VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR HPLC
PARA LA CUANTIFICACIÓN DE VITAMINA B6 Y
METOCLOPRAMIDA HCl EN JARABE Y GOTAS
Gil Elsy*, Sandoval Leonard.
Departamento de Validación, Gerencia de Aseguramiento de la Calidad, Laboratorio Plusandex C.A, El Vigía,
Mérida, Venezuela.
*Validacion@plusandex.com
Introducción
La Metoclopramida HCl junto a la Vitamina B6
son principios activos utilizados para prevenir
las nauseas y el vómito en pre y post
operatorios, inducidos por quimioterapia,
radioterapia y migrañas agudas, en niños y
adultos. En las monografías oficiales no existe
un método analítico que permita el análisis
simultáneo de estos compuestos, es por esta
razón que se propone realizar la validación del
método analítico de desarrollo interno, ya que
es el soporte documental para asegurar
resultados óptimos al utilizar una metodología,
considerando lo establecido en la Farmacopea
Estadounidense 42 capítulo <1225>, donde
indica los ensayos necesarios para que pueda
llevarse a cabo dicha propuesta.
Objetivos
Validar el método analítico por HPLC para la
cuantificación de Vitamina B6 y Metoclopramida
HCl en jarabe y gotas.
Materiales y métodos
Para la validación de la metodología se
utilizaron dos cromatógrafos líquidos de alta
resolución marca Agilent modelo 1260 y 1220,
para la separación se utilizó una columna
Waters Symmetry C18, 4,0 mm x 250 mm (5
µm). Para el diluyente se utilizó ácido fosfórico
0,01 M, y en la fase móvil acetato de sodio,
acetonitrilo, hidróxido de tetrametilamonio en
agua al 25% y ácido acético glacial, el flujo de
la fase móvil fue de 1,5 mL/min, con una
inyección de 20 µL y una longitud de onda de
320 nm. Todas las muestras fueron filtradas
antes de ser inyectadas en el cromatógrafo con
membranas de filtración de nylon de 4,5 µm. Se
utilizaron patrones de trabajo de Vitamina B6 y
Metoclopramida HCl vigentes.
Referencias: United States Pharmacopeial Convention. (2019). United States Pharmacopeia. United States Pharmacopeial Convention,
Ed. 42. <1225>: 8387.
Resultados y discuciones
Se obtuvo en los ensayos realizados pare el jarabe: en la Vitamina
B6 una repetibilidad 0,46%, precisión intermedia 0,57%, para la
Metoclopramida HCl repetibilidad 0,49%, precisión intermedia 0,55%.
En exactitud se consiguió un % de recobro del 100,00% en vitamina
B6 y 100,78% en Metoclopramida HCl. En la linealidad se alcanzó un
coeficiente de determinación mayor a 0,99 para ambos compuestos.
En la especificidad se encontró que, al exponerse térmicamente, hay
un % de degradación mayor que por hidrólisis ácida y básica. La
robustez con variabilidad de pH demuestra que el método es robusto
en un rango de pH (6-7) para la Vitamina B6, pero no para la
Metoclopramida HCl, el método es robusto a diferentes
concentraciones de hidróxido de tetrametilamonio en agua al 25%
para ambos principios activos. El patrón combinado presenta una
estabilidad de 48 h, las muestras son estables en un tiempo de 2 h.
En los ensayos realizados a las gotas para la Vitamina B6 se tiene
una repetibilidad de 0,28%, precisión intermedia 0,28%,
Metoclopramida HCl repetibilidad 0,41%, precisión intermedia 0,40%.
En exactitud se ganó un % de recobro del 100,89% para vitamina B6,
100,08% para Metoclopramida HCl. En la especificidad se encontró
que, al exponerse térmicamente, hay un % de degradación mayor
que por tratamientos de hidrólisis ácida y básica en ambos
compuestos. La robustez con variabilidad de pH demuestra que el
método es robusto en un rango de pH (6,5-7,0) para ambos
compuestos, el método es robusto a diferentes concentraciones de
hidróxido de tetrametilamonio en agua al 25% para Vitamina B6, para
la Metoclopramida HCl no es robusto a diferentes concentraciones.
Las muestras son estables en un tiempo de 1 h.
Figuras
Figura 1. Exactitud del estándar de Vitamina B6 y Metoclopramida
HCl.
Figura 2. % Potencia Vs Tiempo de jarabe y gotas respectivamente.
Conclusiones
El método analítico es preciso, lineal, exacto, especifico y robusto, el
patrón combinado y las muestras son estables el tiempo suficiente
para cumplir con los análisis requeridos en control de calidad.