PESQUISA rey DOI:10.4034/RECS 2011.15.02.14 ‘os Bioquimicos e Hematologicos de ar e Camundongos Swiss do Biotério Professor Thomas George ical and Hematological Parameters of Wistar Rats and the Professor Thomas George Animal Laboratory Volume 15 Numero 2 Paginas 209-214 2011 ISSN 1416-2177 LESSANDRA CAMILLO DA SILVEIRA CASTELLO BRANCO! MARGARETH DE FATIMA FORMIGA MELO DINIZ’ REINALDO NOBREGADE ALMEIDA? HOSANA BANDEIRA SANTOS* KARDILANDIA MENDES DE OLIVEIRA® JOSUE DO AMARAL RAMALHO* JADSON GOMES DANTAS* como objetivo estabelecer pardmetros bioquimicos @ 5 provenientes do Biotério Ho Laboratério de Tecnologia jersidade Federal de Paraloa ram-s0 0 perfil hamatoldgica, iaquetas, # a determinagao tes plesmaticos.glicose, ura, creatinina, colesterol total, trigliceridoos, acido urico, proteinas totais © sieiase alcalina, ransamnases, ‘Sodio, polassio, clo e magnesio, Foram utlizados ratos| Wistar albinos e camundongos Swiss, adultos, pesando 150, 2 950g 0 15 a 35g, rospectivamonte, totalizando 40 para ‘cada espacie animal (20 machos @ 20 tenes). Resuttados ‘Algumas variagies foram detectadas entre os valores ‘obtidos nos animais investigados e 05 parémetros da literatura. Nos ratas, observaram-se valores inferores para leuescitos © sosinéfos, © para camundonges cbiveram-se valores elevados para plaquetas, AST, ALT, fosfatase ‘alcalin, gloouina, fons calcio © magnesio, om comparacao ‘bom dads na literatura, Conolusdo, Portanio, 6 importante 0 ‘conhiecimento © a divulgagao dos valores de paramos fisiolégicos dos snimais de experimentagao, consideranda ‘quo podem exbir variagdes influenciadas por varios fatores ‘que davem ser lavadas em consiseragao nas pesquisa ‘experimentais, como sexo, lithagem e genstipo, DESCRITORES Hematologia. Bloquimica Ratos. Camundongos. Biotario. Prof Det do Prot. Or. $9.0 pantamento de Ciencias Farmactuticas, Universidade Federal da Paraiba, Joie Pessoa sRamento de Fisilogis « Patologia, Universigade Federal da Paraiba, Jo20 Pessoa ~ Paraiba ~ Brasil Prof Dr da Fasuldage Santo Agostinne, Teresins-Piau - Brat! Bloguimics Dr do Laboratorio de Anclises Clinicas do Hosptial Universitario Lauro WanderleylUFPB. Jo3o Pessoa Farmaceutico e Voluntirie de Inciagao Cientiiea do Laborstério de Tecnelogia Farmaceutica, UFPB. Joao Pessoa ~ Paraiba ~ Bras SUMMARY Objective: The objective ofthe present study was to establish retorance values for the bioshemical and hematological parameters of rosents from the Professor Thomas George animal laboratory of the Pharmaceutical Technology Laboreiony, Federal Unversity of Paraiba. Methodology. The parameters evaluated consisted of hamatalogical pri with ful blood and platelst counts, as wall as serum components including glucose, urea, creatinine, total cholesterol, tmglyeondes, uric acid, total protein and protein fractions, alkaline phesphatase, transaminases, sodium, potassium, calcium and magnesium. Adult albino Wistar ais and Swiss ‘rice (20 meles end 20 females of each species), weighing 450-350 grams and 15-35 grams, respectively, wore used in tne study. Results: Variations were detected between values. ‘obtained in the animals and paramoters established in the literature. In rats, leukocyte and eosinophile counts were ower, while in mice, platelet counts, AST, ALT, alkaline phosphatase, globuln, calcium and magnesium levels were higher compared to data published in the literstur. Conclusion: In conclusion, the physiological parameters of ‘experimental animals should be wel established and made ‘available in view of the variations thet may exist as a result fof various factors such as sex, lineage and genotype of the ‘rodents that must be taken inte consideration in experimental slugs DESCRIPTORS Hematology Biochemistry Ras. Mice. Animal Technicians. ribs — Brasil araiva - BrosiBethe experimentago animal na pesquisa cientifica A contribuido para o desenvolvimento da ncia e tecnologia, promovendo ao longo dos anos a descoberta ce medidas profiiticas ¢ tratamento de enfermidades que acometem os seres humanos. Anitais de virias espécies tém sido utilizados nos ltimos tempos, sendo o canmndongo ¢ 05 ratos os mais intensamente wtilizados © 0s mais conhecidos cientificamente (MENENDEZ, 1985; CHORILLI, MICHELIN, SALGADO, 2007). Desde que foram introduzidos em labaratérios. no século XIX, os camundongos transformaranmse em tum dos mais importantes animais experimentais, pois sho proliferos, féceis de euidar, sua meanutengao no é ‘Bo onerosa, seu ciclo de vida é curto, possuem semelhanea fisiolégiea com o organisio humano, entre otras vantagens. Os ratos, apés os canmundongos, s40 os animais de laboratério mais comumente utilizados em pesquisas cientficas, representando cerca de 20% do nimero total de animais usados nestas atividades (HARKNESS, WAGNER, 1993). Assitn como 0s outros mamiferos, 0s camundongos e os ratos, em estado de higidez, tém de manter 0 seu meio interme constante, apesar da existéncia de mecanismos préprios de controle dos parametros fisiolégicos (COLEGIO BRASILEIRO DE EXPERIMENTACAO ANIMAL, 2007. 0s valores normais e os possiveis desvios do niimero de células as taxas dos componentes no celulares do sangue so critérios importantes para avaliar a extensio da homeostase, as alteragdes resultantes de processos patolégicos e da singularidade dos dados obtides partir de procedimentos experimentais, Geralmente, os paramietros fisiolégicas e bioquimicos dos animais so determinados em paises com uma grande tradigao de manter seu biotério sob igoroso controle (SILVERSTEIN, SILVERSTEIN, 1980; HARKNESS, WAGNER. 1993). ‘Apesar de que cada espécie de animal possui mecanismos préprios de controle dos parametros fisiolégicos, é sabido que pode exibir variagSes relacionadas com sexo, linhagem, genstipo, qe sto decorrentes de diversos fatores como idade, deta manuiseio ¢ ambiente. Adicionalmente, os animais experimentais podem se comportar de moda diferente, dependendo das condigdes a que sto submetides, sendo também passiveis de softerem influancia de fatores ecol6gicos, caracteristicos de cada regio do planeta (NUNES eral, 1994) ‘Neste contexto, é necessério que cada laboratério ou biotério estabelega um conjuato préprio de valores de referéncias dos animais, de acordo com linhagem, sexo, e idade. O conhecimento destes parimetros & importante na pré-selegdo de animais, na avaliagao € observacio dos resultados, nos procedimentos cexperimentais e na anzlise das modifieagdes induzidas por processos patolégicos (WOLFORD et al.. 1986). objetivo deste trabalho foi estabelecer valores de referéncias dos parametros bioquimicos & hematol6gicos de ratos Wistar & camundongos Swiss provenientes do Biotério Professor Thomas George do Laboratério de Tecnologia Farmacéutica (LTF) da Universidade Federal da Paraiba (UPB). MATERIAIS E METODOS: Animais ‘Utilizaram.se ratos Wistar albinos ¢ camudongos Swiss, adultos, pesando 150 a 350 ge 15 a 35 8, respectivamente, totalizando wm mimero de 40 para cada’ espécie animal (20 machose 20 femeas). Os animais foram mantides em grupo de seis animais por gaiola sob condigdes ambientais padronizadas (ciclo 12h claro’ escuro e temperatura entre 23=2°C)e alimentados com raglo ¢ Agua potivel & vontade. © protocolo experi- ‘mental foi aprovado pelo Comité de Etica em Experi- mentagio Pesquisa Animal (CEPA) da Universidade Federal da Paraiba (Processo u° 1306/2006). Pardimetros fisiolégicos avaliados. As anélises sanguineas dos animais foram realizadas no LTF-UFPB, ¢ a colcta do sangue foi realizada pela sangria do plexo braquial. Anilises bioquimicas foram realizadas em amostras séricas usando win analisador automiético para quimica clinica (Cobas Mira Roche®). © soro foi obtide por centrifugacdo do sangue em microtubos contendo acelerador de coagulacao (Minicollect® — Greiner Bi um) ¢ sem anticoagulantes, a 3500 rpm por $ minutos. Kits de diagnéstico padronizados (Labtest®) foram utilizados para as avalingdes espectrofotométricas dos segnintes parimetros bioquimicos: glicose, triglice- +ideos, colesterol total, aspartato transaminase (AST), alanina transaminase (ALT), fosfatase alcalina (FAL). proteinas roras, urdia, elobulina, albumina, creatinina, bras el Saude 152) 200214 OTTfcido rico € lactato desidrogenase (LDH). Anilises ‘bematologicas foram realizadas em amostras de sangue total coletado em tubos eontendo EDTA. utilizando um analisador automatizado hemstol6gico (Contador de sangtve animal Vetabe™), Foram avaliados os segwintes parimetros: contagem de células vermelhas do sangue (RBC), bemoglobina, hematéerito, volume corpuscular :édico (MCV), hemoglobina corpuscular média (HCM), concentragdo da hemoglobin corpuscular mia (CHCM), contagem de células brancas do sangue (WBC), neues, linfbcitos, monécitos,eosinéfilos e plaquetas ‘Quadro 1: Pardmetros nematologioos ¢m ratos Wistar. (Os resultados numéricos foram expressos em snédia aritmética (erro padrto). RESULTADOS 0s pardmetros hematologicos ¢ bioquimicos estio demonstrados nos quadros 1 a 4, e serio, considerados como referencia para avaliagao dos resultados em procedimentos experimentais que utilizaram os roedores do LTF-UFPB. Valores de Bioteno do, ‘Vatores do Bioterio do. Paimeton | CTFUFPR Gm ‘rrcurre see) ‘ovine ‘aches | Fimane | aches | Famase MTT usauten | micaten | mideten 7aeay | 7ama1 | eas | eas wsono2 | tsoanz | t47ea2 | taTe02 a5] araa6 | are aoa3-t aie] sae ‘CHEM 1 | 42.0002 }— sana] Levracige | aeas | amas | asos [eee fre + meet +09 | } ora = (Geto —[-W7 ent Sweats ‘Monscnos (ul —[—‘S |S 0a3 {tae Piaget [Tancemo| eteoema | eamseiss | emnseeza ‘Quadro 2: Paramatros bhoqulmicos em ratos Wistar, ‘Valores do Biota do Creare (oes) 7 ‘ise(un | W75.08140 bras et Saude 1) 200214, 207‘Quadro 3: Pardmetros hematokigions de camundongo Swiss Was oe ‘Veam de Benato do | Vata do tunive do | wencinSe | va ‘sors ao irurre coon irre oon” | jbowiiase | atwese| “Soman | ern Pertmewes Purne Wegner ‘entasey | wachos | Fens Mid sen | wianep ; Ss 630.0880 | Phnontn (8 i) ‘Quadro 4: Pardmetros bioqulmicos de camundongos Swiss. ors teiie do | veers deat de | Sorte | vane se Carre en Cieuree ines” | dense | “Aina rutmatee Temas’ | ‘Puree macros [_Fomeee | washes | Fomese | Stu eas tep. | Moda ten. aeo_| oR etaz DiscussAo s resultados mostraram pequenas variagbes individuais ao se avaliar cada pardmetro isoladamente. Entretanto, alguns valores obtidos foram discordantes fos da literatura, Isto mostra a importancia de se estabelecer valores de referencia proprios para cada biotério ou laboratar Este estudo, comparado como trabalho realizado por DINIZ et a. (2006) no antigo biotério do LTF-UFPB, mostra que ocorreram alteragdes nos parametros Meda ten | Medio eo. Temas Vaiores oo Medutep. | Mésaten., bioguiimicos e hematolégicos de camundongos Swiss ¢ zatos Wistar do LTF-UFPB Os ratos Wistar mantidos nas condigdes da UFPB. apresentaram valores de leucécitos entre 4.800-6.300/ sm, enquanto o valor citado por Ralston Purina foi de 14.000/mm'. para Harimess & Wargner entre 6.000 17.000 mm’, para Canadians Counel! Animal Care {CCAC) de 5000-13, 000/mmY e:na Universidade Federal do Cearé (UFC) de 8.000/mm (quadso 1). Portanto, € perceptivela variago no nimero de leuedcitos, mesmo para rtos que exigem uma rigorosa pesquisa, cada vez R bras el Saude 152)208-214, 2017que é usado como um valor controle Os cosinéfilos dos ratos apresentaram-se em tomo de 1 nas condigdes da UFPB, menor que os encontrados nas outras literaturas de referencia, como na UFC onde se obteve fide 2.1 Os camundongos Swiss apresentaram, em condigdes da UFPB, valores altos para as plaquetas, entre 810.000-1,030.000/mm*. Enquanto para Purina e Harkness & Watgner os valores estavam etre 160,000- 410.000 mun, para CCAC entre 150,000-400,000/inne. Para ratos e camundongos, os resultados mos- ‘waram valozes elevados para os seguintes parimetros: AST, ALT. fosfatase alcalina, globulina, ions célcio ‘magnésio, em selagdo aos dados ua literatura. DUNCAN, PRASSE (1982) salientam que os valores discrepantes, podem ser devido aos diferentes métodos usados para os testes enzimaticos, Portanto, @ comparacio com outros estudos, mesmo quando a unidade seja a mesma, s6 sera valida se forem usados os mesmos substratos, pH e temperatura de reagdo. Adicionalmente, HALDELMAN, BLUE (1993) observaram que a metodologia cmpregada sempre contribui com os resultados laboratoriais. LILLIE, TEMPLE, FLORENCE (1996) relatam que os resultados apenas podem ser generalizados em determinadas .2; ena Ralston Purina o valor Referencias 1. CANADIAN COUNCIL ONANILAL CARE, Guido fo the care and use of experimental animals, vo. |, Ottawa, 1993, 140 p. 2. CHORILLIM, MICHELIN DG, SALGADO HRN, Animaisde Laboratorio. 0 camundongo, Rev cigne Farm Bésica pl, 28 (1)11-23, 2007 3. COLEGIO BRASILEIRODE EXPERIMENTAGAOANIMAL (COBEA), Boloum informative, v3, 2008, 10 p. 4. DINZMFFM, MEDEIROSIA SANTOSHB, OLIVEIRAKM: VASCONCELOS THC; AGUIAR FB; TOSCANO M, RIBEIRO EAN ef al Pacronizagao dos parametros hematolégicos e bioqulmicos de camundangos Swiss 6 ralos Wistar, Revisia Brasileira da Saiide, 10 (2) 171-176, 2006, Webras el Saude 152) 200214 2077 condicdes especificas de estudo, coma mesma linhagem, de rates, idade, dicta e metodologia empregada. Portanto, a anilise comparativa dos resultados deste trabalho com aqueles apresentados na literatura demonstra claramente que variagdes intraespécies existem, sendo provavelmente resultantes de diferencas de ordem ambiental, manuseio e/ou metodologia utilizada. E imprescindivel que essas variagtes sejam consideradas durante a pré-selegao dos animais, na avaliacdo e observacio dos resultados obtides nos procedimentos experimentais, assim como na anilise das modificacdes induzidas por prcessas patologicos. 05 resultados sto dados preliminares de uma caracterizagio de camundongos e ratos, provenientes da UFPB, comumente utilizados para fins experimentais| distintos. Eles podem ser titeis para 0 grupo controle, mas niio excluem novas determinagbes cada vez que animais so mantidos em condigdes experimentais particulares. Portanto, mais estudos so necessrios para um melhor conhecimento da fisiologia animal. E importante 0 conhecimento ¢ a divulgagiio dos valores dos paramettos fisiolégicos dos animais de experimentagio, considerando que podem exibir variagdes influenciadas por varios fatores que devem ser levados em consideragao nas pesquisas experimen- tis, 5. DUNCAN,JR, PRASSE KW, Patologia Ciica Votenndnia, ‘Aptindion |, Rio de Jana: Guanabara Koagan, 1982, 5. 6 HALDELMAN CT, BLUE J, Veterinary laboratory ‘medicine: in pratice, Treton: Veterinary Learning Systems, 1993, 8p. 7. HARKNESS SE, WAGNER JE, Biologia ¢ Clinice de coeihos e roedores, 3. ed, S80 Paulo: Livaria Roca Lida, 1993, 238 8 LILLIEEL, TEMPLE NJ, AND FLORENCE LZ, Reference values for young normal Sprague-Dale rats: weight ‘gain, hematology and clinical chemistry, Hum. Exp. Toxicol, 15 (8)612-616, 1936.MENENDEZ RC, Animales de Laboratorio en las Investigationes Biomedicas, La Habana: Ciencias Medicas, 1985, 205 p. 10. NUNES DCS, FAVAL! CBF, SOUZA-FILHO AA, SILVA ACM, FILGUEIRAS TM, LIMA MGS, Evaluaton of collar profile and main constituents the rat and mouse blood from the animal house ofthe Fedoral University of Ceara, Brazil, Rov Med. UFC, 34 (1-2) 21-28, 2004 SILVERSTEINA, SILVERSTEIN, Mico all about em, ‘S80 Pauio: Harper and Row, 1980, 84 p 12 WOLFORD ST, SCHROER RA, GOHS FX, GALLO PP. ERODECKM, FALK HB, RUHREN R, Reference range dota base for serum chemistry and hematology values In laboratory enimals, J. Toxicol. Health, 18(2)181- 188, 1986 ‘CORESPONDENCIA Alessandra Camilo da Siveta.Castolo Branco Rua Hermes Viana, n° 1109, apt-101, S80 CristovBo, (94052-360 Teresina ~Piaul- Brasil E-mail alessandracscb@gmail com bras el Saude 152) 200214 OTT