Machine Translated by Google

235

Sebuah publikasi dari

TRANSAKSI TEKNIK KIMIA

Asosiasi Teknik Kimia
VOL. 49, 2016 Italia Online di
www.aidic.it/cet

Editor Tamu: Enrico Bardone, Marco Bravi, Tajalli Keshavarz

Hak Cipta © 2016, AIDIC Servizi Srl,
ISBN 978-88-95608-40-2; ISSN 2283-9216 DOI: 10.3303/CET1649040

Peningkatan Produksi Biomassa dan Dha di Semi-

Kultur Berkelanjutan Aurantiochytrium sp NYH-2
Andrés F. Barajas-Solanoa*, Masaki Yoshidab , Makoto M Watanabeb
A
Universidad de Santander UDES Program Teknik Lingkungan, Kelompok Penelitian Lingkungan Terapan - GAIA,
Bucaramanga, Kolombia. An.barajas@mail.udes.edu.co.
B
Sekolah Pascasarjana Ilmu Kehidupan dan Lingkungan, Universitas Tsukuba, Tsukuba, Jepang
an.barajas@mail.udes.edu.co

Aurantiochytrium sp telah diakui sebagai salah satu sumber asam lemak bernilai tinggi (FA) yang paling sesuai
termasuk asam docosahexaenoic (DHA), asam docosapentaenoic, asam arakidonat, asam eicosapentaenoic
(EPA), dan FA jenuh; namun perlu dilakukan peningkatan produksi biomassa total dan FA bernilai tinggi khususnya
DHA.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk meningkatkan produksi biomassa dan DHA pada strain novel
Aurantiochytrium sp NYH-2 melalui optimalisasi waktu kultur (2, 3 dan 5 hari) dan penghilangan kultur (20, 50 dan
80% v/ v) menggunakan 23 desain percobaan.
Ditemukan bahwa untuk meningkatkan produksi biomassa, sejumlah besar media budidaya harus diganti (>90%),
namun setelah siklus ketiga produksi biomassa berkurang dari 10 g/L menjadi 9 g/L; Demikian pula dalam kondisi
yang sama, produksi lipid dan DHA meningkat dari 15% menjadi 20% (b/b) dan dari 3 menjadi 5% (b/b) masing-
masing dalam 3 siklus pertama dan kemudian berkurang pada siklus 5. Hasil akhirnya menunjukkan bahwa pada
proses semi kontinyu alga hanya berfungsi 3 siklus (9 hingga 12 hari) dan untuk meningkatkan total biomassa lipid
dan produksi DHA, volume media kultur antara 80-92% harus dibuang setiap 3-4 hari.

1. Perkenalan
Mikroalga telah mendapat banyak perhatian selama 20 tahun terakhir, tidak hanya karena potensi bioteknologinya
namun juga karena relevansinya terhadap lingkungan dan ekologi (Lee Chang dkk. 2013); selama bertahun-tahun
penelitian telah banyak terfokus pada beberapa genera dan spesies yang telah menunjukkan minat industri dan
ilmiah yang besar, namun terdapat keanekaragaman besar yang masih belum dapat ditentukan, contoh di atas
adalah Thraustochytrid (Labyrinthulomycetes), mikroorganisme ini adalah protista mirip jamur heterotrofik obligat
yang dapat ditemukan dimana-mana di kolom air dan sedimen di lingkungan laut (Barclay et al. 1994), dan bahkan
dianggap non-fotosintesis (Armenta dan Valentine 2013) pada kenyataannya dianggap “alga” berdasarkan bukti
molekuler yang menunjukkan bahwa cabang dari posisi utama Heterokontophyta, yang meliputi alga coklat dan
diatom. Thraustochytrid memainkan peran penting dalam ekosistem laut karena kemampuannya bertindak sebagai
bakterivora, detritivora, dan parasit (Maas et al. 1999; Mo et al. 2002; Raghukumar 2002).
Thraustochytrids menetap di daun-daun yang gugur, dan pelet tinja zooplankton dan melakukan dekomposisi
enzimatik ekstraseluler dari substrat organik kompleks untuk penyerapan nutrisi (Findlay et al. 1986; Bremer 1995),
di beberapa tempat (khususnya perairan pantai dan sedimen) telah ditemukan kepadatannya tinggi, temuan ini
menunjukkan bahwa mikroorganisme ini memainkan peran besar dalam pergantian karbon (Santangelo et al.
2000; Bongiorini et al. 2004); juga Thraustochytrid merupakan komponen penting dari jaring makanan detrital,
karena kandungan asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) alami yang tinggi seperti asam docosahexaenoic (DHA),
asam docosapentaenoic (DPA) dan asam Eicosapentaenoic (EPA); karena karakteristik khusus ini Thraustochytrid
diakui sebagai sumber bioteknologi baru untuk produksi produk bernilai tinggi (Kobayashi et al., 2011). DHA telah
mendapat banyak perhatian karena efek menguntungkannya pada perkembangan saraf bayi, pengurangan
kejadian kardiovaskular, hipertensi, arthritis, sklerosis dan trombosis (Ren et al, 2014; Sun et al., 2014), berkat ini
pasar global telah berkembang signifikan dan diperkirakan pada tahun 2016 penjualan DHA mencapai nilai $34,7
miliar. Untuk produksi DHA, sumber karbon yang disukai adalah glukosa, tetapi glukosa untuk minyak

Silakan kutip artikel ini sebagai: Barajas-Solano A., Yoshida M., Watanabe M., 2016, Peningkatan produksi biomassa dan dha pada
kultur semi kontinyu aurantiochytrium sp nyh-2, Transaksi Teknik Kimia, 49, 235-240 DOI: 10.3303/CET1649040
Machine Translated by Google

236

sangat mahal, karena dua faktor: tingginya biaya sumber karbon ini dan rendahnya konversi menjadi DHA (10-15%),
oleh karena itu dalam beberapa tahun terakhir penelitian berfokus pada penerapan sumber karbon berbiaya rendah
dan optimalisasi variabel seperti waktu kultur dan konsentrasi nutrisi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk pertama
kalinya meningkatkan produksi biomassa dan DHA pada strain novel Aurantiochytrium sp NYH-2 melalui optimalisasi
waktu kultur dan penghilangan kultur.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1 Budidaya mikroalga

Aurantiochytrium NYH-2 diisolasi dari kawasan pesisir bakau di Prefektur Okinawa, Jepang. Organisme dipelihara pada
cawan agar yang berisi cawan agar GTY termodifikasi yang mengandung 20 g glukosa, 10 g tripton, 5 g ekstrak ragi,
18 g garam laut alami.
2.2 Desain Eksperimen

Untuk menguji pengaruh waktu kultur dan penghilangan kultur, 23 Desain Komposit Pusat (Tabel 1) diterapkan
menggunakan STATISTICA® 7.0. Untuk setiap pengujian, alga dikultur sebelumnya dalam labu berbentuk kerucut 500
mL yang berisi 200 mL media cair GTY dengan pengocokan berputar (100 rpm) pada suhu 25°C selama tiga hari.
Setelah 3 hari 1 mL diinokulasi pada 200 mL media GTY segar dan dikultur sesuai dengan desain percobaan, setelah
waktu yang ditentukan untuk setiap percobaan selesai, sejumlah media untuk setiap percobaan dikeluarkan dan diganti
dengan media segar, ini Proses diulangi sampai selesai 4 siklus.

Tabel 1: Variabel yang diperoleh untuk Desain Eksperimen 23

Contoh 1 23 4 5(C) 6 7 8 9 10(C) 20
Penghapusan 20 80 80 50 7,57 92,4 50 50 50
kultur (% v/v)
Waktu budaya 3 53 5 4 4 4 2.6 5.4 4
(hari)

2.3 Analisis lipid

Setelah setiap siklus, sejumlah media tertentu dikeluarkan dan biomassa dipanen dengan sentrifugasi (3400 rpm, 20
menit, 20ºC) dibilas dua kali dengan air suling dan kemudian diliofilisasi dan ditimbang. Jumlah total lipid dan asam
lemak diukur menurut Nakazawa et al (2012). Secara singkat, 50 mg alga kering direndam dalam kloroform:metanol
(2:1 v/v). Asam lemak ditransmetilasi dari ekstrak menggunakan 14% BF3
dan asam lemak teresterifikasi diekstraksi menggunakan n-heksana. Ekstrak akhir diaplikasikan pada GC-FID
(Shimadzu GC-2010) yang dilengkapi dengan kolom kapiler DB-5MS (diameter dalam 30 m 0,25 mm; ketebalan film
0,25 mm; J&W Scientific, Agilent Technologies Japan, Ltd). Program suhu dinaikkan dari 130°C menjadi 270°C dengan
peningkatan 20°C/menit. Puncak diidentifikasi menggunakan standar otentik metil ester asam lemak.

3. Hasil dan Pembahasan

Hasil produksi biomassa (gambar 1) menunjukkan bahwa waktu budidaya tidak lebih dari 4 hari ditambah dengan
pertukaran media budidaya yang lebih besar akan meningkatkan konsentrasi biomassa hingga 10 g/L (produktivitas 2
g/L*d-1), hasil ini sesuai dengan hasil yang dicapai . seperti yang dilaporkan oleh Hong et al (2011) dan Lee Chang et
al (2013) dimana konsentrasi awal glukosa yang tinggi meningkatkan produksi biomassa dan lipid selama 49 jam
pertama; namun, kadar glukosa substrat setinggi 100 g/L mengakibatkan terhambatnya produksi biomassa pada strain
Aurantiochytrium (Yaguchi dkk. 1997; Wong dkk. 2008).
Machine Translated by Google

237

12,00

10,00

8,00 1
9
6,00
iB
assamo/)gL(

3
7
4,00 8
2
2,00 4
65
0,00
01234
Siklus

Gambar 1: Produksi biomassa selama 4 siklus pertukaran budaya

Menurut grafik Pareto (Gambar 2, kanan), variabel yang paling signifikan adalah penghilangan kultur, terlebih lagi
permukaan respon (Gambar 2, kiri) menunjukkan bahwa nilai konsentrasi biomassa yang lebih besar memerlukan
pertukaran media kultur yang lebih besar (hingga 90%) dan produksi. kali antara 2-3 hari.

Gambar 2. Respon permukaan (kiri) dan Diagram Pareto untuk produksi biomassa

25

1
20

9
15
3
10
)/ib
dip% L(

5
8

0
01234
Siklus
Gambar 3: produksi lipid selama 4 siklus pertukaran kultur
Machine Translated by Google

238

Hasil untuk konsentrasi Lipid (gambar 3) menunjukkan bahwa waktu kultur tidak lebih dari 4 hari ditambah dengan
pertukaran media kultur yang lebih besar akan meningkatkan konsentrasi lipid hingga 20% b/b; namun, setelah siklus
2 konsentrasi lipid menurun drastis hingga 17% pada siklus 3 dan akhirnya 15% (b/b) pada siklus 4. Menurut grafik
Pareto (Gambar 4, kanan) variabel yang paling signifikan adalah penghilangan kultur, terlebih lagi permukaan respons
(Gambar 4, kiri) menunjukkan bahwa nilai produksi biomassa yang lebih besar memerlukan pertukaran media budidaya
yang lebih besar (hingga 90%) dan waktu produksi antara 2-3 hari.

Gambar 4. Respon permukaan (kiri) dan Bagan Pareto untuk produksi lipid

Literatur untuk strain Aurantiochytrium yang berbeda berfokus pada optimalisasi sumber potensial karbon, nitrogen,
dan konsentrasi elemen jejak serta variabel lain seperti suhu, pH dan pengadukan; namun hanya sedikit penelitian
yang berfokus pada penentuan kemungkinan waktu kultur maksimum untuk alga ini. Studi seperti yang dikembangkan
oleh Lee Chang (2013) menunjukkan bahwa dalam sistem fed-batch Aurantiochytrium dapat tumbuh selama 3 hari,
yang lain seperti Gao et al (2013) telah menghasilkan hingga 6 hari; namun, Huang dkk (2012) menemukan bahwa
setelah 5 hari produksi biomassa dan DHA langsung menurun.

6
1
5
9

4 3

7
3
%D
e
ArH
)/ta B(

8
2 2
4
1
6
0 5 (C)
01234
Siklus
Gambar 5: Produksi DHA selama 4 siklus pertukaran budaya

Berbeda dengan variabel peningkatan konsentrasi biomassa dan lipid, sintesis DHA (gambar 5) memerlukan
kultur antara 3 hingga 4 hari dan pertukaran media hingga 90%; selanjutnya perbedaan lain antara
DHA dan total lipid ditunjukkan pada grafik Pareto (gambar 6, kanan) yang menunjukkan bahwa waktu kultur merupakan variabel yang
signifikan
Machine Translated by Google

239

Gambar 6. Respon permukaan (kiri) dan Diagram Pareto untuk produksi biomassa

Ini adalah percobaan pertama dimana media aurantiochytrium sp yang habis dihilangkan dan diubah dengan kultur media
segar, biasanya alga ini telah diuji pada kultur batch atau fed-batch; namun media dikeluarkan dari Dalam proses semi
kontinyu, alga hanya berfungsi 3 siklus (termasuk siklus 0), juga karya ini menyajikan untuk pertama kalinya proses
budidaya yang melebihi 6 hari budidaya. Wu & Lin (2003) menemukan bahwa dengan menggunakan 27,98 g/L glukosa,
4,52 g/L ekstrak ragi dan 4 hari kultur, konsentrasi DHA dapat menjadi 0,516 g/L (Efisiensi 3,68%) Sebaliknya, ini Studi
menemukan konsentrasi DHA 0,46 g/L menggunakan 18 g/L glukosa, 5 g/L ekstrak ragi dan 4 hari (Efisiensi 4,31%), ini
merupakan pengurangan signifikan pada konsentrasi glukosa yang dibutuhkan tanpa mempengaruhi waktu produksi (4
hari).

4. Kesimpulan

Hasilnya memungkinkan kita untuk menyimpulkan bahwa untuk menjaga kestabilan produksi kultur Aurantiochytrium sp
dengan konsentrasi biomassa 8-10 g/L, 15-20% b/b lipid, dan hingga 5% b/b DHA, diperlukan kultur volumen antara
75-90% (v/v) harus dihilangkan setiap 2-3 hari selama total waktu 12 hari, karena setelah siklus 4 bahkan ketika hampir
90% media segar ditambahkan alge tidak akan tumbuh, ini masih tetap ada sebagai hambatan penting yang harus dipelajari
lebih cermat untuk memahami proses biokimia yang membatasi alga ini.

Ucapan Terima Kasih

Kami sangat berterima kasih kepada MSc. Junichi Ito dan Dr Junko Ito dari Universitas Tsukuba atas bantuan teknisnya
dalam ekstraksi lipid dan preparasi sampel GC. Terima kasih juga karena MSc. Iwashima Hinako dan MSc. Kazuki Kato
dari Universitas Tsukuba atas bantuannya dalam memelihara thraustochytrids dan persiapan kultur. Kami ingin mengucapkan
terima kasih yang tulus kepada anggota Laboratorium Watanabe Universitas Tsukuba atas dukungan baik mereka.
Penelitian ini didukung oleh pendanaan JST CREST, Departamento Administrativo de Ciencia, Tecnología e Innovación
COLCIENCIAS, Kolombia untuk program beasiswa Francisco José de Caldas untuk mendukung gelar doktor PhD nasional
dan Universidad de Santander UDES.

Referensi

Armenta R., Valentine M., 2013, Minyak Sel Tunggal sebagai Sumber Asam Lemak Omega-3: Tinjauan Kemajuan Terkini.
Kimia Minyak J.Am (JAOCS), 90(2), 167.
Bongiorini L., Pignataro L., Santangelo G., 2004, Thraustochytrids (protista fungioid): suatu hal yang belum dijelajahi
komponen mikrobiota sedimen laut. Sains 68 Maret, 43–48.
Bremer GB, Talbot G., 1995, Aktivitas enzim selulolitik pada protista laut Schizochytrium aggregatum.
Bot. 38 Maret 37–41
Findlay RH, Fell JW, Coleman NK dan Vestal JR (1986): Indikator biokimia peran jamur dan thraustochytrid dalam sistem
detrital mangrove. Dalam: Moss ST(ed.):Biologi Jamur Laut. hal.91–103.
Pers Universitas Cambridge.
Machine Translated by Google

240

Huang TY, Lu WC, Chu IM, 2012, Strategi fermentasi untuk memproduksi asam docosahexaenoic di Aurantiochytrium
limacinum SR21 dan meningkatkan proporsi C22:6 dalam total asam lemak. sumber daya hayati. Teknologi. 123, 8–14.

Kobayashi T., Sakaguchi K., Matsuda T., Abe E., Hama Y., Hayashi M., Honda D., Okita Y., Sugimoto S., Okino N., Ito M.,
2011. Peningkatan asam eicosapentaenoic dalam thraustochytrid melalui ekspresi gen desaturase asam lemak D5 yang
digerakkan oleh promotor thraustochytrid ubiquitin. Aplikasi. Mengepung. Mikrobiol. 77, 3870–3876.

Maas PAY, Kleinschuster SJ, Dykstra MJ, Smolowitz R., Parent J, 1999, Karakterisasi molekul QPX (Quahog Parasite
Unknown), patogen Mercenaria mercenaria. J Shellfish Res 18(2):561–567 Mo C., Douek J., Rinkevich B., 2002,
Pengembangan strategi PCR untuk identifikasi thraustochytrid berdasarkan urutan 18S rDNA. Mar Biol 140(5):883–889
Nakazawa A., Matsuura H., Kose R., Kato S., Honda D.,
Inouye I., Kaya K., Watanabe MM, 2012, Optimalisasi produksi biomassa dan asam lemak oleh Aurantiochytrium sp. regangan
4W-1b. Procedia Lingkungan Sci 15, 27-33

Raghukumar S., 2002. Ekologi pelabuhan laut, Labyrinthulomycetes (thraustochytrids dan

labirin). Euro J Protistol 38(2):127–145
Ren LJ, Sun GN, Ji XJ, Hu XC, Huang H. 2014. Pergeseran komposisi fraksi lipid selama lipid
akumulasi dan turnover pada Schizochytrium sp. Teknologi Sumberdaya Hayati. 157:107-13.
Santangelo G., Bongiorni L., Pignataro, L. 2000, Kelimpahan thraustochytrid dan protozoa bersilia di pantai berpasir Mediterania
ditentukan dengan metode langsung yang lebih baik. Mikroba Aquat Ekol 23, 55–61.
Sun LN, Ren LJ, Zhang XY, Ji XJ, Yan JC, Huang H., 2014, Efek diferensial dari keterbatasan nutrisi pada konstituen biokimia
dan produksi asam docosahexaenoic Schizochytrium sp . sumber daya hayati. Teknologi. 159, 199–206.

Wu ST, Lin LP 2003, Penerapan metodologi permukaan respons untuk mengoptimalkan produksi DHA oleh
Skizochytrium sp. SR31. J. Kimia Makanan; 27:127–39.