteraciones y enfermedades de la funcin tiroidea, al igual que de la funcin adrenocortical, pueden afectar la velocidad y cantidad de hexosas absorbidas. El metabolismo periferico de los carbohidratos puede considerarse casi por completo en trminos de glucosa, ya que la utilizacin de fructosa y galactosa por los tejidos extrahepticos es mnima. La glucosa es oxidada a D-gluconato por la glucosa oxidasa (GOD) con la formacin de una cantidad equimolar de peroxido de hidrgeno. En presencia de peroxidasa (HPOD), la 4-amino-antipirina (4-AAP) y el p-Hidroxibencensulfonato (p-HBS) son oxidados por el peroxido de hidrgeno para formar un compuesto de quinoeimina de color rojo. La intensidad del color en la reaccin es proporcional a la cantidad de glucosa en la muestra. Los mtodos enzimticos para la determinacin de la glucosa son los que dan el mximo grado de especificidad en la estimacin de la glucosa verdadera en sangre. La glucosaoxidasa cataliza la oxidacin de la glucosa a cido glucnico y perxido de hidrgeno. El perxido de hidrogeno producido por la glucosa-oxidasa se determina en presencia de una peroxidasa que cataliza la transferencia del oxgeno del perxido (H2O2) a un aceptor cromognico de oxgeno, como por ejemplo la orto-toluidina o la orto-dianisidina, como se muestra a continuacin:

Glucosa Glucosa oxidasa Gluconolactona

cido glucnico

H2O2

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El segundo paso que implica la peroxidasa es menos especfico. Diversas sustancias reductoras inhiben las reacciones, compitiendo con el cromgeno por el oxigeno del H 2O2 . Los avances recientes en la tecnoloia evitan el paso peroxidasa midiendo directamente la cantidad de O2 generado por la glucosa-oxidasa. Un mtodo de hexocinasa proporciona el grado maximo de especificidad para determinar la cantidad verdadera de glucosa hemtica.

1. Glucosa + ATP

hexocinasa

glucosa-6-fosfato (G-6-P) + ADP

2. G-6-P + NADP

G-6-P-deshidrogensa

6 fosfogluconolactona + NADH + H +

Para cada mol de reduccin de glucosa se reduce un mol de NADP a NADPH, que se mide espectronicamente.

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Metabolismo y Deteccin de glucosa en sangre

Material, Equipo y Reactivos

Material

3 2 1 1 1 1

tubos de ensaye de 12 x 25 ml. cubetas o celdillas para espectrofotmetro Gradilla pipeta automtica de 100 ml pipeta serolgica de 1 ml de 1/10 Equipo vacutainer para extraccin de muestra sangunea con tubo tapn rojo (sin anticoagulante).

Equipo

1 1 1
Reactivo

Espectrofotmetro Centrfuga Bao maria

1 1

reactivo de glucosa enzimtica incubado previamente a 37C Solucin estandar de glucosa

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Metodologa
Preparacin de Curva de Calibracin del reactivo vs estndar
1. Colocar 1 ml de reactivo en la celdilla previamente limpia. 2. Montar un blanco de reactivo y estndar en una celdilla 3. Montar un tubo con 10microlitros de muestra y 1 ml de reactivo. 4. Montar 3 pilotos 1:25, 1:50, 1:100, con reactivo y estndar 5. Para los pilotos, llenar el primer tubo (25) con 0.5 ml de reactivo y 0.5 de estndar. 6. El segundo tubo (50),llenar con 0.5 ml de reactivo y agregar 0.5 ml de la dilucin hecha previamente 7. Para el tercer tubo (100) montar con 0.5 ml de reactivo y 0.5 ml del estndar. NOTA: INCUBAR TODOS A 37C X 5 MINUTOS. 8. Leer a 500nm e interpretar. 9. Realizar clculos correspondientes y reportarlos en una grfica (curva de calibracin)

Diagrama de flujo

Practica 1

Metabolismo y Deteccin de glucosa en sangre

Resultados Obtenidos
Concentracin Absorbancia Constante (mg/dl) 25 0.129 0.001 50 0.169 0.001 100 0.231 0.001
120 100 80 Dilucin 60 40 20 0 0.129 0.169 Absorbancia 0.231 Concentracin (mg/dl)

Interpretacin de Resultados Como es evidente en el diseo de la curva, esta representa una constante fija debido a los siguientes argumentos: La relacin existente entre la concentracin del reactivo y la absorbancia obtenida es de tipo proporcional directa, la cual est definida por la siguiente igualdad =

En donde k=representa la constante de incremento o decremento que la relacin entre las dos variables; x (Incremento de Absorbancia) y(Dilucin). Al obtener el valor k, este muestra un valor aproximado de 0.001 en relacin con el incremento de la absorbancia con la dilucin en los valores analizados.

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Determinacin de glucosa en una muestra sangunea

1. Tomar una muestra sangunea a un paciente con una ayuno mximo de 12 horas, con un tubo vacutainer sin anticoagulante. 2. Centrifugar la muestra a 3000 rpm x 5 minutos 3. Separar el suero en un tubo de ensaye limpio 4. Tomar tres tubos de ensaye y proceder con lo siguiente: Tubo Reactivo Muestra Estndar Blanco 1.0 ml -------------Muestra 1.0 ml 10.0 microlitros ------Patron 1.0 ml -----------10.0 microlitros

NOTA: EL REACTIVO Y LAS MUESTRAS DEBEN DE ESTAR PREINCUBADAS A 37C POR 5 MINUTOS. 5. Mezclar bien. 6. Incubar a 37c x 5 minutos. 7. Leer en el espectrmetro las absorbancias a 500nm antes de 15 minutos transcurridos de la incubacin. 8. Reportar en mg/dl.

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Metabolismo y Deteccin de glucosa en sangre

Diagrama de flujo

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Resultados Obtenidos
Datos Paciente: Femenino de 22 aos sin antecedentes de hiperglucemia, hipoglucemia u obesidad notoria. Absorbancia Muestra 0,028 Concentracin 335, 71 mg/dl

Patrn 0,094 Valores de Referencia

70-105 mg/dl

Interpretacin de Resultados
Como es evidente, en los resultados obtenidos y en base a los datos del paciente, se puede afirmar que la concentracin de glucosa obtenida en la muestra de la paciente no coinciden con sus datos clnicos ni con los valores de referencia, ya que estn sumamente incrementados, esto quiz tenga causas de error humano tales como un periodo inadecuado de incubacin, lectura errnea o mal manejo del equipo y los reactivos.

Conclusiones
En base a los anlisis realizados y los resultados obtenidos, no se puede llegar a la emisin de un resultado definitivo en cuanto a la determinacin de glucosa de la paciente por las consideraciones antes mencionadas en la interpretacin de resultados, y derivado de esto, se recomienda una segunda toma de tejido sanguneo con las condiciones idneas para la prueba y la utilizacin correcta del material y equipo para la misma.

Bibliografa
Glucosa enzimtica por CRILIC (Inserto de Prueba Diagnstica) Todd-Stanford, Diagnstico Clnico por el Laboratorio, Editorial Salvat, 1978, Barcelona Espaa, 1 Edicin.

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