ŞENTAŞ AFLATOKSİN B1 KALİTE ve GIDA GÜVENLİĞİ YÖNETİM SİSTEMİ

ANALİZİ Doküman No PR06T13

(Kolonlu)TALİMATI
Yayın Tarihi 05/05/2023

1.ÖRNEK HAZIRLAMA
a. 25 g ezilmiş incir numunesi alınır.
b. 125 ml %70’lik metanol ilave edilir.
c. 5 dakika stomacher ile karıştırılır.
d. Karışım Whatman No.4 filtre kağıdı ile süzülür,numune analize hazırdır.
2.KOLONDAN GEÇİRME İŞLEMİ (Elüe Hazırlanması)
a. Immunoaffinity kolonun kırmızı kapağının alt bölümü kesilerek düzeneğe
yerleştirilir.
b. Kolondan 5 ml PBS çözeltisi geçirilir.
c. 5 ml filtrat alınır,15 ml PBS eklenir.
d. 20 ml seyreltilmiş filtrat kolondan 3ml/dk hızla geçirilir.
e. Kolon daha sonra 20 ml distile su geçirilerek içindeki sıvı tamamen atılır.
f. Kolona 1ml saf Metanol enjekte edilir ve kendi halinde akışa bırakılarak
toksinler elue edilir.
g. Eluata 2 ml distile su ilave edilir.Toplam 3 ml eluat elde edilir.
h. Eluatın 50µ’ si ELISA ‘da kullanılır.(Bu durumda katsayı 0.3’dür.)
3. ELİSA
a. Bütün standartlar ve numuneler için yeterli sayıda kuyucuğu mikrokuyucuk kas-
etine yerleştirilir.Yerleşim sırası not edilir.
b. Ayrı kuyucuklara 5’şer µl standart solüsyonu veya hazırlanan numunelerden
eklenir.Her standart ve numune için yeni pipet ucu kullanılır.
c. Kuyucuklara 50l enzim konjugat (kırmızı kapak) eklenir.
d. Kuyucuklara 50l anti aflatoxin antikor solüsyonu (siyah kapak) eklenir.Pleyti
elle nazikçe karıştırılır ve oda ısısında (20-25 ºC)30 dakika inkübe edilir.
e. Kuyucukları 3’er defa hazırlanan yıkama solüsyonu ile yıkanır.
f. Kuyucuklara 100µl substrat/kromojen (mavi kapak )eklenir.Pleyti elle nazikçe karıştırılır
ve oda ısısında (20-25 ºC) karanlıkta 15 dakika inkübe edilir.
g. Kuyucuklara 100µl stop solüsyonu eklenir.Pleyti elle hafifçe çalkalanır ve 450 nm dalga
boyunda absorbansları ölçün.Stop solüsyonu ilavesinden 15 dakika içinde okutun.
HAZIRLAYAN:Laboratuvar Sorumlusu ONAY : Revizyon No 00

Revizyon T. ---
7
Sayfa No 1/1